消毒剂消毒效果及储存有效期验证专项方案.doc

消毒剂消毒效力及储存有效期
验证方案

部门审核

文 件 目 录

1.概述 3
1.1消毒剂种类 3
1.2消毒剂成分和作用机理 3
2.验证目 3
3.验证范畴 3
4.验证小构成员及分工 4
5.有关文献 4
6.风险分析 4
7.验证内容 4
7.1验证前准备 5
7.2验证用消毒剂配制 6
7.3消毒剂消毒效力确认 6
7.4消毒剂储存有效期确认 7
7.5消毒剂消毒效果确认 8
8.有关记录 8
9.验证进度及筹划 8
10.验证偏差和变更 8
10.1验证偏差 8
10.2验证变更 9

1. 概述
1.1 消毒剂种类
我司在干净区使用消毒剂有0.1％新洁尔灭溶液、含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)、75％乙醇溶液和3%双氧水四种。其中75％乙醇溶液和3%双氧水用于A/B级干净区消毒，0.1％新洁尔灭溶液用于C级和D级干净区消毒，含氯消毒液用于地漏消毒。
1.2消毒剂成分和作用机理
1.2.1 0.1％新洁尔灭溶液是一种阳离子表面活性剂，其作用机理是：破坏细胞膜，变化其通透性而起杀菌作用。
1.2.2 含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)重要消毒成分是次氯酸钠，属于高效含氯消毒剂。含氯消毒剂杀菌作用涉及次氯酸作用、新生氧作用和氯化作用。次氯酸氧化作用是含氯消毒剂最重要杀菌机理。含氯消毒剂在水中形成次氯酸，作用于菌体蛋白质。次氯酸不但可与细胞壁发生作用，且因分子小，故侵入细胞内与蛋白质发生氧化作用或破坏其磷酸脱氢酶，使糖代谢失调而致细胞死亡。次氯酸钠浓度越高，杀菌作用越强。
1.2.3 75％乙醇溶液重要消毒成分为乙醇，属中效消毒剂，其作用机理是（1）使蛋白质变性：乙醇作用于细菌细胞一方面起到脱水作用，乙醇分子进入到蛋白质分子肽链环节，使蛋白质发生变性沉淀；（2）破坏细菌细胞壁：乙醇具备很强渗入作用，60％～85％乙醇比较容易渗入到菌体内，使得细菌细胞破坏溶解。（3）对微生物酶系统破坏：乙醇通过抑制细菌酶系统，特别是脱氢酶和氧化酶等，阻碍了正常代谢，抑制细菌生长繁殖。
1.2.4 3%双氧水化学式为H2O2，其水溶液俗称双氧水，外观为无色透明液体，是一种强氧化剂，其杀菌机理是（1）氧化作用：过氧化氢强氧化性及其氧化性产物可直接氧化细菌外层构造，使细胞通透性屏障遭到破坏，细菌体内外物质平衡受到破坏致细菌死亡。（2）分解产物作用：过氧化氢分解产物如羟基和活性氧等自由基团可直接与微生物蛋白质和核酸发生反映，使物质构造遭到破坏导致其死亡。
1.2.5消毒剂存储时间直接影响消毒剂消毒效力，对生产干净区（室）环境以及药物生产质量，有着直接影响，为此咱们用隔段时间通过特定微生物与待确认消毒剂（使用浓度下）接触后，对微生物进行培养、计数，考察消毒剂消毒效力与否符合规定，并拟定消毒剂使用有效期，确认消毒剂在储藏期内是稳定并且杀菌效力不变。
2. 验证目
确认干净区环境及设备表面按照规定消毒程序进行操作，可以达到消毒效果、防止污染目；并确认消毒剂消毒效力及其在常温条件下（除A/B级使用消毒剂在C级干净区）密闭存储储存期限；同步确认A/B级使用消毒剂在C级干净区存储规定期限后，其无菌符合规定。保证能对的使用各种消毒剂，防止使用已经失效消毒剂，避免交叉污染。
3. 验证范畴
3.1 0.1％新洁尔灭溶液、含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)、75％乙醇溶液和3%双氧水四种消毒剂消毒效力。
3.2 0.1％新洁尔灭溶液、含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)在常温条件密闭存储储存期限；75％乙醇溶液和3%双氧水在C级干净区密闭存储储存期限及其无菌符合规定。
3.3 0.1％新洁尔灭溶液、含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)、75％乙醇溶液和3%双氧水四种消毒剂消毒效果确认。
4. 验证小构成员及分工
姓名
所在部门
组内职务
验证中职责

