桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制.pdf

第 50 卷 第 1 期2024年 1 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.50 No.1Jan.2024DOI：10.13481/j.1671587X.20240102桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制唐红梅,李月蛟,王星,王志彬,袁谢芳,王孝芸（西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室，四川 泸州 646000）摘要 目的目的：探讨桔梗元参汤（JGYST）对过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌的影响，并阐明其相关作用机制。方法方法：40 只雄性 C57BL/J 小鼠随机分为对照组、JGYST 组、卵清蛋白（OVA）组及 OVA+JGYST 组。OVA 组和 OVA+JGYST 组小鼠用 50 g OVA 腹腔注射致敏，每周2 次，致敏后连续 7 d 用 OVA 20 g 滴鼻激发哮喘；OVA+JGYST 组小鼠每次 OVA 激发前 1 h 用JGYST 200 L 灌胃，共灌胃 7 次；对照组用相同剂量的 PBS 缓冲液腹腔注射、滴鼻和灌胃；JGYST组小鼠用相同剂量 PBS 缓冲液腹腔注射和滴鼻，用相同剂量 JGYST 灌胃。采用 HE 染色和过碘酸-雪夫（PAS）染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现并计算炎症评分和 PAS 评分，流式细胞术检测各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、辅助性 T 淋巴细胞 1（Th1）、辅助性 T 淋巴细胞 2（Th2）和树突状细胞（DCs）数及成熟 DCs百分率和活性氧（ROS）水平，实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）法检测各组小鼠肺组织中白细胞介素 4（IL-4）、白细胞介素 10（IL-10）和肿瘤坏死因子 （TNF-）mRNA 表达水平。结果结果：HE 染色和 PAS 染色，对照组小鼠气道和肺泡结构完整、无炎症细胞浸润，无黏液分泌；与对照组比较，OVA 组小鼠气道组织周围有大量炎症细胞浸润，炎症评分和 PAS 评分明显升高（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组和 OVA+JGYST 组小鼠气道组织炎症细胞浸润减少，炎症评分和 PAS评分明显降低（P0.01）。流式细胞术检测，与对照组比较，OVA 组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、Th2 和 DCs数均明显增加（P0.05 或 P0.01），成熟 DCs百分率和 ROS 水平均明显升高（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组和 OVA+JGYST 组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、Th2 和 DCs 数均明显减少（P0.01），成熟 DCs 百分率和 ROS 水平均明显降低（P0.01）。RT-qPCR 法检测，与对照组比较，OVA 组小鼠肺组织中 IL-4、IL-10和 TNF-mRNA 表达水平升高（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组和 OVA+JGYST 组小鼠肺组织中 IL-4和 TNF-mRNA 表达水平降低（P0.01），IL-10 mRNA 表达水平升高（P0.01）。结论结论：JGYST 可以减轻过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌，其作用机制可能与其减少 Th2 细胞和 DCs数量，降低 ROS 水平和促炎细胞因子表达水平同时升高抗炎细胞因子表达水平有关。关键词 桔梗元参汤；哮喘；气道炎症；活性氧；细胞因子中图分类号 R562文献标志码 AEffect of Jiegeng Yuanshen Tang on airway inflammation and mucus secretion in allergic asthmatic mice and its mechanismTANG Hongmei,LI Yuejiao,WANG Xing,WANG Zhibin,YUAN Xiefang,WANG Xiaoyun（Inflammation and Allergic Reaction Laboratory，Affiliated Hospital，Southwest Medical University，Luzhou 646000，China）文章编号 1671587X(2024)01001008收稿日期 20230328基金项目 国家自然科学基金青年基金项目（82100021）；西南医科大学自然科学基金项目（2022QN010）作者简介 唐红梅（1987），女，四川省泸州市人，助理研究员，医学硕士，主要从事呼吸系统疾病基础和临床方面的研究。