（高清正版）DB32_T3719-2020中华绒螯蟹 诺亚1号.pdf

ICS 67.120.30 B 52 DB32 江苏省地方标准 DB 32/T 37192020 中华绒螯蟹“诺亚 1 号”Chinese mitten-handed crab Noahs Ark NO.1 2020-01-06 发布 2020-01-30 实施 江苏省市场监督管理局发 布 DB 32/T 3719-2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。本标准由江苏诺亚方舟农业科技有限公司提出。本标准起草单位：江苏诺亚方舟农业科技有限公司、中国水产科学研究院淡水渔业研究中心。本标准主要起草人：庄红根、徐跑、戴飞、董在杰、郭风英。DB 32/T 3719-2020 1 中华绒螯蟹“诺亚 1 号”1 范围 本标准规定了中华绒螯蟹“诺亚 1 号”产品的术语和定义、要求、规格、试验方法、检验规则、捕捞、暂养、标志、捆扎、包装、运输、贮存。本标准适用于中华绒螯蟹“诺亚 1 号”的成品。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 191 包装储运图示标志 GB 5009.3 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB 5009.4 食品安全国家标准 食品中灰分的测定 GB 5009.5 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定 GB 5009.6 食品安全国家标准 食品中脂肪的测定 GB 5009.11 食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定 GB 5009.12 食品安全国家标准 食品中铅的测定 GB 5009.15 食品安全国家标准 食品中镉的测定 GB 5009.17 食品安全国家标准 食品中总汞及有机汞的测定 GB/T 5009.19 食品中有机氯农药多组分残留量的测定 GB/T 5009.162 动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定 GB 5009.190 食品安全国家标准 食品中指示性多氯联苯含量的测定 GB 5009.205 食品安全国家标准 食品中二噁英及其类似物毒性当量的测定 GB 5009.268 食品安全国家标准 食品中多元素的测定 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB 11607 渔业水质标准 GB/T 17924 地理标志产品 标准通用要求 GB/T 19783 中华绒鳌蟹 GB/T 19857 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 GB/T 20014.14 良好农业规范 第 14 部分：水产池塘养殖基础控制点与符合性规范 GB/T 20361 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 高效液相色谱荧光检测法 GB/T 20366 动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T 21317 动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法 GB/T 21323 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 高效液相色谱-质谱/质谱法 GB/T 22338 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定 GB 23200.92 食品安全国家标准 动物源性食品中五氯酚残留量的测定 液相色谱-质谱法 DB 32/T 3719-2020 2 SC/T 3015 水产品中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定 SC/T 3016 水产品抽样方法 SC/T 9101 淡水池塘养殖水排放要求 SN/T 1928 进出口食品中硝基咪唑残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 SN/T 3032 