丁香菌酯与咪鲜胺对水稻纹枯病菌的协同作用_郭雪.pdf

54卷南 方 农 业 学 报 910丁香菌酯与咪鲜胺对水稻纹枯病菌的协同作用郭雪1，张昕淳1，欧菊1，胡珂1，李荣玉1，2，3*，李明1，2，3，廖逊1，2，3（1贵州大学作物保护研究所，贵州贵阳550025；2贵州省山地农业病虫害重点实验室，贵州贵阳550025；3贵州大学猕猴桃工程技术研究中心，贵州贵阳550025）摘要：【目的】研究丁香菌酯和咪鲜胺及其组合对水稻纹枯病菌的作用效果及对该病害的田间防治效果，为田间防控水稻纹枯病提供理论依据。【方法】在室内离体条件下，以水稻纹枯病菌为材料，采用菌丝生长速率法测定丁香菌酯和咪鲜胺原药及其组合对水稻纹枯病菌的生物活性，筛选出最佳配比，初步分析该组合对纹枯病菌的增效机制；根据最佳配比，进行田间防效试验。【结果】丁香菌酯和咪鲜胺原药单剂对水稻纹枯病菌菌丝生长均具有较好的抑制作用，有效抑制中浓度（EC50）分别为1.47和0.61 g/mL。丁香菌酯与咪鲜胺原药以质量比1 4、1 2、1 1、2 1、4 1进行组合时对纹枯病菌菌丝生长均具有抑制作用，EC50在0.120.24 g/mL；其中，丁香菌酯与咪鲜胺以质量比4 1组合时增效作用最明显，其EC50为0.12 g/mL，共毒系数（CTC）为955.81。田间试验结果显示，20%丁香菌酯SC与25%咪鲜胺EC以有效成分用量比4 1组合（48 g/ha+12 g/ha），药后21 d对水稻纹枯病的防治效果高达84.85%，极显著高于20%丁香菌酯SC（73.58%）和25%咪鲜胺EC（72.79%）单剂的防治效果（P0.01）。丁香菌酯与咪鲜胺以质量比4 1组合能提高纹枯病菌细胞膜的通透性、破坏细胞膜的完整性、增加可溶性蛋白含量。【结论】丁香菌酯与咪鲜胺以有效成分用量比4 1组合的增效作用明显，对水稻纹枯病有较好的协同防治作用，且明显减少药剂的使用量，有开发成水稻纹枯病增效制剂组合的潜力。关键词：水稻纹枯病菌；丁香菌酯；咪鲜胺；生理生化特性；田间防效中图分类号：S435.111.42文献标志码：A文章编号：2095-1191（2023）03-0910-09收稿日期：2022-04-19基金项目：国家自然科学基金项目（32160657，32160658）；贵州大学培育项目（贵大培育 2019 43号）；贵州大学大学生“SRT”计划项目（贵大SRT字 2021 256号）通讯作者：李荣玉（1984-），https:/orcid.org/0000-0002-4654-9352，博士，教授，主要从事农药毒理学、分子生物学及农产品质量安全研究工作，E-mail：第一作者：郭雪（1997-），https:/orcid.org/0000-0002-8045-5026，研究方向为农产品质量安全，E-mail：Synergistic effects of coumoxystrobin and prochloraz onRhizoctonia Solani KhnGUO Xue1，ZHANG Xin-chun1，OU Ju1，HU Ke1，LI Rong-yu1，2，3*，LI Ming1，2，3，LIAO Xun1，2，3（1Institute of Crop Protection，Guizhou University，Guizhou，Guiyang 550025，China；2Provincial Key Laboratory forAgricultural Pest Management in Mountainous Region，Guiyang，Guizhou 550025，China；3Engineering and TechnologyResearch Center of Kiwifruit，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China）Abstract：【Objective】The purpose of the study was to investigate the effect of coumoxystrobin，prochloraz and theircombination on Rhizoctonia solani Khn，and the field control efficacy of this disease，so as to provide theoretical basisfor the field control of rice sheath blight.