乳腺癌患者免疫组化检测指标与骨转移的相关性.pdf

医药前沿 2024年2月 第14卷第4期 临床医学 73乳腺癌患者免疫组化检测指标与骨转移的相关性张 燕1，武振芳2（1 镇江市第四人民医院病理科 江苏 镇江 212002）（2 镇江市第四人民医院妇科 江苏 镇江 212002）【摘要】目的：分析乳腺癌患者免疫组化检测指标与骨转移的相关性。方法：回顾性分析 2019 年 1 月2023 年 6 月镇江市康复医疗集团病理中心收治的 30 例确诊乳腺癌骨转移患者的病历资料，纳入骨转移组；并收集同期镇江市康复医疗集团病理中心收治的 30 例确诊无骨转移的乳腺癌患者的病历资料，纳入无骨转移组。采用免疫组化法测定组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体-2（HER-2）、细胞增殖相关核抗原（Ki-67）、抑癌基因（p53）相关指标，并经 Logistic 回归分析乳腺癌患者免疫组化检测指标与骨转移的相关性。结果：骨转移组 ER、PR、HER-2、KI-67、p53 阳性表达率均高于无骨转移组，差异有统计学意义（P 0.05）；Logistic 回归分析结果显示，ER、PR、HER-2、KI-67、p53 阳性表达是乳腺癌患者发生骨转移的独立危险因素（P 0.05）。结论：乳腺癌患者ER、PR、HER-2、KI-67、p53 免疫组化检测指标与骨转移有关，是骨转移的危险因素。【关键词】乳腺癌；骨转移；免疫组化指标；相关性【中图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2024）04-0073-03乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，发病率呈上升趋势，且病死率较高，严重危害着女性的生命安全。乳腺癌早期症状不显著，随着癌细胞扩散，发展至中晚期会发生远处转移，增高患者病死率，不利于预后。骨是乳腺癌转移常见部位，约 70%以上晚期乳腺癌患者会出现骨转移，发生骨痛、高钙血症等相关事件，降低患者的生存质量1。因此，寻求与骨转移有关的指标，并及早监测，对延缓病情发展有积极意义。肿瘤标志物对诊断肿瘤、评估预后等具有重要作用，被广泛应用于临床。细胞增殖相关核抗原（proliferation cell nuclear antigen,Ki-67）可评估肿瘤细胞增殖，与多种癌症预后有关；人表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2,HER-2）是原癌基因，能促进肿瘤细胞增生，抑制凋亡；p53 是一种抑癌基因，阳性提示恶性肿瘤风险较高；三者阳性达标肿瘤侵袭性高，易发生转移复发2-4。雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,PR）阳性提示激素依赖性乳腺癌。本研究旨在探究上述免疫组化检测指标与乳腺癌骨转移的相关性，现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料回顾性分析 2019 年 1 月2023 年 6 月镇江市康复医疗集团病理中心收治的 30 例确诊乳腺癌骨转移患者的病历资料，纳入骨转移组；并收集同期镇江市康复医疗集团病理中心收治的 30 例确诊无骨转移的乳腺癌患者的病历资料，纳入无骨转移组。患者年龄 47 70 岁，平 均 年 龄（57.724.95）岁；体 质 量 指 数 20.22 24.61 kg/m2，平均（22.231.11）kg/m2；组织分型：浸润性导管癌 21 例，浸润性小叶癌 28 例，其他 11 例。纳入标准：（1）符合诊疗指南（2020 版）5中乳腺癌的相关诊断标准，并经体格检查、乳腺超声、组织活检等检查确诊；（2）初次确诊患者，均为女性；（3）患者免疫组化结果、随访资料等均完整且清晰；（4）患者对本次资料的知晓且同意。排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤，如宫颈癌、肺癌等；（2）入院前接受过抗肿瘤治疗者；（3）伴肝、肾等重要脏器功能异常者；（4）预计生存期 3 个月；（5）资料缺失，无法完成研究者。1.2 方法1.2.1 资料中乳腺癌骨转移判断标准 查阅资料，本次入选的 30 例乳腺癌骨转移患者均符合下述条件：（1）患者有明确乳腺癌史，出现骨痛、恶病质等临床症状；（2）经核素骨扫描显示，多发异常放射性浓聚区，伴或不 伴缺损或稀疏区；或经骨扫描显示，单发异常放射性浓聚区，经随访观察到病灶数目增多，病变范围较之前扩大；（3）经 X 线或磁共振或 CT 等检查确诊为骨转移。