PIK3R1在人原发性肝细胞癌中的表达及其与肿瘤上皮间质转化关系.pdf

收稿日期 2021-11-11摇 修回日期 2022-04-13基金项目 蚌埠医学院科技发展基金项目(BYKF1810)作者单位 1.蚌埠医学院 病理学教研室,安徽 蚌埠 233030;蚌埠医学院第一附属医院2.病理科,3.核医学科,安徽 蚌埠233004作者简介 姚摇 楠(1979-),女,硕士,讲师.文章编号 1000鄄2200(2023)05鄄0570鄄04基础医学PIK3R1 在人原发性肝细胞癌中的表达及其与肿瘤上皮间质转化关系姚摇 楠1,2,孙景秋3,郭冰沁1,2,武世伍1,2摘要目的:探讨磷脂酰肌醇鄄3 激酶调节亚单位 1(PIK3R1)在人原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其与恶性肿瘤上皮间质转化的相关性。方法:选取 80 例 HCC 病人癌组织及相应癌旁组织,通过免疫组织化学染色法检测 HCC 组织及相应癌旁组织中 PIK3R1 编码蛋白(PIK3R1/p85琢)表达,并检测 HCC 组织中 EMT 相关蛋白转化生长因子 茁(TGF鄄茁)、上皮性钙黏蛋白(E鄄cadherin)表达,评估其表达与 HCC 病人临床特征的相关性。结果:PIK3R1/p85琢 在 HCC 组织中的阳性率为 70.0%(56/80),高于癌旁组织的 17.5%(7/40)(P 0.05);不同组织分化程度 HCC 病人的 PIK3R1/p85琢、E鄄cadherin 和 TGF鄄茁 表达差异均有统计学意义(P 0.05 P 0.01);HCC 组织中 PIK3R1/p85琢 与 E鄄cadherin 表达呈明显负相关关系(r=-0.323,P 0.01),与 TGF鄄茁 表达呈正相关关系(r=0.247,P 0.05);无侵袭转移 HCC 病人和有侵袭转移病人的 PIK3R1/p85琢 蛋白表达差异有统计学意义(P 0.05)。结论:PIK3R1 在 HCC 组织中表达水平升高,高水平 PIK3R1 可能会促进肿瘤上皮间质转化的发生,并与 HCC 不良预后有关。关键词 原发性肝细胞癌;磷脂酰肌醇鄄3 激酶调节亚单位 1;上皮间质转化中图法分类号 R 735.7 摇 摇 摇 文献标志码 A摇 摇 摇 DOI:10.13898/ki.issn.1000鄄2200.2023.05.003Expression of PIK3R1 in human primary hepatocellularcarcinoma and its correlation with epithelial mesenchymal transformationYAO Nan1,2,SUN Jing鄄qiu3,GUO Bing鄄qin1,2,WU Shi鄄wu1,2(1.Department of Pathology,Bengbu Medical College,Bengbu Anhui 233030;2.Department of Pathology,3.Department of Nuclear Medicine,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College,Bengbu Anhui 233004,China)Abstract Objective:To investigate the expression level of phosphatidylinositol鄄3 kinase regulatory subunit 1(PIK3R1)in humanprimary hepatocellular carcinoma(HCC)and its correlation with epithelial mesenchymal transformation of malignant tumor.Methods:The expression levels of PIK3R1 coding protein(PIK3R1/p85琢)in HCC tissues and corresponding adjacent tissues of 80 HCC patientswere detected by immunohistochemical staining.The expression levels of EMT鄄related proteins transforming growth factor 茁(TGF鄄茁)and epithelial cadherin(E鄄cadherin)in HCC tissue were detected,and the correlation of the expression with clinical characteristics ofHCC patients was evaluated.Results:The positive rate of PIK3R1 expression in HCC tissue(70.0%)was significantly higher than thatin corresponding adjacent tissue(17.5%)(P 0.05).The