通信作者 王孝芸，主管技师（E-mail：）10唐红梅，等.桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制ABSTRACT Objective：To discuss the effect of Jiegeng Yuanshen Tang（JGYST）on airway tissue inflammation and mucus secretion in the mice with allergic asthma，and to clarify the related mechanism.Methods：Forty male C57BL/J mice were randomly divided into control group，JGYST group，ovalbumin（OVA）group，and OVA+JGYST group.The mice in OVA group and OVA+JGYST group were sensitized with 50 g OVA via intraperitoneal injection twice weekly，followed by 20 g OVA nasal drops daily for 7 d to induce asthma；the mice in OVA+JGYST group were gavaged with 200 L JGYST 1 h before each OVA challenge，and the administration lasted for 7 d；the mice in control group were given equivalent dose of PBS via intraperitoneal injection，nasal drops，and gavage；the mice in JGYST group were given the same dose of PBS for intraperitoneal and nasal administration and gavaged with the same dose of JGYST.The pathomorphology of lung tissue of the mice in various groups was observed by HE staining and periodic acid-Schiff（PAS）staining，and the inflammation and PAS scores were calculated；flow cytometry method was used to detect the numbers of eosinophils，neutrophils，helper T lymphocyte 1（Th1）cells，helper T lymphocyte 2（Th2）cells，and dendritic cells（DCs），as well as the percentage of mature DCs and level of reactive oxygen species（ROS）in lung tissue of the mice in various groups；real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR）method was used to detect the expression levels of interleukin-4（IL-4），interleukin-10（IL-10），and tumor necrosis factor-（TNF-）mRNA in lung tissue of the mice in various groups.Results：The HE and PAS staining results showed that the mice in control group had intact airway and alveolar structure，without infiltration of inflammatory cells or mucus secretion；compared with control group，there was a large number of infiltrating inflammatory cells in airway tissue of the mice in OVA group，and the inflammation and PAS scores were increased（P0.01）；compared with OVA group，the infiltration of inflammatory cells in airway tissue of the mice in JGYST group and OVA+JGYST group was decreased，and the inflammation and PAS scores were significantly decreased（P0.01）.The flow cytometry results showed that compared with control