口腔鳞状细胞癌中CDK6、E2F-1的表达及临床意义.pdf

Journal of Inner Mongolia Medical UniversityJune.2023Vol.45No.3口腔鳞状细胞癌中CDK6、E2F-1的表达及临床意义（1.内蒙古医科大学附属医院 口腔科，内蒙古呼和浩特010050；2.呼和浩特市口腔医院，内蒙古呼和浩特010020）【摘要】目的 解析口腔鳞状细胞癌中CDK6、E2F-1表达与临床病理参数之间的关系，探讨其临床意义。方法 应用免疫组化法检测60例口腔鳞状细胞癌组织中CDK6、E2F-1的表达情况，用2检验分析二者与口腔鳞癌患者临床资料的关联，用Spearman秩相关分析二者表达的相关性。结果（1）CDK6在高分化组和中低分化组阳性表达率差异无统计学意义（P0.05）；在临床分期+期组的阳性表达率显著高于+期组，差异有统计学意义（P0.05）；淋巴结转移阳性组的表达率显著高于淋巴结转移阴性组，差异有统计学意义（P0.05）。E2F-1的阳性表达在高分化组、中低分化组、临床分期+期组、+期组、淋巴结转移阳性组和阴性组间差异均无统计学意义（P0.05）。（2）通过Spearman秩相关分析得出CDK6与E2F-1在口腔鳞状细胞癌中的表达无显著相关性（rs=0.014，P0.05）。结论 口腔鳞状细胞癌中CDK6的表达与淋巴结转移及临床分期有关，提示其参与口腔鳞癌的进展，为早期判定淋巴结转移情况及基因靶向治疗的进一步研究提供了新的思路。E2F-1的表达与口腔癌的临床病理参数无显著关联。文献报道中CDK6与E2F-1在RB细胞通路上下游均发挥重要作用，但是在本研究中并未发现二者的显著相关性。【关键词】口腔鳞状细胞癌；CDK6；E2F-1；淋巴结转移中图分类号：R765文献标识码：B文章编号：2095-512X（2023）03-0270-04王瑞1，周兴安1，达林泰2*口腔鳞状上皮细胞癌（oral squamous cell carci-noma，OSCC）占比口腔颌面部恶性肿瘤的 80%以上，占比口腔恶性肿瘤的90%以上，除了原发于口腔外，也包括由其他组织转移而来和由邻近组织原发灶直接侵袭口腔区域所致的病灶1，其恶性程度高、局部浸润性强并且淋巴结转移发生较早2。虽然近年来国内外学者对其发病机制有了一定的研究，在治疗方法上也有了部分改进，但患者的5年生存率仍然维持在 50%左右的较低水平3。治疗方面，中晚期患者术后因严重的面部畸形及功能缺陷导致其生活质量降低，再加上逐年上升的发病率，针对口腔癌的早期诊断和有效治疗有着重大意义。细胞周期是细胞生命活动的基本过程。细胞周期调控异常，细胞无限分裂、凋亡受阻可导致肿瘤形成4。近年来，人体肿瘤的分子生物学领域有了重大突破，细胞周期调控的多条信号通路被发现，其分子机制逐渐被解析。已知RB通路在细胞周期G1S期发挥了重要作用5。本研究中的细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）和核转录调节因子E2F-1均是Rb通路中的组成因子。我们将通过检测OSCC中二者的表达情况，探讨其在口腔鳞状细胞癌中的临床意义，为口腔癌的预防、诊断和治疗提供相关依据。1材料与方法1.1标本采集选取2013年6月至2019年3月在内蒙古医科大学附属医院口腔颌面外科手术治疗的口腔鳞状细胞癌患者60例。纳入标准：全部病例均为首次手术治疗，术前无放疗和化疗史，经临床病理验证已明确诊断，且有完整的病历资料。详细资料如表1所示，病例中男性41例，女性19例；年龄范围为2478岁，平均年龄59岁，其中59岁有34例、59岁有26例；WHO分化度分类：高分化42例，中度分化15例，低分化3例；淋巴结转移阳性23例，淋巴结转移阴性37例；期24例，期15例，期12例，期9例；发生部位分类：舌癌24收稿日期：2022-11-27；修回日期：2023-05-04基金项目：内蒙古自治区自然科学基金项目（2019LH08016）；内蒙古医科大学附属医院一般科研项目（NYFY YB048）第一作者：王瑞（1988），女，硕士，主治医师。研究方向：口腔颌面部肿瘤及牙槽外科。E-mail:*通信作者：达林泰，男，博士，主任医师，教授，硕士研究生导师。研究方向：口腔颌面部肿瘤及外伤。