临床微生物学检验与抗菌药物敏感性试验进展.ppt

本章主要学习内容和要求本章主要学习内容和要求本章主要学习内容和要求本章主要学习内容和要求主要学习内容主要学习内容主要学习内容主要学习内容要求要求要求要求基本概念基本概念基本概念基本概念细菌的耐药性检测细菌的耐药性检测细菌的耐药性检测细菌的耐药性检测临床常见的耐药菌株临床常见的耐药菌株临床常见的耐药菌株临床常见的耐药菌株掌握掌握掌握掌握 第十三章临床微生物学检验与抗菌药物敏感性试验进展第十三章临床微生物学检验与抗菌药物敏感性试验进展IFIIFI的实验诊断方法及临床意义的实验诊断方法及临床意义熟悉熟悉熟悉熟悉了解了解了解了解标本的采集方法标本的采集方法标本的采集方法标本的采集方法返回返回上一页上一页下一页下一页第一节 概述一、一、一、一、现代感染性疾病的特点现代感染性疾病的特点感染性疾病（感染性疾病（infectious diseasesinfectious diseases）是指各种生物性病原）是指各种生物性病原(病原微生物、寄生虫病原微生物、寄生虫)寄生人体所引起的传染性感染疾病和寄生人体所引起的传染性感染疾病和非传染性感染疾病。非传染性感染疾病。（一一）疾疾病病谱谱发发生生变变迁迁，发发现现了了很很多多引引起起传传染染病病的的新新病病原原 体体，如如嗜嗜肺肺军军团团菌菌、汉汉坦坦病病毒毒、埃埃博博拉拉病病毒毒、尼尼巴巴病病毒毒、朊朊病病毒毒、SARSSARS冠冠状状病病毒毒等等。而而且且已已经经绝绝迹迹的的旧旧传传染染病病又又死灰复燃，如梅毒、结核病、霍乱等。死灰复燃，如梅毒、结核病、霍乱等。（二）多重耐药株的出现，导致抗感染治疗的困难（二）多重耐药株的出现，导致抗感染治疗的困难（三）器官移植、抗肿瘤化疗和放疗的开展，减弱了机体的（三）器官移植、抗肿瘤化疗和放疗的开展，减弱了机体的 免免疫疫防防御御功功能能，造造成成医医院院感感染染及及条条件件性性致致病病菌菌感感染染的的增增加加 上一页下一页返回返回二、二、二、二、感染性疾病的实验诊断方法感染性疾病的实验诊断方法（一）（一）（一）（一）一般实验室检查一般实验室检查 1.1.血常规检查血常规检查 2.C 2.C反应蛋白反应蛋白(CRP)(CRP)3.3.降降钙钙素素原原(PCT),(PCT),PCTPCT是是严严重重细细菌菌性性炎炎症症和和真真菌菌感感染染的的特特异异性性指指标标，而而且且也也是是脓脓毒毒症症和和炎炎症症活活动动有有关关的的多多脏脏器器衰衰竭竭的的可可靠靠指指标标。如如果果给给予予足足够够的的刺刺激激，免免疫疫抑抑制制的的患患者者将将产产生生PCTPCT，PCTPCT不不仅仅是是用用于于鉴鉴别别诊诊断断的的急急性性指指标标，而而且且是是监监控控炎炎症活动的参数。症活动的参数。（二）（二）（二）（二）病原学病原学实验诊断实验诊断 感感染染性性疾疾病病的的病病原原体体的的实实验验诊诊断断方方法法包包括括病病原原体体的的分分离离培培养养、病病原原体体特特异异性性抗抗原原抗抗体体的的检检测测、病病原原体体核核酸酸检检测测等等多多种方法。种方法。上一页下一页返回返回第二节细菌感染的实验诊断第二节细菌感染的实验诊断第二节细菌感染的实验诊断第二节细菌感染的实验诊断一、一、一、一、标本的采集与培养方法标本的采集与培养方法（一）标本采集原则：（一）标本采集原则：1.采集标本时应无菌操作，尽量避免污染。盛放标本的容采集标本时应无菌操作，尽量避免污染。盛放标本的容 器和培养基应预先进行无菌处理并贴好标签。器和培养基应预先进行无菌处理并贴好标签。2.应选择感染部位或病变明显的部位采集标本，避免周围应选择感染部位或病变明显的部位采集标本，避免周围 组织、器官或分泌物中的杂菌污染。组织、器官或分泌物中的杂菌污染。3.根据病原体在感染性疾病的不同时期的体内分布和排出根据病原体在感染性疾病的不同时期的体内分布和排出 部位选择在最佳时间采集适宜标本。部位选择在最佳时间采集适宜标本。4.对于怀疑细菌感染的标本，尽量在抗生素使用前采集。对于怀疑细菌感染的标本，尽量在抗生素使用前采集。5.标本采集后应及时送检。大多数细菌标本应冷藏送检，标本采集后应及时送检。大多数细菌标本应冷藏送检，但是某些细菌，如脑膜炎奈瑟菌对低温和干燥极其敏感但是某些细菌，如脑膜炎奈瑟菌对低温和干燥极其敏感 ，应注意保温，尽量床旁接种，并预温相应的培养基。，应注意保温，尽量床旁接种，并预温相应的培养基。上一页下一页返回返回（二）常用标本的采集及培养方法（二）常用标本的采集及培养方法（二）常用标本的采集及培养方法（二）常用标本的采集及培养方法1.1.1.1.