group，the numbers of eosinophils，Th2 cells，and DCs in lung tissue of the mice in OVA group were increased（P0.05 or P0.01），and the percentage of mature DCs and level of ROS were significantly increased（P0.01）；compared with OVA group，the numbers of eosinophils，Th2 cells，and DCs in lung tissue of the mice in JGYST group and OVA+JGYST group were decreased（P0.01），and the percentage of mature DCs and level of ROS were significantly decreased（P0.01）.The RT-qPCR results showed that compared with control group，the expression levels of IL-4，IL-10，and TNF-mRNA in lung tissue of the mice in OVA group were increased（P0.01）；compared with OVA group，the expression levels of IL-4 and TNF-mRNA in lung tissue of the mice in JGYST group and OVA+JGYST group were decreased（P0.01），while the expression level of IL-10 mRNA was increased（P0.01）.Conclusion：JGYST can alleviate the airway tissue inflammation and mucus secretion in the mice with allergic asthma，and its mechanism may be related to reducing the number of Th2 cells and DCs，decreasing the ROS level and expression level of proinflammatory cytokine，and increasing the expression level of anti-inflammatory cytokine.KEYWORDS Jiegeng Yuanshen Tang；Asthma；Airway inflammation；Reactive oxygen species；Cytokine哮喘是由多种细胞和炎症因子介导的慢性呼吸系统疾病，是危害全球数百万人健康的全球公共卫生问题。目前哮喘临床治疗以西医治疗为主，包括糖皮质激素、-受体激动剂和白三烯受体拮抗剂等。虽然上述药物可以缓解哮喘症状，但也存在产生耐药性、药物疗效明显下降、机体代谢紊乱和免疫力降低等不良反应。与西药比较，中药具有作用温和、作用时间长和治疗成本低等优势1。桔 梗 元 参 汤（Jiegeng Yuanshen Tang，JGYST）出自清朝名医黄元御 四圣心源，主要成分包括桔梗、元参、杏仁、橘皮、法半夏、茯苓、甘草和生姜，具有清咽解毒、宣肺平喘及和胃降逆的功效。研究2-5表明：JGYST 对小儿化脓性扁桃体炎、变应性鼻炎、急性咽炎和急性呼吸道感11第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）染均有治疗作用。关于 JGYST 对过敏性哮喘的治疗目前尚未见报道。本研究通过建立过敏性哮喘小鼠模型，采用 JGYST 进行干预，观察 JGYST 对哮喘小鼠的影响，并探讨其可能的作用机制。1 材料与方法 1.1实验动物实验动物、药物药物、主要试剂和仪器主要试剂和仪器健康雄性C57BL/J 小鼠 40 只，体质量 2035 g，68 周龄，由重庆腾鑫生物技术有限公司提供，动物使用许可证号：SYXK（川）2018-065。卵清蛋白（ovalbumin，OVA）购 自 美 国 Sigma 公 司，活 性 氧（reactive oxygen species，ROS）检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，桔梗、玄参、杏仁、陈皮、法半夏、茯苓、甘草和生姜购自北京同仁堂（集团）有 限 公 司，抗 CD4、抗 CD45、抗CD11c、抗 CD11b、抗 CD86、抗 白 细 胞 介 素 4（interleukin-4，IL-4）、抗 Siglec-F（CD170）、抗Ly6G 和抗干扰素 （interferon-，IFN-）抗体购自美国 Invitrogen公司，RNA 提取试剂盒和实时荧光 定 量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）检测试剂盒购自南京诺维赞生物 技 术 有 限 公 司。流 式 细 胞 仪 购 自 美 国 ACEA Biosciences 公 司，RT-qPCR 仪 购 自 瑞 士 Roche公司。