细胞房注意项目和管理.doc

细胞房注意事项和管理
一、 常规操作
1. 穿着专用试验服。自己白大衣或厚外套，可脱在门外衣帽架上。
2. 穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己鞋子，穿着绿色拖鞋进入缓冲间；再在缓冲间换红色拖鞋。尽可能避免在缓冲间走动、停留。
3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽可能避免在内长时间逗留、交谈。
4． 离开细胞房前，要确保不使用仪器立即关闭并拔下插头（离心机、水浴锅、日光灯），超净台开启紫外灯照射2h后关闭。
二、值日生工作职责
1. 每七天值日生时间从周一开始，至周日结束。
2. 值日周开始时需做事情：配制消毒用75%酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够95%工业乙醇供酒精灯使用。
* 75%酒精可用750ml95%酒精加去离子水至950ml配制而成。
3. 值日周内天天需做事情：开大紫外灯消毒细胞房15-30min后才能投入一天使用，晚上开启紫外灯灭菌，第二天立即关闭；检验灭菌物品贮备情况，方便立即补充；立即安排人员清洗回收培养器皿；检验培养液母液、血清、酒精等公用试剂贮备情况；最少天天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检验培养箱内水量是否足够。
4. 值日周结束前需完成事情：星期五全方位打扫细胞房。包含拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用试验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检验硫酸铜溶液是否需要更换（30天更换一次）！
5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感细胞能够暂存于其它细胞房培养箱；将培养箱内不锈钢板取出，包含4块横板和左右2块立着架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要快速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭洁净。
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培养箱使用注意事项
1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽可能缩短开门时间和降低开门次数。
* 培养箱中空气是经过过滤洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，轻易造成污染。
2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。一般培养中细胞，若非试验需要，每瓶/板细胞天天只需要观察生长状态一次，2人以上共用细胞，可约好时间一起观察。
* 频繁将细胞拿出观察，轻易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件恒定。
超净台操作规则
1. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，全部物品放入超净台前均应用酒精喷拭表面消毒。
2. 点燃酒精灯前需检验瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。
* 消毒用75%酒精，酒精灯用95%酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留心。酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发觉细胞房内存放量不足时请立即通知值日生。
3. 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于试验时临时存放废弃物，试验结束后废液杯内垃圾要随即清理带走，废液杯冲洗、于入室间晾干备用。
4. 可回收移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水塑料桶中浸泡，桶内需有足量清水以没过浸泡物品。
* 可回收器皿初步涮洗后再放入清水内，确保浸泡瓶、管内完全被清水充满，避免营养物质在培养瓶或血清管中过多残留而滋生微生物。
回收器皿洗涤程序：洗洁精洗净，清水冲十次以上去除洗涤剂残留；烘干；泡酸缸48h，尽可能沥干后取出，清水冲洗10次，纯水冲洗3次，超纯水3次；烘干/晾干；报纸/牛皮纸/锡箔纸包装，高压湿热灭菌121℃，20min；放入细胞房备用。
显微镜使用注意事项
1. 显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2. 离开细胞房时或较长时间不需使用时，立即关上电源，延长灯泡寿命。尽可能避免频繁开关显微镜电源。
培养液、试剂等相关操作规则
1. 从冰箱取放物品动作要快速，关门时要检验门是否关好。按类别存放试剂。
2. 血清按一定量分装，分装好血清长时间保留于-20℃，使用前取出需要量4℃预解冻。按需解冻，避免反复冻融。

*从-20℃取用血清者需在表格上做好登记，方便在不够时立即领取，以免耽搁试验进程。
3. 标准上解冻好血清应全部配成含血清培养基备用，若有剩下，则暂存于4℃并立即使用。尽可能不要使用她人开过血清，以免交叉污染。

细胞冻存统计
细胞名称
冻存位置
冻存方法
冻存管编号
细胞起源
细胞代数
冻存者
冻存日期
冻存数量
试验室
冰箱
层/盒
-80°
液氮

细胞复苏统计
细胞名称
复苏管数
复苏细胞冻存管编号
返还情况
冻存细胞库存
复苏者
复苏日期

血清使用/领取登记
血清名称
使用量
使用日期
血清名称
领取数量
领取日期
血清库存

试验相关购置统计
物品名称
花费
购置日期
付款人
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