苦参药材及配方颗粒HPLC指纹图谱研究.pdf

质量标准Identification&SourceGendingSwhyenz 126苦参药材及配方颗粒HPLC指纹图谱研究刘米艳1，陈娜1，秦苹1，王祥培2，吴红梅1*（1.贵州中医药大学，贵阳 550025；2.贵州民族大学，贵阳 550025）基金项目：贵州省一流学科建设项目（2017008号）、广西壮瑶药重点实验室（桂科基字201432号）、壮瑶药协同创新中心（桂教科研201320号）、广西壮族自治区民族药资源与应用工程研究中心（桂发改高技函20202605号）、广西中医药重点学科壮药学（GZXK-Z-20-64）、广西一流学科中药学（民族药学）（桂教科研201812号）第一作者：刘米艳，硕士研究生*通讯作者：吴红梅，副教授，博士，主要从事中药、民族药质量控制及新药研发研究【摘 要】目的：运用高效液相色谱（HPLC）法建立不同批次苦参药材及配方颗粒的指纹图谱，用于苦参药材及配方颗粒的质量评价。方法：采用HPLC指纹图谱法，选用乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，柱温为30，检测波长为295nm，柱温30，进样量10 L，流速1.0mL/min，运用软件中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）建立不同批次苦参药材及配方颗粒的指纹图谱分析方法。结果：HPLC法结果显示，不同批次苦参药材及配方颗粒质量较稳定，而药材和配方颗粒间化学成分有差异。结论：该方法简便、准确、重复性好，可用于苦参药材及其配方颗粒的质量控制和评价，并为其科学应用提供参考。【关键词】苦参药材；配方颗粒；指纹图谱；质量评价Study on HPLC Fingerprint of Sophorae flavescentis Radix and formula granulesLiu Miyan1，Chen Na1，Qin Ping1，Wang Xiangpei2，Wu Hongmei1*（1.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，2.Guizhou Minzu University，Guiyang 550025）【Abstract】Objective：To establish fingerprint spectra of different batches of sophorae flavescentis radix and formula granules using high-performance liquid chromatography（HPLC）for quality evaluation of sophorae flavescentis radix and formula granules.Method：HPLC fingerprint method was used，with acetonitrile-0.1%phosphoric acid aqueous solution as the mobile phase，gradient elution，column temperature of 30，detection wavelength of 295 nm，injection volume of 10 L，flow rate 1.0 mL/min，and the software“Similarity Evaluation System for Traditional Chinese Medicine Chromatography Fingerprint（2012 Edition）”is used to establish fingerprint analysis methods for different batches of sophorae flavescentis radix and formula particles.Result：The HPLC results showed that the quality of different batches of sophorae flavescentis radix and its formula particles is relatively stable，while there are differences in chemical composition between the herbs and formula particles.Conclusion：This method is simple，accurate，and reproducible，and can be used for quality control and evaluation of sophorae flavescentis radix and formula granules，and provides reference for its scientific application.【Keywords】sophorae flavescentis radix；Formula granules；Fingerprint；Quality evaluation苦参来源于豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait.）的干燥根1。苦参作为一种常用中药材，药用历史悠久，且在我国壮、瑶、苗、蒙等少数民族中的得到了广泛应用。目前已被用于传统及流行医学，用于治疗麻风病、痢疾、溃疡、湿疹和皮肤灼伤等。苦参来源较广，质量参差不齐，影响临床治疗效果，因此，提高苦参药材质量的稳定性十分重要。现有文献报道关于苦参药材中的苦参碱和氧化苦参碱含量测定研究较多2，而对苦参配方颗粒的含量测定研究较少3。为更加完善苦参药材及苦参配方颗粒的质量控制体系、整体性地评价其质量并提高质量控制水平，本研究收集了不同批次苦参药材及配方颗粒，通过对苦参药材苦参药材及配方颗粒HPLC指纹图谱研究127及配方颗粒进行HPLC指纹图谱研究与优化，并对比苦参药材及配方颗粒的区别与联系，以期为苦参药材与配方颗粒的质量控制提供依据。1 仪器与材料1.1 仪器Waterse-2695高效液相色谱仪（厂家：美国Waters公司，型号：2695）；PDA检测器（厂家：美国Waters公司，型号：2998）；HH-6数显恒温水浴锅（厂家：常州澳华仪器有限公司，型号：HH-6）；AL204-IC/万分之一分析天平（厂家：METTLERTOLEDO仪器有限公司，型号：AL204-IC）。1.2 试剂甲醇（厂家：国药集团化学试剂有限公司，批号：20201224）；磷酸（厂家：重庆川东化工有限公司）；哇哈哈纯净水（厂家：杭州娃哈哈集团有限公司，批号：20200819）。1.3 样品来源十批药材分别来源于山西省、内蒙古、河北省、河南省；十批苦参配方颗粒来源广东一方制药有限公司，以上编号分别为S1-S20。2 实验方法与结果2.1 供试品溶液制备称取苦参药材粉末1 g及配方颗粒0.5 g，加甲醇25 mL，超声提取60 min，放冷，补重，过滤，取续滤液过0.22 m滤膜，即得。2.2 色谱条件参考纪瑛4HPLC指纹图谱法并对其方法进行了优化，确定了最佳色谱条件，流动相A为乙腈，流动相B为0.1%的磷酸水，色谱柱为DiasonsilC18（4.6 mm250 mm，5 m），检测波长为295 nm，柱温30，进样量10 L，流速1.0 mL/min。