GB 31613.5-2022 食品安全国家标准 鸡可食组织中抗球虫药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法-（高清版）.pdf

中华人民共和国国家卫生健康委员会食品安全国家标准鸡可食组织中抗球虫药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法22中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号：XXXX-XXXX67.120X31613.52022National food safety standardDetermination of coccidiostats residues in chicken edible tissues byliquid chromatography-tandem mass spectrometric methodGB2022?09?20发布2023?02?01实施发 布国 家 市 场 监 督 管 理 总 局中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部CCSG B 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.本文件系首次发布.G B 食品安全国家标准鸡可食组织中抗球虫药物残留量的测定液相色谱串联质谱法范围本文件规定了鸡可食组织中常山酮、氯苯胍、盐霉素、莫能菌素、甲基盐霉素、马度米星铵和拉沙洛西种抗球虫药物残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法.本文件适用于鸡肌肉、肝脏和皮脂(皮脂)中常山酮、氯苯胍、盐霉素、莫能菌素、甲基盐霉素、马度米星铵和拉沙洛西种抗球虫药物残留量的检测.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理试样中残留的抗球虫药物经胰蛋白酶酶解,乙酸乙酯提取,固相萃取柱净化,液相色谱串联质谱法检测,基质匹配外标法定量.试剂与材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合G B/T 规定的一级水.试剂 甲醇(CHOH):色谱纯.乙腈(CHC N):色谱纯.乙酸(CHC OOH):色谱纯.甲酸(HC OOH):色谱纯.乙酸乙酯(CHCHOO C CH):色谱纯.胰蛋白酶:来源于牛胰腺,U/m g.碳酸钠(N aC O).溶液配制 碳酸钠溶液:取碳酸钠 g,加水适量使溶解并稀释至 m L,混匀.乙酸溶液:取乙酸m L,用水稀释至 m L,混匀.甲醇溶液:取甲醇 m L,用水稀释至 m L,混匀.洗脱液:取甲醇 m L,加乙酸乙酯 m L,混匀.复溶液:取甲醇 m L,加水 m L、甲酸 m L,混匀.标准品常山酮、氯苯胍、盐霉素、莫能菌素、甲基盐霉素、马度米星铵、拉沙洛西含量.具体见附录A.G B 标准溶液制备 标准储备液(m g/m L):取常山酮、氯苯胍、盐霉素、莫能菌素、甲基盐霉素、马度米星铵、拉沙洛西标准品适量(相当于各有效成分 m g),精密称定,分别加甲醇适量使溶解并稀释定容于 m L容量瓶,配制成浓度均为m g/m L的标准储备液.以下避光保存,有效期个月.混合标准工作液(g/m L):分别精密量取标准储备液各 m L,于 m L容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为 g/m L的混合标准工作液.以下避光保存,有效期个月.混合标准工作液(g/m L):精密量取 g/m L的混合标准工作液m L,于 m L容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为g/m L的混合标准工作液.以下避光保存,有效期个月.混合标准工作液(g/m L):精密量取g/m L的混合标准工作液m L,于 m L容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为 g/m L的混合标准工作液.以下避光保存,有效期个月.材料 三键键合C 固相萃取柱:m g/m L,或相当者.尼龙微孔滤膜:m.仪器和设备 液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源.分析天平:感量 g和 g.高速冷冻离心机:r/m i n.组织匀浆机.涡旋混合器.固相萃取装置.氮吹仪.水浴摇床.p H计.试样的制备与保存 试样的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎并均质.a)取均质后的供试样品,作为供试试样;b)取均质后的空白样品,作为空白试样;c)取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.试样的保存 以下保存.测定步骤 提取称取试料g(准确至 g),加胰蛋白酶 m g、水m L,涡旋m i n,用 碳酸钠溶液调p H至 ,水浴过夜酶解.