differences of the expression of PIK3R1/p85琢,E鄄cadherin and TGF鄄茁 inHCC patients with different levels of tissue differentiation were statistically significant(P 0.05 to P 0.01).The expression ofPIK3R1/p85琢 was negatively correlated with E鄄cadherin expression(r=-0.323,P 0.01),and positively correlated with TGF鄄茁expression in HCC tissue(r=0.247,P 0.05).The difference of the protein expression of PIK3R1/p85琢 between non鄄invasivemetastatic and invasive metastatic HCC patients was statistically significant(P 0.05).Conclusions:The expression level of PIK3R1in HCC tissue increases.The high level of PIK3R1 may promote the epithelial mesenchymal transformation of tumors,and be associatedwith the poor prognosis of HCC.Key words primary hepatocellular carcinoma;phosphoinositide鄄3鄄kinase regulatory subunit 1;epithelial鄄mesenchymal translation摇摇原发性肝细胞 癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球五大恶性肿瘤之一,其死亡率位居全球恶性肿瘤的第二位1,病人检测发现时往往已经是晚期,肿瘤发生转移。近年来针对肝细胞癌诊断和治疗的研究较多,但肝癌病人的总体预后仍然较差。肿瘤的侵袭和转移取决于多方面因素,上皮间质转化(EMT)及多种信号通路都参与其中,目前,针对EMT 和 PI3K/AKT 信号通路之间的相互关系尚未完全阐明。本研究针对肝细胞癌中 EMT 相关蛋白转化生长因子 茁(TGF鄄茁)、上皮性钙黏蛋白(E鄄cadherin)和 PI3K/AKT 信号通路中磷脂酰肌醇鄄3 激酶调节亚单位 1 编码蛋白(PIK3R1/p85琢)表达进行075J Bengbu Med Coll,May 2023,Vol.48,No.5测定,并分析其相关性,以期为中晚期肝细胞癌治疗提供科学依据。现作报道。1摇 资料与方法1.1摇一般资料摇收集 2010-2015 年我院病理科80 例 HCC 肿瘤组织和相应癌旁组织。其中男 61例,女 19 例;年龄 26 79 岁。按照 Edmondson鄄Steiner 分级法分为四级,将其中玉 域级定义为低级别,共 33 例,芋 郁级定义为高级别,共 47 例;大肝癌 63 例,小肝癌 17 例。所有病例均明确肝细胞癌病理诊断,并完善随访资料,行肝癌根治切除术前,未接受术前辅助化疗、放疗、靶向治疗或免疫治疗。1.2摇 试剂摇 兔抗人单克隆 p85琢 抗体(工作浓度 1:100)、兔抗人多克隆 E鄄cadherin(工作浓度 1颐 100)、兔抗人多克隆 TGF鄄茁 抗体(工作浓度1颐 100)均购自美国 Santa Cruz 公司,链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)试剂盒及 DAB 显色试剂盒购自福州迈新公司。PAS 染色液为蚌埠医学院第一附属医院病理科配制。1.3摇 方法摇组织采用 10%中性甲醛固定,石蜡包埋。4 滋m 切片,常规脱蜡、水化、3%H2O210 min 阻断内源性过氧化物酶,高温高压修复10 rain,加入一抗后,按试剂盒说明书进行免疫组织化学染色操作。DAB 显色,苏木精复染。采用已知阳性片作为对照组,以 PBS 代替一抗作为空白对照组。1.4摇 结果判定摇p85琢 蛋白均定位于细胞质,以颗粒状或片状着色棕黄色为阳性。E鄄cadherin 主要定位于细胞膜,有时表现为细胞质和细胞膜均着色,染色呈棕黄色。TGF鄄茁 定位在细胞质中,染色呈黄色或棕黄色。采取二次计分法,每例标本随机选取 10个高倍视野(伊 400),计数每个高倍视野中阳性细胞所占百分比计分。(1)按染色强度评分:无色为0 分,淡黄色为 1 分,棕黄色为 2 分,棕褐色为 3 分。(2)按阳性细胞百分比计分:阳性细胞数 30%50%为 2 分,50%75%为 3 分,75%为 4 分。将两项得分结果相乘:臆1 分为阴性,1 分为阳性。免疫组织化学标记结果由两位病理医师采用独立双盲法判定。1.5摇 统计学方法摇采用 字2检验和 Spearman 相关分析。