【Method】Used R.solani as material in the indoor in vitro condition，the bioacti-vity of coumoxystrobin TC and prochloraz TC and their combination against R.solani was determined by mycelium growthrate method.The optimal ratio was screened out to preliminarily analyze the synergistic mechanism of the combinationagainst rice sheath blight.According to the optimal ratio，the field efficacy tests were carried out.【Result】The resultsshowed that coumoxystrobin TC and prochloraz TC single dosage had good inhibitory effects on the mycelial growth ofR.solani，and the effective inhibitory concentrations（EC50）were 1.47 and 0.61 g/mL respectively.The combination of cou-moxystrobin TC and prochloraz TC at the mass ratios of 1 4，1 2，1 1，2 1 and 4 1 had inhibitory effects on the myce-lial growth of R.solani，and the EC50was in the range of 0.12-0.24 g/mL.Among them，the synergistic effect was mostsignificant when the combination of coumoxystrobin and prochloraz at the mass ratio of 4 1，with an EC50of 0.12 g/mL，and a cotoxicity coefficient（CTC）of 955.81.Field test results showed that the combination of 20%coumoxystrobin SC南方农业学报Journal of Southern Agriculture2023，54（3）：910-918ISSN 2095-1191；CODEN NNXAABhttp:/DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.03.0273期9110引言【研究意义】水稻是我国重要的粮食作物，其年产量占全国粮食总产量的一半左右（Shen et al.，2018）。随着水稻种植面积的不断扩大，水稻产区纹枯病频繁发生，严重影响了水稻的产量和质量。水稻纹枯病是由立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Khn）引起的一种严重危害水稻生长的真菌病害（王勇等，2016；Feng et al.，2017；朱志炎等，2021），难防控、易患病，在全球均有发生（Kora et al.，2020），被列为水稻三大病害之一，仅我国由该病造成的年产量损失就达5亿kg（詹锡望，2021），且氮素化肥使用水平的提升以及矮秆、杂交水稻等特定水稻品种的推广，使纹枯病的发生越来越严重，成为制约水稻生产的重要限制因素（刘薇等，2009）。目前，水稻纹枯病的防治方法主要有抗性育种、生物防治、化学防治等（Huang et al.，2014；俞寅达等，2019；于艳敏等，2019），其中化学防治仍是防控水稻纹枯病的重要手段，但农药的长期单一使用、超剂量使用及不合理使用等原因造成不同地区的水稻纹枯病菌已对部分药剂产生了不同程度的抗性（刘世江等，2019）。通过不同作用靶标的杀菌剂组合既可以实现提高病害的防治效率，延缓抗药性发生，还能实现农药减量使用（张秀焕等，2014；赵建江等，2015；黄鹏等，2018；李纪潮等，2022）。因此，探究农药组合的作用机理是对现有农药创新应用的必然趋势。