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1．(2022·高考江苏卷)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是(多选)( )
A．切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列
B．PCR反应中温度的周期性转变是为了DNA聚合酶催化不同的反应
C．载体质粒通常接受抗生素合成基因作为筛选标记基因
D．抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
解析：选ABC。A项，限制性核酸内切酶大多特异性地识别6个核苷酸序列，但也有少数限制性核酸内切酶能识别4个、5个或8个核苷酸序列。B项，PCR反应中温度周期性变化是为变性、复性和延长制造条件。另外，耐高温的DNA聚合酶只是在延长阶段发挥催化作用，变性和复性过程不需要酶的催化。C项，载体质粒上的抗生素抗性基因可作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，而不是抗生素合成基因。D项，目的基因导入受体细胞后不愿定能正常表达。
2．(2022·高考重庆卷)如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是( )
A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与
B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
C．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状
D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异
解析：选D。A项，②为重组Ti质粒，其构建需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。B项，含重组Ti质粒的农杆菌侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的目的基因整合到受体细胞(④)的染色体上，而并非整个重组Ti质粒整合到④的染色体上。C项，目的基因导入受体细胞后不愿定能进行表达，所以抗虫基因导入植物细胞后，培育成的植株也不愿定具有抗虫性状。D项，转基因抗虫植株是否培育成功，可以从个体水平上进行检测，即观看植株是否具有抗虫性状，假如具有抗虫性状则说明发生了可遗传变异(基因重组)。
3．(2022·高考浙江卷)下列关于动物细胞培育的叙述，正确的是( )
A．连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型
B．某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞
C．由多个祖细胞培育形成的细胞群为一个克隆
D．未经克隆化培育的细胞系细胞具有相同的性状
解析：选B。A项，连续细胞系的细胞一般都培育了多次，二倍体核型发生了转变，大多数细胞具有异倍体核型。B项，细胞癌变是由基因突变引起的，假如癌细胞在确定条件下(如用秋水仙胺等药物治疗)，则有可能恢复成正常细胞。C项，细胞克隆的最基本的要求是：必需确定所建成的克隆来源于单个细胞。D项，未经克隆化培育的细胞系具有异质性。
4．(2021·高考重庆卷)下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是( )
A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞
B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D．④是经筛选培育获得的能分泌特异性抗体的细胞群
解析：选D。①是从小鼠脾脏中获得的能产生抗体的浆细胞，A项错误；②中应当使用能促进细胞融合的促融剂，如聚乙二醇等，B项错误；③同时具有从脾脏中分别出的浆细胞和骨髓瘤细胞的特性，C项错误；④是经筛选培育获得的能产生特异性抗体的细胞群，D项正确。
5．(2021·高考浙江卷)试验小鼠皮肤细胞培育(非克隆培育)的基本过程如下图所示。下列叙述错误的是 ( )
A．甲过程需要对试验小鼠进行消毒
B．乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C．丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型
D．丁过程得到的细胞具有异质性
解析：选C。甲过程表示从试验小鼠身上取皮肤组织小块，该过程需要对小鼠进行消毒，故A项正确。乙过程表示将皮肤组织分散为单个细胞，可用胰蛋白酶进行酶解消化，故B项正确。丙过程表示由组织细胞培育到细胞系的过程，小鼠细胞是二倍体细胞，其细胞系大多数为有限细胞系，能连续培育下去具有异倍体核型的连续细胞系很少，故C项错误。丁过程表示通过选择或纯化从细胞系中获得具有特殊性质的细胞株的过程，细胞株具有异质性，故D项正确。
6．(2021·高考江苏卷)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷， 可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。下列相关叙述正确的是(多选)( )
A．设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列
B．用PCR 方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列