血液血液血液血液 血培养是用于检测细菌、真菌等患者血液中的微生血培养是用于检测细菌、真菌等患者血液中的微生血培养是用于检测细菌、真菌等患者血液中的微生血培养是用于检测细菌、真菌等患者血液中的微生 物的方法。物的方法。物的方法。物的方法。1).1).1).1).采采采采血血血血时时时时机机机机：通通通通常常常常细细细细菌菌菌菌从从从从感感感感染染染染部部部部位位位位入入入入血血血血1 1 1 1小小小小时时时时后后后后，引引引引起起起起机机机机体体体体发发发发热热热热，因因因因此此此此，如如如如果果果果能能能能够够够够准准准准确确确确预预预预测测测测病病病病人人人人发发发发热热热热时时时时间间间间时时时时，在在在在发发发发热热热热前前前前半半半半小小小小时时时时至至至至一一一一小小小小时时时时采采采采血血血血最最最最好好好好。当当当当无无无无法法法法准准准准确确确确预预预预测测测测病病病病人人人人发发发发热热热热时时时时间间间间时，可在发热时采血。细菌性心内膜炎患者可随时采血。时，可在发热时采血。细菌性心内膜炎患者可随时采血。时，可在发热时采血。细菌性心内膜炎患者可随时采血。时，可在发热时采血。细菌性心内膜炎患者可随时采血。2).2).2).2).采采采采血血血血量量量量：成成成成人人人人每每每每次次次次每每每每瓶瓶瓶瓶最最最最好好好好采采采采血血血血8-10ml8-10ml8-10ml8-10ml，小小小小儿儿儿儿每每每每次次次次每每每每瓶瓶瓶瓶可可可可采血采血采血采血1-5ml1-5ml1-5ml1-5ml。3).3).3).3).采采采采血血血血次次次次数数数数：成成成成人人人人每每每每天天天天采采采采血血血血2-32-32-32-3次次次次，通通通通常常常常间间间间隔隔隔隔半半半半小小小小时时时时或或或或1 1 1 1小小小小时时时时，在患者不同部位采血。在患者不同部位采血。在患者不同部位采血。在患者不同部位采血。4).4).4).4).培培培培养养养养方方方方法法法法：通通通通常常常常每每每每次次次次将将将将血血血血液液液液分分分分别别别别加加加加入入入入需需需需氧氧氧氧和和和和厌厌厌厌氧氧氧氧两两两两种种种种培培培培养养养养瓶瓶瓶瓶中中中中35353535 C C C C同同同同时时时时进进进进行行行行培培培培养养养养。每每每每天天天天观观观观察察察察结结结结果果果果。3 3 3 3天天天天后后后后如如如如果果果果无无无无菌菌菌菌生生生生长长长长则则则则报报报报告告告告“培培培培养养养养48484848小小小小时时时时无无无无菌菌菌菌生生生生长长长长”；7 7 7 7天天天天后后后后如如如如果果果果无无无无菌菌菌菌生生生生长长长长则报告则报告则报告则报告“培养培养培养培养7 7 7 7天无菌生长天无菌生长天无菌生长天无菌生长”。上一页下一页返回返回2.2.2.2.尿尿尿尿液液液液 正正正正常常常常人人人人体体体体内内内内，膀膀膀膀胱胱胱胱中中中中的的的的尿尿尿尿液液液液是是是是无无无无菌菌菌菌的的的的，尿尿尿尿液液液液经经经经尿尿尿尿道道道道排排排排出出出出时时时时，受受受受尿尿尿尿道道道道细细细细菌菌菌菌的的的的污污污污染染染染而而而而会会会会混混混混有有有有细细细细菌菌菌菌，但但但但取取取取中中中中段段段段尿尿尿尿时时时时，细菌数不会超过细菌数不会超过细菌数不会超过细菌数不会超过101010103 3 3 3CFU/mlCFU/mlCFU/mlCFU/ml。1).1).1).1).标本采集：清洁外阴部位，用无菌容器留取中段尿标本采集：清洁外阴部位，用无菌容器留取中段尿标本采集：清洁外阴部位，用无菌容器留取中段尿标本采集：清洁外阴部位，用无菌容器留取中段尿10ml10ml10ml10ml。2).2).2).2).培养方法：尿液一定要做定量培养，通常取培养方法：尿液一定要做定量培养，通常取培养方法：尿液一定要做定量培养，通常取培养方法：尿液一定要做定量培养，通常取1ul1ul1ul1ul或或或或10ul10ul10ul10ul尿尿尿尿 液进行培养，报告时要报告液进行培养，报告时要报告液进行培养，报告时要报告液进行培养，报告时要报告1ml1ml1ml1ml尿液中的菌落数，当取尿液中的菌落数，当取尿液中的菌落数，当取尿液中的菌落数，当取 1ul 1ul 1ul 1ul尿液培养后发现无菌生长，要报告尿液培养后发现无菌生长，要报告尿液培养后发现无菌生长，要报告尿液培养后发现无菌生长，要报告“小于小于小于小于1000 CFU/ml1000 CFU/ml1000 CFU/ml1000 CFU/ml”。