金黄色葡萄球菌小菌落变异体在关节假体周围感染中的分子病原学特征.pdf

基金项目:北京积水潭医院自然基金培育计划(Z R-2 0 2 1 1 7)通信作者:郭宇C o r r e spo n d e n c e t o:G U O Y u E-m a i l:gu oyu_js t 1 6 3.c o md o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 3-6 1 8 4.2 0 2 3.0 2.0 0 1论著金黄色葡萄球菌小菌落变异体在关节假体周围感染中的分子病原学特征魏莹,刘颖,刘薇,郭宇北京积水潭医院医学检验中心微生物实验室,北京 1 0 0 0 3 5摘 要:本研究旨在了解关节假体周围感染(pe r ipr o s t h e t i c jo i n t i n f e c t i o n,P J I)中金黄色葡萄球菌小菌落变异体(S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s s m a l l c o l o ny v a r i a n t,S A S C V)的毒力、耐药基因携带情况及分子型别,为探讨其致病机制提供基础数据。收集从1 9例P J I患者关节液中分离出的S A S C V,进行全基因组测序、生物信息学分析及数据库比对,以了解其毒力相关基因和耐药基因的携带情况;采用多位点序列分型(m u l t i l o c u s s equ e n c e ty pi ng,M L S T)分析菌株型别,并构建系统发育树。结果显示,1 9株S A S C V中,有8株与正常形态金黄色葡萄球菌混合生长。对全部2 7株菌株进行全基因组测序,基因组长度为 2 6 9 6 4 3 7 3 0 1 1 8 0 3 bp,G+C 含量为(3 2.8 0.0 5)%。共检出2 3种毒力相关基因:其中1 4种黏附素相关基因的检出率较高,为2 1.1%1 0 0.0%;4种与免疫逃逸相关基因的检出率为3 6.8%6 8.4%;5种溶血及杀白细胞素基因也有检出。耐药基因检出1 2种:b l a Z检出率为7 8.9%(1 5/1 9);m e c A检出率为3 1.6%(6/1 9);大环内酯类及氨基糖苷类抗生素耐药基因也有不同比例的检出。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中耐药基因的检出数量高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌。M L S T分析结果显示,1 9株S A S C V共分1 0个型别。8组表型混合生长的菌株中,2组S C V与正常表型菌株分属不同型别,且毒力及耐药基因差异较大,其余6组为同一型别。本研究还发现,P J I中S A S C V的生物膜相关黏附素基因检出率高,耐药基因中m e c A检出率较高,M L S T以S T 5 9最多,其次为S T 3 9 8和S T 2 5。S C V与正常表型菌株混合生长时可分属不同型别。关键词:小菌落变异体;关节假体周围感染;金黄色葡萄球菌;全基因组测序中图分类号:R 3 7 8.1 文献标识码:AM o l e c u l a r p a t h o g e n i c c h a r a c t e r i s t i c s o f S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s s m a l l c o l o n y v a r i a n t s i n p e r i p r o s t h e t i c j o i n t i n f e c t i o n sWE I Y i ng,L I U Y i ng,L I U W e i,GU O Y uD e p a r t m e n t o f L a b o r a t o r y,B e i j i n g J i s h u i t a n H o s p i t a l,B e i j i n g 1 0 0 0 3 5,C h i n aA b s t r a c t:T h i s s t u dy a i m s t o i n v e s t iga t e t h e v i r u l e n c e,a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e ge n e pr o f i l e s,a n d m o l e c u l a r ty pe s o f S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s s m a l l c o l o ny v a r i a n t s(S A S C V s)i n pe r ipr o s t h e t i c jo i n t i n f e c t i o n s(P J I s)t o pr o v i d e f u n d a m e n t a