先天性锁肛猪类型及常规生理生化指标分析.pdf

养殖与饲料 2024 年第 3 期先天性锁肛猪类型及常规生理生化指标分析蒋凯1，21.井冈山大学生命科学学院，江西吉安 343009；2.江西农业大学省部共建猪遗传改良与养殖技术国家重点实验室，南昌 330045摘要 目的 明确先天性锁肛猪的类型、常规生理生化指标的变化，为后续研究提供基础数据。方法 对43头先天性锁肛大白猪进行临床诊断或解剖观察来判定锁肛类型，分别在1、10、60、120、180日龄称量5头直肠阴道瘘锁肛猪与正常对照猪（全同胞）的体质量，并比较90、180日龄的血常规和血清生化指标，分析肝、脾、肺、肾、小脑和大脑等6种组织器官的HE切片。结果 先天性锁肛大白猪存在肛门直肠均闭锁、直肠阴道瘘、直肠尿道瘘和肛门闭锁直肠未闭锁4种锁肛类型；直肠阴道瘘锁肛猪的生长速度与正常对照猪相比无显著差异，血常规数据和血清生化结果未表现出显著差异，组织切片学结果显示未表现出明显的病理性变化。结论 直肠阴道瘘锁肛猪生长速度、血液生理生化指标和组织切片与正常对照猪相比均无显著差异，不存在健康不良状况。关键词 大白猪；先天性锁肛症；锁肛类型；生长速度；血液生理生化指标The types of pigs with congenital anal atresia and the analysis of The types of pigs with congenital anal atresia and the analysis of hematological parameters and biochemistry parametershematological parameters and biochemistry parametersJIANG Kai1,21.College of Life Sciences,Jinggangshan University,Jian 343009,China;2.State Key Laboratory of Pig Genetic Improvement and Production Technology,Jiangxi Agricultural University,Nanchang 330045,ChinaAbstractAbstract Objectives The types of pigs with congenital anal atresia and the changes in hematological parameters and biochemistry parameters were clarified to provide basic data for subsequent studies.Methods Clinical diagnosis or anatomical observation were conducted on 43 large white pigs with congenital anal atresia to determine the types of anal atresia.The body weight of 5 pigs with rectal-urethral fistula and 5 normal control pigs(all siblings)at the ages of 1,10,60,120,and 180 days was measured.The hematological parameters and biochemistry parameters at 90,180 ages were compared.HE slices of six tissues and organs,including liver,spleen,lungs,kidneys,cerebellum,and brain were analyzed.Results There were four types of large white pigs with congenital anal atresia in收稿日期：2023-07-06基金项目：江西省教育厅科技项目（GJJ2201610）；井冈山大学博士科研启动项目（JZB1916）作者简介：蒋凯,男，1989年生，博士，副教授。21养殖与饲料 2024 年第 3 期cluding anus atresia without rectal atresia,rectal-urethral fistula,rectovaginal fistula and rectal atresia.There was no significant difference in growth rate between the pigs with rectal-urethral fistula and the normal control pigs.The results of hematological parameters and biochemistry parameters did not show significant differences.The results of tissue slices showed no significant pathological changes.Conclusions There were no significant differences in growth rate,hematological parameters and biochemistry parameters,and tissue slices between the pig with rectal-urethral fistula and the normal control pig,indicating that there are no adverse health conditions.KeywordsKeywords large white pig;congenital anal atresia;types of anal atresia;growth rate;blood physiological and biochemical parameters先天性锁肛症是一种复杂的直肠末端发育缺陷疾病，通常是后肠发育异常致使肛门口泄殖腔膜未能破裂引发的1-2。