3).3).3).3).结果解释：通常引起泌尿系统感染的细菌有大肠埃希菌、结果解释：通常引起泌尿系统感染的细菌有大肠埃希菌、结果解释：通常引起泌尿系统感染的细菌有大肠埃希菌、结果解释：通常引起泌尿系统感染的细菌有大肠埃希菌、肺炎克雷伯氏菌等肠杆菌科细菌及肠球菌等革兰氏阳性球肺炎克雷伯氏菌等肠杆菌科细菌及肠球菌等革兰氏阳性球肺炎克雷伯氏菌等肠杆菌科细菌及肠球菌等革兰氏阳性球肺炎克雷伯氏菌等肠杆菌科细菌及肠球菌等革兰氏阳性球 菌。菌。菌。菌。90%90%90%90%以上的泌尿系统感染为单一细菌感染，只有很少以上的泌尿系统感染为单一细菌感染，只有很少以上的泌尿系统感染为单一细菌感染，只有很少以上的泌尿系统感染为单一细菌感染，只有很少 量患者为两种混合细菌感染，当培养出三种以上的细菌量患者为两种混合细菌感染，当培养出三种以上的细菌量患者为两种混合细菌感染，当培养出三种以上的细菌量患者为两种混合细菌感染，当培养出三种以上的细菌 时，可视为标本污染。当培养出大于时，可视为标本污染。当培养出大于时，可视为标本污染。当培养出大于时，可视为标本污染。当培养出大于101010105 5 5 5 CFU/ml CFU/ml CFU/ml CFU/ml的细菌时，的细菌时，的细菌时，的细菌时，通常认为可能是尿路感染或肾盂肾炎，当培养出通常认为可能是尿路感染或肾盂肾炎，当培养出通常认为可能是尿路感染或肾盂肾炎，当培养出通常认为可能是尿路感染或肾盂肾炎，当培养出101010104 4 4 4-10-10-10-105 5 5 5 CFU/ml CFU/ml CFU/ml CFU/ml的细菌时，诊断不确定，当培养出小于的细菌时，诊断不确定，当培养出小于的细菌时，诊断不确定，当培养出小于的细菌时，诊断不确定，当培养出小于101010103 3 3 3 CFU/ml CFU/ml CFU/ml CFU/ml的的的的 细菌时，通常认为是标本污染。细菌时，通常认为是标本污染。细菌时，通常认为是标本污染。细菌时，通常认为是标本污染。上一页下一页返回返回3.3.3.3.脑脊液脑脊液脑脊液脑脊液 中枢神经系统的感染有很多原因。化脓性脑炎主中枢神经系统的感染有很多原因。化脓性脑炎主中枢神经系统的感染有很多原因。化脓性脑炎主中枢神经系统的感染有很多原因。化脓性脑炎主 要是由细菌、真菌等引起，偶尔也由寄生虫引起。要是由细菌、真菌等引起，偶尔也由寄生虫引起。要是由细菌、真菌等引起，偶尔也由寄生虫引起。要是由细菌、真菌等引起，偶尔也由寄生虫引起。1).1).1).1).标本采集：按先后顺序取标本采集：按先后顺序取标本采集：按先后顺序取标本采集：按先后顺序取3 3 3 3管脑脊液，每管管脑脊液，每管管脑脊液，每管管脑脊液，每管2-5ml2-5ml2-5ml2-5ml。1 1 1 1号试号试号试号试 管：细菌检查；管：细菌检查；管：细菌检查；管：细菌检查；2 2 2 2号试管：生化学或血清学检查；号试管：生化学或血清学检查；号试管：生化学或血清学检查；号试管：生化学或血清学检查；3 3 3 3号试号试号试号试 管；细胞计数等常规检查。管；细胞计数等常规检查。管；细胞计数等常规检查。管；细胞计数等常规检查。2).2).2).2).革兰氏染色检查有助于迅速查出肺炎链球菌或流感嗜血革兰氏染色检查有助于迅速查出肺炎链球菌或流感嗜血革兰氏染色检查有助于迅速查出肺炎链球菌或流感嗜血革兰氏染色检查有助于迅速查出肺炎链球菌或流感嗜血 杆菌等细菌性感染。杆菌等细菌性感染。杆菌等细菌性感染。杆菌等细菌性感染。3).3).3).3).培养方法：将脑脊液培养方法：将脑脊液培养方法：将脑脊液培养方法：将脑脊液1500150015001500转离心转离心转离心转离心15151515分钟，取沉渣进行培分钟，取沉渣进行培分钟，取沉渣进行培分钟，取沉渣进行培 养，养，养，养，5%CO5%CO5%CO5%CO2 2 2 2环境、环境、环境、环境、35353535 C C C C培养培养培养培养3 3 3 3天。天。天。天。上一页下一页返回返回4.4.4.4.痰痰痰痰 正正正正常常常常人人人人体体体体的的的的下下下下呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道是是是是无无无无菌菌菌菌的的的的，留留留留取取取取痰痰痰痰标标标标本本本本时时时时由由由由于于于于经经经经 常常常常混混混混入入入入上上上上呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道的的的的分分分分泌泌泌泌物物物物，通通通通常常常常痰痰痰痰培培培培养养养养时时时时总总总总是是是是可可可可以以以以见见见见到到到到上上上上呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道的的的的正正正正常常常常菌菌菌菌群群群群。