【前人研究进展】近年来，不同学者在药剂组合防治水稻纹枯病研究上取得了众多成果。噻呋酰胺与氟环唑以3 1和2 1配比时对水稻纹枯病菌有增效作用，增效系数分别为1.77和2.02（吉沐祥等，2014）；多粘类芽孢杆菌与井冈霉素A以7 3组合后增效最明显，防治效果与30%苯甲 丙环唑乳油（150 g a.i./ha）相当，是有效防治水稻纹枯病的生物化学制剂（周子燕等，2014）；咯菌腈与氟环唑以5 1和1 5进行配比作用于水稻纹枯病菌后有增效作用，增效系数分别为1.89和1.51（孙雪等，2015）；将啶酰菌胺与氟啶胺以3 1和3 2进行组合时对水稻纹枯病菌的增效效果显著，增效系数分别为7.10和5.46（刘妍等，2018）；己唑醇与申嗪霉素以3 2、稻瘟灵与噻呋酰胺以4 1进行配比对水稻纹枯病菌的菌丝生长表现为良好的抑制作用（连娜娜，2019）；使用丙硫菌唑与防治水稻纹枯病的常用药剂戊唑醇、氟环唑、吡唑醚菌进行组合时均表现为增效作用（张坤，2019）；井冈霉素与氟环唑以2 1的配比进行复配时对水稻纹枯病菌的增效作用明显，增效系数为1.93（黄建华等，2020）；通过水稻离体叶片测试发现己唑醇与丁香菌酯以有效成分比1 4进行组合时增效作用显著，其共毒系数（CTC）为155.90，对水稻纹枯病的防治效果可达80.79%（刘世江等，2021）；丙环唑与肟菌酯以1 5组合作用于水稻纹枯病菌后增效作用明显，其CTC为393.41，且田间防效达94.08%（周艾艾等，2021）。咪鲜胺作为一种咪唑类广谱杀菌剂在防治由子囊菌和半知菌等引起的多种病害时具有很好的防治效果（刘磊等，2018；李雷雷等，2021；龙家寰等，2021），对水稻纹枯病、水稻稻瘟病、小麦赤霉病等多种病害具有治疗和铲除作用（刘怀阿等，2018）。其作用方式主要是抑制14-脱甲基酶的活性，使细胞正常麦角甾醇的合成受到阻碍，破坏真菌细胞膜的正常功能，从而使细胞死亡，达到杀死病原菌的目的（马雪莉等，2020）。丁香菌酯是沈阳化工研究院开发的具有自主知识产权的新型杀菌剂（郑豪杰等，2020），属于甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，其作用机理是阻断细胞色素b和c1之间的电子传递，抑制细胞正常ATP的合成，抑制其线粒体呼吸而发挥抑菌作用（范昆等，2020）。丁香菌酯具有广谱的杀菌范围，对水稻纹枯病、黄瓜霜霉病和黄瓜灰霉病等具有良好的防治效果（周湘娟等，2013）。【本研究切入点】目前，已有多种杀菌剂与咪鲜胺组合登记用于防治水稻纹枯病，如戊唑醇与咪鲜胺、氟环唑与咪鲜胺、苯醚甲环唑与咪鲜胺等，咪鲜胺和丁and 25%prochloraz EC with the active ingredient mass ratio of 4 1（48 g/ha+12 g/ha）had a high control effect of 84.85%on rice sheath blight at 21 d post-dose，which was extremely sgnificantly higher than the control effects of 20%coumoxys-trobin SC（73.58%）and 25%prochloraz EC（72.79%）as single agent（P0.01）.The combination of coumoxystrobinand prochloraz with the active ingredient mass ratio of 4 1 could improve the permeability of cell membrane ofR.solanidamage the integrity of the cell membrane，and increase the content of soluble protein.