该病最明显的表型是无肛门，肛门区为皮肤所覆盖，无法排出胎粪，出现腹胀、呕吐等胃肠阻梗现象。环境因素和遗传因素均能导致肛门闭锁症的发生，但主要因素是遗传3。肛门闭锁症在人、牛、猪、羊和狗等哺乳动物中均有发生。人 先 天 性 锁 肛 症 的 发 病 率 约 为 0.03%0.05%1，其病理组织学较为复杂，包括简单的单一性肛门闭锁和形成不同类型的瘘管（直肠阴道瘘，直肠膀胱瘘及直肠尿道瘘等）的复杂性肛门闭锁，而且经常会伴有其他发育异常4-6。猪先天性锁肛症自然发生率远高于人类，为0.1%1.0%7，表现形式与人类非常相似，但很少会伴有其他异常综合征表型，但锁肛类型很少被详细报道6,8。锁肛症发生在公猪上是致死的，一般在1周内死亡，严重影响经济效益；新生锁肛母猪中部分母猪因为会形成直肠阴道瘘，粪便能从阴道口排出，因此，锁肛母猪有50%的存活率9。猪先天性锁肛症是猪先天性畸形中较为多见的一种消化道末端发育不良遗传性疾病，其遗传率为0.110.3510-11。但先天性锁肛猪的血常规、血清生化以及内脏器官HE切片等常规生理生化指标并未见相关报道。该病发病率高、手术治疗效益差，给养猪业带来较大的经济损失。本试验对先天性锁肛猪进行临床诊断或解剖观察来判定锁肛类型，比较分析先天性锁肛猪（直肠阴道瘘锁肛猪）及其全同胞正常对照个体的生长曲线、血常规、血清生化、脏器组织切片观察等指标，旨在加强对先天性锁肛猪的类型及常规生理生化指标的认识，为后续研究提供基础资料。1材料与方法1.1实验动物实验用猪为笔者所在实验室科研猪场构建的1个大白猪近交群体。该群体由1头祖代大白公猪和3头大白母猪配种获得F1代个体，1头F1代公猪与4头F1代母猪、8头F2代正常母猪及1头F2代锁肛母猪配种后共获得了43头先天性锁肛猪，其中5头锁肛猪（直肠阴道瘘锁肛猪）一直存活。锁肛猪与对照猪在相同的条件下饲养管理，每日饲喂2次，自由饮水，饲养期间未发现其他疾患。1.2表型判定首先通过肉眼观察新生仔猪的肛门发育情况，为进一步确定锁肛猪的类型，观察存活锁肛仔猪和正常仔猪的排便情况，如：正常仔猪是否能从肛门排出粪便（可能存在有正常肛门但直肠闭锁的类型）；锁肛母猪是否能从阴道口排出粪便（直肠阴道瘘）。针对死亡的锁肛猪进行解剖学分析，观察是否存在直肠闭锁、是否形成直肠尿道瘘或者直肠膀胱瘘等。1.3体质量测定分别称量5头锁肛猪（直肠阴道瘘锁肛猪）和5头对照猪（1日龄、10日龄、60日龄、120日龄和180日龄）的体质量，以日龄为横坐标、体质量为纵坐标绘制生长曲线。1.4血液生理生化指标的检测通过耳缘静脉采集90日龄和180日龄直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪的血液，1份保存于EDTA-Na2抗凝管中，送往江西中医药大学附属医院，利用BC-6800（迈瑞）血液自动分析仪检测血常规指标。另22养殖与饲料 2024 年第 3 期取1份样本经离心分离血清，送往南昌大学第一附属医院，使用7600（日立）全自动生化分析仪检测血清生化指标。1.5组织切片屠宰2岁直肠阴道瘘锁肛猪和同胞对照猪各2头，采集肝、脾、肺、肾、大脑和小脑等6种组织标本，在4%多聚甲醛溶液中保存并带回实验室，采用HE染色法（苏木精-伊红染色法）制作石蜡切片，切片于BA410显微镜（Motic，中国）下观察。1.6数据统计分析试验数据以“平均值标准差”表示，通过 Student t-test进行统计分析,在=0.05水平进行显著性分析。P0.05）。2.3血常规与血生化指标检测分析血常规和血生化指标的检测结果(表1、2)均表明，直肠阴道瘘锁肛猪和对照个体在2个时间点所有参数之间均无显著差异（P0.05）。2.4主要组织切片结果直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪的肝、脾、肺、肾、WT:对照猪；AA:直肠阴道瘘锁肛猪图 3直肠阴道瘘锁肛猪与对照猪生长速度比较表1直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪血常规结果（n=5）检验项目白细胞（WBC）/（109/L）淋巴细胞（LYM）/（109/L）单核细胞（MON）/（109/L）嗜酸性粒细胞（EOS）/（109/L）嗜碱性粒细胞（BAS）/（109/L）红细胞（RBC）/（1012/L）血红蛋白（HGB）/（g/L）红细胞压积（HCT）/%平均红细胞体积（MCV）/fL平均红细胞血红蛋白含量（MCH）/pg平均红细胞血红蛋白（MCHC）/（g/L）红细胞分布宽度变异系数（RDW）/%血小板（PLT）/（109/L）平均血小板体积（MPV）/fL血小板分布宽度（PDW）/%血小板压积（PCT）/%90日龄直肠阴道瘘锁肛猪20.32 1.201.64 0.297.85 1.050.77 0.100.18 0.036.02 0.3493.20 8.4632.38 3.7455.72 0.9915.84 0.27281.40 3.2317.50 0.29387.40 30.1310.14 0.1315.04 0.140.39 0.0590日龄对照猪23.95 2.161.93 0.2910.28 1.000.88 0.150.15 0.036.61 0.3398.20 9.8837.60 2.2954.74 1.5015.80 0.50284.60 4.5717.68 0.52385.60 34.009.88 0.2114.92 0.090.37 0.03P值0.180.500.130.530.490.250.710.270.600.950.580.770.970.320.480.68180日龄直肠阴道瘘锁肛猪20.48 1.286.51 0.677.41 0.471.30 0.280.15 0.026.95 0.26113.40 5.4138.90 1.60569.96 1.1116.28 0.37291.40 3.8819.42 0.58253.20 24.889.26 0.3314.82 0.120.23 0.02180日龄对照猪23.34 1.306.95 0.898.31 0.361.21 0.100.17 0.037.01 0.17112.20 3.4237.72 0.9553.86 1.4016.04 0.51297.80 3.0918.68 0.60257.60 18.289.24 0.2314.78 0.090.24 0.01P值0.190.730.200.800.580.860.870.580.320.740.270.440.900.970.820.94A：直肠阴道瘘；B：肛门直肠均闭锁。