出口食品中三聚氰胺和三聚氰酸检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 SN/T 3235 出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 DB32/T 593 中华绒螯蟹产品 农业部783号公告-1-2006 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 农业部1025号公告-23-2008 动物源食品中磺胺类药物残留检测 液相色谱-串联质谱法 农业部1077号公告-1-2008 水产品中17中磺胺类及15种诺喹酮类药物残留检测 液相色谱-串联质谱法 3 术语和定义 3.1 中华绒螯蟹“诺亚 1 号”中华绒螯蟹“诺亚1号”（以下统称诺亚1号蟹）是指选用“诺亚1号”蟹种养殖的成蟹，其质量符合GB/T 19783的要求。4 要求 4.1 环境条件 水质应清新无污染，符合GB11607规定。pH值7.5-8.5，溶解氧5mg/L，水深1.2-2.0m，透明度0.4m以上，池底平坦，淤泥少。4.2 蟹种 亲本为诺亚方舟基地或长江水系培育而成的国家水产新品种“诺亚1号”，大眼幼体由诺亚方舟在定点蟹苗繁育场繁育而成，规格为14万头/kg，一龄蟹种由诺亚方舟及子公司的蟹种培育基地培育成，规格为20只/kg-120只/kg，并符合相应的国家标准。4.3 养殖周期 在养殖基地内连续饲养周期不少于200天。4.4 感官要求 诺亚1号蟹的感官应符合表1要求。表表1 诺亚诺亚1号蟹的感官指标号蟹的感官指标 项目 指标 体表 体表清洁，纹理清晰，没有寄生虫及其他附着物。背面淡青色或黄褐色，腹部灰白。甲壳 坚硬，头胸甲呈方圆形，后半部宽于前半部，中央隆起，表面凹凸不平。活力 反应灵敏，活力强。气味 具有诺亚1号蟹固有的鲜味，无异味。鳃 鳃丝清晰完整，无色或微褐色。附肢 附肢完整，关节处肌肉饱满。组织 肌肉纹理清晰，有弹性，不易剥离。水煮 肌肉组织紧密有弹性，肉质鲜嫩，蟹黄厚实酥松，气味微甜。DB 32/T 3719-2020 3 4.5 产品分级 4.5.1 规格等级 诺亚1号蟹按个体体重的不同分成特级、一级、二级、三级、四级、五级，规格应符合表2的规定。表表2 诺亚诺亚1号蟹的规格等级号蟹的规格等级 规格 g/只 雄蟹 雌蟹 特级 300 200 一级 250-299 175-199 二级 200-249 150-174 三级 175-199 125-149 四级 150-174 100-124 五级 150 100 4.5.2 质量等级 诺亚1号蟹分为一级、二级共两个质量等级，等级指标应符合表3的规定。表表3 诺亚诺亚1号蟹的质量等级号蟹的质量等级 项目 一级 二级 外观 蟹体清洁，无斑点，附肢齐全。蟹体清洁，斑点少，附肢齐全。内在品质 性腺饱满，无透明区 性腺有1-2mm透明区。肥满度，g/cm 0.41 0.36 性腺占体重的百分比，%7.5 6.5 4.6 理化指标 10月中旬至11月中旬，蟹体的理化指标应符合表4的规定。表表4 诺亚诺亚1号蟹的理化指标号蟹的理化指标 项目 雄蟹 雌蟹 粗蛋白/（%）14.5 15.5 粗脂肪/（%）7.5 9.5 水分/（%）68 65 灰分/（%）1.8 1.5 4.7 安全卫生指标 安全指标应符合表 5 的规定。DB 32/T 3719-2020 4 表表 5 诺亚诺亚 1 号蟹的安全指标号蟹的安全指标 序号 检验项目 指标 检测方法 1 镉（以 Cd 计），g/kg 500 GB 5009.15 2 孔雀石绿a 不得检出 GB/T 19857 GB/T 20361 3 氯霉素，g/kg 不得检出 GB/T 22338 4 氟苯尼考，g/kg 100 GB/T 22338 5 呋喃唑酮代谢物 不得检出 农业部 783 号公告-1-2006 6 呋喃它酮代谢物 不得检出 农业部 783 号公告-1-2006 7 呋喃西林代谢物 不得检出 农业部 783 号公告-1-2006 8 呋喃妥因代谢物 不得检出 农业部 783 号公告-1-2006 9 恩诺沙星（以恩诺沙星与环丙沙星之和计），g/kg 5 GB/T 20366 农业部 1077 号公告-1-2008 10 氧氟沙星 不得检出 GB/T 20366 农业部 1077 号公告-1-2008 11 培氟沙星 不得检出 GB/T 20366 农业部 1077 号公告-1-2008 12 洛美沙星 不得检出 GB/T 20366 农业部 1077 号公告-1-2008 13 诺氟沙星 不得检出 