仙茅盐蒸炮制工艺优选.pdf

中药炮制专栏 基金项目:中药炮制技术传承创新项目(.)作者简介:张一美女硕士生研究方向:中药炮制工艺及原理:.通信作者:鞠成国男博士教授研究方向:中药炮制工艺及原理:.仙茅盐蒸炮制工艺优选张一美王巍李利华朱琳鞠成国(.辽宁中医药大学药学院辽宁 大连.国家中医药管理局中药炮制技术传承基地辽宁 大连)摘要:目的 采用正交试验设计法优选盐蒸仙茅最佳工艺 方法 采用正交试验设计法以盐水比例、闷润时间、蒸制时间为考察因素以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标优化盐蒸仙茅炮制工艺 结果 仙茅盐蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量置于密闭容器内加入盐水(盐水比例.每 仙茅饮片用 食盐)拌匀闷润 置于锅中蒸制 取出放凉 干燥即得 结论 优化所得盐蒸仙茅炮制工艺稳定可行且仙茅盐蒸后有效成分的含量高于仙茅生品、传统酒炙品和盐炙品盐蒸工艺优于盐炙工艺关键词:仙茅盐蒸工艺炮制正交试验中图分类号:文献标志码:文章编号:():./.(.):.(.).:.仙茅为石蒜科植物仙茅(.)的干燥根茎具有补肾阳、强筋骨、去寒湿的功效 仙茅始载于雷公炮炙论常用于肾阳不足、阳痿精冷、筋骨痿软、腰膝冷痛、寒虚崩漏、带下、痨虚内伤等临床病症 仙茅的化学成分主要包括酚类、桉烷类、黄酮类、多糖类、木脂素类、生物碱类、挥发油等 现代药理研究表明仙茅具有免疫调节、抗氧化、抗骨质疏松、抗关节炎、抗肿瘤、保肝、抗炎、血管保护等作用临床上多用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、骨质疏松症、肾阳不足所致的阳痿早泄及更年期综合征等疾病历代仙茅炮制方法主要有药汁制、泔水制、酒药学研究 .炒、酒浸、酒蒸等 与古代炮制方法相比现代炮制方法以酒炙法为主而对盐制法记载较少 贵州省中药饮片炮制规范(年版、年版)中新增了“用淡盐水漂约 沥干蒸至上气”的记载采用食盐水来对仙茅进行炮制以更好地发挥仙茅补肾阳、祛风湿、强筋骨的功效 盐制中药始载于雷公炮炙论根据辨证论治的需要用盐制法炮制中药取其引经、咸味、寒性、功用等作用以改变或缓和药性从而达到提高临床疗效的目的而仙茅归肾经中药炮制又有“入盐走肾脏”的传统理论同时在中药理论中五味中的咸味可以入肾 故选择用盐制法对仙茅进行炮制以期通过其引药下行入肾的作用来增强仙茅补肾壮阳、强筋健骨的作用 仙茅补肝肾、强筋骨的有效成分以酚苷类化合物为主其中发挥补肝肾作用的有效成分之一为仙茅苷中国药典 年版中规定以仙茅苷为指标性成分进行仙茅的质量控制仙茅中含量较高的成分有苔黑酚龙胆二糖苷和苔黑酚葡萄糖苷等其为仙茅发挥强筋骨作用的有效成分 本实验采用正交试验设计法以盐水比例、闷润时间、蒸制时间为考察因素以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷含量及醇溶性浸出物为评价指标优选盐蒸仙茅炮制工艺以期为盐蒸仙茅饮片的规范化、科学化、工业化生产奠定理论基础 材料.主要仪器 型电磁炉(美的集团股份有限公司)型高速万能粉碎机(浙江温岭市林大机械有限公司)型高效液相色谱仪(公司)型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏试验设备有限公司)型电子分析天平(梅特勒托利多公司)型医用超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司)型数显恒温水浴锅(上海江星仪器有限公司)型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)等.