流动相洗脱梯度如下：表1 色谱条件时间乙腈（A%）0.1%的磷酸水（B%）020801040.551.53050504570305070305520806520802.3 数据处理使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版进行相似度分析。2.4 方法学考察2.4.1 精密度实验取苦参药材（S1）供试品溶液按“2.1”项下的方法制备，在“2.2”项下的色谱条件下连续进样6次考察仪器的精密度。结果表明，各共有峰的相对保留时间及相对峰面积RSD均小于3%，说明仪器的精密度良好。2.4.2 稳定性实验取苦参药材（S1）供试品溶液按“2.1”项下的方法制备提取液，按“2.2”项下的色谱条件下分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进样，考察药物的稳定性。结果表明，各共有峰的相对保留时间与相对峰面积RSD均小于3%，说明样品在24 h内稳定。2.4.3 重复性实验取苦参药材样品6份，按“2.1”项下的方法平行制备分析样品，按“2.2”项下的色谱条件分别进样，考察实验方法的重复性。结果表明，各共有峰的相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3%，说明该方法的重复性良好。3 苦参药材及苦参配方颗粒指纹图谱的建立取20批样品精密称定，按上述方法制备分析样品，按上述色谱条件进行检测分析，将所得到的色谱图数据文件导入中药指纹图谱相似度评价系统，得到苦参药材及其配方颗粒的HPLC指纹图谱，结果见图1、图3、图5。3.1 共有峰的确定10批苦参药材有28个共有色谱峰，10批苦参配方颗粒有20个共有色谱峰，苦参药材与苦参配方颗粒比较有15个共有色谱峰，结果见图2、图4、图6。3.2 相似度评价采用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版软件分别匹配10批苦参药材与10批苦参配方颗粒的HPLC色谱图相关参数，不同批次苦参药材、苦参配方颗粒的相似度在0.986-0.999之间；苦参药材及苦参配方颗粒之间的相似度在0.708-0.905之间。质量标准Identification&SourceGendingSwhyenz 128图1 10批苦参药材HPLC指纹图谱图2 10批苦参药材HPLC指纹图谱共有模式图950900850800750700650600550500450400350300250200150100500S10S9S8S7S6S5S4S3S2S1信号（mV）时间（min）0415268379 10162333431218253545142027374729394911172434441319263646152232422131412838483040502702602502402302202102001901801701601501401301201101009080706050403020100信号（mV）时间（min）0415268379 101616232333431212181825253545141420202737472939491111171724243444131319192626364615152222324221213141283848304050S112345678910苦参药材及配方颗粒HPLC指纹图谱研究129图3 10批苦参配方颗粒HPLC指纹图谱图4 10批苦参配方颗粒HPLC指纹图谱共有模式图1.3501.3001.2501.2001.1501.1001.0501.000950900850800750700650600550500450400350300250200150100500S10S9S8S7S6S5S4S3S2S1信号（mV）时间（min）0415268379 1016233343121825354514202737472939491117243444131926364615223242213141283848304050620600580560540520500480460440420400380360340320300280260240220200180160140120100806040200信号（mV）时间（min）0415268379 10161623334312121818253545141420273747293949111117172434441313192636461515223242213141283848304050S112345678910质量标准Identification&SourceGendingSwhyenz 130图5 苦参药材及苦参配方颗粒HPLC指纹图谱（S1-S10苦参药材；S11-S20苦参配方颗粒）图6 苦参药材及苦参配方颗粒HPLC指纹图谱共有模式图2.1002.0001.9001.8001.7001.6001.5001.4001.3001.2001.1001.0009008007006005004003002001000S20S19S18S17S16S15S14S13S12S11S10S9S8S7S6S5S4S3S2S1信号（mV）时间（min）0415268379 1016233343121825354514202737472939491117243444131926364615223242213141283848304050时间（min）0415268379 101623334312121825354514142027374729394911111724344413131926364615223242213141283848304050S1123456789102702602502402302202102001901801701601501401301201101009080706050403020100信号（mV）苦参药材及配方颗粒HPLC指纹图谱研究1314 讨论本研究对苦参HPLC指纹图谱色谱条件进行了优化，样品分离效果好，其精密度、稳定性、重现性均表现良好但在已发表文章中，只侧重对苦参药材或苦参配方颗粒的指纹图谱研究，所建立的指纹图谱方法对苦参配方颗粒和药材不一定都适用，本文综合了苦参药材及配方颗粒HPLC指纹图谱，为中药材苦参从饮片到中成药建立系统的质量评价体系提供参考。本研究10批苦参药材相似度在0.9880.994之间，有26个共有峰；10批苦参配方颗粒相似度在0.9860.999之间，有18个共有峰；苦参药材与苦参配方颗粒之间的相似度在0.7080.905之间，苦参药材与苦参配方颗粒有14个共有峰。从共有峰上发现其数目减少，表明苦参药材与苦参配方颗粒的相似度虽高，但在化学成分组成上差异较大，说明经提取和浓缩等制备工艺后其化学成分组成发生了较大改变，即苦参药材与苦参配方颗粒的一致性较差，因此，在后续研究中可对中药材的配方颗粒制备工艺进行考察，以提取出较高含量指标性成分以及更多有效成分为目标，保证其临床疗效。本文建立了苦参药材及配方颗粒HPLC指纹图谱，该方法简便、快速、准确，重复性好，专属性强，通过指纹图谱整体相似度为苦参药材和配方颗粒全面质量评价提供可靠依据。参考文献1国家药典委员会.中华人民共和国药典一部S.北京：中国医药科技出版社，2020：211.2李振兴,单雪梅，袁万瑞，等.HPLC测定十味苦硝熏洗散中苦参碱和氧化苦参碱的含量J.海峡药学，2020，32（11）：58-61.3李定发,邓淙友，张坚祥，等.优化苦参配方颗粒HPLC含量测定方法J.湖南中医杂志，2020，36（9）：173-176.4纪瑛.苦参的化学成分指纹图谱J.中成药，2010，32（4）：535-538.