因因因因此此此此判判判判断断断断下下下下呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道中中中中是是是是否否否否有有有有致致致致病病病病菌菌菌菌，必必必必须须须须了了了了解解解解上上上上呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道的的的的正正正正常常常常菌菌菌菌群群群群。留留留留取取取取的的的的痰痰痰痰标标标标本本本本的的的的质质质质量量量量也也也也直直直直接接接接影影影影响响响响培培培培养养养养的的的的结结结结果果果果。根根根根据据据据痰痰痰痰涂涂涂涂片片片片革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏染染染染色色色色的的的的结结结结果可以判断痰标本的质量。果可以判断痰标本的质量。果可以判断痰标本的质量。果可以判断痰标本的质量。培培培培养养养养方方方方法法法法：将将将将痰痰痰痰液液液液进进进进行行行行洗洗洗洗净净净净、均均均均质质质质化化化化处处处处理理理理后后后后，接接接接种种种种于于于于血血血血平平平平板板板板、巧巧巧巧克克克克力力力力平平平平板板板板、麦麦麦麦康康康康凯凯凯凯平平平平板板板板。痰痰痰痰中中中中的的的的致致致致病病病病菌菌菌菌不不不不少少少少属属属属于于于于条条条条件件件件致致致致病病病病菌菌菌菌，与与与与正正正正常常常常菌菌菌菌群群群群同同同同时时时时存存存存在在在在，在在在在培培培培养养养养报报报报告告告告中中中中应应应应作作作作说说说说明明明明，通通通通常常常常以以以以报报报报告告告告草草草草绿绿绿绿色色色色链链链链球球球球菌菌菌菌和和和和奈奈奈奈瑟瑟瑟瑟氏氏氏氏菌菌菌菌为为为为正正正正常常常常菌菌菌菌群群群群的的的的指指指指标标标标，同时要注明相应菌群的量。同时要注明相应菌群的量。同时要注明相应菌群的量。同时要注明相应菌群的量。上一页下一页返回返回5.5.5.5.浓浓浓浓汁汁汁汁 组组组组织织织织或或或或器器器器官官官官的的的的化化化化脓脓脓脓性性性性感感感感染染染染，其其其其病病病病原原原原菌菌菌菌的的的的来来来来源源源源可可可可分分分分为为为为两两两两类类类类，内内内内源源源源性性性性和和和和外外外外源源源源性性性性。内内内内源源源源性性性性的的的的感感感感染染染染源源源源是是是是炎炎炎炎症症症症局局局局部部部部周周周周围围围围器器器器官官官官中中中中的的的的正正正正常常常常菌菌菌菌群群群群，由由由由于于于于损损损损伤伤伤伤等等等等因因因因素素素素造造造造成成成成正正正正常常常常栖栖栖栖居居居居菌菌菌菌进进进进入入入入无无无无菌菌菌菌状状状状态态态态的的的的组组组组织织织织内内内内发发发发生生生生感感感感染染染染。外外外外源源源源性性性性的的的的感感感感染染染染源源源源是是是是存存存存在在在在于于于于人人人人体体体体外外外外部部部部自自自自然然然然界界界界的的的的微微微微生生生生物物物物，由由由由于于于于外外外外伤伤伤伤和和和和直直直直接接接接接接接接触触触触，外外外外界界界界微微微微生生生生物物物物通过人体表面进入人体，造成感染。通过人体表面进入人体，造成感染。通过人体表面进入人体，造成感染。通过人体表面进入人体，造成感染。1).1).1).1).革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏染染染染色色色色涂涂涂涂片片片片检检检检查查查查：直直直直接接接接涂涂涂涂片片片片可可可可迅迅迅迅速速速速为为为为临临临临床床床床提提提提供供供供最最最最初初初初的的的的诊断依据，对淋病奈瑟菌、产气荚膜梭菌等的诊断有意义。诊断依据，对淋病奈瑟菌、产气荚膜梭菌等的诊断有意义。诊断依据，对淋病奈瑟菌、产气荚膜梭菌等的诊断有意义。诊断依据，对淋病奈瑟菌、产气荚膜梭菌等的诊断有意义。2).2).2).2).培培培培养养养养与与与与鉴鉴鉴鉴定定定定：通通通通常常常常将将将将标标标标本本本本接接接接种种种种于于于于血血血血平平平平板板板板、麦麦麦麦康康康康凯凯凯凯平平平平板板板板、巧巧巧巧克克克克力力力力平平平平板板板板等等等等三三三三种种种种培培培培养养养养基基基基，疑疑疑疑为为为为厌厌厌厌氧氧氧氧菌菌菌菌感感感感染染染染时时时时还还还还要要要要接接接接种种种种厌厌厌厌氧氧氧氧血平板。