30婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定.pdf

中中华华人人民民共共和和?家家标标准准GB 5413.132010前 言 本标准代?GB 5413.13-1997?婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B6的测定?本标准?GB 5413.13-1997相比，?要变化如?标准?改?婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定?完善了维生素B6含量的计算?本标准附录A?资料性附录?本标准所代?标准的历次版本发布情况?GB 5413-1985?GB 5413.13-1997?中中 华华 人人 民民 共共 和和?卫卫 生生 部部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施食品安全?家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B6的测定 National food safety standard Determination of vitamin B6 in foods for infants and young children,milk and milk products GB 5413.132010 I 前 言 本标准代?GB/T 5413.13-1997?婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B6的测定?本标准?GB/T 5413.13-1997相比，?要变化如?标准?改?婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定?完善了维生素B6含量的计算?本标准附录A?资料性附录?本标准所代?标准的历次版本发布情况?GB 5413-1985?GB/T 5413.13-1997?GB 5413.132010 1 食品安全?家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B6的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素 B6的测定方法?本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素 B6的测定?2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必?可少的?凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准?凡是?注日期的引用文件，其?新版本?包括所有的修改单?适用于本标准?3 原理 试样经热水提取等前处理?，经 C18色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量测定维生素 B6?吡哆醇?吡哆醛?吡哆胺?的含量?4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均?分析纯，水?GB/T 6682 规定的一?水?4.1 淀粉酶?酶活力1.5 U/mg?4.2 辛烷磺酸钠?优?纯?4.3 冰乙酸?优?纯?4.4 甲醇?色谱纯?4.5?乙胺?色谱纯?4.6 盐酸溶液?5.0 mol/L，0.1 mol/L?4.7 氢氧化钠溶液?5.0 mol/L，0.1 mol/L?4.8 标准溶液 4.8.1 维生素 B6?吡哆醇?吡哆醛?吡哆胺?标准贮备液?1 mg/mL?取 0.05 g?精确至 0.0001 g?吡哆醇?吡哆醛?吡哆胺标准品，分别置于 50 mL 容量瓶中，用水溶解定容?4.8.2 维生素 B6?吡哆醇?吡哆醛?吡哆胺?混合标准中间液?20 g/mL?分别准确吸取吡哆醇?吡哆醛?吡哆胺标准贮备液?4.8.1?1 mL 至 50 mL 容量瓶中，用水定容?4.8.3 维生素 B6?吡哆醇?吡哆醛?吡哆胺?混合标准系列测定液?分别准确吸取维生素 B6混合标准中间液?4.8.2?0.0 mL?1.0 mL?2.0 mL?3.0 mL?5.0 mL，至 100 mL 容量瓶中，用水定容?该标准系列浓度分别?0.00 g/mL?0.20 g/mL?0.40 g/mL?0.60 g/mL?1.00 g/mL?临用前配制?5 仪器和设备 5.1 超声波振荡器?GB 5413.132010 2 5.2 高效液相色谱仪，带荧光检测器?5.3 天平?感量?0.1 mg?5.4 pH 计?精度?0.01?5.5 培养箱?30 80。6 分析步骤 6.1 试样预处理 6.1.1 含淀粉的试样?取混合均匀固体试样?5.0 g?精确至 0.0001 g?，加入?25 mL 45 50 的水，或?取混合均匀液体试样?20.0 g?精确至 0.0001 g?于 150 mL 锥形瓶中?加入?0.5 g 淀粉酶?4.1?，混匀?向锥形瓶中充氮，盖?瓶塞，置 50 60 培养箱内?30 min?取出冷?至室温?6.1.2?含淀粉的试样?取混合均匀固体试样?5.0 g?精确至 0.0001 g?，加入?25 mL 45 50 的水，或?取混合均匀液体试样?20.0 g?精确至 0.0001 g?于 150 mL 锥形瓶中?混匀并充分溶解，静置 5 min10 min，冷?至室温?6.2 待测液的制备 6.2.1 用盐酸溶液?4.6?调节试样溶液的 pH 值至 1.7 0.1，放置?1 min?再用氢氧化钠溶液?4.7?调节试样溶液的 pH 值至 4.5 0.1?6.2.2 将试样溶液转移至 50 mL 容量瓶中，用水冲洗锥形瓶?洗液合并于 50 mL 容量瓶中，用水定容至 50 mL?6.2.3 把?述容量瓶放入超声波振荡器中，超声振荡?10 min?6.2.4 另取 50 mL?角瓶，?面放入?角漏斗和滤纸，把超声波振荡的试样溶液倒入其中，自然过滤?滤液再经 0.45 m 微孔滤膜加压过滤，用试管收集，?试样?测液?6.3 参考色谱条件 色谱柱?C18柱?粒?5 m，150 mm 4.6 mm?或?等性能的色谱柱?流动相?甲醇?4.4?50 mL，辛烷磺酸钠?4.2?2.0 g，?乙胺?4.5?2.5 mL，用水溶解并定容到1000 mL?，用冰乙酸?4.3?调pH至3.0 0.1，再经0.45 m微孔滤膜加压过滤?流速?1.0 mL/min?检测波长?激发波长 293 nm，发射波长 395 nm?进样量?10 L?6.4 定量分析 6.4.1 标准曲线绘制 将维生素 B6混合标准系列测定液?4.8.3?依次进行色谱测定?其标准样品色谱?参见附录 A 中?A.1?记录各组分的色谱峰面?或峰高，以峰面?或峰高?纵坐标，以标准测定液的浓度?横坐标，绘制标准曲线?6.4.2 试样测定 将试样?测液?6.2.4?进行色谱测定?记录各组分色谱峰面?或峰高，根据标准曲线计算出试样?测液中维生素 B6各组分的浓度 ci?7 分析结果的表述 7.1 试样中维生素B6各组分的含量的计算 试样中维生素B6各组分的含量按式?1?计算?GB 5413.132010 3 mVcXii100=?1?式中?Xi试样中组分的含量，单位?微克每百克?g/100 g?ci试样?测液中维生素B6各组分的浓度，单位?微克每毫升?g/mL?m试样的质量，单位?克?g?V试样溶液的体?，单位?毫升?mL?7.2 试样中维生素B6的含量的计算 试样中维生素B6的含量按式?2?计算?006.1012.1+=胺醛醇XXXX?2?式中?X试样中维生素B6含量，单位?微克每百克?g/100 g?X醇试样中吡哆醇含量，单位?微克每百克?g/100 g?X醛试样中吡哆醛含量，单位?微克每百克?g/100 g?X胺试样中吡哆胺含量，单位?微克每百克?g/100 g?1.012吡哆醛的含量换算成吡哆醇的系数?1.006吡哆胺的含量换算成吡哆醇的系数?注：试样中维生素B6含量以吡哆醇计?以重复性条件?获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留?位有效数字?8 精密度 在重复性条件?获得的两次独立测定结果的绝对差值?得超过算术平均值的10%?9 其他 本标准检出限?吡哆醇 1.5 g/100 g?吡哆醛 1.3 g/100 g?吡哆胺 1.6 g/100 g?GB 5413.132010 4 附录 A?资料性附录?维生素 B6标准溶液的液相色谱?A.1 维生素 B6标准溶液的液相色谱?维生素 B6标准溶液的液相色谱?见?A.1。F luores cence0.0010.0020.0030.0040.00分钟1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.00吡哆醛-5.965吡哆醇-7.525吡哆胺-10.545?A.1 维生素 B6标准溶液的液相色谱?