1.2.2 免疫组化检测方法（1）主要仪器及试剂。主要仪器：北京白洋提供的 BY-120 型离心机；德国莱卡提供的 CM-1850 包埋机、2135 型切片机、AST-300 型脱水机；北京恒奥德提供的 SC-JBX-D 型光学显微镜；上海科华提供的 MM-1 型微量振荡器；日本樱花自动封片机。主要试剂：福州迈新生物公司提供的免疫组化试剂盒，包括兔抗人 ER、PR、HER-2、KI-67、p53 单克隆抗体；北京梦怡美提供的磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution,PBS）、二氨基联苯胺（diaminobenzidine,DAB）染色液；Invitrogen 公司提供的聚合酶链式反应74 医药前沿 2024年2月 第14卷第4期 临床医学（polymerase chain reaction,PCR）试剂。（2）检测方法：取材后经10%中性甲醛固定24 h，经过脱水、透明、浸蜡、包埋及切片处理，用切片机连续切片 4 m；将切片进行脱蜡处理，然后用 100%、95%、70%梯度的酒精各浸泡5 min 水化，利用蒸馏水冲洗，PBS 溶液浸泡 5 min，然后将切片浸于抗原修复缓冲液中，进行抗原修复 2 min，PBS 冲洗 3 次，5 min/次；取适量过氧化氢溶液滴加到切片，室温下孵育 10 min，阻断灭活内源性过氧化物酶活性，PBS冲洗3次，5 min/次；将玻片上PBS液甩干净，滴加 5%10%山羊血清封闭非特异性抗原，在室温下孵育 10 min；滴加一抗（ER、PR、HER-2、KI-67、p53均为 1 200），室温下放置 60 min 或 37 孵育 30 60 min，PBS 浸洗 5 次，3 min/次；滴加第二代生物素标记二抗工作液，在 37 恒温箱中孵育 30 60 min，PBS 冲洗 3 次，5 min/次；于小试管中加入 0.85 mL 蒸馏水，然后进行DAB显色，滴加DAB染液，滴加于样本，避光，观察到背景黄色颗粒显色后用自来水冲洗，终止染色；苏木精复染 2 min，碳酸锂返蓝 10 s；用梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，并镜检。阴性对照为 PBS 代替一抗，观察各指标阳性表达情况。1.2.3 免疫组化结果判读方法 KI-67、p53、ER、PR 均定位于细胞核，HER-2 定位于细胞膜，出现黄色颗粒为阳性。以半定量评分法（于高倍镜下选择 10 个视野，每个视野计 100 个肿瘤细胞）判定阳性：（1）染色强度：无色、浅黄色、黄色、棕黄色分别记 0、1、2、3 分；（2）阳性细胞率：以阳性细胞占总肿瘤细胞数百分比判断，占比 6%、6%26%、26%51%、51%75%、75%分别记 0、1、2、3、4 分；染色强度、百分数得分之和为总分；若总分4分为阳性表达，4 分为阴性表达。1.2.4 临床资料收集内容 翻阅患者资料，记录年龄、体质量指数、组织分型、临床分期、肿瘤直径等资料。1.3 统计学方法采用 SPSS 25.0 统计软件进行数据处理。正态分布计量资料采用均数 标准差（x s）表示，组间比较采用t 检验，多组间比较采用方差分析。计数资料用频数和百分比（%）表示，组间比较采用2检验。采用多因素Logistic 回归分析进行影响因素分析。P 0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 两组一般资料比较两组年龄、体质量指数、组织分型、临床分期和肿瘤直径比较，差异无统计学意义（P 0.05），见表 1。表 1 两组一般资料比较项目骨转移组（n=30）无骨转移组（n=30）2/tP年龄（x s，岁）58.075.0457.374.930.5440.589体质量指数（x s，kg/m2）22.421.1322.051.081.3140.194组织分型 n（%）浸润性导管癌9（30.00）12（40.00）0.6620.718浸润性小叶癌15（50.00）13（43.33）其他6（20.00）5（16.67）临床分期 n（%）期10（33.33）15（50.00）1.7140.190期20（66.67）15（50.00）肿瘤直径（x s，cm）3.241.063.761.151.8100.0762.2 两组免疫组化检测指标比较骨转移组 ER、PR、HER-2、KI-67、p53 阳性表达率均高于无骨转移组，差异有统计学意义（P 0.05），见表 2。