E-mail: 270内蒙古医科大学学报2023 年 6 月第 45 卷第 3 期例，唇癌16例，牙龈癌13例，颊癌4例，口底癌2例，颞部癌1例。WHO 病理组织学分类，组织病理学TNM 分类以及临床分期均按照国际抗癌联盟（UICC）标准进行。1.2免疫组化-SP法组织标本经甲醛固定、包埋切片、脱蜡脱水后，免疫组化法染色。设定阳性对照组为阳性表达组织切片，设定磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。其余操作按照试剂说明进行，PBS液冲洗，EDTA抗原修复，30%双氧水在室温下孵育15 min，PBS液洗片，滴加CDK6（工作浓度1 100）和E2F-1（工作浓度1 50）抗体，对照组滴加PBS液，37恒温箱孵育2 h。PBS液洗片后，滴加第二抗体，室温下孵育30 min。再次进行冲洗，滴加DAB显色剂进行显色，冲洗后苏木素复染（因E2F-1染色为核着色，所以不必复染），流水冲洗返蓝，再次脱水后树脂封片，显微镜下观察并分析结果。2结果判定在OSCC组织中，CDK6主要表达在细胞质内（偶见细胞核着色），胞浆呈黄色或棕黄色（见图1）；E2F-1可同时表达于细胞核和细胞质内，镜下见细胞质呈黄染，细胞核呈棕黄色深染（见图1）。低倍镜下找到癌组织，高倍镜（400）下选取5个清晰而典型的视野，计数阳性细胞个数在癌细胞总数中所占的比例，取5个视野的细胞比例平均值作为本片的表达比率，以全部组织标本的表达比率平均值作为分界值，个例的表达比率大于或等于分界值判定为阳性表达，小于分界值判定为阴性表达。3统计学方法应用SPSS 20.0统计学软件分析，CDK6、E2F-1与临床分期、病理分型等的关联采用 2检验，用Spearman秩相关分析研究二者间有无关联，检验标准为=0.05，当P0.05时差异有统计学意义。4结果4.1CDK6、E2F-1在OSCC中的表达与患者临床资料的关系分析60例OSCC组织中CDK6、E2F-1的表达情况与患者临床资料的相关性发现，CDK6阳性表达率为45%；E2F-1阳性表达率为40%。分别以性别、年龄（平均年龄59岁）、病理学肿瘤分化程度、恶性肿瘤分期以及淋巴结转移情况进行分组。CDK6在高分化组和中低分化组阳性表达率差异无统计学意义（P0.05）；在临床分期+期组的阳性表达率显著高于+期组，差异有统计学意义（P0.05）；淋巴结转移阳性组的表达率显著高于淋巴结转移阴性组，差异有统计学意义（P0.05）。E2F-1的阳性表达在高分化组、中低分化组、临床分期+期组、+期组、淋巴结转移阳性组和阴性组间差异均无统计学意义（P0.05）（见表1、表2）。淋巴结转移阳性淋巴结转移阴性CDK6E2F-1图1CDK6和E2F-1在有淋巴结转移和无淋巴结转移的高分化口腔鳞状细胞癌组织中的SP染色（400）组别性别年龄临床分期分化度淋巴结转移女男59岁59岁+高分化中低分化阳性阴性例数19413426392142182337CDK6阳性率（%）10（52.63）17（41.46）12（35.29）15（57.69）10（25.64）17（80.95）18（42.86）9（50.00）17（73.91）10（27.03）20.2411.1165.9190.0974.548P0.6230.2910.0150.7560.033表1 口腔鳞状细胞癌中CDK6的表达及其与患者临床资料的关系组别性别年龄临床分期分化度淋巴结转移女男59岁59岁+高分化中低分化阳性阴性例数19413426392142182337E2F-1阳性率(%)8（42.11）16（39.02）13（38.24）11（42.31）19（48.72）5（23.81）18（42.86）6（33.33）5（21.74）19（51.35）20.0220.0431.6100.2102.363P0.8830.8350.2050.6470.124表2 口腔鳞状细胞癌中E2F-1的表达及其与患者临床资料的关系 271Journal of Inner Mongolia Medical UniversityJune.2023Vol.45No.34.2口腔鳞状细胞癌中CDK6与E2F-1表达的相关性60例OSCC织中，CDK6和E2F-1表达均为阳性的有 11 例，CDK6 与 E2F-1 均为阴性表达的有 20例，CDK6阳性表达而E2F-1阴性表达的有16例，CDK6表达为阴性表达而E2F-1为阳性表达的有13例，Spearman 秩相关分析显示 OSCC 中 CDK6 与E2F-1间表达无显著相关性（rs=0.014，P0.05）（见表3）。