取出放至室温,加 碳酸钠溶液m L,涡旋m i n.加乙酸乙酯m L,涡旋m i n,于、r/m i n离心 m i n,转移上清液,残渣重复提取次.合并次提取液,用乙酸乙酯稀释至 m L,混匀.取提取液 m L于 水浴氮气吹干,加乙腈 m L涡旋 m i n,加水 m L,混匀,备用.净化固相萃取柱依次用甲醇m L、乙酸溶液m L活化,取备用液全部过柱,控制流速为每s sG B 滴.用乙酸溶液m L和 甲醇溶液m L淋洗,用洗脱液 m L洗脱.收集洗脱液,水浴氮气吹干,加复溶液 m L涡旋m i n,于、r/m i n离心 m i n,取上清液,过滤膜后供液相色谱串联质谱测定.基质匹配标准曲线的制备取份空白样品经提取和净化后,加入适量的标准工作液,水浴氮气吹干,加复溶液 m L涡旋m i n,配制成浓度为 g/L、g/L、g/L、g/L、g/L和 g/L的基质匹配标准溶液,于、r/m i n离心 m i n,取上清液,过滤膜后供液相色谱串联质谱测定.以测得特征离子峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.测定 液相色谱参考条件色谱柱:C(mm mm,m),或相当者;流动相:A为 甲酸水溶液,B为 甲酸甲醇溶液;梯度洗脱:梯度洗脱程序见表;流速:m L/m i n;柱温:;进样量:L.表梯度洗脱程序时间,m i nA,B,质谱参考条件a)离子源:电喷雾(E S I)离子源;b)扫描方式:正离子扫描;c)检测方式:多反应监测;d)电离电压:k V;e)离子源温度:;f)雾化温度:;g)锥孔气流速:L/h;h)雾化气流速:L/h;i)待测药物的定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量的参考值见表.表待测药物的定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量的参考值药物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量e V常山酮 氯苯胍 盐霉素 莫能菌素 G B 表(续)药物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量e V甲基盐霉素 马度米星铵 拉沙洛西 测定法 定性测定在同样测试条件下,试料溶液中抗球虫药物的保留时间与基质匹配标准工作液中抗球虫药物的保留时间之比,偏差在 以内,且检测到的相对离子丰度,应当与浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度一致.其允许偏差应符合表的要求.表定性确证时相对离子丰度的允许偏差单位为百分号相对离子丰度 允许的最大偏差 定量测定取试料溶液和基质匹配标准工作液,作单点或多点校准,按外标法定量.基质匹配标准工作液及试料溶液中目标物的响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述色谱质谱条件下,标准溶液特征离子质量色谱图见附录B.空白试验取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.结果计算和表述试样中抗球虫药物的残留量按标准曲线或公式()计算.XACsVVAsVm()式中:X 试样中抗球虫药物残留量的数值,单位为微克每千克(g/k g);A 试样中抗球虫药物的峰面积;Cs 基质匹配标准溶液中抗球虫药物浓度的数值,单位为微克每升(g/L);V 提取液体积的数值,单位为毫升(m L);V 分取提取液体积的数值,单位为毫升(m L);V 复溶液体积的数值,单位为毫升(m L);As 基质匹配标准溶液中抗球虫药物的峰面积;m 试样质量的数值,单位为克(g).方法灵敏度、准确度和精密度 灵敏度本方法的检测限为g/k g,定量限为 g/k g.准确度本方法在 g/k g g/k g添加浓度水平上的回收率为 .G B 精密度本方法的批内相对标准偏差,批间相对标准偏差.G B 附录A(资料性)抗球虫药物中英文通用名称、化学分子式和C A S号抗球虫药物中英文通用名称、化学分子式和C A S号见表A .表A 抗球虫药物中英文通用名称、化学分子式和C A S号中文通用名称英文通用名称化学分子式C A S号常山酮H a l o f u g i n o n eC H B r C l NO 氯苯胍R o b e n i d i n eC H C lN 盐霉素S a l i n o m y c i nC H O 莫能菌素M o n e n s i nC H O 甲基盐霉素AN a r a s i nAC H O 马度米星铵M a d u r a m i c i nAmm o n i u mC H NO 拉沙洛西L a s a l o c i dC H O G B 附录B(资料性)抗球虫药物标准溶液特征离子质量色谱图抗球虫药物标准溶液特征离子质量色谱图见图B .图B 抗球虫药物标准溶液特征离子质量色谱图(g/L)