1.2 实 验 分 组 和 哮 喘 模 型 制 备实 验 分 组 和 哮 喘 模 型 制 备 40 只 雄 性C57BL/J小鼠随机分为对照组、JGYST组、OVA组和 OVA+JGYST 组，每 组 10 只。OVA 组 和OVA+JGYST 组 小 鼠 采 用 OVA 联 合 氢 氧 化 铝Al（OH）3 腹 腔 注 射 致 敏，每 只 小 鼠 50 g OVA+2.5 mg Al（OH）3，每周 2次；致敏后每只小 鼠 连 续 7 d 用 20 g OVA 滴 鼻 激 发 哮 喘6，OVA+JGYST 组小鼠在每次 OVA 激发前 1 h 用JGYST 200 L 灌胃，共灌胃 7 次；对照组小鼠用相同剂量的 PBS 缓冲液腹腔注射、滴鼻和灌胃；JGYST 组小鼠用相同剂量 PBS 缓冲液腹腔注射和滴鼻，用相同剂量 JGYST 灌胃。造模期间密切观察各组小鼠的健康状况。1.3HE 染色和过碘酸染色和过碘酸-雪夫雪夫（periodic acid-Schiff，PAS）染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现并计染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现并计算炎症评分和算炎症评分和 PAS 评分评分收集各组小鼠肺组织，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋切片后行 HE 染色和PAS 染色，进行炎症评分和黏液分泌情况评估（PAS 评分）。炎症评分。每张切片选取 10 个区域对气道和血管周围组织炎症细胞浸润严重程度和浸润总 体 范 围 进 行 评 分。浸 润 严 重 程 度 评 分：0 分，无炎症细胞；1 分，10 个炎症细胞；浸润总体范围评分：0分，无炎症细胞浸润；1分，炎症细胞浸润范围75%。结合炎症细胞浸润严重程度和浸润总体范围对炎症进行评分，最高评分可达 9分7。PAS评分。每张切片选取10 个区域，对 PAS 阳性杯状细胞进行 PAS 评分：0分，PAS阳性杯状细胞百分率75%8。1.4流式细胞术检测各组小鼠肺组织中中性粒细流式细胞术检测各组小鼠肺组织中中性粒细胞胞、嗜 酸 性 粒 细 胞嗜 酸 性 粒 细 胞、辅 助 性辅 助 性 T 淋 巴 细淋 巴 细 胞胞 1（helper T lymphocyte 1，Th1）、）、辅助性辅助性 T 淋巴细胞淋巴细胞 2（helper T lymphocyte 2，Th2）和 树 突 状 细 胞和 树 突 状 细 胞（dendritic cells，DCs）数数取各组小鼠肺组织，用型胶原酶和 DNA 酶消化过滤获得单细胞，用相应抗体在4 条件下进行染色，0.5 h后上机检测中性粒细胞（CD45+Siglec-FLy6G+CD11b+）、嗜 酸 性 粒细胞（CD45+Siglec-F+Ly6GCD11c）、Th1细 胞（CD45+CD4+IFN-+）、Th2 细 胞（CD45+CD4+IL-4+）、成 熟 DCs（CD45+CD11c+CD86+）和 总 DCs（CD45+CD11c+）数。结果以各组荧光阳性细胞数表示，采用 Flowjo软件对流式细胞术检测结果进行分析，计算成熟DCs 百分率。成熟 DCs 百分率成熟 DCs 数/总DCs数100%。1.5 2，7-二氯荧光素二乙酸酯二氯荧光素二乙酸酯（2，7-dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA）荧光探针检测各组小鼠肺组织中荧光探针检测各组小鼠肺组织中 ROS水平水平取各组小鼠肺组织，用型胶原酶和 DNA酶裂解，过滤获得单细胞。收集细胞悬浮于用无血清培养液稀释的 DCFH-DA（11 000，100 L）中，37 细胞培养箱中孵育 20 min。每隔 35 min颠倒混匀，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞 3 次 以 充 分 去 除 未 进 入 细 胞 内的 DCFH-DA。洗涤后加 100 L 流式上样缓冲液，流式细胞术检测 ROS 水平。ROS 水平以各组细胞的 平 均 荧 光 强 度（mean fluorescence intensity，MFI）表示，采用 Flowjo软件对流式细胞术检测结12唐红梅，等.桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制果进行分析。1.6RT-qPCR 法 检 测 各 组 小 鼠 肺 组 织 中法 检 测 各 组 小 鼠 肺 组 织 中 IL-4、IL-10 和和 TNF-mRNA 表达水平表达水平采用 RNA 提取试剂盒分离各组小鼠肺组织总 RNA。以 RNA 为模板，采用逆转录试剂盒合成 cDNA。以 cDNA 为模板，采用 SYBR qPCR 试剂盒检测 IL-4、IL-10 和TNF-mRNA 表达水平。反应条件：95、10 s，58 、10 s，72 、10 s，共 40 个 循 环。以GAPDH 为内参，采用 2Ct法计算各组小鼠肺组织中 IL-4、IL-10和 TNF-mRNA 表达水平。引物序列见表 1。1.7统计学分析统计学分析采用 SPSS 17.0 统计软件进行统计学分析。