GB/T 20366 农业部 1077 号公告-1-2008 14 四环素，g/kg 100 SC/T 3015 GB/T 21317 15 金霉素，g/kg 100 SC/T 3015 GB/T 21317 16 土霉素，g/kg 100 SC/T 3015 GB/T 21317 17 磺胺类（总量）b 不得检出 农业部 1025 号公告-23-2008 农业部 1077 号公告-1-2008 18 地西泮 不得检出 SN/T 3235 19 甲硝唑 不得检出 SN/T 1928 20 地美硝唑 不得检出 SN/T 1928 21 洛硝哒唑 不得检出 SN/T 1928 22 羟基甲硝唑 c 不得检出 SN/T 1928 23 羟甲基甲硝咪唑 d 不得检出 SN/T 1928 24 五氯酚酸钠（以五氯酚计）不得检出 GB 23200.92 25 甲基汞，mg/kg 0.5 GB 5009.17 DB 32/T 3719-2020 5 表表 5（续）（续）序号 检验项目 指标 检测方法 26 无机砷，mg/kg 0.5 GB 5009.11 27 铅，mg/kg 0.3 GB 5009.12 28 指示性多氯联苯，mg/kg 0.2 GB 5009.190 29 己烯雌酚，g/kg 不得检出 SN/T 3235 30 溴氰菊酯，mg/kg 不得检出 GB/T 5009.162 注：a.孔雀石绿系指孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿残留量之和，以孔雀石绿表示。b.磺胺类（总量）项目至少包含磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺喹恶啉，如检出其他磺胺药物残留，一并计入磺胺类（总量）并判定。c.羟基甲硝唑为甲硝唑代谢物。d.羟甲基甲硝咪唑为地美硝唑、洛硝哒唑代谢物。4.8 风险监控指标 风险监控指标应符合表 6 要求。表表 6 诺亚诺亚 1 号蟹的风险监控指标号蟹的风险监控指标 序号 项目类别 项目 指标 检测方法 1 四环素类 强力霉素，g/kg 50 GB/T 21317 2 染料类 结晶紫 不得检出 GB/T 19857 3 隐性结晶紫 不得检出 4 化学元素类 铜，g/kg 20000 GB 5009.268 5 氨基糖苷类 新霉素，g/kg 500 GB/T 21323 6 环境污染物 二噁英及其多氯联苯，pg/g 6.5 GB 5009.205 7 杀虫剂 六六六，mg/kg 0.05 GB/T 5009.19 8 滴滴涕，mg/kg 0.05 9 非法添加物 三聚氰胺 不得检出 SN/T 3032 10 喹诺酮类药物 环丙沙星，g/kg 5 GB/T 20366 11 丹诺沙星，g/kg 5 12 沙拉沙星，g/kg 5 13 麻保沙星，g/kg 5 14 恶喹酸，g/kg 5 15 氟甲喹，g/kg 5 16 双（二）氟沙星，g/kg 5 DB 32/T 3719-2020 6 5 检验方法 5.1 感官特征 5.1.1 感官检验 将试样放在白色搪瓷盘中，用目测、手掂、捏，鼻嗅检查。当感官难以判定产品质量时，进行水煮试验。5.1.2 水煮试验 将 2-3 只蟹用清水洗净放入蒸煮容器中，加少量水，以刚没过整蟹为准，煮 10-15 分钟，打开盖，闻其味，品尝肉质。5.2 等级检验 5.2.1 规格等级 用灵敏度为 0.1g 的天秤称重，进行规格分级。5.2.2 肥满度的测定 按 DB32/T 593 的方法执行。5.3 蛋白质的测定 按 GB 5009.5 的方法执行。5.4 脂肪的测定 按 GB 5009.6 的方法执行。5.5 水分的测定 按 GB 5009.3 的方法执行。5.6 灰分的测定 按 GB 5009.4 的方法执行。6 检验规则 6.1 组批规则 同一养殖场、同等级、同批次、同时收获的诺亚 1 号蟹为一个检验批次。6.2 抽样方法 按 SC/T 3016 的规定执行。6.3 检验分类 产品检验分为出场检验和型式检验。6.3.1 出场检验 每批产品出场前，出场检验由生产者执行，检验项目为等级规格、感官指标。6.3.2 型式检验 型式检验是对产品进行全面考核，即对本标准规定的全部要求进行检验，有下列情形之一者应进行型式检验：a)申请绿色食品农产品标识；b)有关行政部门提出型式检验要求；c)前后两次抽样检验结果差异较大；d)正常养殖时，每年至少一次型式检验；6.4 判定规则 6.4.1 所有检验指标都符合本标准的规定，则判定该批次产品合格。