l d a t a f o r u n d e r s t a n d i ng t h e i r pa t h oge n i c m e c h a n i s m s.A t o t a l o f 1 9 S A S C V s t r a i n s i s o l a t e d f r o m syn o v i a l f l u i d s a mpl e s o f P J I pa t i e n t s w e r e c o l l e c t e d,a n d w h o l e ge n o m e s equ e n c i ng,b i o i n f o r m a t i c s a n a lys i s,a n d d a t a b a s e c o mpa r i s o n w e r e pe r f o r m e d t o d e t e r m i n e t h e pr e s e n c e o f v i r u l e n c e a n d a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e ge n e s.M u l t i l o c u s s equ e n c e ty pi ng(M L S T)w a s e mpl oye d t o c l a s s i fy s t r a i n ty pe s a n d a phyl oge n e t i c t r e e w a s c o n s t r u c t e d by M E G A s o f t w a r e.T h e r e s u l t s d e m o n s t r a t e d t h a t a m o ng t h e 1 9 S A S C V s t r a i n s,e igh t w e r e 56微生物与感染 J o u r n a l of M i c r o b e s a n d I nfe c t i o n s,Apr i l 2 5,2 0 2 3,1 8(2):6 5-7 4 h t tp:jm i.f u d a n.e d u.c nf o u n d t o c o e x i s t w i t h S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s w i t h a n o r m a l ph e n o ty pe.A l l 2 7 s t r a i n s u n d e r w e n t w h o l e ge n o m e s equ e n c i ng,w i t h ge n o m e l e ngt h s r a ngi ng f r o m 2 6 9 6 4 3 7 bp t o 3 0 1 1 8 0 3 bp a n d G+C c o n t e n t o f(3 2.8 0.0 5)%.A t o t a l o f 2 3 v i r u l e n c e-r e l a t e d ge n e s w e r e d e t e c t e d:1 4 a d h e s i n-r e l a t e d ge n e s h a d d e t e c t i o n r a t e s b e t w e e n 2 1.1%a n d 1 0 0.0%;f o u r i mm u n e e v a s i o n-r e l a t e d ge n e s h a d d e t e c t i o n r a t e s r a ngi ng f r o m 3 6.8%t o 6 8.4%;a n d f i v e h e m o lyt i c a n d l e u k o c i d i n ge n e s w e r e a l s o i d e n t i f i e d.T w e l v e r e s i s t a n c e ge n e s w e r e d e t e c t e d:b l a Z w a s d e t e c t e d i n 7 8.9%(1 5/1 9)o f t h e s a mpl e s;m e c A w a s d e t e c t e d i n 3 1.6%(6/1 9)o f t h e s a mpl e s;r e s i s t a n c e ge n e s f o r m a c r o l i d e a n d a m i n oglyc o s i d e a n t i b i o t i c s w e r e d e t e c t e d w i t h v a ryi ng r a t e s;a n d m e t h i c i l l i n-r e s i s t a n t S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s(MR