【Conclusion】The synergistic effectof the combination of coumoxystrobin and prochloraz with the active ingredient mass ratio of 4 1 is significant，and it hasa better synergistic control effect on rice sheath blight，and greatly reduces the amount of pesticides used.It has the poten-tial to be developed into a combination of synergistic preparations for rice sheath blight.Key words：Rhizoctonia solani Khn；coumoxystrobin；prochloraz；physiological-biochemical characteristics；field control efficacyFoundation items：National Natural Science Foundation of China（32160657，32160658）；Guizhou University Cul-tivation Project（Guidapeiyu201943）；University Students“SRT”Project of Guizhou University（Guida SRT2021 256）郭雪等：丁香菌酯与咪鲜胺对水稻纹枯病菌的协同作用54卷南 方 农 业 学 报 912香菌酯是2种作用机理不同的杀菌剂，但甲氧基丙烯酸酯类丁香菌酯和咪唑类咪鲜胺组合在水稻上的使用尚未见相关报道。【拟解决的关键问题】选用2种作用靶标差异的杀菌剂丁香菌酯和咪鲜胺，采用菌丝生长速率法测定水稻纹枯病菌对咪鲜胺和丁香菌酯单剂及组合的敏感性，筛选出增效组合，并在田间验证该组合对水稻纹枯病的防治效果，为田间防控水稻纹枯病提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料1.1.1供试菌株水稻纹枯病菌菌株由贵州大学农产品质量安全实验室提供。1.1.2供试药剂96%丁香菌酯原药（吉林省八达农药有限公司）；97.8%咪鲜胺原药（温州乐清乐斯化工）；25%咪鲜胺EC；20%丁香菌酯SC。1.2试验方法1.2.1丁香菌酯和咪鲜胺原药对水稻纹枯病菌的作用效果参考赵琪君等（2019）采用菌丝生长速率法测定咪鲜胺和丁香菌酯对水稻纹枯病菌的敏感性。咪鲜胺原药和丁香菌酯原药用丙酮配制成1000 g/mL的母液置于4 冰箱备用。将操作台紫外灭菌0.51.0 h，灭菌后在无菌操作下将融化好的PDA培养基与药剂按一定比例加入到灭菌的培养皿中，配制成系列浓度梯度的含药培养基平板。含药培养基浓度：丁香菌酯（D）分别为0.8、1.6、3.2、6.4和12.8 g/mL，咪鲜胺（M）分别为0.75、1.50、3.00、6.00和12.00 g/mL。待平板上的培养基凝固后，用直径6 mm的打孔器在准备好的水稻纹枯病菌菌落上打孔，制成水稻纹枯病菌菌饼，接种于不同的培养基上，封口，做好标记，28 恒温培养；以不加药剂的PDA培养基为对照。每处理3次重复。待对照组菌落直径生长到培养皿的2/3后用十字交叉法测量各处理菌落直径（培养34 d），每个重复测量2次。运用Excel 2016计算其平均值，然后计算各浓度菌落直径平均值。按公式计算菌丝生长抑制率（王彦等，2016），使用DPS计算药剂的有效抑制中浓度（EC50）、毒力回归方程和相关系数（r）。抑制率（%）=（对照菌落增长直径处理菌落增长直径）/对照菌落增长直径 100（1）在单剂生物活性测定的基础上，将丁香菌酯与咪鲜胺按质量比（D M）分别设置4 1、2 1、1 1、1 2和1 4进行混配，4 1、2 1、1 1、1 2配比配制成最终质量浓度为0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 g/mL 5个系列质量浓度的含药PDA培养基，1 4配比配制成最终质量浓度为0.175、0.350、0.700、1.400和2.800 g/mL 5个系列质量浓度的含药PDA培养基，确定药剂对菌落生长的抑制率，单药剂质量浓度梯度不变。以不加药剂为对照，每处理3次重复。测定方法同单药剂测定。先以常规方法测出混剂EC50及组成该混剂的各单剂的EC50，再以其中一种单剂为标准（即毒力指数为100）计算各单剂的毒力指数、混剂的实际毒力指数（ATI）和理论毒力指数（TTI）；最后计算出混剂CTC（郑雪松等，2016）。毒力指数=标准药剂EC50/供试药剂的EC50（2）ATI=标准药剂EC50/供试药剂（混用）EC50 100（3）TTI=A的毒力指数A在混用中的含量（%）+B的毒力指数B在混用中的含量（%）（4）CTC=ATI/TTI（5）CTC80为拮抗作用；80CTC120为相加作用；CTC120为增效作用（郭晓刚等，2015；张宗磊等，2015）。