血平板。血平板。血平板。3).3).3).3).对对对对于于于于无无无无菌菌菌菌部部部部位位位位的的的的感感感感染染染染，从从从从分分分分泌泌泌泌物物物物中中中中分分分分离离离离的的的的细细细细菌菌菌菌，一一一一般般般般都都都都有有有有临临临临床床床床意意意意义义义义，按按按按分分分分离离离离鉴鉴鉴鉴定定定定的的的的菌菌菌菌种种种种报报报报告告告告细细细细菌菌菌菌名名名名称称称称及及及及药药药药敏敏敏敏实实实实验验验验结结结结果。果。果。果。上一页下一页返回返回6.6.6.6.便便便便 正正正正常常常常人人人人体体体体的的的的肠肠肠肠道道道道中中中中栖栖栖栖居居居居大大大大量量量量的的的的微微微微生生生生物物物物，组组组组成成成成人人人人体体体体健健健健康康康康极极极极为为为为重重重重要要要要的的的的体体体体内内内内微微微微生生生生态态态态环环环环境境境境，参参参参与与与与营营营营养养养养、消消消消化化化化、吸吸吸吸收收收收等等等等作作作作用用用用。腹泻是因病原菌在肠道内大量繁殖的结果。腹泻是因病原菌在肠道内大量繁殖的结果。腹泻是因病原菌在肠道内大量繁殖的结果。腹泻是因病原菌在肠道内大量繁殖的结果。培培培培养养养养方方方方法法法法：粪粪粪粪便便便便中中中中最最最最常常常常见见见见的的的的病病病病原原原原菌菌菌菌是是是是沙沙沙沙门门门门氏氏氏氏菌菌菌菌与与与与志志志志贺贺贺贺氏氏氏氏菌菌菌菌，因因因因此此此此通通通通常常常常临临临临床床床床标标标标本本本本可可可可接接接接种种种种SSSSSSSS平平平平板板板板即即即即可可可可，如如如如疑疑疑疑为为为为特特特特殊殊殊殊菌菌菌菌种种种种感感感感染染染染要要要要选选选选择择择择相相相相应应应应的的的的选选选选择择择择性性性性培培培培养养养养基基基基，如如如如霍霍霍霍乱乱乱乱弧弧弧弧菌菌菌菌选选选选用用用用TCBSTCBSTCBSTCBS，小小小小肠肠肠肠结结结结肠肠肠肠炎炎炎炎耶耶耶耶尔尔尔尔森森森森氏氏氏氏菌菌菌菌选选选选用用用用NYENYENYENYE琼琼琼琼脂脂脂脂平平平平板板板板或或或或CINCINCINCIN琼琼琼琼脂脂脂脂平平平平板板板板，难难难难辨辨辨辨梭梭梭梭状状状状芽芽芽芽孢孢孢孢杆杆杆杆菌菌菌菌选选选选用用用用CCFACCFACCFACCFA琼琼琼琼脂脂脂脂平平平平板板板板，念念念念珠珠珠珠菌菌菌菌选选选选用用用用TTCTTCTTCTTC沙沙沙沙保保保保罗罗罗罗等。等。等。等。7.7.穿穿刺刺液液 穿穿刺刺液液包包括括胸胸水水、腹腹水水、心心包包液液、关关节节液液及及鞘鞘膜膜液液。正正常常的的穿穿刺刺液液是是无无菌菌的的，有有感感染染的的情情况况下下，只只要要检检出出细细菌菌，通通常常都都可可视视为为是是病病原原菌菌，因因此此，革革兰兰氏氏染染色色直直接接涂涂片片检检查查很很有有意意义义，只只要要检检出出细细菌菌即即可可诊诊断断感感染染的的类类型型。培培养养须须做做需需氧氧与与厌厌氧氧培培养养，而而且且要要同同时时接接种种肉肉汤汤做做增增菌菌培培养养，根根据据分离鉴定的细菌选择相应的药敏实验进行报告。分离鉴定的细菌选择相应的药敏实验进行报告。上一页下一页返回返回二二二二 、细菌感染的实验诊断方法细菌感染的实验诊断方法（一）显微镜检查（一）显微镜检查 直接显微镜检查是细菌感染实验诊断的基本方法之一，包直接显微镜检查是细菌感染实验诊断的基本方法之一，包 括染色和不染色标本检查法。染色法可根据镜下细菌的形括染色和不染色标本检查法。染色法可根据镜下细菌的形 态及染色性做出初步诊断，只对特定样品中的细菌有诊断态及染色性做出初步诊断，只对特定样品中的细菌有诊断 价值。价值。1.1.革兰染色革兰染色 革兰染色是诊断细菌感染最简单快速的方法，通革兰染色是诊断细菌感染最简单快速的方法，通 常根据不同的染色性和细菌形态，可以对细菌的种属做出常根据不同的染色性和细菌形态，可以对细菌的种属做出 初步的推测性鉴定。初步的推测性鉴定。2.2.抗酸染色抗酸染色 鉴定结核和麻风等分枝杆菌属细菌的重要方法。鉴定结核和麻风等分枝杆菌属细菌的重要方法。3.3.墨汁染色墨汁染色 用于检查脑脊液的隐球菌，具有方便、快速、节用于检查脑脊液的隐球菌，具有方便、快速、节 约成本等优点。约成本等优点。4.4.不染色标本直接检查法不染色标本直接检查法 主要用于检查细菌的动力及运动状主要用于检查细菌的动力及运动状 态。