Fam172a基因敲除加剧非酒精性脂肪性肝病的机制研究.pdf

医学分子生物学杂志,2024,21(1):001-008 J Med Mol Biol,2024,21(1):001-008DOI:10.3870/j.issn.1672-8009.2024.01.001论 著#:共同第一作者:共同通讯作者资助项目:北京市自然科学基金(No.7202071),国家自然科学基金(No.82170541,No.82200640)通讯作者:魏红山(电话:84322309,E-mail:drwei ),肖凡(电话:84322620,E-mail:xiaofan )#:These authors contributed equally as first author:These authors contributed equally as corresponding authorThis work was supported by grants from the Natural Science Foundation of Beijing(No.7202071),the National Natural Science Foundation of China(No.82170541,No.82200640)Corresponding author:WEI Hongshan(Tel:[phone],E-mail:drwei ),XIAO Fan(Tel:[phone],E-mail:)Fam172a 基因敲除加剧非酒精性脂肪性肝病的机制研究李梦绮1#,韦何锐1#,安稳1,罗婧2,何玲玲1,杨君茹1,肖凡3,4,5,6,魏红山1,21首都医科大学附属北京地坛医院消化科 北京市,1000152北京大学地坛医院教学医院消化科 北京市,1000153首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所,新发突发传染病研究北京市重点实验室 北京市,1000154北京市感染性疾病研究中心 北京市,1000155国家传染病医学中心,首都医科大学附属北京地坛医院 北京市,100156传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室 北京市,100015【摘要】目的 探讨 Fam172a 基因敲除加剧内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)诱导的非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用机制。方法小鼠腹腔注射 PBS、衣霉素(tunicamycin,TM)或 NF-B 抑制剂 DHMEQ;检测肝功能和肝组织脂质堆积;蛋白质印迹检测蛋白水平。结果 与对照组相比,Fam172a-/-TM 组小鼠血清 ALT 和 AST 水平明显升高;肝脏结构损伤和脂质堆积加重;肝脏 GRP78、CHOP 和 pNF-B/NF-B 的相对表达水平均显著上调。此外,DHMEQ 可明显减轻Fam172a-/-小鼠肝损伤、脂质堆积和 ERS。结论Fam172a 基因敲除可通过活化 NF-B 通路来加剧 ESR诱导的 NAFLD。【关键词】Fam172a;非酒精性脂肪性肝病;内质网应激;核因子 B【中图分类号】R34Mechanism of Fam172a Gene Knockout Exacerbating Non-alcoholicFatty Liver DiseaseLI Mengqi1#,WEI Herui1#,AN Wen1,LOU Jing2,HE Lingling1,YANG Junru1,XIAO Fan3,4,5,6,WEIHongshan1,21Department of Gastroenterology,Beijing Ditan Hospital,Capital Medical University,Beijing,100015,China2Department of Gastroenterology,Peking University Ditan Teaching Hospital,Beijing,100015,China3Beijing Key Laboratory of Emerging Infectious Diseases,Institute of Infectious Diseases,Beijing