1.2.2丁香菌酯和咪鲜胺商品制剂及其组合对水稻纹枯病的田间防治效果试验试验于2021年8月在贵州省惠水县好花红镇进行，供试水稻品种为泰优1055，水稻长势均匀。试验设计：20%丁香菌酯SC（有效成分用量75 g/ha）；25%咪鲜胺EC（有效成分用量93.75 g/ha）；丁香菌酯 咪鲜胺（D M4 1）设2个梯度，丁香菌酯+咪鲜胺有效成分用量分别为24 g/ha+6 g/ha（低剂量组）和48 g/ha+12 g/ha（高剂量组）；清水（CK）。共5个处理，小区面积30 m2，每处理3次重复，随机区组排列。于水稻抽穗期第1次调查纹枯病的发生情况，调查方法根据GB/T 17980.202000 农药田间药效试验准则（一）杀菌剂防治水稻纹枯病 的相关规定。以株为单位，根据水稻叶片和叶鞘的受害程度进行分级；以株为单位，每小区对角线五点取样，每点调查5丛，记录总株数、病株数和病级数（段小莉等，2018）。第1次调查后施药，采用3WBJ-16DZ多功能静电喷雾器喷药，全株均匀喷雾，分别于药后7、14和21 d进行调查，调查方法同上。按照公式（6）和（7）计算病情指数和田间防治效果。试验数据采用邓肯氏新复极差法进行统计分析。病情指数=（各级严重度病株数各级严重度代表数值）/（调查总株数9）100（6）防治效果（%）=（空白对照区病情指数药剂处理区病情指数）/空白对照区病情指数（7）3期9131.2.3丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌细胞通透性的影响参照刘世江等（2021）的方法，将空白对照纹枯病菌在PDA培养基培养，在菌落覆盖整个培养皿时，于无菌操作台用6 mm的打孔器在菌落边缘切取15个菌饼，分别接入含有PDB培养液（150 mL）的锥形瓶中，28 恒温下120 r/min振荡培养3 d形成菌丝悬浮液。取30 mL菌丝悬浮液加入50 mL的离心管中，加入药剂。单剂用量通过1.2.1的EC50计算获得，不同组合所加药剂量根据不同组合的EC50按照比例加入药剂，每组3次重复，以不加药剂的菌丝悬浮液为对照。加药后0、0.5、1、2、4、6、8和12 h测其电导率值，12 h后把所有菌丝悬浮液放入沸水中煮沸15 min，再测其电导率值。某时间的相对渗透率（%）=某时间电导率值（J1）/处理后的电导率值（J2）（8）1.2.4丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌细胞膜完整性的影响用1.2.3的方法获得菌丝悬浮液，将所获得的菌丝悬浮液取20 mL加入灭菌干燥的小锥形瓶中，用1.2.3方法加入药剂，加入药剂后培养1 h。参考辛志彤（2019）的方法，取0.10 g菌丝体，加入1 mL 50 mmol/L、pH 7.0的PBS，再加入适量10 g/mL碘化吡啶（PI），于30 下水浴染色1015 min。最后用PBS洗3次去除残留染料，保存在1 mL pH 7.0的PBS中，取少量样品制片，于荧光显微镜下观察拍照。1.2.5丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌可溶性蛋白的影响1.2.5.1酶液制备用1.2.3的方法获得菌丝悬浮液，将培养得到的菌丝悬浮液除去菌饼取100 mL加入准备好的灭菌干燥小锥形瓶中，用1.2.3方法加入药剂，药后分别培养0、3、6、12、24和48 h，分别取适量菌丝悬浮液5000 r/min离心5 min，弃上清，沉淀转入研钵中并加入0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5），液氮破碎后转入离心管中10000 r/min离心10 min，取上清液用于测定。1.2.5.2蛋白含量测定按蛋白含量测定试剂盒测定蛋白含量，具体操作步骤按使用说明书进行，用酶标仪测定在595 nm波长处的吸光度，每处理3次重复，结果取平均值。1.3统计分析本研究涉及的计算使用DPS v18.10进行分析，使 用 Origin 2017 绘 图，使 用 Photoshop CS6 制 作图版。2结果与分析2.1丁香菌酯和咪鲜胺原药及其组合对水稻纹枯病菌的作用效果丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌菌丝生长均具有较好的抑制作用，其EC50分别为1.47和0.61 g/mL（表1）。