态。上一页下一页返回返回上一页下一页返回返回（二）病原菌的分离培养（二）病原菌的分离培养1.1.很很多多细细菌菌的的形形态态和和染染色色性性缺缺乏乏明明显显特特征征，仅仅凭凭形形态态学学不不能能做做确确切切的的诊诊断断，需需经经细细菌菌的的分分离离培培养养，甚甚至至纯纯培培养养后后，对对细菌进行生化和血清学鉴定，方能明确感染的细菌。细菌进行生化和血清学鉴定，方能明确感染的细菌。2.2.原原则则上上应应对对所所有有送送检检标标本本做做分分离离培培养养，以以便便获获得得单单个个菌菌落落后后进进行行纯纯培培养养，从从而而对对细细菌菌做做进进一一步步的的生生物物学学、免免疫疫学学、致致病病性性或或细细菌菌的的药药物物敏敏感感性性等等方方面面的的检检查查，最最终终做做出出确确切切的报告。的报告。3.3.细细菌菌培培养养时时应应选选择择适适宜宜的的培培养养基基，以以便便提提供供特特定定细细菌菌生生长长所所需需的的必必要要条条件件。分分离离培培养养后后根根据据菌菌落落的的大大小小、形形态态、颜颜色色、表表面面性性状状、透透明明度度和和溶溶血血性性等等对对细细菌菌做做出出初初步步的的识识别别，然后根据生化反应结果及血清学试验对分离菌做出鉴定。然后根据生化反应结果及血清学试验对分离菌做出鉴定。上一页下一页返回返回（三）病原菌抗体的检测（三）病原菌抗体的检测1.1.病原菌侵入机体后，其抗原性物质能刺激机体产生特异病原菌侵入机体后，其抗原性物质能刺激机体产生特异 性抗体。存在于血液或其他体液中的特异性抗体，常随性抗体。存在于血液或其他体液中的特异性抗体，常随 病程的进展发生变化。用已知细菌或其抗原检测病人体病程的进展发生变化。用已知细菌或其抗原检测病人体 内是否产生了相应的特异性抗体及其量的多少，可作为内是否产生了相应的特异性抗体及其量的多少，可作为 某些病原菌感染的辅助诊断。某些病原菌感染的辅助诊断。2.2.常用的血清学试验包括：玻片或试管凝集试验、沉淀试常用的血清学试验包括：玻片或试管凝集试验、沉淀试 验、补体结合试验和冷凝集试验等，可根据病原菌的种验、补体结合试验和冷凝集试验等，可根据病原菌的种 类加以选择。血清学诊断一般适用于病程较长和抗原性类加以选择。血清学诊断一般适用于病程较长和抗原性 较强的病原菌引起的感染。较强的病原菌引起的感染。3.3.若以血清学试验结果作为诊断依据时，应在急性期和恢若以血清学试验结果作为诊断依据时，应在急性期和恢 复期各取一份血清同时检测，恢复期血清效价明显升高复期各取一份血清同时检测，恢复期血清效价明显升高4 4 倍或以上时方有诊断价值。倍或以上时方有诊断价值。4.4.用血清学试验检测特异性抗体对感染性疾病的诊断有两用血清学试验检测特异性抗体对感染性疾病的诊断有两 方面的局限：在疾病的早期，抗体难以检测出来，因此方面的局限：在疾病的早期，抗体难以检测出来，因此 难以作为早期诊断的依椐难以作为早期诊断的依椐;当抗体水平升高时，很难找出当抗体水平升高时，很难找出 抗体效价与病情之间的关系。抗体效价与病情之间的关系。上一页下一页返回返回（四）病原菌抗原的检测（四）病原菌抗原的检测抗原的检测是用已知的特异性抗体检测未知的细菌抗原成分。抗原的检测是用已知的特异性抗体检测未知的细菌抗原成分。这些试验特异、敏感、简便，即使是在采集样品前患者使用这些试验特异、敏感、简便，即使是在采集样品前患者使用了抗生素，对细菌的培养不易成功，但细菌的抗原仍能被检了抗生素，对细菌的培养不易成功，但细菌的抗原仍能被检测出来。因此抗原的检测是检查病原菌的常用技术，可直接测出来。因此抗原的检测是检查病原菌的常用技术，可直接使用临床标本或在细菌分离培养后进行。使用临床标本或在细菌分离培养后进行。上一页下一页返回返回（五）病原菌的核酸检测（五）病原菌的核酸检测1.1.传传统统的的微微生生物物学学鉴鉴定定技技术术主主要要根根据据微微生生物物形形态态学学和和生生化化等等表表型型特特征征来来进进行行。但但有有些些试试验验耗耗时时长长、费费用用高高或或难难以以顺顺利利完完成成。随随着着分分子子生生物物学学技技术术的的发发展展，多多种种检检测测病病原原菌菌核核酸酸的的实实验验技技术术已已经经被被建建立立。这这不不但但能能有有助助于于感感染染性性疾疾病病的的确确诊诊，还还能能确确定定病病原原菌菌的的基基因因型型，使使微微生生物物学学的的检检测测技技术术从从细菌生物学检查进展到细菌分子生物学的鉴定。细菌生物学检查进展到细菌分子生物学的鉴定。2.2.