C．PCR 体系中确定要添加从受体细胞中提取的DNA 聚合酶
D．确定要依据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞
解析：选BD。设计引物时应当考虑需扩增的目的基因与载体两端的序列进行互补配对，A项错误；利用PCR技术扩增目的基因只需要知道基因两端的序列，据此设计合适的引物即可，不必知道基因的全部序列，B项正确；PCR体系中应当用耐高温的DNA聚合酶，而不是从受体细胞中提取的一般DNA聚合酶，C项错误；需依据目的基因的编码产物的特性来选择合适的受体细胞，假如是分泌蛋白，则最好选用真核细胞作为受体细胞，D项正确。
7．人α1抗胰蛋白酶是治疗先天性肺纤维化囊肿、肺气肿以及呼吸窘迫综合征、特异性皮炎等疾病的特效药物。2001年，我国首例4只转有人α1抗胰蛋白酶的转基因羊在北京顺义诞生，填补了我国α1抗胰蛋白酶药物市场的空白。回答下列问题：
(1)在体外，构建人α1抗胰蛋白酶基因的表达载体时，用到的工具有________________________________________________________________________。
(2)接受________法将构建好的基因表达载体导入受精卵，然后将受精卵移入________中连续培育得到早期胚胎，然后将其移植入受体母羊的子宫。
(3)检测人α1抗胰蛋白酶基因是否插入染色体上，可从分子水平上检测，方法是____________________。
(4)在培育转基因羊之前，生产人α1抗胰蛋白酶常用的方法是细胞工程或发酵工程。培育出转基因羊后，可以在羊奶或羊尿中分别出该药物。与此相比，试述细胞工程或发酵工程的不足之处。__________________________________________________。
解析：(1)构建基因表达载体时，用到的工具有工具酶及载体，工具酶包括限制酶和DNA连接酶，一般常用质粒作载体。(2)培育转基因动物时，需要确定的养分条件，诱导受精卵分裂、分化形成胚胎。(3)在分子水平上检测，应当用DNA分子杂交技术。(4)培育出转基因羊后，可以在羊奶或羊尿中分别出该药物，羊吃的是草(成本低)，产出的奶、尿液均是对环境无害的物质。
答案：(1)限制酶(限制性核酸内切酶)、DNA连接酶、载体 (2)显微注射 发育培育液 (3)DNA分子杂交技术 (4)成本高、易产生有害废弃物等
8．我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比一般大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的养分品质。如图为培育转基因水稻过程示意图，请回答：
(1)在上述工程中，铁结合蛋白基因称为________，猎取该基因后常用________技术进行扩增。
(2)构建重组Ti质粒时，通常要用同种限制酶分别切割______________________和______________。将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用________处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入。
(3)将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培育时，通过培育基2的筛选培育，可以获得______________________；培育基3与培育基2的区分是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻______________________。
解析：本题中培育转基因水稻的目的是获得铁含量比一般大米高的大米，因此目的基由于铁结合蛋白基因，要大量获得一般接受PCR技术进行扩增。要构建重组质粒要用同种限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒。将外植体培育成试管苗的过程要用到不同的培育基，各培育基最明显的差别在于所添加激素的比例不同。
答案：(1)目的基因 PCR
(2)含目的基因的DNA片段 质粒 CaCl2
(3)含有重组质粒的愈伤组织 生长素和细胞分裂素的浓度比例不同
(4)种子中铁含量
9．在20世纪初，科学家用植物细胞杂交方法，将白菜的原生质体和甘蓝的原生质体融合，成功地培育出了“白菜—甘蓝”杂种植株，据图回答下列问题：
(1)过程b完成的标志是________________________________。要促进杂种细胞的分裂生长，培育基中应有养分物质和激素，其中激素包括________________和________________两类植物激素。
(2)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，依据的原理是__________________________________，c涉及的分裂方式为_________________。
(3)若白菜细胞内有m条染色体，甘蓝细胞含n条染色体，则“白菜—甘蓝”细胞内含________条染色体；若杂种细胞培育成的“白菜—甘蓝”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于________倍体。
(4)要制备“白菜—甘蓝”人工种子，要选取具有生根发芽力气的________(结构)等，包裹上人工种皮制得。
答案：(1)原生质体再生出新的细胞壁 细胞分裂素 生长素 (2)植物细胞的全能性 有丝分裂 (3)m＋n 单 (4)胚状体
10．某争辩小组以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培育细胞的毒性。供培育的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培育的问题：