药品与试剂仙茅苷对照品(批号:纯度 )苔黑酚龙胆二糖苷对照品(批号:纯度)购自大连美仑生物技术有限公司苔黑酚葡萄糖苷对照品(批号:纯度)购自北京索莱宝科技有限公司黄酒(批号:酒精度)购自浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司食盐(批号:)购自大连新春多品种盐有限公司乙腈、甲醇、磷酸均为色谱纯其余试剂均为分析纯水为娃哈哈纯净水仙茅药材(批号:)购自安国市聚药堂药业有限公司经辽宁中医药大学中药鉴定室李峰教授鉴定为石蒜科植物仙茅(.)的干燥根茎 方法与结果.盐制仙茅的制备.盐炙法 取生仙茅饮片 置于密闭容器中加入盐水(食盐:水 每 仙茅饮片用 食盐)拌匀闷润 置于锅中 翻炒 取出放凉即得.盐蒸法 取生仙茅饮片 置于密闭容器中加入盐水(食盐水.每 仙茅饮片用 食盐)拌匀闷润 置于锅中蒸制 取出放凉 干燥即得.酒炙法 取生仙茅饮片 置于密闭容器中加入黄酒(即生仙茅饮片质量的)拌匀闷润待黄酒被吸尽后置于锅中以文火炒干取出放凉即得.醇溶性浸出物的测定 按中国药典 年版通则 项下醇溶性浸出物测定法中的热浸法进行测定.仙茅苷等 种成分的含量测定.色谱条件 仙茅苷:以 (.)为色谱柱以.磷酸溶液乙腈(/)为流动相流速 检测波长 柱温 进样量 苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷:以 (.)为色谱柱以乙腈().磷酸溶液()为流动相进行梯度洗脱()流速.检测波长 柱温 进样量 .对照品溶液的制备 精密称取仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷对照品适量分别加入甲醇溶解稀释混匀制得仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷、苔黑酚龙胆二糖苷质量浓度分别为.、.、.的单一对照品母液.供试品溶液的制备 取“.”项下盐蒸仙茅样品粉末(过三号筛下同).精密称定加入甲醇 称定质量于水浴锅中加热回流 取出放冷再次称定质量用甲醇补足减失的质量摇匀滤过 精密量取上述滤液 蒸干残渣加入甲醇复溶转移至 量瓶中加入甲醇稀释至刻度药学研究 .摇匀经.微孔滤膜滤过取续滤液即得同法制得仙茅生品及盐炙品的供试品溶液.系统适用性试验取上述各供试品溶液及单一对照品溶液适量按“.”项下色谱条件进样测定记录色谱图详见图.仙茅苷对照品(色谱条件).供试品溶液(色谱条件).苔黑酚龙胆二糖苷对照品(色谱条件).苔黑酚葡萄糖苷对照品(色谱条件).供试品溶液(色谱条件).仙茅苷.苔黑酚龙胆二糖苷.苔黑酚葡萄糖苷图 各成分 色谱图.线性关系考察分别精密吸取“.”项下各单一对照品母液适量用甲醇稀释制成仙茅苷质量浓 度 分 别 为.、.、.、.、.、.苔黑酚龙胆二糖苷.、.、.、.、.、.苔黑酚葡萄糖苷.、.、.、.、.、.的各单一对照品线性溶液按“.”项下色谱条件进样测定 以各待测成分进样量()为横坐标、峰面积()为纵坐标进行线性回归计算各成分的回归方程及线性范围结果见表.精密度试验分别精密吸取“.”项下各单一对照品溶液适量按“.”项下色谱条件连续进样 次 计算仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷峰面积的 值分别为.、.、.()表明仪器精密度良好表 各成分线性关系待测成分回归方程线性范围/仙茅苷.苔黑酚葡萄糖苷.苔黑酚龙胆二糖苷.稳定性试验 取“.”项下供试品溶液(仙茅生品)适量按“.”项下色谱条件进行测定分别于、进样 计算仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷峰面积的 值分别为.、.、.()表明供试品溶液在 内基本稳定.重复性试验 取仙茅生品样品粉末.共 份按“.”项下方法制备供试品溶液并按“.”