S A)h a d a h igh e r n u m b e r o f d e t e c t e d r e s i s t a n c e ge n e s c o mpa r e d t o m e t h i c i l l i n-s e n s i t i v e S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s(M S S A).M L S T a n a lys i s r e v e a l e d 1 0 d i f f e r e n t s equ e n c e ty pe s(S T s)a m o ng t h e 1 9 S A S C V s t r a i n s.T h e r e w e r e e igh t gr o ups o f ph e n o ty pi c a l ly m i x e d s t r a i n s.I n t w o gr o ups S C V s a n d t h e i r n o r m a l ph e n o ty pe(N P)c o u n t e rpa r t s b e l o nge d t o d i f f e r e n t ge n o-ty pe s,w i t h s ign i f i c a n t d i f f e r e n c e s i n v i r u l e n c e a n d a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e ge n e s,w h i l e i n t h e r e m a i n i ng s i x gr o ups S C V s a n d N P s t r a i n s b e l o nge d t o t h e s a m e ge n o ty pe.T h i s s t u dy r e v e a l e d t h a t i n P J I s,t h e d e t e c t i o n r a t e o f b i o f i l m-r e l a t e d a d h e s i o n ge n e s i n S A S C V s i s h igh,a n d t h e pr e v a l e n c e o f m e c A i s r e l a t i v e ly e l e v a t e d.A m o ng t h e M L S T ge n o ty pe s,S T 5 9 i s t h e m o s t c o mm o n,f o l l o w e d by S T 3 9 8 a n d S T 2 5.W h e n S C V s c o e x i s t w i t h n o r m a l ph e n o ty pe s t r a i n s,t h ey m ay b e l o ng t o d i f f e r e n t ge n o ty pe s.K e y w o r d s:S m a l l c o l o ny v a r i a n t;P e r ipr o s t h e t i c jo i n t i n f e c t i o n;S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s;W h o l e ge n o m e s equ e n c i ng 人工关节置换术是治疗终末期关节损伤如骨关节炎、股骨头坏死等疾病的首选手术方法,能够有效缓解患者的临床症状并改善其生活质量。然而,一旦出现关节假体周围感染(pe r ipr o s t h e t i c jo i n t i n f e c t i o n,P J I),则可能给患者带来灾难性的影响。研究表明,尽管髋膝关节的P J I发生率相对较低,为1%2%1-2,但随着社会老龄化的发展趋势,接受人工关节置换术的患者数量逐渐增加,P J I已成为术后最严重的并发症之一。P J I具有较高的致残风险,患者往往须进行二次手术并长期使用抗生素,从而增加了个人经济负担和社会医疗保险压力。值得关注的是,目前P J I治疗仍存在较高的失败率:保留假体清创术后失败率为3 0%5 0%3;关节翻修术后感染复发率高达1 0%2 0%4-5。因此,在P J I诊疗过程中,病原学的精确诊断尤为关键。既往研究显示,P J I病原菌主要以葡萄球菌为主,金黄色葡萄球菌(S t aphyl o c o c c u s a u r e u s)占2 3%2 7%6-8,其致病性与多种毒力因子密切相关;其还能形成生物膜,导致慢性及持续性感染9。近年来,小菌落变异体(s m a l l c o l o ny v a r i a n t,S C V)日益受到关注。S C V是一种营养缺陷型细菌亚群,是细菌为适应环境所呈现的特殊表型,具有菌落细小、生长迟缓、代谢能力较低及胞内寄生等特点。