6.4.2 卫生标准中有一项不符合本标准的规定，则判定该批次产品不合格。DB 32/T 3719-2020 7 6.4.3 除卫生指标外的其他指标有两项或两项以上不符合本标准的规定，则判定该产品不合格，有一项指标不合格，可降级或进行复检，以复检结果为准。7 捕捞及暂养 7.1 捕捞 捕捞方式可以是地笼捕捞、塘埂捕捉和干塘捕捞等，但不得使用灯光捕捞。捕捞后池塘尾水排放符合 SC/T 9101 的要求。7.2 暂养 成蟹捕捞后在暂养塘分规格分网箱暂养，上市前经专用清洗池清水暂养（15-30）分钟，清洗用水符合 GB 5749 的规定，彻底去除成蟹鳃中泥沙。8 标志、捆扎、包装、运输、贮存 8.1 标志 诺亚 1 号蟹的标志使用，应符合 GB/T 17924 规定。8.2 捆扎 诺亚 1 号蟹用棉绳或香草将蟹的两只大螯及附肢捆扎住，捆扎物不得超过蟹体重量的 5%。8.3 包装 8.3.1 将蟹头部朝下整齐排列于包装容器中，包装容器应有透气孔；包装材料应卫生、洁净，无毒、无害。8.3.2 运输包装物的图示标志应符合 GB/T 191 的规定。8.4 运输、贮存 8.4.1 在低温清洁的环境中装运，保证鲜活，防止挤压。运输工具应清洁卫生、无毒、无异味，不得与有毒有害物品混运和重压，严防运输污染。8.4.2 活体诺亚 1 号蟹应贮存于洁净环境中，防止有毒有害物质的污染及其他损害。9 记录 符合 GB/T 20014.14 的要求，及时登记蟹种、饲料、饵料、药物等投入品的使用情况，记录保存时间不得少于 2 年。DB 32/T 3719-2020 8 附录 A（规范性附录）A.1 亲本来源和类型 A.1.1 亲本来源 2005年采用长江水系野生中华绒螯蟹为基础群体，经群体继代选育而成。2014年2015年经历生产小试、中试试验，2017年4月经全国水产原种和良种审定委员会审定，定名为诺亚1号（品种登记号：GS-01-005-2016）。A.1.2 亲本特性 形态指标：“青背、白肚、金爪、黄毛”，是指背甲淡青色，腹部银白色或灰白色，螯足具有浓密的绒毛，步足上的刚毛呈金黄色；步足长，额齿明显，额齿间缺刻较深，呈“U”字型。生物学指标：性腺发育良好，体重规格达标（雄蟹大于200g，雌蟹大于150g）。A.2 主要特征 A.2.1 形态学特征 头胸甲呈方圆形，后半部宽于前半部，中央隆起，表面凹凸不平。额缘具4尖齿，齿间缺刻较深，第4尖齿小而明显，内额齿间缺刻呈“U”型。额部两侧有一对带柄的复眼。头胸部两侧有5对足，第1对为螯足，末端似钳，布满棕褐色绒毛，后4对为步足，长节末前角各有1尖齿。腹部覆以腹甲，腹部扁平，雄蟹腹脐呈三角形，雌蟹腹脐呈卵圆形。头胸甲背面淡青色或黄褐色，腹部灰白。诺亚1号蟹的外部形态见图1和图2。雌性 雄性 图1 诺亚1号蟹外形（背面）雌性 雄性 图2 诺亚1号蟹外形（腹面）DB 32/T 3719-2020 9 A.2.2 可量性状 诺亚1号蟹的主要形态性状比值见表1。A.3 形体与繁殖 A.3.1 形体指标 诺亚 1 号蟹体重与头胸甲长的关系式为：雄蟹：W=0.0207L2.2173(R=0.8538)，雌蟹：W=0.0041L2.5372(R=0.8247)。式中：W体重，g；L头胸甲长，cm。A.3.2 繁殖 A.3.2.1 诺亚 1 号蟹生殖洄游一般在 10 月中下旬-11 月下旬。A.3.2.2 性成熟雌蟹可进行一次交配，多次产卵。A.3.2.3 不同体重诺亚 1 号蟹抱卵量见表 2。表 2 不同体重诺亚 1 号蟹的抱卵量 体重/g 抱卵量/粒 100 200 750 000 表 1 诺亚 1 号蟹主要形态性状比值 项目 平均值标准差 雄 雌 体高/头胸甲长 0.5600.022 0.5740.018 头胸甲宽/头胸甲长 1.1060.026 1.0730.027 中额齿间距/头胸甲长 0.0770.006 0.0720.009 两侧额齿间距/头胸甲长 0.2280.011 0.2260.011 第一侧齿间距/头胸甲长 0.6030.018 0.5840.014 侧缺刻至前疣状突/头胸甲长 0.0810.010 0.0810.007 侧缺刻至中疣状突/头胸甲长 0.1890.008 0.1820.011 侧缺刻至后疣状突/头胸甲长 0.2240.011 0.2160.012 第四侧齿至中缺刻/头胸甲长 0.6950.011 0.6710.013 第四侧齿至侧缺刻/头胸甲长 0.6450.012 0.6280.012 第四侧齿至前疣突/头胸甲长 0.6370.013 0.6180.017 第二步足长节长/头胸甲长 0.7780.025 0.6900.032 第二步足趾节长/头胸甲长 0.4300.060 0.4070.027 DB 32/T 3719-2020 10 A.4 遗传学特性 A.4.1 细胞遗传学特性 诺亚1号蟹的染色体数目为146（2n），为点状型。