5. 有关文献
5.1《表面微生物测定操作规程》
5.2《当代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术》
5.3《消毒技术规范》
5.4《药物生产验证指南》
5.5《消毒与灭菌效果评价办法与原则》GB15981—1995
5.6《中华人民共和国药典》三部
5.7《消毒剂管理操作规程》（）
5.8《检定菌种管理操作规程》
5.9《消毒剂配制使用操作规程》
6. 风险分析
见《消毒剂效力和储存有效期验证风险评估报告》，通过对消毒剂消毒效力和储存有效期各方面风险点排查，发现风险点为文献系统、人员、消毒剂效力、消毒剂储存有效期及消毒剂消毒效果等，因而在制定本验证方案时应针对风险点进行验证。
7. 验证内容
7.1 验证前检查
7.1.1验证地点及环境
序号
验证项目
验证地点
环境规定
1
消毒剂消毒效力
QC微生物实验室
阳性室进行实验
2
消毒剂储存效期
QC实验准备室及QC微生物实验室
0.1％新洁尔灭溶液、含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)密闭储存在常温条件；75％乙醇溶液和3%双氧水密闭储存在C级干净区
3
消毒剂效果确认
生产部B级、C级干净区
B级、C级
4
无菌确认
QC无菌实验室
A/C级
7.1.2 文献检查
已制定验证方案和有关操作规程，经批准生效且在有效期内。
7.1.3 人员培训状况检查
验证组长应对验证有关人员进行本验证方案及有关操作规程培训。
7.1.4 对验证所需检测仪器型号、数量及其校验状况进行确认，保证本次验证所使用检查仪器均在检定有效期内。仪器、器具清单如下：
序号
仪器或设备名称
规格或型号
数量
1
立式圆弧电热蒸汽灭菌锅