研究表明,金黄色葡萄球菌小菌落变异体(S t aphyl o c o c c u s a u r e u s s m a l l c o l o ny v a r i a n t,S A S C V)与人体植入物相关感染(i mpl a n t-a s s o c i a t e d i n f e c t i o n,I A I)关 系 密切1 0-1 1。因 其 在 假 体 表 面 的 黏 附 性 增 强1 2,S A S C V所致P J I的抗感染治疗效果劣于正常表型(n o r m a l ph e n o ty pe,N P)菌株1 1-1 3,更易转为慢性感染且复发率更高1 4。目前,国内对此类感染中S A S C V的分子病原学报道较少。因此,本研究对从北京 积 水 潭 医 院P J I患 者 关 节 液 中 分 离 的S A S C V进 行 全 基 因 组 测 序(w h o l e ge n o m e s equ e n c i ng,WG S),分析其毒力基因、耐药基因及分子分型情况,旨在为进一步探讨S A S C V在P J I中的致病机制提供基础数据。1 材料与方法1.1 菌株来源及患者资料本研究所用菌株分离自2 0 1 7年1月2 0 2 2年1月北京积水潭医院矫形骨科收治的髋膝关节P J I患者关节液标本。当2份及以上标本中培养出同种细菌时,将其视为病原菌。对1 9例患者的病历资料进行回顾性分析,其中男性1 2例,女性7例,年龄5 5 1 3岁。均 符 合 肌 肉 骨 骼 感 染 学 会(M u s c u l o s k e l e t a l I n f e c t i o n S o c i e ty,M S I S)的P J I诊断标准1 5,其中髋关节P J I共5例,膝关节P J I共1 4例。所有S A S C V均为非重复菌株;若同一患者多次分离出相同菌株,则选取首次分离的菌株。参考菌株为金黄色葡萄球菌A T C C 2 5 9 2 3。66微生物与感染 J o u r n a l o f M i c r o b e s a n d I n f e c t i o n s,Apr i l 2 5,2 0 2 3,1 8(2):6 5-7 41.2 菌株分离培养与鉴定将P J I患者关节穿刺液注入血培养瓶(美国B D公司),置于B A C T E C F X 1 0 0体液血液培养仪(美国B D公司)中培养。培养仪报阳性结果后,从血培养瓶中抽取1 m L培养液,接种于哥伦比亚血琼脂平皿(中国郑州安图公司),置于3 5 微生物培养箱内培养,分别于2 4 h及4 8 h观察菌落形态。挑取菌落直径远小于正常菌落(直径约为金黄色葡萄球菌A T C C 2 5 9 2 3的1/1 0;见图1)或大小明显不一的菌株,再次分离纯化培养后,使用基质辅助激光解吸电 离 飞 行 时 间 质 谱(m a t r i x-a s s i s t e d l a s e r d e s o rpt i o n/i o n i z a t i o n t i m e-o f-f l igh t m a s s spe c t r o m e t ry,MA L D I-T O F M S)仪(德国B r u k e r公司)鉴定为金黄色葡萄球菌,将菌株置于-8 0 冰箱保存。1.3 全基因组测序1.3.1 菌株D N A提取 将实验菌株接种于哥伦比亚血琼脂平皿(中国郑州安图公司),3 5 培养4 8 h后挑取单个菌落,接种于1 0 m L胰蛋白胨大豆肉汤(t ry pt i c a s e s oy b r o t h,T S B)培养液,在3 5 1 5 0 r/m i n条件下振荡培养2 4 h,1 0 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,弃上清液后得到菌体沉淀。采用T I A N a mp D N A提取试剂盒(中国天根生化科技有限公司),按试剂说明书操作提取收集D N A。采用Q u b i t 4荧光定量仪(美国T h e r m o F i s h e r公司)定量,将符合标准的D N A(O D2 6 0/2 8 0为1.82.0,D N A总量1 g,浓度 2 0 ng/L)置于-8 0 冰箱中保存,用于后续建库与测序。1.3.2 文库构建及测序 将菌株D N A送上海美吉生物医药科技有限公司完成测序:取至少1 g基因组D N A,利用C o v a r i s超声波打断仪进行D N A片段化,N E X T f l e xT M R api d D N A-S eq试剂盒(美国B i o S c i e n t i f i c公司)进行文库制备,I l l u m i n a H i S eq X T e n仪器进行双端测序,通过F a s tp软件(h t tps:/gi t h u b.c o m/Ope n G e n e/f a s tp)对原始测序数据进行剪切,采用S O A P d e n o v o 2软件(h t tp:/s o ap.ge n o m i c s.o rg.c n)进 行 拼 接,并 利 用B L A S T P、D i a m o n d、S w i s s-P r o t D a t a b a s e等进行基因功能预测与注释。