Di-tan Hospital,Capital Medical University,Beijing,100015,China4Beijing Institute of Infectious Diseases,Beijing,100015,China5National Center for Infectious Diseases,Beijing Ditan Hospital,Capital Medical University,Bei-jing,100015,China6National Key Laboratory of Intelligent Tracking and Forecasting for Infectious Diseases,Beijing,100015,China【Abstract】Objective To explore the mechanism of Fam172a gene knockout in enhancing en-doplasmic reticulum stress(ERS)induced nonalcoholic fatty liver disease(NAFLD).MethodsMice were intraperitoneally injected with PBS,tunicamycin(TM),or the NF-B inhibitor DH-MEQ.The hepatic function and hepatic lipid accumulation were then evaluated,and protein levelswere assessed via Western blotting.Results Compared to the control group,the Fam172a-/-TMgroup had significantly increased levels of serum ALT and AST,along with the increased liver struc-ture damage and lipid accumulation.Additionally,the relative expression levels of GRP78,CHOP,and pNF-B/NF-B in liver tissues were significantly up-regulated in the Fam172a-/-TMgroup.Furthermore,DHMEQ significantly reduced liver injury,lipid accumulation,and ERS inFam172a-/-mice.ConclusionFam172a knockout could enhance the ERS-induced NAFLD byactivation of NF-B pathway.【Key words】Fam172a;nonalcoholic fatty liver disease;endoplasmic reticulum stress;nucle-ar factor kappa B 非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liverdisease,NAFLD)是指从非酒精性脂肪肝(non-al-coholic fatty liver,NAFL)到非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的一系列肝脏异常1。NASH 是 NAFLD 严重的临床形式,其特征是肝细胞脂质堆积、炎症、损伤和凋亡,在极端情况下可进展为肝硬化和肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)1-3。目前,NAFLD 已是全球最常见的慢性肝病,全球患病率约为 25.24%4-7。随着过去二十年间中国居民生活方式的巨大改变,NAFLD 也已成为中国最常见的肝脏疾病,全国患病率约为 29.2%,但却未得到足够的重视8。NAFLD 的发病机制和临床表现均具有高度异质性9,其致病途径包括:内质网应激、脂质代谢紊乱、氧化应激、胰岛素抵抗、炎症、纤维化、自噬和细胞凋亡等10。