各组小鼠肺组织炎症评分和 PAS 评分，各组小鼠肺组织中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、Th1细胞、Th2细胞和 DCs数，成熟 DCs百分率和 ROS 水平，各组小鼠肺组织中 IL-4、IL-10和TNF-mRNA 表达水平，均符合正态分布，以 xs表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间样本均数两两比较采用 LSD-t 检验。以 P0.05为差异有统计学意义。2 结 果 2.1各组小鼠肺组织病理形态表现各组小鼠肺组织病理形态表现、炎症评分和炎症评分和PAS评分评分HE染色和 PAS显示：对照组小鼠气道和肺泡结构完整、清晰，无炎症细胞浸润，无黏液分泌；与对照组比较，OVA 组小鼠气道变窄，管壁增厚，黏液分泌增加，气道组织和血管周围有大量炎症细胞浸润，炎症 评 分 和 PAS 评 分 明 显 升高（P0.01）；与 OVA 组 比 较，JGYST 组 和OVA+JGYST 组小鼠气道组织炎症细胞浸润和黏液分泌明显减少，炎症评分和 PAS 评分明显降低（P0.01）。见图 1和表 2。2.2各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞和中性粒细各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数胞数与对照组比较，OVA 组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞数明显增加（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组和 OVA+JGYST 组小鼠肺组织中表表 1RT-qPCR 引物序列引物序列TabTab.1 1Primer sequences of RTPrimer sequences of RT-qPCRqPCRPrimerIL-4IL-10TNF-GAPDHSequence（53）Forward:ATCATCGGCATTTTGAACGAGGTCReverse:ACCTTGGAAGCCCTACAGACGAForward:CGGGAAGACAATAACTGCACCCReverse:CGGTTAGCAGTATGTTGTCCAGCForward:GGTGCCTATGTCTCAGCCTCTTReverse:GCCATAGAACTGATGAGAGGGAGForward:CATCACTGCCACCCAGAAGACTGReverse:ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGAD：HE staining；EH：PAS staining；A，E：Control group；B，F：OVA group；C，G：JGYST group；D，H：OVA+JGYST group.图图 1各组小鼠肺组织各组小鼠肺组织 HE染色和染色和 PAS染色结果染色结果（200）Fig.1HE staining and PAS staining results of lung tissue of mice in various groups(200)13第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）嗜酸性粒细胞数明显减少（P0.05）。见表 3。2.3各组小鼠肺组织中各组小鼠肺组织中 Th1 和和 Th2 细胞数细胞数与对照组比较，OVA 组小鼠肺组织中 Th2 细胞数明显增加（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组和OVA+JGYST 组小鼠肺组织中 Th2 细胞数明显减少（P0.05）。见表 4。2.4各组小鼠肺组织中各组小鼠肺组织中 DCs 数数与对照组比较，OVA 组小鼠肺组织中总 DCs数和成熟 DCs数明显增加（P0.05 或 P0.01），成熟 DCs 百分率明显升高（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组和 OVA+JGYST 组小鼠肺组织中总 DCs数和成熟DCs 数明显减少（P0.01），成熟 DCs 百分率明显降低（P0.01）。见表 5。2.5各组小鼠肺组织中各组小鼠肺组织中 ROS 水平水平与对照组比较，OVA 组小 鼠 肺 组 织 中 ROS 水 平 明 显 升 高（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组和 OVA+JGYST 组小鼠肺组织中 ROS 水平明显降低（P0.01）。见图 2和表 6。2.6 各 组 小 鼠 肺 组 织 中各 组 小 鼠 肺 组 织 中 IL-4、IL-10 和和 TNF-mRNA 表达水平表达水平与对照组比较，OVA 组小鼠肺组织中 IL-4、IL-10和 TNF-mRNA 表达水平均明显升高（P0.01）；与 OVA 组比较，JGYST 组小鼠组织中 IL-4、IL-10和 TNF-mRNA 表达水平均明显降低（P0.01）；OVA+JGYST 组小鼠肺组织中 IL-4 和 TNF-mRNA 水平明显降低（P0.01），IL-10 mRNA 表 达 水 平 明 显 升 高（P0.01）。见图 3。3 讨 论 中药在防治哮喘方面积累了丰富的经验，且具有较好的临床效果9-11。