项下色谱条件进行测定计算仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷的平均含量分别为.、.、.值 分 别 为.、.、.()表明该方法重复性良好.加样回收率试验 精密称取 份已知含量的同一批次仙茅样品(生品)粉末每份.分别加入适量“.”项下各单一对照品溶液按“.”项下方法制备供试品溶液并按“.”项下色谱条件进行测定计算仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷的平均加样回收率分别为.、.、.值分别为.、.、.单因素试验 本研究选择以盐水比例、闷润时间、蒸制时间进行单因素试验同时参考相关文献确定各因素的权重 种化学成分及醇溶性浸出物含量的权重均为 按以下综合评分公式进行计算:综合评分(/)其中 表示仙茅苷含量、表示苔黑酚葡萄糖苷含量、表示苔黑酚龙胆二糖苷含量、表示醇溶性浸出物含量表示仙茅苷含量的最大值、表示苔黑酚葡萄糖苷含量的最大值、表示苔黑酚龙胆二糖苷含量的最大值、表示醇溶性浸出物含量的最大值综合评分分值越高表示样品质量越好.盐水比例取生仙茅饮片每份 共 份加入不同比例盐水(每 生仙茅饮片 食盐)至密闭容器内闷润 后蒸制.取出放凉 干燥 考察不同盐水比例(、)对综合评分的影响 结果当盐水比例为 时综合评分最高而盐水比例 存在盐水与饮片无法完全拌匀的情况盐水比例存在盐水无法完全吸尽的情况故选择盐水比药学研究 .例为 正交试验设计详见表 表 不同盐水比例对综合得分的影响盐水比例仙茅苷()苔黑酚葡萄糖苷()苔黑酚龙胆二糖苷()浸出物()综合得分.闷润时间取生仙茅饮片每份 共 份加入盐水比例为 至密闭容器内闷润不同时间后蒸制.取出放凉 干燥 考察不同闷润时间(、)对综合评分的影响 结果表明闷润 时综合评分最高其他时间分值相差不大而闷润时间少于 时存在不能完全润透的情况为节约时间选择以闷润时间 进行正交试验设计详见表 表 不同闷润时间对综合得分的影响闷润时间/仙茅苷()苔黑酚葡萄糖苷()苔黑酚龙胆二糖苷()浸出物()综合评分.蒸制时间取生仙茅饮片每份 共 份加入盐水比例为 至密闭容器内闷润 蒸制不同时间取出放凉 干燥 考察不同蒸制时间(、.、.、)对综合评分的影响 结果表明蒸制 时综合评分最高其他时间分值相差不大而蒸制时间少于 时存在不能完全蒸透的情况为节约时间选择以蒸制时间 进行正交试验设计详见表 表 不同蒸制时间对综合评分的影响蒸制时间/仙茅苷()苔黑酚葡萄糖苷()苔黑酚龙胆二糖苷()浸出物()综合评分.正交试验.正交试验设计 以单因素试验为基础本研究以盐水比例()、闷润时间()、蒸制时间()为考察因素以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷和醇溶性浸出物含量的综合评分为评价指标采用()正交表进行设计 酒蒸仙茅炮制工艺的因素与水平见表 试验设计方案与结果见表方差分析结果见表 表 正交试验因素水平表水平因素 盐水比例 闷润时间/蒸制时间/.表 正交试验设计方案与结果序号仙茅苷()苔黑酚葡萄糖苷()苔黑酚龙胆二糖苷()醇溶性浸出物()综合评分.表 正交试验方差分析方差来源离均差平方和自由度 值 值.误差.注:.().由表 可知各因素对醇溶性浸出物及 种化学成分含量影响的大小顺序依次为 最优组合为 由表 可知因素、无显著影响(.)最终确定最优工艺为 即盐水比例.、闷润时间 、蒸制时间 .验证试验取生仙茅饮片每份 共 份按上述最优盐蒸炮制工艺制备 份盐蒸仙茅样品按“.”“.”项下方法分别测定含量并计算综合得分结果见表 综合评分 值为.表明所得最优盐蒸仙茅工艺稳定、可行表 验证试验结果编号仙茅苷()苔黑酚葡萄糖苷()苔黑酚龙胆二糖苷()浸出物()综合得分.仙茅生品、盐炙品、盐蒸品及酒炙品含量比较 取生仙茅饮片 按“.”“.”“.”