5讨论口腔鳞状细胞癌是人体常见的恶性肿瘤，其发病涉及体内一系列遗传物质的改变，主要包括原癌基因的激活、抑癌基因的失活及各种功能性蛋白产物的异常表达等6，反映到细胞层面，就表现为细胞周期调控的异常7。RB信号通路是细胞周期调控的经典途径，CDK6是其重要组成部分。它在G1期与Cyclin D结合形成复合物，参与 pRb磷酸化，从而解除pRb对转录调节因子E2F-1的抑制效应8，9，启动DNA复制，使细胞周期向前推进。研究报道显示，CDK6在胃癌、卵巢癌、淋巴瘤等恶性肿瘤中均有异常表达，与多种肿瘤的发生及进展存在密切联系10，11。在临床治疗方面，CDKs抑制剂Palbociclib或 Ribociclib 与来曲唑联用治疗乳腺癌已被批准为一线治疗方案12，13；Ribociclib 针对部分肝癌细胞系发挥了良好的抗肿瘤活性14，它可增强肝癌细胞的辐射敏感性，作为放疗化疗的辅助用药15，也可通过独立于 CDK4/6 的PP5/AMPK轴对肝癌发挥抗肿瘤活性16。本研究中，CDK6在淋巴结转移阳性组的表达率显著增加。这提示我们若将CDK6作为OSCC淋巴结转移的检测指标之一，可能在疾病病程的判断及治疗等方面有一定的指导意义。临床上已有将CDKs抑制剂用于恶性肿瘤治疗的先例，并取得了一定的效果，结合此研究结果，未来或可将CDK6作为OSCC化疗的新思路及基因治疗的研究目标。E2F-1是转录调节因子家族中目前研究较多的一员。它是细胞周期 pRb 通路中的重要调控因子17，其转录调节功能除了受pRb通路影响外，还受到 p53 依赖的负反馈环18和 mir-RNAs 信号19的调控。它具有一定的诱导细胞凋亡的功能，且可发挥促癌和抑癌两种活性。已有研究证实，E2F-1在肺癌、肝癌、胰腺癌等恶性肿瘤中均有异常表达20，21；在结肠癌、恶性黑色素瘤中表达显著上调，并与肿瘤分级、分期及远处转移等呈正相关关系22。在本研究中，60例口腔鳞状细胞癌中E2F-1的总阳性率为40%（24/60），而其表达在肿瘤分化度、临床分期及淋巴结转移等方面的分组间差异无统计学意义。分析其可能原因如下：（1）E2F-1在人体恶性肿瘤中同时发挥促癌和抑癌作用，在口腔鳞状细胞癌中未能发现E2F-1表达与临床病理参数之间的相关性，在今后OSCC机制研究中应进一步关注E2F-1。（2）由于本研究样本含量小或者实验所纳入的 OSCC 病例分布不均匀，影响了实验结果。（3）RB信号通路中尚存在一些影响E2F-1表达的其他因子，有待于学者们进一步研究。参考文献1Sasahira T，Kurihara SM，Shimojjukoku Y，et al.Searching fornew molecular targets for oral squamous cell carcinoma with aview to clinical implementation of precision medicineJ.J PersMed，2022，12（3）：4132McDermott JD，Bowles DW.Epidemiology of head and necksquamous cell carcinomas：impact on staging and preventionstrategiesJ.Curr Treat Options Oncol，2019，20（5）：433Ford PJ，Rich AM.Tobacco use and oral healthJ.Addiction，2021，116（12）：3531-35404武强，窦长武，张占普.转录因子FoxM1调控恶性肿瘤病理性发展研究论述J.内蒙古医科大学学报，2022，44（3）：321-3245Lafitte M，Sirvent A，Roche S.Collagen kinase receptors aspotential therapeutic targets in metastatic colon 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