1、课题课题1 微生物试验室培养微生物试验室培养一、课题目标：了解相关培养基基础知识，进行无菌技术操作，进行微生物培养。二、课题重点和难点：无菌技术操作。三、技能目标：掌握培养基制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。第1页一、自学导引：一、自学导引：阅读书本P14P20，完成优化设计P16自学导引。1、关于培养基：（1）按物理状态来分：培养基可分为 和 。其中固体培养基用于菌种分离、判定菌落等。（2）按功效来分，可分为选择培养基和判别培养基。（3）按成份来分，可分为天然培养基和合成培养基。不论哪种培养基，普通都含有 、和 。第2页二、基础知识：二
2、、基础知识：1、比较各种培养基配方（见附录3），熟悉马铃薯琼脂培养基配制和操作过程。2、关于无菌技术：（1）取得纯净培养物关键是 。（2）怎样防止杂菌污染？（3）消毒和灭菌区分：（4）试验室惯用消毒和灭菌方法（见附录4）第3页三、试验操作三、试验操作本试验用马铃薯琼脂培养基进行草坪病原菌纯化培养，可分成制备培养基和纯化病原菌两个阶段进行。1、制备马铃薯琼脂培养基（1）计算 依据马铃薯琼脂培养基配方百分比，计算配制50ml培养基，各种成份用量。（2）称量 准确称取各种成份。（3）溶化 将10g去皮马铃薯切成薄片，加水50ml，加热到沸腾，20min后，用纱布过滤。往滤液中加入1g葡萄糖、1g琼脂
3、，用蒸馏水定容至50ml。用清水清洗三角锥瓶，并准备好棉花塞、牛皮纸。第4页（4）灭菌 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。（5）倒平板 待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见书本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。2、纯化草坪病原微生物（1）把有斑点草坪样本若干条剪到培养皿中，加入酒精消毒，用清水清洗后，浸泡待用。第5页（2）用镊子把样品夹到培养基上，每个培养基放五片青草。注意无菌操作，整个操作过程都应在酒精灯附近进行，镊子在接种前和接种后都应灼烧，预防杂菌感染，接种后培养基依旧倒置。注意以上全部操作都不能讲话，预防唾液中微生物污染平板。（3）7d后平板应出现几个不一样微生物，这时可挑选一个进行纯化。（4）培养基制取同上。用镊子夹取少许菌丝，快速接种到平板上，操作同书本P18。（5）操作后要用肥皂洗手，切勿在试验室吃喝东西或过位，或讲话，都会带来各种杂菌影响试验效果。第6页
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