2摇 结果2.1摇 PIK3R1/p85琢 在 HCC 及癌旁组织中的表达比较 摇PIK3R1/p85琢 在 HCC 组 织 中 的 阳 性 率 为70.0%(56/80)(见图 1),高于癌旁组织中的17.5%(7/40)(字2=29.47,P 0.05)。2.2摇不同临床特征 HCC 病人 PIK3R1/p85琢 和 E鄄cadherin、TGF鄄茁 表达比较摇 不同组织分化程度 HCC病人的 PIK3R1/p85琢、E鄄cadherin 和 TGF鄄茁 表达差异均有统计学意义(P 0.05 P 0.05)(见表 1)。摇表 1 摇不 同 临 床 病 理 特 征 HCC 病 人 PIK3R1/p85琢、E鄄cadherin和 TGF鄄茁 表达比较(n)临床特征np85琢阳性字2PE鄄cadherin阳性字2PTGF鄄茁阳性字2P分化程度摇 低摇 高334719374.13 0.0523196.66 0.0193619.17 0.0531110.29 0.0535100.13 0.05肿瘤直径摇 臆3 cm摇3 cm176314421.57 0.056362.56 0.0510350.06 0.052.3 摇HCC 组 织 中 PIK3R1/p85琢 与 E鄄cadherin、TGF鄄茁 表达的相关性摇Spearman 相关分析显示,HCC 组织中 PIK3R1/p85琢 与 E鄄cadherin 表达呈明显负相关关系(r=-0.323,P 0.01),与 TGF鄄茁 表达呈正相关关系(r=0.247,P 0.05)。2.4摇 HCC 组织中 PIK3R1/p85琢 表达与肿瘤侵袭转移的关系摇 将收集的病例分为无侵袭转移组(无脉管侵犯及随访无复发转移)66 例和有侵袭转移组(有脉管侵犯或术后有复发转移)14 例,结果显示,2组 p85琢 蛋白表达差异有统计学意义(字2=3.87,P 0.05)。175蚌埠医学院学报 2023 年 5 月第 48 卷第 5 期3摇 讨论摇 摇 在我国,HCC 发病率和死亡率均排在消化系统恶性肿瘤的首位。临床上发现时多为晚期,虽然近年来治疗手段多样化,但病人 5 年生存率仍较低。统计2发现,若肝细胞癌发生肝外转移,病人5 年生存率仅为 4%。肝癌预后差主要是因为肿瘤细胞易发生转移。肿瘤的转移机制与多种因素有关,其中肿瘤细胞的 EMT 及多种信号通路的参与是近期研究的热点。EMT 是指上皮细胞在特定条件下向间充质细胞转化的现象。在这个过程中上皮细胞骨架发生重排、细胞外基质重塑,形态从原来的上皮样转变为梭形或星芒状,排列上也从紧密黏附的铺路石样变为弥散性排列,随着黏附性降低,肿瘤细胞的运动和侵袭能力显著增强,从而更容易从原发病灶脱离,进入末梢血管或淋巴系统3。在此期间,肿瘤细胞会出现上皮细胞标志性蛋白表达减少,而间充质细胞标志性蛋白表达增加。现有实验4结果已证实,在肝细胞癌的侵袭转移过程中存在 EMT,但其具体机制尚不明确。本实验中,我们选取已证实的 EMT 相关蛋白 E鄄cadherin5和 TGF鄄茁6进行验证,发现在HCC 组织中,不同组织分化程度病人的 E鄄cadherin和 TGF鄄茁 表达差异均有统计学意义。三磷酸肌醇激酶作为一种细胞内的磷脂酰肌醇激酶,可以通过结合定位于质膜的受体而激活,并产生磷脂酞肌醇鄄3,4,5鄄三磷酸,其与蛋白激酶 B 结合,进而启动 PI3K/AKT 信号通路7-8,调节肿瘤细胞的增殖和凋亡。作为 PI3K 的调节亚单位,p85 亚基又是由 p85琢(PIK3R1)和 p85茁(PIK3R2)这两个密切相关的蛋白组成9-10。其中 PIK3R1 是 PI3K信号通路的关键基因11。有研究表明,该基因和其编码的蛋白 p85琢,在多种恶性肿瘤如前列腺癌、肝细胞癌中,PIK3R1/p85琢 表达明显高于正常肝组织12-13。但 PIK3R1 与肝癌尤其是 HCC 侵袭转移之间的关系尚未完全阐明。有研究表明,PIK3R1 的下调可以导致 HCC 细胞生长抑制,这可能与细胞周期 G2/M 期细胞停滞和细胞凋亡增强有关14-15。本组实验通过对 80 例 HCC 及癌旁组织进行 p85琢蛋白表达检测,发现 HCC 组织中 PIK3R1/p85琢 表达高于癌旁组织,且不同组织分化程度 HCC 病人的PIK3R1/p85琢 表达差异有统计学意义。目前,针对 PIK3R1 在肿瘤细胞 EMT 中的作用研究仍较少,尚未明确两者之间的作用机制,尤其在HCC 中,其与肿瘤 EMT 之间的关系目前还是盲区。有研究表明,TGF鄄茁 可以通过调节肿瘤坏死因子受体相关因子 6 的活性激活 PI3K/AKT 信号通路。TRAF6 可诱导 p85 多聚泛化,从而促进前列腺癌细胞的侵袭性16。本实验结果显示,HCC 组织中PIK3R1 与 TGF鄄茁 表达呈正相关关系,与 E鄄cadherin的表达呈负相关关系。综上,HCC 组织中 PIK3R1 过表达可能参与诱导 EMT 的发生,PIK3R1 的上调与 HCC 的发生和恶性发展有关。参考文献1摇SIEGEL RL,MILLER KD,JEMAL A.Cancer statisties,2018J.CA Cancer J Clin,2018,68(1):7.2摇 于召龙,梁鹤,李秋园,等.肝细胞癌骶骨转移 1 例报告并文献复习J.