目前 NAFLD 的发病机制仍未完全阐明,但随着研究的深入,越来越多研究表明内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)对 NAFLD 的发病与进展至关重要,其可通过诱导肝脏胰岛素抵抗、脂质积累、炎症和肝细胞凋亡来参与 NAFLD 的发生发展11-14。Fam172a 基因,又名 C5orf21,位于染色体 5q15,由李连喜团队首次发现并克隆,该基因在许多组织中正常表达(在脂肪和主动脉组织中的表达量最高)15-16。FAM172A 蛋白在小鼠与人类中具有高度同源性,均含有 4 个功能区域:Arb2 样结构域(domain homologous to yeast argonaute-bind-ing protein 2,Arb2 like domain)、丝氨酸水解酶基序(esterase-like serine hydrolase motif,Ser hydro-lase)、C 端内质网驻留信号肽(endoplasmic reticu-lum retention signal,ER signal)和核定位信号肽(nuclearlocalizationsignal,NLS)17。由 于Fam172a 基因是一个新发现的基因,功能尚不明确,因此目前针对该基因的研究主要涉及动脉粥样硬化、肿瘤及基因转录后水平调控等方面17-19。本课题组在前期研究中成功制备了 Fam172a 基因敲除(Fam172a-/-)小鼠20,并通过研究发现Fam172a 基 因 敲 除 可 加 重 内 质 网 应 激 诱 导 的NAFLD21。然而,Fam172a 基因敲除在 ESR 诱导的 NAFLD 中的作用机制尚未明确,本文通过衣霉素(tunicamycin,TM)诱导的野生型(wild type,WT)小鼠和 Fam172a 基因敲除(Fam172a-/-)小鼠 ERS 模型研究了 Fam172a 基因敲除在 ESR 诱导的 NAFLD 中潜在的作用机制21。1 材料与方法1.1 实验动物野生型(wild type,WT)小鼠采用购自于北京华阜康生物科技有限公司的 C57BL/6J 背景的小鼠。Fam172a 基因敲除(Fam172a-/-)小鼠由中国南京大学动物模型研究中心利用 C57BL/6J 背景的小鼠构建,基因敲除方法参照相关文献20。选 取 6 8 周 龄 的 雄 性 野 生 型(WT)和Fam172a-/-小鼠进行科学研究。所有小鼠均在标准条件(环境温度 20 25 和环境湿度 50%60%)下饲养,自由进食、饮水并定期更换鼠笼和垫料。所有动物实验均由首都医科大学实验动物学系及首都医科大学附属北京地坛医院动物保护与使用委员会批准。1.2 药物与试剂衣霉素(tunicamycin,TM)、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、NF-B 抑制剂DHMEQ(美国 MCE 公司),组织/细胞甘油三酯测定试剂盒、RIPA 裂解液、一抗稀释液(中国普利莱公司),血浆丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒、血浆天冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(中国迈克2李梦绮,等.Fam172a 基因敲除加剧非酒精性脂肪性肝病的机制研究生物有限公司),5 蛋白上样缓冲液(含 DTT)(北京索莱宝公司美国),PierceTMBCA 蛋白定量试剂盒、PageRulerTM预 染 蛋 白 分 子 量 标 准、20 SDS 电泳缓冲液、蛋白预制胶(美国 Thermo 公司),甘氨酸(中国索莱宝公司),Tween(中国GPC 生物公司),脱脂奶粉(美国 BD 公司),-Actin 抗 体、pNF-B 抗 体、NF-B 抗 体(美 国CST 公司),CHOP 抗体、GRP78 抗体(美国 Pro-teintech 公司),山羊抗小鼠 IgG 辣根过氧化物酶抗体、山羊抗兔 IgG 辣根过氧化物酶抗体(中国中杉金桥公司),化学发光液(中国美仑生物公司),非变性组织/细胞裂解液(中国索莱宝公司),胎牛血清(美国 Gibco 公司),多聚甲醛(4%)(中国塞维尔公司),TrisHCl 粉末牛血清白蛋白(美国 Sigma 公司),Protein A/G PLUS-Agarose(美国 Santa Cruz 公司),NaCl 粉末、无水甲醇(中国普利公司)。