图 3 诺亚 1 号蟹染色体 A.4.2 生化遗传学特性 诺亚 1 号蟹肌肉组织脂酶（EST）同工酶的电泳图谱见图 4。图 4 诺亚 1 号蟹肌肉组织脂酶（EST）同工酶电泳图 A.4.3 分子遗传学特性 A.4.3.1 RAPD 筛选到 2 个 RAPD 引物 S1 与 S15 在诺亚 1 号蟹群体中扩增条带清晰，扩增产物长度分别为 950bp和 750bp（图 5，6）。DB 32/T 3719-2020 11 图 5 引物 S1PCR 扩增 M：100bp DNA ladder，1-15：雌蟹，16-24：雄蟹 图 6 引物 S15 PCR 扩增 M：100bp DNA ladder，1-15：雌蟹，16-24：雄蟹 A.4.3.2 核糖体内转录区 1 用所设计的特异引物 ITS1，在诺亚 1 号蟹群体中的核糖体转录区 1 中进行扩增，均可扩出一条大小为 390bp 的条带，见图 7。图 7 引物 ITS1PCR 扩增 M：DL2000，1-15：雌蟹，16-24：雄蟹 A.5 检测方法 A.5.1 形态特征 目测检查。DB 32/T 3719-2020 12 A.5.2 可量指标 10 月-11 月取性成熟蟹，雌雄个体样本数均大于 30 只。用感量不低于 0.001g 的天平称重，计算，取算术平均值。A.5.3 繁殖力测定 在繁殖季节，将附着在抱卵蟹腹部刚毛上的受精卵刮下称重。取 3 组样品，采用 0.001g 电子天平各称取 1g 卵，在解剖镜下计数，计算平均每克卵粒数和抱卵数。A.5.4 染色体测定 按 GB/T 18654.12 的规定执行。A.5.5 同工酶测定 按 GB 17716 中的第 6 章的规定执行。A.5.6 随机扩增多态（RAPD）测定 A.5.6.1 样本采集与保存 取约 200mg 肌肉、肝脏、血液或性腺的新鲜样品，于液氮、干冰及-30低温保存，或于 95%乙醇保存。A.5.7 基因组 DNA 提取 采用酚-氯仿抽提法提取基因组 DNA。取个体新鲜肌肉组织（步足或螯足）约 200mg，于冰上预冷的研钵内研磨，放入 1.5mL 的 eppendorf离心管中，加入 2 倍体积的裂解缓冲液（10mmol/L Tris-HCL，pH 值 8.0；0.1mol/L EDTA，pH 值 8.0；0.5%SDS）混匀，加入蛋白酶 K 至终浓度为 100g/mL，56消化 3-4h。冷却至室温后，室温下 13200r/min 离心 10min，取上清液加入等体积的平衡酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）剧烈混匀，13200 r/min 室温离心10min。取粘稠水相，加入 2 倍体积的无水乙醇，-20静置 30min，13200 r/min 室温离心 10min，弃上清液晾干。将上述沉淀溶于 200LTE（2ml TE，pH 值 7.6，溶解 2mg 粗制胰蛋白酶 RNase I），37消化 30min。1%琼脂糖凝胶电泳观察提取的 DNA 浓度和纯度，4保存。A.5.7.1 基因组 DNA 的 PCR 扩增 在 0.5mL 的薄壁管中加入总体积为 25L 的 PCR 反应混合液。其中 2.5L10PCR 反应缓冲液（100mmol/L Tris-HCL，500mmol/L KCl，1.3mg/mL BSA，0.01%Gelatin，pH值8.4）；2LMgCl2(2.5mmol/L)；1L dNTP（2.5 mmol/L）；1LRAPD 引入物（10mol/L）；0.2Taq 酶（5U/L）；0.7L 基因组 DNA；ddH2O 补足体积。PCR 扩增程序：94预变性 7min；94变性 1 min，37退火 1min，72延伸 2min，4045 个循环；72延伸 10min，4保存。每次反应设置不含模板的空白对照。A.5.7.2 PCR 扩增产物的电泳分离与观察 将扩增产物置于 1%琼脂糖凝胶上进行电泳，取 10LPCR 扩增产物，用移液器将样品加入样品孔。以溴酚蓝做指示剂，在 5V/cm 凝胶的电压下进行电泳。当指示剂迁移至足够分离 DNA 片段的距离时，停止电泳。用 0.5g/mL 的溴化乙锭染色 20min 后，在凝胶成像系统下观察并照相。_