项下方法分别制备盐炙品、盐蒸品和酒炙品再按药学研究 .“.”“.”项下方法测定生仙茅饮及 种炮制品中醇溶性浸出物及仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷的含量结果见表 结果显示盐蒸仙茅的醇溶性浸出物及仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷含量均高于仙茅生品、盐炙品和酒炙品表 仙茅生品、盐炙品、盐蒸品及酒炙品含量比较样品仙茅苷()苔黑酚葡萄糖苷()苔黑酚龙胆二糖苷()浸出物()生品.盐炙品.盐蒸品.酒炙品.讨论目前对盐制仙茅的研究较少有盐炙法和盐蒸法其经盐制后的炮制机理和化学成分变化等尚不明确 盐制中药的方法最早于雷公炮炙论中就有所记载 经过历朝历代的不断发展创新盐制饮片品种有所增加 沿用至今的方法多为盐炙法和盐蒸法但盐炙法存在火力不均、火候难以控制等问题而盐蒸法则能使饮片受热均匀且由于其操作过程中处于密闭环境减少了对饮片的污染 故本研究选择对盐蒸仙茅炮制工艺进行研究以期提高临床疗效和用药安全性为临床用药提供新思路本研究经实验考察并以本课题组前期研究为参考发现以“.”项下色谱条件测定仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷含量时其色谱峰分离度较好、基线较为平稳 故选择以“.”项下色谱条件对其进行检测酚苷类成分是仙茅发挥补肝肾、强筋骨作用的物质基础故本研究将醇溶性浸出物含量作为考察指标同时选择中国药典 年版中仙茅含量测定所规定的指标成分仙茅苷及仙茅酚苷类成分中含量较高的苔黑酚龙胆二糖苷和苔黑酚葡萄糖苷作为评价指标以盐水比例、闷润时间、蒸制时间为考察因素结合综合加权评分对工艺进行优化得到仙茅盐蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量置于密闭容器内加入盐水(盐水比例 .每 仙茅饮片用 食盐)拌匀闷润 置于锅中蒸制 取出放凉 干燥即得 经验证结果表明所得最优盐蒸仙茅炮制工艺具有一定的科学性与可行性 随着中药炮制技术的演变炮制工艺也在不断改进炮制方法不断创新 但由于炮制工艺变化较大中药成分较为复杂本研究后续尚需对其质量标准、药理实验、化学成分分析、临床疗效等进行更深入的研究参考文献:国家药典委员会.中华人民共和国药典 年版(一部).北京:中国医药科技出版社:.丁按伟.现代中药临床手册.南京:江苏科学技术出版社:.(/):.曹大鹏.仙茅抗骨质疏松化学成分及品质评价研究.长春:吉林农业大学.():.陈泉生陈万群杨士琰.仙茅的药理研究.中国中药杂志():.贾鑫王锋刘宝辉等.仙茅苷对脂多糖诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的影响.药学研究():.王长海张仲海马静.二仙汤治疗骨质疏松症 例.陕西中医():.刘霞吴文辉王耀登等.仙茅炮制历史沿革及现代研究进展.中国中医药信息杂志():.贵州省卫生厅.贵州省中药饮片炮制规范(年版).贵州:贵州人民出版社:.贵州省食品药品监督管理局.贵州省中药饮片炮制规范(年版).贵州:贵州科技出版社:.董国明张汉明.仙茅提取物与仙茅甙的补肾壮阳作用及其机理研究.中国中西医结合杂志():.张乃丹蒋益萍薛黎明等.仙茅酚苷类成分促进成骨细胞骨形成和抑制破骨细胞骨吸收.第二军医大学学报():.吕彤彤鞠成国刘博男等.仙茅盐炙工艺的优化.中成药():.贾天柱.中药炮制学.北京:中国中医药出版社:.国家药典委员会.中华人民共和国药典 年版(四部).北京:中国医药科技出版社:.李媛媛王巍鞠成国等.酒仙茅的微波炮制工艺建立及与传统炮制法的比较.中国药房():.艾雪鞠成国贾坤静等.酒仙茅炮制工艺的正交试验优选.时珍国医国药():./.():.(收稿日期:)药学研究 .