1.3 主要仪器低温高速离心机、低温梯度离心机、96 孔酶标仪、实时荧光定量 PCR 仪(ABI 7500)(Thermo公司),常温高速离心机(艾本德公司),冰冻研磨机(赛维尔公司)、组织脱水机(TP1020)、组织包埋机(EG1160)、石蜡切片机(徕卡公司),倒置显微镜(蔡司公司),Tanon 发光成像工作站(天能科技有限公司),全自动生化检测分析仪(Olympus 公司),超净工作台(苏坤实业有限公司)。1.4 动物分组与处理C57BL/6J 雄性小鼠(8 周龄,体重 25.0 1.5 g)20 只,随机分为 5 组,每组 4 只,分别为WT-Control 组(WT 小鼠腹腔注射 1 mg/kg DM-SO)、WT-TM 组(WT 小 鼠 腹 腔 注 射 1 mg/kgTM)、Fam172a-/-Control 组(Fam172a-/-小鼠腹腔注射 1 mg/kg 1 PBS)、Fam172a-/-TM 组(Fam172a-/-小 鼠 腹 腔 注 射 1mg/kgTM)、Fam172a-/-TM+NF-B 抑 制 剂 DHMEQ 组(Fam172a-/-小鼠同时腹腔注射 1 mg/kg TM 和4 mg/kg DHMEQ)。造模24 h 后,麻醉小鼠,球后取血,然后处死小鼠,留取肝脏组织。1.5 肝脏生物化学指标的检测使用 Olympus AU 2700 全自动生化分析仪和相应的检测试剂盒,检测小鼠血浆的丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平。1.6 肝脏苏木素&伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E)将留取的肝左叶固定于4%多聚甲醛,脱水包埋后,于首都医科大学附属北京地坛医院病理科进行切片(厚度为 4 m)和 HE 染色。1.7 肝脏油红 O 染色将留取的肝组织固定于4%多聚甲醛,于北京塞维尔有限公司进行标本包埋和油红 O 染色。1.8 蛋白质印迹实验(Western blotting,WB)肝组织加入 RIPA 裂解液后利用冰冻研磨机充分裂解,将所得组织裂解液离心(4,12 000 r/min,10 min)后取上清,上清液即为组织总蛋白原液,测定其蛋白浓度。取 40 80 g 变性总蛋白经预制胶电泳(浓缩胶:80 V,分离胶:120 V)分离目的蛋白,转膜(100 V,90 min)并封闭(5%脱脂奶粉,室温 1 h)。分别加入一抗 GRP78(11 000)、p-NF-B(1 500)、NF-B(1 1 000)、CHOP(11 000)和-Actin(11 000)于 4 孵育过夜,1 TBST 洗膜 10 min,重复 3 次后,分别加入相应二抗(1 5 000)室温孵育 1 h,1 TBST 洗膜 5 min,重复 3 次后,显色曝光。利用Image J 软件对成像条带进行灰度值分析,并利用GraphPad Prism 8.0 软件对结果进行统计学分析并作图。1.9 统计学分析所有实验数据采用 GraphPad Prism 8.0 软件进行统计分析及绘图,计量资料均采用 x s表示,且均要进行方差齐性检验和非参数检验,两组独立数据之间采用独立样本 t 检验,3组及以上数据采用单因素方差分析(one-wayANOVA),P 0.05 表示差异显著具有统计学意义。2 结果2.1 Fam172a 基因敲除加重内质网应激诱导的 NAFLD为了对比 TM 造模后 WT 小鼠和 Fam172a-/-小鼠肝功能的情况,我们对小鼠血清 ALT 和 AST水平进行检测。结果如图 1 所示,在 WT 小鼠中,与 Control 组相比,TM 组小鼠的血清 ALT 水平明显升高(P 0.01);在 Fam172a-/-小鼠中,Con-trol 组和 TM 组小鼠的血清 ALT 水平无明显差异;无论是在 TM 组还是 Control 组,Fam172a-/-小鼠的 血 清 ALT 水 平 均 较 WT 小 鼠 明 显 升 高(P0.01)。在 WT 小鼠和 Fam172a-/-小鼠中,与 Control 组相比,TM 组小鼠的血清 AST 水平均明显升高(P0.05 或 P0.01);无论是在 TM 组还是 Control 组,Fam172a-/-小鼠的血清 AST 水平均较 WT 小鼠明显升高(P0.01)。3医学分子生物学杂志,2024,21(1):001-008 J Med Mol Biol,2024,21(1):001-008A:血清 ALT 水平;B:AST 水平。