1.4 多位点序列分型(m u l t i l o c u s s e q u e n c e t y p i n g,M L S T)及系统发育树构建 将测序结果与数据库(h t tp:/w w w.m l s t.n e t)比对,获取金黄色葡萄球菌7个管家基因(a r c C、a r o E、glpF、gm k、pt a、tpi、y qi L)的等位基因编码,通过数据库(h t tps:/pu b m l s t.o rg)比对确定序列分型(s equ e n c e ty pe,S T),将至少包含2个S T定义为克隆复合物(c l o n a l c o mpl e x,C C)分型。使用M E G A 8.0软件针对菌株核心基因序列构建系统发育树,采用N e igh b o r-J o i n i ng法,自展值设为 1 0 0 0,选取已知金黄色葡萄球菌D S M 2 0 2 3 1、头状葡萄球菌N C T C 1 1 0 4 5作为参考序列。1.5 毒力基因与耐药基因注释 将 测 序 序 列 与 病 原 菌 毒 力 因 子 数 据 库(v i r u l e n c e f a c t o r s o f pa t h oge n i c b a c t e r i a,V F D B)比对,进行毒力因子相关基因注释并统计;与耐药基因数据库(h t tps:/c a r d.m c m a s t e r.c a和h t tps:/cge.c b s.d t u.d k)比对,进行抗生素耐药基因注释并统计。2 结果2.1 S A S C V的鉴定通过菌落形态筛选及MA L D I-T O F M S鉴定,本研究获得1 9株S A S C V,其中8例患者标本中的S C V与N P菌落混合生长(见图1 C)。将8组分离自同一患者的N P和S C V菌落分别标记为s a u 0 5-N P/s a u 0 5-S C V、s a u 0 9-N P/s a u 0 9-S C V、s a u 1 3-N P/s a u 1 3-S C V、s a u 1 4-N P/s a u 1 4-S C V、s a u 2 0-N P/s a u 2 0-S C V、s a u 4 1-N P/s a u 4 1-S C V、s a u 5 7-N P/s a u 5 7-S C V、A:S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s s m a l l c o l o ny v a r i a n t(S A S C V).B:S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s n o r m a l c o l o ny(N P).C:M i x e d gr o w t h o f S C V a n d N P c o l o n i e s.D:S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s A T C C 2 5 9 2 3.T h e ye l l o w a r r o w s po i n t t o a S C V c o l o ny,a n d t h e gr e e n a r r o w po i n t s t o a N P c o l o ny.图1 金黄色葡萄球菌小菌落变异体及正常形态(3 5,培养4 8 h)F i g.1 S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s s m a l l c o l o n y v a r i a n t s a n d n o r m a l m o r p h o l o g y(3 5,a f t e r 4 8 h o f i n c u b a t i o n)76 魏莹,等:金黄色葡萄球菌小菌落变异体在关节假体周围感染中的分子病原学特征s a u 7 9-N P/s a u 7 9-S C V,纯化培养后用于后续分析。2.2 菌株全基因组基本特征对1 9株S C V和8株N P(共2 7株)进行测序,所得基因组长度为2 6 9 6 4 3 7 3 0 1 1 8 0 3 bp,G+C含量为(3 2.8 0.0 5)%,测序深度为4 7 3 7 6.6,每个基因组中C o n t ig 数量为7 4.9 2 8.3个,S c a f f o l d数量为5 0.71 9.8个,基因数为2 5 9 79 9.7个(见表1)。