细胞房注意项目和管理.doc

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细胞房注意事项和管理一、常规操作 1. 穿着专用试验服。自己白大衣或厚外套，可脱在门外衣帽架上。 2. 穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己鞋子，穿着绿色拖鞋进入缓冲间；再在缓冲间换红色拖鞋。尽可能避免在缓冲间走动、停留。 3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽可能避免在内长时间逗留、交谈。 4．离开细胞房前，要确保不使用仪器立即关闭并拔下插头（离心机、水浴锅、日光灯），超净台开启紫外灯照射2h后关闭。二、值日生工作职责 1. 每七天值日生时间从周一开始，至周日结束。 2. 值日周开始时需做事情：配制消毒用75%酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够95%工业乙醇供酒精灯使用。 * 75%酒精可用750ml95%酒精加去离子水至950ml配制而成。 3. 值日周内天天需做事情：开大紫外灯消毒细胞房15-30min后才能投入一天使用，晚上开启紫外灯灭菌，第二天立即关闭；检验灭菌物品贮备情况，方便立即补充；立即安排人员清洗回收培养器皿；检验培养液母液、血清、酒精等公用试剂贮备情况；最少天天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检验培养箱内水量是否足够。 4. 值日周结束前需完成事情：星期五全方位打扫细胞房。包含拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用试验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检验硫酸铜溶液是否需要更换（30天更换一次）！ 5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感细胞能够暂存于其它细胞房培养箱；将培养箱内不锈钢板取出，包含4块横板和左右2块立着架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要快速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭洁净。 .6.9 培养箱使用注意事项 1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽可能缩短开门时间和降低开门次数。 * 培养箱中空气是经过过滤洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，轻易造成污染。 2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。一般培养中细胞，若非试验需要，每瓶/板细胞天天只需要观察生长状态一次，2人以上共用细胞，可约好时间一起观察。 * 频繁将细胞拿出观察，轻易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件恒定。超净台操作规则 1. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，全部物品放入超净台前均应用酒精喷拭表面消毒。 2. 点燃酒精灯前需检验瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。 * 消毒用75%酒精，酒精灯用95%酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留心。酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发觉细胞房内存放量不足时请立即通知值日生。 3. 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于试验时临时存放废弃物，试验结束后废液杯内垃圾要随即清理带走，废液杯冲洗、于入室间晾干备用。 4. 可回收移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水塑料桶中浸泡，桶内需有足量清水以没过浸泡物品。 * 可回收器皿初步涮洗后再放入清水内，确保浸泡瓶、管内完全被清水充满，避免营养物质在培养瓶或血清管中过多残留而滋生微生物。回收器皿洗涤程序：洗洁精洗净，清水冲十次以上去除洗涤剂残留；烘干；泡酸缸48h，尽可能沥干后取出，清水冲洗10次，纯水冲洗3次，超纯水3次；烘干/晾干；报纸/牛皮纸/锡箔纸包装，高压湿热灭菌121℃，20min；放入细胞房备用。显微镜使用注意事项 1. 显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。 2. 离开细胞房时或较长时间不需使用时，立即关上电源，延长灯泡寿命。尽可能避免频繁开关显微镜电源。培养液、试剂等相关操作规则 1. 从冰箱取放物品动作要快速，关门时要检验门是否关好。按类别存放试剂。 2. 血清按一定量分装，分装好血清长时间保留于-20℃，使用前取出需要量4℃预解冻。按需解冻，避免反复冻融。 *从-20℃取用血清者需在表格上做好登记，方便在不够时立即领取，以免耽搁试验进程。 3. 标准上解冻好血清应全部配成含血清培养基备用，若有剩下，则暂存于4℃并立即使用。尽可能不要使用她人开过血清，以免交叉污染。细胞冻存统计细胞名称冻存位置冻存方法冻存管编号细胞起源细胞代数冻存者冻存日期冻存数量试验室冰箱层/盒 -80° 液氮细胞复苏统计细胞名称复苏管数复苏细胞冻存管编号返还情况冻存细胞库存复苏者复苏日期血清使用/领取登记血清名称使用量使用日期血清名称领取数量领取日期血清库存试验相关购置统计物品名称花费购置日期付款人报销情况（√）备注

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