研究2-4表明：JGYST 可用于治疗小儿化脓性扁桃体炎、变应性鼻炎和急性表表 2各组小鼠肺组织炎症评分和各组小鼠肺组织炎症评分和 PAS评分评分TabTab.2 2Inflammation scores and PAS scores of lung tissue of mice in various groups (n=6,xs)GroupControlOVAJGYSTOVA+JGYSTInflammation score2.170.827.750.82*2.830.614.500.84PAS score0.670.521.830.41*0.500.550.830.41*P0.01 compared with control group；P0.01 compared with OVA group.表表 3各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数TabTab.3 3 Numbers of eosinophils and neutrophils in lung tissue of mice in various groups(n=6,xs)GroupControlOVAJGYSTOVA+JGYSTNumber of eosinophils603.33293.629 957.675 692.08*382.33140.363 222.001 843.63Number of neutrophils857.50326.553 261.503 144.02673.50195.183 569.002 212.35*P0.01 compared with control group；P0.01 compared with OVA group.表表 4各组小鼠肺组织中各组小鼠肺组织中 Th1和和 Th2细胞数细胞数TabTab.4 4 Numbers of Th1 and Th2 cells in lung tissue of mice in various groups(n=6,xs)GroupControlOVAJGYSTOVA+JGYSTNumber of Th1664.00707.45377.67410.03323.83113.95401.67264.29Number of Th2167.3351.761 234.33456.00*204.8384.02496.67275.74*P0.01 compared with control group；P0.01 compared with OVA group.表表 5各组小鼠肺组织中总各组小鼠肺组织中总 DCs数数、成熟成熟 DCs数和成熟数和成熟 DCs百分率百分率TabTab.5 5Numbers of total DCs,mature DCs and percentages of mature DCs in lung tissue of mice in various groups (n=6,xs)GroupControlOVAJGYSTOVA+JGYSTNumber of total DCs1 7291.833 202.2236 178.3316 558.82*13 857.673 931.8116 398.336 992.92Number of mature DCs2 324.17527.2828 040.5013 712.93*1 977.83848.218 022.675 424.33Percentage of mature DCs(/%)13.542.2876.857.08*13.783.0745.0013.49*P0.05，*P0.01 compared with control group；P0.01 compared with OVA group.14唐红梅，等.桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制咽炎等，然而 JGYST 是否对哮喘有效尚未见文献报道。本研究采用 JGYST 对过敏性哮喘小鼠进行干预，结果显示：JGYST 可减轻哮喘小鼠气道组织炎症细胞浸润，减少嗜酸性粒细胞数量并且抑制组织气道黏液分泌，表明 JGYST 可减轻过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌，改善过敏性哮喘小鼠症状。CD4+T 淋巴细胞主要分为 Th1细胞和 Th2细胞 2 个亚群，二 者 在 正 常 人 体 内 呈 动 态 平 衡，Th1/Th2 细 胞 免 疫 失 衡 是 过 敏 性 哮 喘 的 经 典 途径12。Th1细胞主要分泌 IFN-，抑制由 IL-4诱导的 IgE 的生成。Th2 细胞主要分泌 IL-4，可激活嗜酸性粒细胞，促进气道炎症、气道重塑和黏液分泌13-16。本研究结果显示：OVA 组小鼠肺组织中Th2 细胞数明显增加，JGYST 干预可减少小鼠肺组织中 Th2 细胞数，提示 JGYST 可以改善小鼠体内 Th1/Th2细胞的免疫失衡状态。DCs是免疫系统中最重要的抗原提呈细胞，在固有免疫和获得性免疫中起桥梁作用。过敏原可刺激气道组织上皮细胞产生警报素和炎症因子，激活DCs进而启动和维持 Th2免疫反应17-18。CD11c通常被视为小鼠 DCs 的标记物19。研究20-21表明：在 OVA 诱导的过敏性哮喘小鼠中，与野生型小鼠比较，CDs敲除小鼠气道高反应和气道组织嗜酸性粒细胞浸润均有降低。本研究结果显示：OVA 可增加小鼠肺组织中 DCs 数，JGYST 干预可以明显减少小鼠肺组织的 DCs 数，表明 JGYST 可通过下调过敏性哮喘小鼠的 DCs表达减轻 Th2免疫反应。