表1 菌株全基因组基本特征T a b.1 B a s i c c h a r a c t e r i s t i c s o f w h o l e g e n o m e o f s t r a i n sS t r a i n N o.C o n t ig c o u n tS c a f f o l d c o u n tG e n e c o u n tL e ngt h(bp)G+C(%)s a u 0 5-N P6 74 32 5 7 02 7 5 2 7 4 13 2.8 3s a u 0 5-S C V6 94 32 5 7 42 7 5 5 2 5 93 2.8 3s a u 0 9-N P4 32 72 5 7 02 7 6 4 0 1 63 2.6 9s a u 0 9-S C V4 32 82 5 7 32 7 6 2 1 1 23 2.6 8s a u 1 3-N P6 74 32 5 7 62 7 5 4 6 8 13 2.8 3s a u 1 3-S C V6 34 02 5 7 02 7 4 8 6 9 23 2.8 3s a u 1 4-N P4 23 22 5 4 52 7 3 4 6 4 73 2.7 5s a u 1 4-S C V4 22 92 5 4 72 7 3 7 1 7 53 2.7 5s a u 2 0-S C V7 54 92 5 1 22 7 1 0 7 2 33 2.7 2s a u 2 0-N P8 55 72 5 1 52 7 2 4 1 6 03 2.7 7s a u 2 79 86 42 5 0 22 7 0 4 5 9 93 2.7 8s a u 3 29 05 92 5 2 92 7 3 0 8 1 73 2.7 4s a u 3 88 96 52 7 0 32 8 5 8 3 7 73 2.8 1s a u 3 95 33 72 6 1 02 7 8 4 2 1 53 2.7 3s a u 4 1-N P1 3 59 02 9 3 93 0 1 1 8 0 33 2.8 1s a u 4 1-S C V5 43 62 4 9 22 6 9 6 4 3 73 2.6 7s a u 4 48 56 02 7 0 12 8 6 0 5 3 13 2.8 1s a u 4 74 93 42 6 1 92 7 8 4 6 6 03 2.6 7s a u 5 67 95 22 5 3 12 7 3 4 7 7 83 2.7 2s a u 5 7-N P9 77 32 7 4 12 8 6 6 4 0 23 2.7 9s a u 5 7-S C V1 4 89 92 7 2 82 8 4 3 0 2 73 2.6 9s a u 7 41 0 87 42 5 8 32 7 4 2 9 6 43 2.7 3s a u 7 79 76 92 6 1 72 7 9 4 6 6 43 2.7 6s a u 7 9-S C V4 02 62 5 0 52 7 1 2 6 5 23 2.6 5s a u 7 9-N P4 12 62 5 0 02 7 1 3 8 4 63 2.6 7s a u 8 08 96 62 5 7 82 7 7 3 1 0 73 2.7 5s a u 9 47 44 92 6 9 72 8 5 1 5 9 83 2.7 42.3 M L S T及系统发育树ML S T结果显示,1 9株S C V和8株N P共分1 0个S T,主要型别为S T 5 9、S T 3 9 8和S T 2 5,均各检出5株,各占1 8.5%(5/2 7);S T 2 2、S T 5、S T 3 6 8 7、S T 9 6 5各检出2株,各占7.4%(2/2 7);其余S T 3 0、S T 1 8 8、S T 2 3 9也有检出,分别占7.4%(2/2 7)、3.7%(1/2 7)、3.7%(1/2 7)。聚类分析显示,1 0个S T共分为1个C C型和7个单一型(s i ngl e t o n):86微生物与感染 J o u r n a l o f M i c r o b e s a n d I n f e c t i o n s,Apr i l 2 5,2 0 2 3,1 8(2):6 5-7 4S T 5、S T 3 6 8 7、S T 9 6 5均属于C C 5,在系统发育树上进化关系较密切,其余S T均为单一型(见图2)。S C V和N P混合生长的菌株中,6组处于系统进化发育树的同一分支(图2中标识为绿色圆点);其余2组(s a u 4 1-S C V/s a u 4 1-N P和s a u 2 0-S C V/s a u 2 0-N P)处于不同分支(图2中标识为红色三角),菌株为不同S T,且携带的毒力基因及耐药基因不同。s a u 2 0-S C V属S T 2 2,m e c A基因阴性,而s a u 2 0-N P属S T 5 9,m e c A基因阳性;s a u 4 1-S C V属S T 3 9 8,m e c A基因阴性,而s a u 4 1-N P属S T 2 3 9,m e c A基因阳性。各菌株之间的亲缘关系、S T、分离时间,以及m e c A、P V L基因检出情况具体如图2所示。