P0.05,P0.01。图 1 TM 造模后,各组小鼠血浆 ALT 和 AST 水平为 了 进 一 步 了 解 TM 造 模 后 WT 小 鼠 和Fam172a-/-小鼠肝脏损伤和脂质堆积水平,我们对小鼠肝脏进行 HE 染色、油红 O 染色。结果如图2 所示,将 WT 小鼠和 Fam172a-/-小鼠的 TM 组与Control 组两两进行比较,HE 染色结果提示在 WT小鼠和 Fam172a-/-小鼠中,与 Control 组相比,TM 组小鼠肝脏气球样变、坏死和汇管区炎症均明显加重,Fam172a-/-TM 组小鼠较 WT-TM 组加重更为显著;肝脏油红 O 染色结果提示在 WT 小鼠和Fam172a-/-小鼠的肝脏中,TM 组小鼠肝脏脂质堆积均较 Control 组更明显,且无论是在 TM 组还是Control 组,Fam172a-/-小鼠肝脏脂质堆积均较WT 小鼠更为严重。以上结果表明,Fam172a 基因敲除加重 ERS 诱导的肝损伤和脂质堆积。A:肝脏 HE 染色(100);B:肝脏油红 O 染色(200)。P0.05,P0.01。图 2 TM 造模后,各组小鼠肝脏炎症和脂质堆积水平 为了研究 Fam172a 基因敲除影响 TM 诱导的小鼠 ERS 模型的分子机制,我们利用 WB 方法检测 WT 和 Fam172a-/-小鼠肝脏 FAM172A 和 ERS通路关键分子(GRP78 和 CHOP)的蛋白质水平。结果如图 3 所示,FAM172A 蛋白在 Fam172a-/-小鼠肝脏中几乎没有表达,说明 Fam172a-/-小鼠已成功敲除 Fam172a 基因;且在 WT 小鼠中,TM 组较 Control 组小鼠肝脏中的 FAM172A 蛋白表达显著上调(P0.01)。与 Control 组相比,TM 组小鼠肝脏中的 GRP78 和 CHOP 表达水平均显著上调(P0.05、P 0.01)。Fam172a-/-小鼠与 WT 小鼠相比,Control 组之间 GRP78 和 CHOP 表达水平无明显差异,而 Fam172a-/-TM 组的 GRP78 和 CHOP表达水平显著高于 WT-TM 组(P 0.05、P 0.01)。以上结果表明,Fam172a 基因敲除后会上调 ERS 通路的关键分子。4李梦绮,等.Fam172a 基因敲除加剧非酒精性脂肪性肝病的机制研究A:FAM172A、GRP78 和 CHOP 的蛋白质表达;B:对 A 中 WB 条带进行灰度值分析(n=4)。-Actin 为内参蛋白。P0.05,P0.01。图 3 TM 造模后,各组小鼠肝脏中 FAM172A、GRP78 和 CHOP 的表达情况2.2 Fam172a 基因敲除活化 NF-B 通路NAFLD 经典的“二次打击假说”认为肝脏炎症可导致 NAFLD 的进展,而 NF-B 是调节炎症最重要的转录因子2,22-23。为了进一步探讨 Fam172a基因敲除对 NF-B 的影响,我们利用 WB 方法检测 WT 和 Fam172a-/-小鼠肝脏 pNF-B 和 NF-B的蛋白质水平。结果如图4 所示,在 WT 小鼠中,与 Control 组相比,TM 组小鼠肝脏中 pNF-B/NF-B 的相对水平稍有增加,但无显著性差异。在 Fam172a-/-小鼠中,与 Control 组相比,TM 组小鼠肝脏中的pNF-B/NF-B 的相对水平显著上调(P 0.01)。Fam172a-/-小鼠与 WT 小鼠相比,Control 组之间pNF-B/NF-B 的 相 对 水 平 无 明 显 差 异,而Fam172a-/-Tm 组的 pNF-B/NF-B 的相对水平显著高于 WT-Tm 组(P0.01)。A:pNF-B 和 NF-B 的蛋白质表达;B:对 A 中 WB 条带进行灰度值分析(n=4)。-Actin 为内参蛋白。P 0.01。图 4 TM 造模后,各组小鼠肝脏中 pNF-B 和 NF-B 的表达情况2.3NF-B 介导 Fam172a-/-小鼠中内质网应激诱导的NAFLD 为了研究 Fam172a 基因敲除是否通过 NF-B 来介导 Fam172a-/-小鼠中内质网应激诱导的 NAFLD,我们利用 NF-B 抑制剂 DHMEQ 对 Fam172a-/-小鼠进行处理,并检测Fam172a-/-TM 组和Fam172a-/-TM+DHMEQ 组小鼠血浆的 ALT、AST 水平。