2种杀菌剂的协同作用测定结果显示，丁香菌酯与咪鲜胺不同组合均对水稻纹枯病菌菌丝生长具有较好的增效作用，其EC50为0.120.24 g/mL，CTC为360.69955.81。其中，丁香菌酯与咪鲜胺以质量比4 1组合时协同增效作用最明显，其CTC为955.81、EC50为0.12 g/mL。2.2丁香菌酯与咪鲜胺商品制剂及其组合对水稻纹枯病的田间防治效果田间试验结果（表2）显示，20%丁香菌酯SC、25%咪鲜胺EC及其组合对水稻纹枯病均具有较好的防治效果，其中，丁香菌酯 咪鲜胺（D M）的低剂量组和高剂量组处理对水稻纹枯病的防效极显著高于其单剂处理（P0.01，下同），药后7 d的防效分别为70.24%和77.78%，药后14 d的防效均超过75.00%，药后21 d的防效仍分别达79.53%和84.85%，且各处理对水稻生长均未产生不良影响。2.3丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌细胞膜通透性的影响采用外渗电导法测定丁香菌酯和咪鲜胺及其组合处理水稻纹枯病菌菌丝悬浮液不同时间后纹枯病菌细胞膜通透性的影响，结果（图1）显示，经药剂处理后，水稻纹枯病菌菌丝悬浮液的相对渗透率在供试药剂Fungicide咪鲜胺 Prochloraz丁香菌酯 CoumoxystrobinD M4 1D M2 1D M1 1D M1 2D M1 4毒力回归方程Toxic regression equationy=5.1533+0.7225xy=4.7670+1.3857xy=6.0491+1.1410 xy=5.9737+1.2258xy=5.8695+1.4036xy=5.9488+1.0186xy=5.8193+1.1951x置信区间Confidence interval0.13112.87110.85752.52970.05350.27080.06150.41890.14830.38900.03020.45400.09710.4471相关系数（r）Correlation coefficient0.986 60.993 00.993 40.989 40.991 20.989 70.985 7EC50（g/mL）0.611.470.120.160.240.120.21共毒系数CTC955.81625.44360.69650.50557.77表 1丁香菌酯和咪鲜胺原药及其组合对纹枯病菌的作用效果Table 1Synergistic effects of coumoxystrobin，prochloraz original medicine and their combination on R.solani郭雪等：丁香菌酯与咪鲜胺对水稻纹枯病菌的协同作用54卷南 方 农 业 学 报 914处理后1 h内上升，而后逐渐下降。其中，丁香菌酯与咪鲜胺以质量比4 1组合处理后纹枯病菌菌丝悬浮液的相对渗透率显著高于其他处理（P0.05）。表明2种药剂处理后，影响了水稻纹枯病菌可溶性蛋白含量变化，导致菌丝细胞内部功能紊乱，干扰正常的生长代谢，发挥抑菌作用。3讨论本研究通过菌丝生长速率法测定了丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌的毒力，明确了丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌菌丝生长均具有较好的抑制作用，丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌的EC50药剂Fungicide清水对照 CK20%丁香菌酯SC20%coumoxystrobin SC25%咪鲜胺EC25%prochloraz ECD M4 1（低剂量组）D M4 1（low dose group）D M4 1（高剂量组）D M4 1（high dose group）有效成分用量（g/ha）Active ingredientdosage7593.7524+648+12药后7 d7 d after fungicide application病情指数（%）Diseaseindex4.322.072.181.290.96防效（%）Controlefficiency52.151.54cC49.461.95cC70.240.70bB77.781.02aA药后14 d14 d after fungicide