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(方案)大黄素的提取分离和鉴定

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大黄素的提取分离和鉴定（实验方案）
一、 药物简介
【英文名称】：Emodin
【大黄素别名】：朱砂莲甲素
【化学名】：1'3'8-三羟基-6-甲基蒽醌
【分子式】：C15H10O5
【分子量】：270.23
【结构式】：

【植物来源】：为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。掌叶大黄的根茎。
【物理性质】：橙黄色长针状结晶(丙酮中结晶为橙色,甲醇中结晶为黄色)，熔点256℃～257℃。具有蒽醌的特殊反应。几乎不溶于水，溶于乙醇及碱溶液。
【药理药效】：大黄素可用作泻药，虽有泻下活性，但由于体内易被氧化破坏，实际上泻下作用很弱，如与糖结合成苷类，则可发挥泻下作用。大黄素国内专业生产商西安融升生物目前表示大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷者是大黄素与葡萄糖结合的苷，二者只是结合的位置不同，同时存在于大黄中。另有抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等作用。
二、实验目的
1.掌握大黄素的提取原理及方法。
2.熟练掌握大黄素提取实验方法操作。
3.了解大黄素的不同提取方法。
三、实验原理
游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。
大黄酸：黄色针状结晶
mp.321—322℃（升华），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃（乙醇或冰醋酸），能升华。其溶解度如下：
四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%。易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。
四、仪器及试剂
试剂：大黄粗粉、90%乙醇、25%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、冰醋酸、大黄素标准品等
仪器：回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪、循环水式多用真空泵、抽滤瓶等。
五、实验内容
1、 大黄素提取分离流程图
大黄粗粉30g
加8倍量的90%乙醇240ml
于500ml的圆底烧瓶中。
回流2次，温度80℃，时间1h
合并滤液，滤液浓缩至50ml
加入25%硫酸140ml，沸水浴中回流5min
乙酸乙酯萃取
乙酸乙酯层
5% NaHCO3

水层（紫红色） 乙酸乙酯层
5% Na2CO3

水层（红色） 乙酸乙酯层
盐酸
黄色沉淀（粗品）
水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化
大黄素结晶
具体步骤：
a.游离蒽醌的提取
搭好回流装置取 大黄30g，加8倍量的90%乙醇240ml于500ml的圆底烧瓶中 回流2次，温度80℃，时间1h，合并滤液 滤液浓缩至50ml（旋蒸仪） 加入25%硫酸140ml沸水浴中回流5min 倾出水解液，用乙酸乙酯萃取两次（100ml），合并提取液。
b.pH梯度萃取分离
将乙酸乙酯提取液加入分液漏斗中，用5% NaHCO3水溶液萃取三次，（经观察乙酸乙酯层颜色变浅及无气泡产生为止）。
经5% NaHCO3水溶液萃取后的乙酸乙酯层，继以5% Na2CO3水溶液萃取三次，乙酸乙酯层经薄层检查(标准大作对照)，得知已提尽大黄素后，合并三次Na2CO3萃取液，并用5%HCl酸化，得大黄素沉淀。（注意:加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出）。
2、 大黄素的精制
过滤大黄素沉淀，水洗沉淀物至洗出液呈中性，用适量丙酮溶解，用自备薄层色谱分离纯化大黄素。薄层层析板上橙色层为大黄素，将其刮下溶于丙酮中。用旋转蒸发仪浓缩丙酮溶液，得到大黄素结晶。
3、 大黄素的薄层色谱检识
薄层板：硅胶CMC-Na板
样品液：自制大黄素溶液
对照品：标准大黄素溶液
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸（15：2：:1）
显色：观察斑点颜色及计算Rf值
4、 注易事项
（1） 游离蒽醌的提取要控制温度，不宜太高
（2） PH梯度萃取分离时，要检查是否萃取完全
（3）注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。
六、讨论
1. 蒽醌类化合物的含量测定有哪些方法？各有什么优缺点？
答：含量测定方法有比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法、 及重现性较差。薄层扫描相对简单，在一块板能处理许多样品，但因其为封闭系统，受外界影响较大，导致其测定的结果的重现性较差。高效液相色谱法需要解决好样品的前处理问题，则比较准确、可行。高效毛细管电泳法虽然有许多的优点，但它一直处于被研究和改进的阶段，技术上不是很成熟。

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