(1)以动物肝脏组织块为培育材料时，需用________________处理，使组织分散成单个细胞。在植物体细胞杂交时，应用同样原理的操作是_____________________。
(2)细胞培育时，为了促进细胞生长和增殖，除了糖、氨基酸、促生长因子、维生素、无机盐等养分物质外，还需要加入________________。
(3)培育的细胞不能无限长大，细胞自身限制因素包括__________________、____________________。
(4)培育______________________(填“肝肿瘤细胞”或“正常肝细胞”)最终能获得单层细胞，这是由于除了细胞贴壁外，这种细胞还具有________________的特点。
(5)已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生亲热相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为两组，A组细胞培育液中加入________，B组细胞培育液中加入等量无菌生理盐水，经培育后，从两组收集等量细胞，通过比较X基因在两组细胞中________和________(生理过程)的差异，确定Y的药效。
答案：(1)胰蛋白酶或胶原蛋白酶(答出一种即可) (用纤维素酶和果胶酶)去除细胞壁(制备原生质体)
(2)(动物)血清(血浆) (3)细胞表面积和体积比 细胞核把握范围(核质比) (4)正常肝细胞 接触抑制 (5)药物Y 转录 翻译
11．下图是某试验室做的通过动物纤维母细胞等获得单克隆抗体的试验争辩。据图回答：
(1)X、Y、Z细胞的名称分别是________________、________________、________________。
(2)①过程类似于植物组织培育技术中的________过程。与纤维母细胞相比，诱导干细胞的全能性较______________。②过程的实质是________________________________________________________________________。
(3)生产单克隆抗体一般不直接培育浆细胞，主要缘由是____________________。
(4)④处需要筛选，从而得到______________________细胞，且培育该细胞的气体环境为________________________________________________________________________。
答案：(1)骨髓瘤细胞 抗原刺激过的B细胞(或浆细胞) 杂交瘤细胞 (2)脱分化 高 基因的选择性表达 (3)浆细胞高度分化，不能无限(或大量)增殖 (4)能产生特异性抗体的杂交瘤 95%的空气＋5%的CO2
12．(2021·高考天津卷)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用确定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丢失再生力气。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
据图回答下列问题：
(1)过程①所需的酶是________________。
(2)过程②后，在显微镜下观看融合的活细胞中有供体的________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3)原生质体培育液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持确定的渗透压，其作用是______________________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖，通过________、 ________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观看比较染色体的形态和数目。
(5)接受特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1～4进行PCR 扩增的结果。据图推断，再生植株1～4中确定是杂种植株的有________。
(6)对杂种植株进行____________接种试验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
解析：(1)猎取植物细胞的原生质体可用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞。(2)依据题干信息可知，供体使用的是叶肉细胞的原生质体，所以可将融合的细胞是否含叶绿体作为初步筛选杂种细胞的标志。(3)原生质体因没有了细胞壁，在低渗溶液中简洁吸水涨破，加入甘露醇可保持确定的渗透压，以保持原生质体的完整性。原生质体需再生出细胞壁形成杂种细胞，然后经分裂、脱分化形成愈伤组织。(4)若要分析再生植株的染色体变异类型，需对再生植株细胞和双亲细胞的染色体形态与数目进行比较。植物细胞有丝分裂装片的制作包括解离、漂洗、染色和制片四个步骤。(5)由图可知，植株1、2、4的条带中除了具有花椰菜的DNA片段外，还有来自黑芥的DNA片段，所以是杂种植株。(6)对杂种植株进行病原体(黑腐病菌)接种试验，若不患黑腐病，即为高抗性杂种植株。
答案：(1)纤维素酶和果胶酶 (2)叶绿体 (3)保持原生质体完整性 细胞壁 (4)双亲(或花椰菜和黑芥)
解离 漂洗 (5)1、2、4 (6)黑腐病菌
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