图2锁肛母猪的肛门直肠解剖学观察24养殖与饲料 2024 年第 3 期大脑和小脑这6个主要器官组织HE切片结果显示，直肠阴道瘘锁肛猪与对照个体相比，未发生明显的病 理 性 变 化，并 没 有 出 现 显 著 的 病 理 性 特征（图4）。表2直肠阴道瘘锁肛猪和对照猪血生化指标结果（n=5）检验项目谷丙转氨酶（ALT）/（U/L）谷草转氨酶（AST）/（U/L）总胆红素（TBIL）/（mol/L）总蛋白（TP）/（g/L）白蛋白（ALB）/（g/L）球蛋白（GLB）/（g/L）蛋白比值（A/G）谷氨酰转肽酶（GGT）/（U/L）碱性磷酸酶（ALP）/（U/L）肌酐（CREA）/（mol/L）尿素氮（BUN）/（mmol/L）尿酸（UA）/（mol/L）葡萄糖（GLU）/（mmol/L）甘油三酯（TG）/（mmol/L）高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）/（mmol/L）钠（Na）/（mmol/L）钙（Ca）/（mmol/L）90日龄直肠阴道瘘锁肛猪38.80 8.7547.60 5.240.56 0.0956.00 3.6318.34 0.8337.42 4.000.52 0.0439.80 5.0372.20 6.1174.80 9.722.66 0.142.00 0.895.54 0.450.57 0.070.71 0.07135.20 1.932.45 0.1090日龄对照猪36.00 6.8340.20 4.750.58 0.0956.56 2.0619.66 0.6037.14 2.760.56 0.0538.00 4.4071.20 6.6184.90 5.982.40 0.232.60 0.934.98 0.300.41 0.080.74 0.06136.80 1.072.45 0.10P值0.810.330.880.900.230.960.540.790.910.400.360.650.330.170.790.491.00180日龄直肠阴道瘘锁肛猪42.40 5.9429.20 3.411.00 0.1767.54 3.1722.42 1.9144.58 4.760.54 0.0940.40 3.56123.60 7.15131.98 9.352.586 0.205.00 1.145.01 0.490.43 0.060.90 0.06136.80 2.272.32 0.06180日龄对照猪36.80 2.3124.60 3.390.88 0.0966.86 2.1823.92 1.8243.06 3.530.59 0.0846.00 6.65122.40 12.32126.56 11.882.70 0.274.20 0.864.40 0.190.38 0.050.89 0.08136.00 2.452.38 0.06P值0.410.370.540.860.580.800.700.480.930.730.680.590.280.580.910.820.50图4直肠阴道瘘锁肛猪与对照猪组织切片对照图（200)25养殖与饲料 2024 年第 3 期3讨 论本试验对锁肛猪进行临床诊断或解剖观察来判定锁肛类型，发现存在肛门直肠闭锁、直肠阴道瘘、直肠尿道瘘和肛门闭锁直肠未闭锁4种锁肛类型，与前期研究发现一致6，这4种锁肛类型在人类锁肛症中也有类似报道1,12-14。其中，肛门直肠均闭锁和直肠阴道瘘2种锁肛类型在猪中报道较多8-9,2，而直肠尿道瘘和肛门闭锁直肠未闭锁2种类型未见相关报道。不同类型的锁肛形成有不同的类型，因此，猪先天性锁肛症类型的判定可为该病发病机制的遗传解析提供一定的基础资料。此外，本试验分析了存活的锁肛猪（直肠阴道瘘）的生长速度、血液生理生化指标和组织切片。结果显示，生长速度、血液生理生化指标和组织切片与正常对照个体相比均不存在显著差异（P0.05）（表13，图34），表明直肠阴道瘘锁肛猪常规生理生化指标正常。而且5头直肠阴道瘘锁肛猪均能与正常个体配种繁育后代。因此，本研究试验结果提示直肠阴道瘘锁肛猪除无正常肛门外，并不存在其他健康不良情况。本研究丰富了先天性锁肛猪类型及常规生理生化指标方面的研究，可为先天性锁肛猪后续研究提供重要借鉴。参 考 文 献1CUSCHIERI A,GROUP E W.Descriptive epidemiology of isolated anal anomalies:a survey of 4.6 million births in EuropeJ.American journal of medical genetics part A,2001,103(3):207-215.2QI B Q,BEASLEY S W,WILLIAMS A K,et al.Apoptosis during regression of the tailgut and septation of the cloacaJ.Journal of pediatric surgery,2000,35(11):1556-1561.3WIJERS C H W,ROOIJ I A L M,MARCELIS C L M,et al.Genetic and nongenetic etiology of nonsyndromic anorectal malformations:a systematic reviewJ.Birth defects research part C embryo today 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