脊柱外科杂志,2020,18(1):68.3摇DIEPENBRUCK M,CHRISTOFORI G.Epithelial鄄mesenchymaltransition(EMT)and metastasis:yes,no,maybe?J.CurrOpin Cell Biol,2016,43:7.4摇 MA M,XU H,LIU G,et al.Metabolism鄄induced tumor activator 1(MITA1),an energy stress鄄inducible long noncoding rna,promotes hepatocellular carcinoma metastasis J.Hepatology,2019,70:215.5摇BURE IV,NEMTSOVA MV,ZALETAEV DV.Roles of E鄄cadherin and noncoding RNAs in the epithelial鄄mesenchymaltransition and progression in gastric cancerJ.Int J Mol Sci,2019,12,20(12):2870.6摇MIHIRA H,SUZUKI HI,AKATSU Y,et al.TGF鄄茁鄄inducedmesenchymal transition of MS鄄1 endothelial cells requires Smad鄄dependent cooperative activation of Rho signals and MRTF鄄AJ.J Biochem,2012,151:145.7摇SUIT,MAL,BAIX,etal.Resveratrolinhibitsthephosphatidylinositide3鄄kinase/proteinkinaseB/mammaliantarget of rapamycin signaling pathway in the human chronicmyeloid leukemia K562 cell lineJ.Oncol Lett,2014,7(6):2093.8摇KHAN KH,WONG M,RIHAWI K,et al.Hyperglycemia andphosphatidylinositol 3鄄kinase/protein kinase B/mammalian targetof rapamycin(PI3K/AKT/mTOR)inhibitors in phase 玉 trials:incidence,predictive factors,and management J.Oncologist,2016,21(7):855.9摇 KANAMOTO N,TAGAMI T,UEDA鄄SAKANE Y,et al.Forkheadbox A1(FOXA1)and A2(FOXA2)oppositely regulate humantype 1 iodothyronine deiodinase gene in liverJ.Endocrinology,2012,153(1):492.10摇 MILED N,YAN Y,HON WC,et al.Mechanism of two 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水平与超声心动图中左房内径(LAD)、左室舒张内径(LVD)、左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(FS)相关性。采用多元logsitic 回归分析 AF 病人 AF 发生持续相关因素。结果:与对照组相比,血清 SLC7A11 在阵发性 AF 组和非阵发性 AF 组均下降(P 0.01),且非阵发性 AF 组中 SLC7A11 低于阵发性 AF 组(P 0.01),血清 FGF23 在阵发性 AF 组和非阵发性 AF 组均升高(P 0.01),且非阵发性 AF 组中 FGF23 高于阵发性 AF 组(P 0.01);Pearson 相关性分析显示,LAD 与血清 SLC7A11 呈负相关关系(r=-0.534,P 0.01),与血清 FGF23 呈正相关关系(r=0.532,P 0.01)。多元 logsitic 回归分析结果显示,SLC7A11 是 AF 独立的保护因素(OR=0.231,P 0.01),而 FGF23 是独立危险因素(OR=1.097,P 0.01)。结论:SLC7A11、FGF23 可能与 AF 的发病、进展有关。