1台
2
数显电热恒温培养箱

1台
3
霉菌培养箱

1台
4
集菌仪

1台
5
微生物限度检测仪

1台
7.1.5 验证用物品
序号
物料名称
规格/浓度
物料编号/自编批号
数量
1
0.1％新洁尔灭溶液
0.1％
以实际领用为准
10L
2
含氯消毒液
有效氯含量为0.5g/L
以实际领用为准
10L
3
75％乙醇溶液
75％
以实际领用为准
10L
4
3%双氧水
3%
以实际领用为准
10L
5
金黄色葡萄球菌悬液
107～108 CFU/ml
以实际使用为准
10ml
6
白色念珠球菌悬液
107～108 CFU/ml
以实际使用为准
10ml
7
枯草芽胞杆菌悬液
107～108 CFU/ml
以实际使用为准
10ml
8
营养琼脂平皿
实际配方
以实际领用为准
300块
9
玫瑰红钠平皿
实际配方
以实际领用为准
300块
10
TSA接触皿
Φ55mm
以实际领用为准
100个
11
pH7.0无菌氯化钠
蛋白胨缓冲液
实际配方
以实际领用为准
10000L
12
不锈钢薄片
尺寸5cm*5cm
以实际领用为准
50片
7.2验证用消毒剂配制
7.2.1 0.1％新洁尔灭溶液配制
按照《消毒剂配制使用操作规程》进行配制，配制完24小时内进行消毒效力实验。
7.2.2含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)
按照《消毒剂配制使用操作规程》进行配制，配制完24小时内进行消毒效力实验。
7.2.3 75％乙醇溶液配制
购买该浓度成品或者按照《消毒剂配制使用操作规程》进行配制。应进行消毒效力实验和无菌实验。
7.2.4 3%双氧水
无需配制，购买该浓度成品。应进行消毒效力实验和无菌实验。
7.3消毒剂消毒效力确认
7.3.1实验菌种
细菌繁殖体
107～108 CFU/ml金黄色葡萄球菌悬液
真菌
107～108 CFU/ml白色念珠菌悬液
细菌芽胞
107～108 CFU/ml枯草芽胞杆菌悬液
7.3.2可接受原则
名称
可接受原则
细菌繁殖体、
真菌
消毒剂对实验菌种杀灭率≥99.9％，即实验菌种数量至少下降3个对数单位。
细菌芽胞
消毒剂对实验菌种杀灭率≥99.9％，即实验菌种数量至少下降3个对数单位。
7.3.3实验办法
7.3.3.1含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)消毒效力确认
A) 菌液制备：按照《检定菌种管理操作规程》SOP-QC-GL-021进行操作。
B) 准备实验用边长为5cm不锈钢正方形薄片，薄片必要通过湿热灭菌解决，温度：121℃，时间：30分钟。
C) 作用时间应有1分钟、5分钟、10分钟三组。
D) 办法：在实验薄片上接种菌液0.1ml（107～108 CFU/ml），以使菌液能在实验薄片表面上充分铺散开，每种菌液接种3个薄片。再将接种过菌液薄片置于生物安全柜内吹干，及时取消毒剂3ml与接种表面接触至上述作用时间。然后分别将薄片置于100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中润洗后，按照《中华人民共和国药典》三部 Ⅻ G微生物限度检查法进行检查，将此溶液过滤后，用300ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液进行冲洗（每次冲洗100ml，共三次）。营养琼脂平皿置于30～35℃培养2天，玫瑰红钠平皿置于23～28℃培养3天，逐日观测点计菌落数。
E) 对照：取一种薄片只涂用含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)作为阴性对照，取一种薄片只接种菌液作为阳性对照。
F) 平皿编码办法：字母A代表含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)，数字代表接触菌液时间，-j代表接种金黄色葡萄球菌悬液，－b代表接种白色念珠菌悬液，－k代表接种枯草芽孢杆菌悬液。如A1-j含义是含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)接触金黄色葡萄球菌悬液1分钟样品。
7.3.3.2 0.1％新洁尔灭溶液消毒效力确认
A) 按照7.3.3.1环节，用0.1％新洁尔灭溶液代替含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)作为验证对象，进行消毒效力确认。
B) 平皿编码办法同7.3.3.1，用字母B代表0.1％新洁尔灭溶液，不使用枯草芽孢杆菌进行实验，其她不变。
7.3.3.3 75％乙醇溶液消毒效力确认