表 2 两组 ER、PR、HER-2、KI-67、p53 阳性表达率比较 n（%）指标-无骨转移组（n=30）骨转移组（n=30）2PER阴性23（76.67）13（43.33）6.9440.008阳性7（23.33）17（56.67）PR阴性22（73.33）13（43.33）5.5540.018阳性8（26.67）17（56.67）HER-2阴性24（80.00）16（53.33）4.8000.028阳性6（20.00）14（46.67）KI-67阴性18（60.00）10（33.33）4.2860.038阳性12（40.00）20（66.67）p53阴性22（73.33）13（43.33）5.5540.018阳性8（26.67）17（56.67）2.3 骨转移影响因素的 Logistic 回归分析将乳腺癌患者骨转移情况作为因变量（1=骨转移，0=无骨转移），将 ER、PR、HER-2、KI-67、p53 阳性表达情况（赋值均为 1=阳性，0=阴性）作为自变量，经 Logistic 回归分析结果显示，ER、PR、HER-2、KI-67、p53 阳性表达是乳腺癌患者发生骨转移的独立危险因素（P 0.05），见表 3。表 3 骨转移影响因素的 Logistic 回归分析结果变量标准误WaldPOR95%置信区间ER2.0780.8046.6720.0107.9851.651，38.632PR2.0880.9145.2160.0228.0691.345，48.428HER23.1961.1158.2130.00424.428 2.746，217.303KI672.7500.9917.7080.00515.642 2.245，109.002p531.8060.8035.0640.0246.0881.262，29.364常量4.8801.26914.7910.0000.008医药前沿 2024年2月 第14卷第4期 临床医学 753 讨论乳腺癌是临床常见肿瘤。因乳腺生理结构特殊，癌细胞间连接不紧密，容易发生转移，这也是乳腺癌病死率较高的原因之一。乳腺癌容易发生骨转移，一旦发生骨转移，会导致骨痛、脊髓压迫、病理性骨折等骨相关事件，严重降低患者的生存质量，也会增加患者病死风险6。因此，临床应寻求可靠、灵敏的方法及时评估乳腺癌患者骨转移风险，以及早治疗，降低病死率。本研究旨在分析 HER-2、KI-67、p53 等免疫组化检测指标与乳腺癌骨转移的相关性。HER-2 是原癌基因，正常情况下在体内处于未激活状态，能够在一定程度上调节细胞生长及分化，一旦机体受到刺激后，其结构及表达异常。乳腺癌患者的HER-2 多呈高表达，具有促进肿瘤发展作用。据报道，HER-2 阳性的乳腺癌具有更高的侵袭性，且容易转移及复发，不利于预后7。KI-67 在肿瘤中的表达呈异常升高，主要定位于细胞核，可监测肿瘤细胞活性，与肿瘤细胞增殖、转移等有关8。突变型 p53 基因与乳腺癌发生及发展具有密切联系，因突变型 p53 半衰期较长，临床容易检测到，目前常用免疫组化方法检测9。突变型p53 在乳腺癌组织中常为阳性表达，与疾病发展有一定联系10。乳腺是 ER、PR 靶器官，乳腺癌为雌激素依赖性肿瘤，检测 ER、PR 指标能够反映患者的预后情况11。本研究结果显示，骨转移组 ER、PR、HER-2、KI-67、p53 阳性表达率均高于无骨转移组，初步提示上述免疫组化检测指标可能与乳腺癌骨转移存在一定关系；进一步经 Logistic 回归分析结果显示，免疫组化检测指标（ER、PR、HER-2、KI-67、p53）阳性表达与乳腺癌患者骨转移有关，可能是骨转移的危险因素（P0.05）；结果提示，上述免疫组化检测指标与乳腺癌骨转移有关，是骨转移的风险因素。分析原因，p53 基因突变后，染色体结构不稳定，能够促使细胞向癌变转化，导致细胞增生无度，进而导致癌细胞不断扩散，增强癌细胞侵袭力，增加骨转移风险12。KI-67能够体现肿瘤细胞增殖活性，阳性表达提示肿瘤细胞活性较强，容易促使恶性肿瘤转移，不利于预后。HER-2 阳性的乳腺癌患者恶性程度高，会增加肿瘤侵袭、转移风险。ER、PR 阳性患者的内脏转移风险一般较低，而骨转移率较高，这可能与乳腺癌骨转移病灶微环境内低氧、高钙等利于癌细胞逃避化疗、内分泌治疗的杀伤有关13。但本研究未进一步随访乳腺癌患者生存情况，关于各指标与乳腺癌患者生存相关性还需今后进一步证实。综上所述，乳腺癌患者 ER、PR、HER-2、KI-67、p53 免疫组化检测指标与骨转移有关，是骨转移的危险因素。【参考文献】1 宋军，刘翔 超声联合血清OPN、IL-1诊断乳腺癌骨转移的研究J影像科学与光化学，2022,40(5):1138-1142.2 任爱雄，卫美辰，杨玉庆，等血清 KI-67 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