分分子子生生物物学学诊诊断断技技术术常常用用于于检检测测不不能能在在体体外外培培养养或或目目前前的的培培养养技技术术不不敏敏感感、费费用用高高昂昂或或耗耗时时长长的的病病原原体体。目目前前常常用用的的 方方 法法 主主 要要 有有 聚聚 合合 酶酶 链链 反反 应应 (polymerase(polymerase chain chain reactionreaction，PCR)PCR)及及 核核 酸酸 杂杂 交交 技技 术术(nucleotide nucleotide hybridization)hybridization)包包括括SouthernSouthern印印迹迹杂杂交交(Southern(Southern blot)blot)、NorthemNorthem印印迹迹杂杂交交(Northern(Northern blot)blot)、斑斑点点杂杂交交(dot(dot blot)blot)和原位杂交和原位杂交(in situ hybridization(in situ hybridization，ISH)ISH)等。等。上一页下一页返回返回（六）内毒素检测（六）内毒素检测1.1.细细菌菌内内毒毒素素检检查查法法又又称称鲎鲎试试验验法法，它它是是19641964年年由由美美国国学学者者LevihLevih和和BangBang发发现现，并并在在19681968年年正正式式建建立立的的一一种种定定性性或或定定量量检检测测微微量量细细菌菌内内毒毒素素的的分分析析方方法法。该该法法具具有有灵灵敏敏度度高高、特特异异性性强强和和操操作作简简便便快快捷捷的的特特点点，不不仅仅在在药药学学，而而且且在在微微生物学及临床检验等领域应用较为广泛。生物学及临床检验等领域应用较为广泛。2.2.鲎鲎试试验验法法可可广广泛泛用用于于革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌感感染染的的快快速速诊诊断断，可可对对患患者者的的血血液液、尿尿液液及及脑脑脊脊液液进进行行直直接接检检查查，有有助助于于临临床床医医生生及及时时发发现现内内毒毒素素疾疾病病，以以迅迅速速采采取取果果断断的的治治疗疗。在在公公共共卫卫生生方方面面，鲎鲎试试验验法法可可对对水水源源、食食物物、饮饮料料等等进进行行内内毒毒素素测定，以便将其控制在规定水平以下，预防疾病。测定，以便将其控制在规定水平以下，预防疾病。3.3.正正常常人人血血中中内内毒毒素素浓浓度度为为：0.1 0.1 EUEUmlml，超超过过此此值值即即可可诊诊断断为为内内毒毒素素血血症症。许许多多研研究究表表明明，内内毒毒素素与与多多种种疾疾病病密密切切相相关关，内内毒毒素素血血症症多多随随病病情情恶恶化化而而加加重重，随随病病情情缓缓解解而而减减轻轻。因因此此，内内毒毒素素可可以以作作为为一一个个衡衡量量病病情情和和判判断断预预后后的的参参考考指指标标。也也可可用用于于临临床床治治疗疗及及判判定定疗疗效效或或筛筛选选恰恰当当药药物物的指标之一。的指标之一。上一页下一页返回返回第三节第三节第三节第三节细菌的耐药性检测细菌的耐药性检测一、一、一、一、细菌耐药性的概念细菌耐药性的概念 细菌耐药性细菌耐药性(drug resistance):(drug resistance):是指细菌对某抗菌药是指细菌对某抗菌药 物的相对抵抗性。指病原体对反复应用的化学治疗药物物的相对抵抗性。指病原体对反复应用的化学治疗药物 敏感性降低或消失的现象。敏感性降低或消失的现象。上一页下一页返回返回第三节第三节第三节第三节细菌的耐药性检测细菌的耐药性检测二、二、二、二、细菌耐药性的遗传机制细菌耐药性的遗传机制（一一）天天然然耐耐药药指指细细菌菌对对某某些些抗抗菌菌药药物物的的天天然然耐耐药药，耐耐药药基基因因源源自自亲亲代代，由由细细菌菌染染色色体体基基因因决决定定而而且且代代代代相相传传的的耐耐药药性性，存存在在于于其其染染色色体体上上，具具有有种种属属特特异异性性，天天然然耐耐药药性性始始终终如如一并可预测。一并可预测。（二二）获获得得耐耐药药获获得得耐耐药药性性指指细细菌菌DNADNA的的改改变变导导致致其其获获得得耐耐药药性性表表型型。耐耐药药细细菌菌的的耐耐药药基基因因来来源源于于基基因因突突变变或或获获得得新新的的基基因因，作作用用方方式式为为接接合合、转转导导或或转转化化。可可发发生生于于染染色色体体DNADNA、质质粒粒、转转座座子子等等结结构构基基因因，也也可可发发生生于于某某些些调调节节基基因因。