A) 按照7.3.3.1环节，用75％乙醇溶液代替含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)作为验证对象，进行消毒效力确认。
B) 平皿编码办法同7.3.3.1，用字母C代表75％乙醇溶液，不使用枯草芽孢杆菌进行实验，其她不变。
7.3.3.4 3%双氧水消毒效力确认
A) 按照7.3.3.1环节，用3%双氧水取代含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)作为验证对象，进行消毒效力确认。
B) 平皿编码办法同7.3.3.1，用字母D代表3%双氧水，其她不变。
7.3.3.5 依照以上实验成果，按照计数公式计算杀菌率：[（对照组活菌数—实验组活菌数）/对照组活菌数]×100%
7.4消毒剂储存有效期确认
7.4.1确认办法
各级别使用消毒剂依照使用需要，0.1％新洁尔灭溶液和含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)在微生物准备室每天启动两次，75％乙醇溶液和3%双氧水在干净工作台下每天启动两次。根据消毒剂消毒效力确认成果，选取消毒剂能有效杀灭微生物最佳时间，按照7.3条消毒剂消毒效力确认办法进行操作，以鉴定0.1％新洁尔灭溶液和含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L) 在微生物准备室温条件下密闭储存规定期间后与否能有效杀灭微生物，拟定消毒剂储存有效期；鉴定75％乙醇溶液和3%双氧水在C级干净区密闭储存规定期间后与否能有效杀灭微生物及其无菌符合规定。
7.4.2可接受原则
名称
可接受原则
细菌繁殖体、真菌
消毒剂对实验菌种杀灭率≥99.9％，即实验菌种数量至少下降3个对数单位。
细菌芽胞
消毒剂对实验菌种杀灭率≥99.9％，即实验菌种数量至少下降3个对数单位
无菌检查
75％乙醇溶液和3%双氧水两种消毒剂无菌检查应符合规定。
7.4.3取样周期
A/B级使用消毒剂在配制完毕第1天、7天、14天，在干净工作台下严格按照无菌操作取样；C、D级使用消毒剂在配制完毕第1天、7天、14天、21天进行取样。第1天取样为消毒剂效力实验和无菌检查；第7天开始取样为储存有效期确认（也涉及消毒剂效力实验和无菌检查）。
7.4.3实验办法
取含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)、0.1％新洁尔灭溶液、75％乙醇溶液和3%双氧水这四种消毒剂，选取最佳消毒时间进行消毒剂效力实验，其中75％乙醇溶液和3%双氧水还需按照《无菌检查（薄膜过滤法）操作规程》（SOP-QC-JY-120）进行无菌检查。
7.4.4 如果在配制完毕后某个取样时间点不能达到可接受原则，则该验证工作结束。
7.5消毒剂消毒效果确认
7.5.1消毒办法
在A/B级干净区选定一种不锈钢桌面作为验证对象，使用75％乙醇溶液和3%双氧水采用最佳消毒时间消毒后进行表面微生物取样；在C级干净区选定一种不锈钢桌面作为验证对象，使用0.1％新洁尔灭溶液采用最佳消毒时间消毒后进行表面微生物取样；在C级干净区选定一种地漏作为验证对象，使用含氯消毒液(有效氯含量为0.5g/L)采用最佳消毒时间消毒后进行擦拭取样。
7.5.2实验办法
使用以上四种消毒剂，依照消毒剂效力实验成果，采用最佳消毒时间进行消毒，按照《表面微生物测定操作规程》（SOP-QA-GW-004）进行取样和培养。
7.5.3可接受原则：表面微生物A级为＜1CFU/皿；B级为≤5CFU/皿；C级为≤25CFU/皿（CFU/25cm2）。
7.6以上4种消毒剂消毒效力确认、消毒剂储存有效期确认和消毒剂消毒效果确认均进行三次实验。
8. 有关记录
8.1《验证前检查记录》
8.2《消毒剂消毒效力验证记录》
8.3《消毒剂储存有效期确认记录》
8.4《消毒剂消毒效果确认记录》
8.5《菌液制备记录》
8.6《菌落计数记录》
9. 验证进度及筹划
本次验证工作筹划于5月实行并完毕。
10. 验证偏差和变更
10.1 验证偏差
10.1.1 当该方案某一某些无法实行或实际状况无法达到可接受原则时，按照《偏差解决操作规程》进行偏差调查，并拟定该偏差是由什么引起，之后再拟定相应解决办法。
10.1.2 每个某些偏差必要在该某些验证工作结束之前得以解决。对也许浮现测试失败而无法解决偏差状况，在这种状况下要对测试进行修正，且该系统验证暂停直到方案对的修正完毕为止。质量管理部必要负责监督所有偏差解决过程。
10.1.3 在方案执行过程中遇到所有偏差必要汇总，并单独用偏差表格形式来完毕，最后经质量管理部经理审核，并订立意见。
10.2 变更控制
所有在验证过程中产生变更都要按照《变更控制操作规程》规定执行，保证所有变更得到评估和批准，并填写相应记录。