结果发现,与 Fam172a-/-TM 组相比,Fam172a-/-TM+DHMEQ 组小鼠血浆的 ALT 水平显著降低(P 0.05),AST 水平无明显变化(图5)。5医学分子生物学杂志,2024,21(1):001-008 J Med Mol Biol,2024,21(1):001-008A:血清 ALT 水平;B:AST 水平。P0.05。图 5 Fam172a-/-小鼠 TM 造模后,TM 组和 TM+DHMEQ 组小鼠血浆 ALT 和 AST 水平 为了进一步了解 NF-B 抑制剂 DHMEQ 处理对TM 造模后 Fam172a-/-小鼠肝脏损伤和脂质堆积水 平 的 影 响,我 们 对 Fam172a-/-TM 组 和Fam172a-/-TM+DHMEQ 组小鼠肝脏进行 H&E染色、油红 O 染色和肝脏 TG 含量检测。结果如图6 所示,HE 染色结果提示与 Fam172a-/-TM 组小鼠相比,Fam172a-/-TM+DHMEQ 组小鼠肝脏气球样变、坏死和汇管区炎症明显减轻;肝脏油红 O染色结果提示,Fam172a-/-TM+DHMEQ 组肝脏脂质堆积较 Fam172a-/-TM 组改善。以上结果表明,急性 ERS 模型中,NF-B 抑制剂缓解了 Fam172a基因敲除引起的肝损伤和脂质堆积的加重。A:肝脏 HE 染色(100);B:肝脏油红 O 染色(200)。P 0.05。图 6 Fam172a-/-小鼠 TM 造模后,TM 组和 TM+DHMEQ 组小鼠肝脏炎症和脂质堆积水平 为了研究 NF-B 影响 Fam172a-/-小鼠中 ERS模型的分子机制,我们利用 WB 方法分别检测Fam172a-/-TM 组 和 Fam172a-/-TM+DHMEQ组小鼠肝脏 ERS 通路关键分子(GRP78 和 CHOP)的蛋白质水平。结果如图 7 所示,与 Fam172a-/-TM 组相比,Fam172a-/-TM+DHMEQ 组小鼠肝脏中的 GRP78和 CHOP 表达水平均显著降低(P0.01),即 NF-B 抑制剂可逆转 Fam172a 基因敲除引起的 ERS 通路关键分子的上调。A:TM 诱导的小鼠 ERS 模型,在 Fam172a-/-小鼠中,TM 组和 TM+DHMEQ 组小鼠肝脏中 GRP78 和 CHOP 的蛋白质表达;B:对左侧 WB 条带进行灰度值分析(n=4)。-Actin 为内参蛋白。P0.01。图 7 Fam172a-/-小鼠 TM 造模后,肝脏中 GRP78 和 CHOP 的表达情况6李梦绮,等.Fam172a 基因敲除加剧非酒精性脂肪性肝病的机制研究3 讨论NAFLD 的发病机制复杂,经典的“二次打击假说”和“多重打击假说”体现了肝脏炎症和内质网应激在 NAFLD 发生发展中的重要作用2,22,24。近年来也有文献报道了抑制肝脏炎症和内质网应激可能是治疗 NAFLD 的有效策略24-25。本研究探讨了 Fam172a 基因敲除在 ESR 诱导的 NAFLD 中的潜在作用机制。实验结果发现抑制 NF-B 通路可以通过减轻内质网应激来改善 Fam172a 基因敲除小鼠的 NAFLD。在本研究中,我们通过给小鼠腹腔注射 TM 建立了 ERS 模型。实验结果发现 TM 诱导的 ERS 模型小鼠的肝脏中 FAM172A 和 ERS 通路关键分子(GRP78 和 CHOP)的蛋白表达水平均显著升高,且在 Fam172a-/-小 鼠 中 升 高 更 为 明 显,因 此Fam172a 基因是 ERS 诱导的 NAFLD 损伤的负反馈调节因子,与本课题组前期结果一致21。NF-B 是一种与炎症、自身免疫性疾病、细胞凋亡和肿瘤发生等过程有关的转录因子,在许多细胞中均有表达23,25。许多研究表明 NF-B 可通过调控肝脏炎症促进 NAFLD 的进展2,25-27。由于Fam172a 基因敲除和 NF-B 均可促进 NAFLD 的进展,我们推测 Fam172a 基因和 NF-B 之间可能存在某种联系。有文献报道 ERS 可以通过多种机制激活 NF-B 通路引起炎症反应,且 ERS 可以通过激活 NF-B 通路来影响 NAFLD 的进展12,24,28。因此本研究假设 Fam172a 基因敲除通过活化 NF-B通路加重 ERS 诱导的 NAFLD。为了探究 Fam172a基因敲除对 NF-B 的影响,我们利用 WB 方法检测 WT 和 Fam172a-/-小鼠肝脏 pNF-B 和 NF-B的蛋白质水平。