ROS 具有代谢调节功能，过量的 ROS 会对细胞造成损害，促进细胞死亡和疾病的发生22。研究23显示：ROS 可通过多种细胞内信号途径促进气道炎症，因此抑制 ROS 并减轻气道炎症是哮喘治疗的思路之一。研究24表明：JGYST 含药血清A：Number of total cells；B：Level of ROS.图图 2DCFH-DA 荧光探针检测各组小鼠肺组织中荧光探针检测各组小鼠肺组织中 ROS 水水平平Fig.2 Levels of ROS in lung tissue of mice in various groups detected by DCFH-DA fluorescence probe表表 6各组小鼠肺组织中各组小鼠肺组织中 ROS水平水平TabTab.6 6 Levels of ROS in lung tissue of mice in various groups (n=6,xs,104)GroupControlOVAJGYSTOVA+JGYSTROS level18 152.67732.9331 854.336 117.00*13 539.672 932.9419 425.832 471.19*P0.01 compared with control group；P0.01 compared with OVA group.A：Expression level of IL-4 mRNA；B：Expression level of IL-10 mRNA；C：Expression level of TNF-mRNA.*P0.01 vs control group；P0.01 vs OVA group.图图 3各组小鼠肺组织中各组小鼠肺组织中 IL-4、IL-10和和 TNF-mRNA表达水平表达水平Fig.3Expression levels of IL-4,IL-10,and TNF-mRNA in lung tissue of mice in various groups15第 50 卷 第 1 期 2024 年 1 月吉林大学学报（医学版）可 明 显 降 低 人 中 性 粒 细 胞 弹 性 蛋 白 酶（human neutrophil elastase，HNE）诱导的 ROS 增加。本研究结果显示：OVA 组小鼠肺组织中 ROS 水平明显升高，JGYST 干预可以明显降低小鼠肺组织中ROS 水平，进而减轻过敏性哮喘小鼠的气道组织炎症。IL-4 由 Th2 细胞分泌，是一种促炎细胞因子，可刺激 B 淋巴细胞合成 IgE15。TNF-是免疫反应中重要的细胞因子，在各种慢性炎症性疾病中均有表达，是中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的化学趋化因子，也 可 激 活 T 淋 巴 细 胞25-26。研究27-28表明：IL-10 作为一种抗炎细胞因子，可减少嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的浸润。本研究结果显示：OVA组小鼠肺组织中 IL-4、IL-10和 TNF-mRNA 表达水平明显升高，JGYST 干预后可明显降低小鼠肺组织 中 IL-4 和 TNF-mRNA 表 达 水 平，升高IL-10 mRNA 表达水平，表明 JGYST 可通过减少过敏性哮喘小鼠肺组织中 IL-4 和 TNF-表达，增加 IL-10表达，进而减轻气道炎症。综上所述，JGYST 可以减轻过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌，其机制可能与减少 Th2细胞和 DCs 数 量、降 低 ROS 水 平 和 IL-4 及 TNF-mRNA 表达水平以及升高 IL-10 mRNA 表达水平有关。本研究为采用 JGYST 治疗过敏性哮喘提供了理论和实验依据，未来应进一步通过临床试验研究JGYST 抑制过敏性哮喘气道炎症和黏液分泌的具体机制，为哮喘的治疗提供新的线索和思路。利益冲突声明：所有作者声明不存在利益冲突。作者贡献声明：唐红梅参与论文设计、撰写和修改，唐红梅、李月蛟、王星、王志彬和袁谢芳参与实验数据的获取和分析，王孝芸参与实验设计。参考文献1 王 鹏.支气管哮喘药物治疗现状及进展分析 J.实用中西医结合临床，2018，18（3）：176-177.2 杜文元.元 参 桔 梗 饮 治 疗 小 儿 化 脓 性 扁 桃 体 炎 25例报告 J.内蒙古医学杂志，2009，41（S2）：81.3 高健美，申 茹，徐英辉.桔梗元参汤对变应性鼻炎小鼠行 为 学 和 p38MAPK/COX-2 信 号 转 导 通 路 的影响 J.中药药理与临床，2014，30（1）：11-13.4 张语珉.桔梗玄参汤合千层纸汤治疗急性咽炎性咳嗽的临床疗效观察 J.中医临床研究，2018，10（8）：26-27，29.5 陈晓薇，程 桯.桔梗元参汤治疗急性上呼吸道感染临床疗效观察 J.深圳中西医结合杂志，2020，30（7）：61-62.6 ZHANG Y，TANG H M，YUAN X F，et al.TGF-3 promotes MUC5AC hyper-expression by modulating autophagy pathway in airway epitheliumJ.EBioMedicine，2018，33：242-252.