application病情指数（%）Diseaseindex4.711.521.671.080.81防效（%）Controlefficiency67.760.41cC64.581.13dC77.110.64bB82.710.99aA药后21 d21 d after fungicide application病情指数（%）Diseaseindex6.401.691.741.310.97防效（%）Controlefficiency73.581.00cC72.791.68cC79.530.55bB84.850.66aA表 2丁香菌酯与咪鲜胺商品制剂及其组合对水稻纹枯病的田间防治效果Table 2Control effects of coumoxystrobin，prochloraz commercial formulation and its combination on field control of rice sheathblight同列数据后不同大、小写字母分别表示差异达极显著（P0.01）和显著水平（P0.05）Different uppercase letters in the same column represented extremely significant difference（P0.01），and lowercase letters represented significant dif-ference（P0.05）图 1丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌菌丝细胞膜通透性的影响Fig.1Effects of coumoxystrobin and prochloraz on myceliummembrane permeability of R.solani折线上不同小写字母表示同一时间不同处理间差异显著（P0.05）。图3同Different lowercase letters on the broken line indicated significant dif-ference between different treatments at the same time（P0.05）.Thesame was applied in Fig.3CKD M（4 1）D M（1 1）DM024681012时间（h）Time相对渗透率（%）Relative permeability8684828078767472abcaaaaaaaaaaaababababababbbbbccccccccccccccca3期915分别为1.47和0.61 g/mL，与刘世江等（2019）测定丁香菌酯对水稻纹枯病菌（EC50为2.396 g/mL）的抑制作用存在一定差异，但与孙雪等（2015）测定结果丁香菌酯对纹枯病菌的活性（EC50为1.43 g/mL）无明显差异；而咪鲜胺对纹枯病菌的活性与段小莉等（2018）测定咪鲜胺对纹枯病菌的结果（EC50为8.40g/mL）存在较大差异，其原因可能是不同菌株来源地理差异而导致病原菌菌株间对药剂的敏感性存在一定差异。咪鲜胺通过抑制真菌细胞膜麦角甾醇的合成，破坏细胞膜正常结构，干扰细胞膜的正常功能，从而杀死病原菌（张玉超，2020）。有研究表明，抑制麦角甾醇合成类杀菌剂的作用位点单一，容易导致病原菌产生抗药性（Olaya et al.，2012）。丁香菌酯作为新型杀菌剂具有环境友好、高效、低毒、结构新颖等优点，且与咪鲜胺作用位点不同，2种药剂组合后表现为明显的增效作用。丁香菌酯与咪鲜胺组合后，各组合对水稻纹枯病菌菌丝生长均具有较好的增效作用，其EC50为0.120.24 g/mL，CTC为360.69955.81。20%丁香菌酯SC与25%咪鲜胺EC以有效成分用量24 g/ha+6 g/ha（低剂量组）和48 g/ha+12 g/ha（高剂量组）施于田间，药后21 d防效仍分别达79.53%和84.85%，极显著高于丁香菌酯（73.58%）和咪鲜胺（72.79%）单剂处理，且各处理对水稻生长均未产生不良影响。