62食品微生物学检验霉菌和酵母计数.pdf

中中华华人人民民共共和和?家家标标准准GB 4789.152010 食品安全?家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 National food safety standard Food microbiological examination:Enumeration of moulds and yeasts 中中 华华 人人 民民 共共 和和?卫卫 生生 部部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施GB 4789.152010 I 前 言 本标准自实施之日起代?GB/T 4789.15-2003?食品卫生微生物学检验 霉菌和酵母计数?本标准?GB/T 4789.15-2003 相比，?要修改如?修改了?围?修改了检验程序和操作?骤?修改了?养?和试剂?修改了设备和材料?修改了附录?本标准的附录 A?规?性附录，附录 B?资料性附录?本标准所代?标准的历次?本发布情况?GB 4789.15-1984?GB 4789.15-1994?GB/T 4789.15-2003?GB 4789.152010 1 食品安全?家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 1 范围 本标准规定了食品中霉菌和酵母菌?moulds and yeasts?的计数方法?本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数?2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及?养设备外，?他设备和材料如?2.1 冰箱?2 5?2.2 恒温?养箱?28 1?2.3 均质器?2.4 恒温振荡器?2.5 显微镜?10100?2.6 电子天平?感?0.1 g?2.7 无菌锥形瓶:容?500 mL?250 mL?2.8 无菌广口瓶?500 mL?2.9 无菌吸管?1 mL(?0.01 mL 刻度)?10 mL(?0.1 mL 刻度)?2.10 无菌平皿?直?90 mm?2.11 无菌试管:10 mm75 mm?2.12 无菌牛皮纸袋?塑料袋?3?养?和试剂 3.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂?养?附录 A 中 A.1?3.2 孟加拉红?养?附录 A 中 A.2?4 检验程序 霉菌和酵母计数的检验程序?1?GB 4789.152010 2?1 霉菌和酵母计数的检验程序 5 操作步骤 5.1 样品的稀释 5.1.1 固体和半固体样品?取 25 g 样品至盛有 225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充?振摇，?1:10稀释液?或放入盛有 225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打 2min，制成 1:10 的样品匀液?5.1.2 液体样品?以无菌吸管吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶?可在瓶内预置适当数?的无菌玻璃珠?中，充?混匀，制成 1:10 的样品匀液?5.1.3 取1 mL 1:10稀释液注入含有9 mL无菌水的试管中,另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸,?液?1:100 稀释液?5.1.4 按 5.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液?每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管?5.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液?液体样品可包括原液?，在进行 10 倍递增稀释的同时，每个稀释度?别吸取 1 mL 样品匀液于 2 个无菌平皿内?同时?别取 1 mL样品稀释液加入 2 个无菌平皿作空?对照?5.1.6 及时将 15 mL20 mL 冷?至 46 的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红?养?(可放置于461恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使?混合均匀?5.2?养 检 样 25g?mL?样品+225mL 无菌蒸馏水，均质 10 倍系列稀释 选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各取 1mL?别加入无菌?养皿内 每皿中加入 15mL20mL 马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红?养?菌落计数 报 告 2815d GB 4789.152010 3?琼脂凝固后，将平板倒置，281?养 5d，?察并记录?5.3 菌落计数 肉眼?察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数?以菌落形成单?colony forming units，CFU?表示?选取菌落数在 10 CFU150 CFU 的平板，根据菌落形态?别计数霉菌和酵母数?霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录?多?可计?菌落数应采用两个平板的平均数?6 结果与报告 6.1 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值?以相应稀释倍数计算?6.1.2 若所有平板?菌落数均大于 150 CFU，则对稀释度?高的平板进行计数，?他平板可记录?多?可计，结果按平均菌落数?以?高稀释倍数计算?6.1.3 若所有平板?菌落数均小于 10 CFU，则应按稀释度?的平均菌落数?以稀释倍数计算?6.1.4 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于 1?以?稀释倍数计算?如?原液，则以小于 1计数?6.2 报告 6.2.1 菌落数在 100 以内时，按?四舍五入?原则修约，采用两?有效数?报告?6.2.2 菌落数大于或等于 100 时，前 3?数?采用?四舍五入?原则修约后，取前 2?数?，后面用0 代?数来表示结果?也可用 10 的指数形式来表示，?时也按“四舍五入”原则修约，采用两?有效数?6.2.3?取样以 CFU/g?单?报告，体?取样以 CFU/mL?单?报告，报告或?别报告霉菌和/或酵母数?GB 4789.152010 4 附录 A(规范性附录)?养?和试剂 A.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂 A.1.1 成?马铃薯(去皮?块)300 g 葡萄糖 20.0 g 琼脂 20.0 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1000 mL A.1.2 制法 将马铃薯去皮?块，加 1000mL 蒸馏水，煮沸 10 min20 min?用纱布过滤，补加蒸馏水至 1000 mL?加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，?装后，121 灭菌 20 min?倾注平板前，用少?醇溶解氯霉素加入?养?中 A.2 孟加拉红?养?A.2.1 成?蛋?胨 5.0 g 葡萄糖 10.0 g 磷酸二氢钾 1.0 g 硫酸镁?无水?0.5 g 琼脂 20.0 g 孟加拉红 0.033 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1000 mL A.2.2 制法?述各成?加入蒸馏水中，加热溶化，补足蒸馏水至 1000 mL，?装后，121灭菌 20 min?倾注平板前，用少?醇溶解氯霉素加入?养?中?GB 4789.152010 5 附录 B(资料性附录)霉菌直接镜检计数法 常用的?郝氏霉菌计测法，本方法适用于番?酱罐头?B.1 设备和材料 B.1.1 折光仪?B.1.2 显微镜?B.1.3 郝氏计测玻?有标准计测室的特制玻?B.1.4 盖玻?B.1.5 测微器?标准刻度的玻?B.2 操作步骤 B.2.1 检样的制备?取定?检样,加蒸馏水稀释至折光指数?1.34471.3460?浓度?7.9%8.8%?，备用?B.2.2 显微镜标准视?的校?将显微镜按放大率 90125 倍调节标准视?，使?直?1.382 mm?B.2.3 涂?洗净郝氏计测玻?，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备?察?B.2.4?测?将制好之载玻?放于显微镜标准视?进行霉菌?测，一般每一检样?察 50 个视?，同一检样应由两人进行?察?B.2.5 结果?计算?在标准视?，发现有霉菌菌丝?长度超过标准视?1.382mm吸的1/6或?根菌丝总长度超过标准视?的1/6?测微器的一格?时?性?+?，否则?性?-?，按100个视?计，?中发现有霉菌菌丝体?在的视?数，?霉菌的视?数?