G r e e n d o t s r epr e s e n t S C V a n d N P s t r a i n s i s o l a t e d f r o m t h e s a m e pa t i e n t.R e d t r i a ngl e s r epr e s e n t S C V a n d N P s t r a i n s i s o l a t e d f r o m t h e s a m e pa t i e n t,w i t h d i s t a n t e v o l u t i o n a ry r e l a t i o n s h ips a n d d i f f e r e n t m o l e c u l a r ty pe s.图2 菌株进化关系树、分子型别及m e c A、P V L检出情况F i g.2 P h y l o g e n e t i c t r e e,m o l e c u l a r t y p e a n d d e t e c t i o n o f m e c A a n d P V L2.4 毒力基因携带情况基于全基因组序列与数据库分析,本研究对金黄色葡萄球菌主要毒力基因进行了比对。在1 9株S C V中,1 4种黏附素相关基因的检出率普遍较高。如图3所示,与生物膜形成相关的i c a A、i c a B、i c a C、i c a D和i c a R的检出率均超过8 0%,分别为9 4.7%(1 8/1 9)、1 0 0.0%(1 9/1 9)、8 4.2%(1 6/1 9)、8 9.5%(1 7/1 9)和8 4.2%(1 6/1 9)。与细胞聚集黏附相关的c lfA、c lfB、fn b A和fn b B基因检出率分别为8 9.5%(1 7/1 9)、8 4.2%(1 6/1 9)、5 7.9%(1 1/1 9)和7 3.7%(1 4/1 9)。此外,e b h的检出率为1 0 0.0%(1 9/1 9),e bp为6 8.4%(1 3/1 9),efb为7 8.9%(1 5/1 9),e ap/m ap为7 8.9%(1 5/1 9),而c n a为2 1.1%(4/1 9)。与细菌免疫逃避相关的4种基因的检出96 魏莹,等:金黄色葡萄球菌小菌落变异体在关节假体周围感染中的分子病原学特征R e d m e a n s d e t e c t e d,a n d b l u e m e a n s n o t d e t e c t e d.图3 1 9株S A S C V中2 3种毒力基因检出情况F i g.3 D e t e c t i o n o f 2 3 v i r u l e n c e g e n e s i n 1 9 S A S C V s t r a i n s率介于3 6.8%6 8.4%:A d s A为4 2.1%(8/1 9)、c hp为5 7.9%(1 1/1 9)、s b i为6 8.4%(1 3/1 9)、s c n为3 6.8%(7/1 9)。葡萄球菌主要溶血毒素基因h l b和h l d的检出率均为8 4.2%(1 6/1 9),而h l a为6 3.2%(1 2/1 9)。S A S C V中P V L(l u k F/S)和l u k D的检出率相对较低,均在4 0%以下,分别为2 6.3%(5/1 9)和3 6.8%(7/1 9)。2.5 抗生素耐药基因携带情况全基因组序列与抗生素耐药基因数据库比对结果显示,1 9株S A S C V耐药基因中b l a Z检出率最高,为7 8.9%(1 5/1 9),m e c A检出率为3 1.6%(6/1 9)。与红霉素、林可霉素及链霉素耐药相关的e r m基因中,e r m(B)检出率最高(3 1.6%,6/1 9),其次是e r m(C)(1 5.8%,3/1 9)和e r m(A)(1 0.5%,2/1 9)。其他耐药基因的检出率较低:与四环素耐药相关的t e t基因中,t e t(K)和t e t(M)的检出率均为1 0.5%(2/1 9);与氨基糖苷类及甲氧苄啶耐药相关的基因中,aph(2)-I a(2 1.1%,4/1 9)、a n t(6)-I a(1 0.5%,2/1 9)、a n t(9)-I a(1 0.5%,2/1 9)、aph(3)-I I I(1 0.5%,2/1 9)及dfr G(5.7%,1/1 9)均有检出。1 9株S A S C V抗生素耐药基因检出情况具体如图4所示。R e d m e a n s d e t e c t e d,a n d b l u e m e a n s n o t d e t e c t e d.图4 1 9株S A S C V中抗生素耐药基因检出情况F i g.4 D e t e c t i o n o f a n t i b i o t i c r e s i s t a n c e g e n e s i n 1 9 S A S C V s t r a i n s 07微生物与感染 J o u r n a l o f M i c r o b e s a n d I n f e c t i o n s,Apr i l 2 5,2 0 2 3,1 8(2):6 5-7 43 讨论P J I是人工关节置换术后的严重并发症之一,治疗失败率较高3。其主要病原菌是金黄色葡萄球菌,该菌也常引起皮肤软组织及其他外科术后感染。鉴于假体植入后关节组织内的特殊微环境,金黄色葡