实验结果显示,在 Fam172a-/-小鼠中,TM 诱导的 ERS 模型小鼠肝脏中 pNF-B/NF-B 的相对水平显著升高。该实验结果表明,NF-B 是 Fam172a 的下游靶分子。2022 年明少雄29报道了草酸盐可通过 ERS-ROS-NF-B 信号通路诱导肾小管上皮细胞凋亡,且 NF-B 信号通路被抑制时,ERS-ROS 通路也被抑制,说明 ERS 通路和 NF-B 通路之间存在正反馈循环。董晓飞30同样报道了 NF-B 抑制剂 QNZ 可以抑制 ERS 和 NF-B信号转导。由此看来,抑制 NF-B 通路能够有效地抑制 ERS。由此本研究进一步假设抑制 NF-B 通路可以减轻 ERS 诱导的 NAFLD。为了验证这一猜想,本研究利用 NF-B 抑制剂 DHMEQ 处理 Fam172a-/-小鼠,实验结果显示在 Fam172a-/-小鼠中,经 DHMEQ 处理后的 TM 造模小鼠肝脏的 NAFLD 相关表型显著改善,ERS 通路关键分子(GRP78 和 CHOP)的表达水平也显著降低。以上结果证实,抑制 NF-B通路可以减轻 Fam172a 基因敲除诱导的 NAFLD,其机制主要是抑制 ERS。本课题组前期研究发现,Fam172a 基因敲除可加重 ERS 诱导的 NAFLD,而本文则重点研究了Fam172a 基因敲除在 ESR 诱导的 NAFLD 中的潜在作用机制。本文首次证明了 NF-B 是 Fam172a 基因的下游靶分子,并通过 NF-B 将肝脏炎症和ERS 这两个 NAFLD 关键发病机制结合在一起。本研究发现 Fam172a 基因可以调控 NF-B 通路,但其具体的调控机制还未明确,我们将在下一步的 实 验 中 继 续 完 善 该 机 制 的 研 究。此 外,Fam172a 基因除了调控 ERS 通路外是否还会对其他 NF-B 下游通路造成影响也是我们需要进一步探究的问题。综上,本文的研究结果表明 Fam172a 基因敲除可通过活化 NF-B 通路来加重 ESR 诱导的NAFLD。本文只在动物水平研究了 Fam172a 基因敲除在 ESR 诱导的 NAFLD 中的作用机制,后续我们还将利用 TM 建立 HepG2 细胞系(Fam172a 基因高表达和低表达)的 ERS 模型,在细胞水平进一步验证 Fam172a 基因敲除在 ESR 诱导的 NAFLD中的作用机制。参考文献1 FRIEDMAN S L,NEUSCHWANDER-TETRI B A,RINELLAM,et al.Mechanisms of NAFLD development and therapeuticstrategiesJ.Nat Med,2018,24(7):908-922.2 YUAN S,LIU H,YUAN D,et al.PNPLA3 I148 M medi-ates the regulatory effect of NF-kB on inflammation in PA-treated HepG2 cellsJ.J Cell Mol Med,2020,24(2):1541-1552.3RAZA S,RAJAK S,UPADHYAY A,et al.Current treat-ment paradigms and emerging therapies for NAFLD/NASHJ.Front Biosci(Landmark Ed),2021,26(2):206-237.4 FRANCQUE S M,MARCHESINI G,KAUTZ A,et al.Non-alcoholic fatty liver disease:A patient guidelineJ.JHEPRep,2021,3(5):100322.5 RIAZI K,AZHARI H,CHARETTE J H,et al.The preva-lence and incidence of NAFLD worldwide:a systematic re-view and meta-analysisJ.Lancet Gastroenterol Hepatol,2022,7(9):851-861.6 WANG S,LIU Z,GENG J,et al.An overview of ferropto-sis in non-alcoholic fatty liver diseaseJ.Biomed 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