获获得得耐耐药药性性大大多多由由质质粒粒介介导导，但但也也有有染染色色体体介介导导，如如金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌对对青青霉霉素素的的耐耐药药。耐耐药药基基因因在在质质粒粒、转转座座子子和和整整合子等可移动的遗传元件介导下，进行传播。合子等可移动的遗传元件介导下，进行传播。上一页下一页返回返回细菌的耐药性细菌的耐药性天然耐药性天然耐药性 与与抗抗菌菌药药物物无无关关，是是细细菌菌固固有有的的，在在某某种种抗抗菌菌药药物物发发现现或或产生之前所分离的细菌已对该药已具有耐药性。产生之前所分离的细菌已对该药已具有耐药性。获得性耐药获得性耐药 A A 染色体介导的耐药染色体介导的耐药 突变突变 B B 质粒介导的耐药质粒介导的耐药 转导、转化、接合、易位转导、转化、接合、易位上一页下一页返回返回细菌耐药性细菌耐药性 染色体染色体 染色体耐药性染色体耐药性 -稳定稳定 -垂直传播垂直传播 -无水平传播无水平传播 (耐药性不会从一种细菌传给另一种细菌耐药性不会从一种细菌传给另一种细菌)上一页下一页返回返回细菌耐药性细菌耐药性 质粒质粒 质粒的耐药性质粒的耐药性 不不 稳稳 定定,由由 于于 抗抗 生生 素素 的的 使使 用用 选选 择择 了了 耐耐 药药 质质 粒粒 -耐耐药药基基因因由由一一个个细细菌菌传传给给另另一一个个细细菌菌,甚甚至至是是不不同同的细菌的细菌上一页下一页返回返回细菌产生耐药的因素细菌产生耐药的因素人人的的行行为为使使微微生生物物 适应生存，产生新的防御力适应生存，产生新的防御力 抗抗菌菌药药物物是是医医院院中中各各类类药药物物使使用用范范围围最最广广；使使用用频频度度最高；使用量最大的药物最高；使用量最大的药物抗抗菌菌药药物物的的大大量量使使用用和和不不合合理理使使用用使使微微生生物物产产生生耐耐药药性性多多重重耐耐药药菌菌在在全全世世界界播播散散，使使抗抗微微生生物物化化疗疗失失去去效效力力，以以致致我我们们的的治治疗疗可可能能又又回回到到了了抗抗菌菌药药物物诞诞生生之之前前的的时时代代上一页下一页返回返回自然状态下，只占极少数（自然状态下，只占极少数（1010-5-51010-9-9）的耐药菌（株）的耐药菌（株）难以与占压倒决大多数的敏感菌（株）竞争：微生态定难以与占压倒决大多数的敏感菌（株）竞争：微生态定植位点的竞争、营养物质的竞争及代谢产物的抑制等植位点的竞争、营养物质的竞争及代谢产物的抑制等耐药突变株在所有 当细菌增殖时耐 由于敏感菌被消除细菌群体中均存在 药菌的比例恒定 耐药菌存活增殖抗菌药物选择性压力选择性压力上一页下一页返回返回第三节第三节第三节第三节细菌的耐药性检测细菌的耐药性检测三、三、三、三、抗生素的耐药机制抗生素的耐药机制 由由于于细细菌菌的的生生命命周周期期短短、繁繁殖殖较较快快，因因此此它它有有很很强强的的适适应应新新环环境境的的能能力力，接接触触抗抗生生素素时时能能形形成成耐耐药药。常常见见的的细细菌菌对对抗生素的耐药机制主要有四种抗生素的耐药机制主要有四种：（一）膜通透性的降低（一）膜通透性的降低（二）改变作用靶位（二）改变作用靶位（三）分泌各种酶（三）分泌各种酶（四）主动外排（四）主动外排返回返回上一页上一页下一页下一页上一页下一页返回返回细菌的耐药机制上一页下一页返回返回第三节第三节第三节第三节细菌的耐药性检测细菌的耐药性检测四、细菌耐药性的防治原则四、细菌耐药性的防治原则四、细菌耐药性的防治原则四、细菌耐药性的防治原则（一）合理使用抗菌药物（一）合理使用抗菌药物 1.1.制定抗生素用药常规，供临床选用抗菌药物参考。制定抗生素用药常规，供临床选用抗菌药物参考。2.2.严格根据适应证选用药物。严格根据适应证选用药物。3.3.病人用药前应尽可能进行病原学检测，并进行药敏试验，作为调整病人用药前应尽可能进行病原学检测，并进行药敏试验，作为调整 用药的参考。用药的参考。4.4.根据根据PK/PDPK/PD理论，制定合理的用药方案。理论，制定合理的用药方案。（二二）严严格格执执行行消消毒毒隔隔离离制制度度，对对耐耐药药菌菌感感染染的的患患者者应应予予隔隔离离，防防止止耐耐药药菌的交叉感染。菌的交叉感染。（三）加强药政管理（三）加强药政管理 1.1.加强细菌耐药性的检测，建立细菌耐药监测网，掌握本地区、本单加强细菌耐药性的检测，建立细菌耐药监测网，掌握本地区、本单 位重要致病菌和抗菌药物的耐药性变迁资料，及时为临床提供信息。位重要致病菌和抗菌药物的耐药性变迁资料，及时为临床提供信息。2.2.必须规定抗菌药物凭处方供应。必须