关键词 心房颤动;血清溶质载体家族 7 成员 11;血清成纤维细胞生长因子 23中图法分类号 R 541.75摇 摇 摇 文献标志码 A摇 摇 摇 DOI:10.13898/ki.issn.1000鄄2200.2023.05.004Detection and clinical significance of serum SLC7A11and FGF23 levels in patients with atrial fibrillationLIU Wei鄄wei1,LU Yuan鄄yuan1,LENG Jun鄄jie1,GAO Qi1,KANG Pin鄄fang1,2,ZHANG Ning鄄ru1(1.Department of Cardiology,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College,Bengbu Anhui 233004;2.Heart and Cerebrovascular Disease Research Center,Bengbu Medical College,Bengbu Anhui 233030,China)Abstract Objective:To detect the levels of serum solute carrier family 7 member 11(SLC7A11)and serum fibroblast growth factor23(FGF23)in patients with atrial fibrillation(AF)and sinus rhythm,and analyze the correlation between them and AF and theirclinical significance.Methods:A total of 120 AF patients who were hospitalized were selected as observation group.According torelevant guidelines,they were divided into paroxysmal AF group(70 cases)and non鄄paroxysmal AF group(50 cases).In the control g摇 摇 摇 roup,96 healthy patients with sinus rhythm were selected.Theconcentrations ofSLC7A11andFGF23inserumweremeasured by enzyme鄄linked immunosorbent assay(ELISA).The clinical data and serological indexes of the three groupswere compared,and the correlation between serum SLC7A11and FGF23 levels and left atrial diameter(LAD),leftventricular diastolic diameter(LVD),left ventricular ejectionfraction(LVEF)and left ventricular shortening fraction(FS)in echocardiography was analyzed by Pearson c拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾拾orrelation12摇 ZHU HT,CHEN H,DING DG,et al.Overexpression of PIK3R1promotes bone formation by regulating osteoblast differentiationand osteoclast formationJ.Comput Math Methods Med,2021,14:2909454.13摇 MARKUS K,CHRISTOPH B,CHARIS K,et al.MiR鄄221augments TRAIL鄄mediated apoptosis in prostate cancer cells byinducingendogenousTRAILexpressionandtargetingthefunctional repressors SOCS3 and PIK3R1J.Biomed Res Int,2019,2019:6392748.14摇ZHUO ZJ,XIAO MJ,LIN HR,et al.Novel betulin derivativeinduces anti鄄proliferative activity by G2/M phase cell cycle arrestand apoptosis in Huh7 cellsJ.Oncol Lett,2018,15(2):2097.15摇CHEN S,LI F,CHAI HY,et al.miR鄄502inhibits cellproliferation andtumor growthinhepatocellularcarcinomathrough suppressing phosphoinositide 3鄄kinase catalytic subunitgammaJ.Biochem Biophys Res Commun,2015,464(2):500.16摇 ANAHITA H,JIE S,NOOPUR T,et al.TGF鄄茁 promotes PI3K鄄AKT signaling and prostate cancer cell migration through theTRAF6鄄mediated 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