张冉（2018）分别用0.01和0.04 g/mL的咪鲜胺处理核盘菌后，能明显降低该菌细胞膜的通透性，组合处理后能破坏细胞膜的完整性；占礼钢（2020）研究表明，用丁香菌酯处理荔枝霜疫霉病菌后24 h，病菌可溶性蛋白的渗透量显著高于对照嘧菌酯药剂处图 2丁香菌酯和咪鲜胺对水稻纹枯病菌菌丝细胞膜完整性的影响Fig.2Effects of coumoxystrobin and prochloraz on mycelium cell membrane integrity of R.solani图 3丁香菌酯与咪鲜胺对水稻纹枯病菌菌丝可溶性蛋白的影响Fig.3Effects of coumoxystrobin and prochloraz on myceliumsoluble protein content of R.solaniCKMDD M（4 1）D M（1 1）时间（h）Time036122448茨光场 Fluorescence field明场 Bright field茨光场 Fluorescence field明场 Bright field可溶性蛋白（mg/g）Soluble protein0.500.450.400.350.300.250.200.15郭雪等：丁香菌酯与咪鲜胺对水稻纹枯病菌的协同作用54卷南 方 农 业 学 报 916理；张保（2021）用咪鲜胺处理意大利青霉后，其孢子细胞膜完整性受到破坏，且随着咪鲜胺浓度的升高，对意大利青霉孢子细胞膜的破坏严重。本研究生理生化初步抑菌机制测定结果表明，丁香菌酯与咪鲜胺以质量比4 1组合能破坏纹枯病菌细胞膜的完整性，提高细胞膜的通透性，且组合处理水稻纹枯病菌后引起病原菌可溶性蛋白的含量变化，影响生长代谢，干扰细胞新陈代谢过程，与张冉（2018）、占礼钢（2020）及张保（2021）的研究结果一致。表明丁香菌酯和咪鲜胺对病原菌生理生化产生一定影响，影响了病原菌生长代谢，从而发挥抑菌效果。由于抗性品种随着种植年限的延长抗性容易丧失，合理的药剂组合是防治水稻纹枯病的重要措施。利用药剂组合不仅可以减少用药量，降低成本，延缓病原菌抗药性的产生，还能达到更高的防治效果，同时也能提高药剂的安全性（刘妍等，2018；徐鹿等，2021）。丁香菌酯与咪鲜胺组合后能有效防治水稻纹枯病，且对水稻纹枯病菌的生理生化过程产生一定影响，有明显的增效作用，但丁香菌酯与咪鲜胺组合对水稻纹枯病菌的增效机制有待进一步探究，组合的田间实际防效也有待进一步验证。4结论将丁香菌酯与咪鲜胺原药按不同的质量比组合后对水稻纹枯病菌均有良好的抑制效果，在丁香菌酯与咪鲜胺以质量比4 1组合时增效作用明显，对水稻纹枯病菌有较好的协同防治作用。商品制剂组合的田间药效试验结果表明，丁香菌酯与咪鲜胺以有效成分用量4 1组合处理不仅明显提高了对水稻纹枯病的防治效果，还明显减少了制剂的使用量，具有开发成水稻纹枯病增效制剂组合的潜力。参考文献：段小莉，马超，张力卜，王佰涛，李佳浩，徐梁，王腾达，徐军，陈昶.2018.咪鲜胺、氟环唑及其混配对水稻纹枯病室内毒力及田间防效 J.植物保护，44（4）：221-225.DuanX L，Ma C，Zhang L B，Wang B T，Li J H，Xu L，WangT D，Xu J，Chen C.2018.Indoor toxicity and feild ef-fects of mixtures of prochloraz and epoxiconazole onrice sheath blight J.Plant Protection，44（4）：221-225.doi：10.16688/j.zwbh.2017433.范昆，张国福，付丽，武海斌，曲健禄，薛雯.2020.丁香菌酯与辛菌胺混配对2种苹果枝干病害的联合生物活性及田间防效 J.农药，59（12）：928-932.Fan K，Zhang G F，FuL，Wu H B，Qu J L，Xue W.2020.Joint-toxicity andfield efficacy of mixtures of coumoxystrobin and Xinju-nan against Valsa mali and Botryosphaeria dothidea J.Agrochemicals，59（12）：928-932.doi：10.16820/ki.1006-0413.2020.12.017.郭晓刚，王晓梅，侯志广，赵晓峰，赵兰坡，张浩.2015.15种杀菌剂及其相关配比对水稻稻瘟病菌的室内毒力及田间防效 J.农药，54（3）：223-226.Guo X G，Wang X M，Hou Z G，Zhao X F，Zhao L P，Zhang H.2015.Toxicitytest of 15 fungicides and related proportions against riceblast fungus and field effects 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