戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化_韩鹏飞.pdf

韩鹏飞，朱璇，杨敏，等.戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化 J.食品工业科技，2023，44（14）：130136.doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022090117HAN Pengfei,ZHU Xuan,YANG Min,et al.Solid-state Fermentation of Cordyceps taii for Polysaccharide ProductionJ.Science andTechnology of Food Industry,2023,44(14):130136.(in Chinese with English abstract).doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022090117 生物工程 戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化韩鹏飞1,2，朱璇1，杨敏1，黄贵强1,*（1.六盘水师范学院生物科学与技术学院，贵州六盘水 553000；2.大连大学生命健康学院，辽宁大连 116622）摘要：以大米为原料进行戴氏虫草真菌发酵，通过优化发酵条件提高戴氏虫草多糖含量。采用单因素实验和多因素实验优化戴氏虫草产多糖的固体发酵条件。Plackett-Burman 试验结果表明，影响戴氏虫草多糖含量的主要因素是发酵温度、接种量和料水比。最陡爬坡试验和 Box-Behnken 试验得出产戴氏虫草多糖的最适条件为：发酵温度25，接种量8%，料水比（g/mL）=1:1.5，基质重量10 g，发酵时间5 d，得到的戴氏虫草多糖含量为5.31%0.11%，与理论值的误差为 0.93%1.8%。本文旨在为戴氏虫草多糖的工业化生产提供理论依据，同时为其它虫草真菌固体发酵生产虫草多糖提供理论参考。关键词：戴氏虫草，固体发酵，大米，多糖，条件优化本文网刊:中图分类号：Q946.92 文献标识码：A 文章编号：10020306（2023）14013007DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022090117Solid-stateFermentationofCordycepstaiiforPolysaccharideProductionHANPengfei1,2，ZHUXuan1，YANGMin1，HUANGGuiqiang1,*（1.College of Biological Science and Technology,Liupanshui Normal University,Liupanshui 553000,China；2.College of Life and Health,Dalian University,Dalian 116622,China）Abstract：Rice was used as materials for Cordyceps taii fermentation,the content of Cordyceps taii polysaccharide wasincreased through optimizing fermentation conditions.Single-factor and multi-factor experiments were used to optimize thesolid fermentation conditions of Cordyceps taii producing polysaccharide.The results of Plackett-Burman test showed thatfermentation temperature,inoculation quantity and the ratio of material to water were main affecting factors for the contentof Cordyceps taii polysaccharide.Then the steepest ascent experiment and Box-Behnken experiment were conducted toobtain the optimum conditions of Cordyceps taii producing polysaccharide as follows:Fermentation temperature 25,inoculation amount 8%,the ratio of material to water(g/mL)1:1.5,the weight of substrate 10 g and the fermentation time 5days.The content of Cordyceps taii polysaccharide was 5.31%0.11%,and the error was 0.93%1.8%comparing with thetheoretical value.It would provide a theoretical basis for the industrial production of Cordyceps taii polysaccharide and atheoretical reference for other Cordyceps spp.producing polysaccharide by solid fermentation.Keywords：Cordyceps taii；solid fermentation；rice；polysaccharide；condition optimization 戴氏虫草（Cordyceps taii）是一种虫草菌属真菌1，与中国传统的药用真菌蛹虫草、冬虫夏草、蝉花等为同属真菌，通常可入药和制成保健食品2。郭锡勇等3通过对戴氏虫草菌丝体和代谢产物的研究发现，其氨基酸、微量元素和维生素成份等与冬虫夏草中对应物质的含量相近，且对戴氏虫草的代谢产物进行成分分析和药理研究得出，其代谢产物包括：多糖、腺苷、甘露醇等1,4，且具备抗肿瘤510、抗菌1115、抗虫16和免疫调节1721等作用，戴氏虫草有望成为冬虫夏草的替代品。收稿日期：20220913 基金项目：六盘水师范学院 2021 年度联合培养研究生专项基金项目（LPSSYLPY202115）。作者简介：韩鹏飞（1998），男，硕士研究生，研究方向：微生物工程，E-mail：。*通信作者：黄贵强（1988），男，博士，副教授，研究方向：昆虫系统学，E-mail：。第 44 卷 第 14 期食品工业科技Vol.44 No.142023 年 7 月Science and Technology of Food IndustryJul.2023 大米被称作“五谷之首”，是我国重要的粮食作物之一，其种植面积约占所有粮食作物栽培面积的四分之一2223。人体所需要的氨基酸总共有 20 种，大米中就占有 17 种之多，且大米中的矿质元素主要包括镁、钾、钙、铁、锌等等2425。大米不仅能作为主食，有研究表明以大米为发酵基质产生的多糖含量较高2627，且能有效提高多糖含量28。朱丽娜等26以大米和麦子作为发酵基质培养蛹虫草，结果显示以大米为发酵基质得到的多糖含量（3.12%0.20%），高于以小麦为发酵基质得到的多糖含量（2.75%0.13%）；何雯雯等27分别以大米、小麦、玉米、花生、黄豆等七种物质栽培蛹虫草，通过发酵以后检测发酵物中多糖含量，结果显示以大米为发酵基质得到的多糖含量在七种发酵基质中位居第二；付铭等28以大米为基质发酵灵芝菌丝体，经过培养温度、装料量、发酵时间等单因素条件优化，得到灵芝菌丝体产生的多糖含量为 27.37%，有效的提高了多糖产生量。对于戴氏虫草的研究，目前主要集中于生物活性功能研究、活性物质的成分分析以及无性型的鉴定等，而关于戴氏虫草的发酵工艺研究相对较少。本研究以大米为发酵基质，戴氏虫草多糖含量为指标，通过单因素实验和多因素试验的方法，获取最优产戴氏虫草多糖的发酵条件，为戴氏虫草产业化生产虫草多糖提供理论依据，同时也为开发含戴氏虫草天然功能因子的食品原料提供参考，以期能够替代冬虫夏草，降低对冬虫夏草的需求。1材料与方法 1.1材料与仪器戴氏虫草（Cordyceps taii）贵州大学/贵州省生化工程中心提供；小町米（食品级）沃尔玛超市（六盘水市钟山区）；无水葡萄糖（AR）天津市科密欧化学试剂有限公司；苯酚（AR）成都金山化学试剂有限公司；浓硫酸（AR）国药集团化学试剂有限公司。Epoch 多功能酶标仪Bio Tek Instruments Inc；TGL-16M 高速冷冻离心机湖南迈克尔实验仪器有限公司；HWS-250P 恒温恒湿箱天津市泰斯特仪器有限公司。1.2实验方法 1.2.1 培养基制备种子液培养基：马铃薯 200 g/L（去皮煮后过滤取汁液）、葡萄糖 20 g/L，pH 自然。用 5 mL 移液器吸头（大孔一侧）打孔取一饼戴氏虫草菌块接种于种子液培养基中，在 25 下，以160 r/min 发酵 4 d。固体发酵培养基：在 350 mL 组培瓶中装入 20 g大米，料水比（g/mL）为 1:1，121 灭菌 20 min。按照 6%的接种量接入种子液培养基，于 25 下发酵 5 d。1.2.2 单因素实验 1.2.2.1 发酵温度对戴氏虫草多糖含量的影响在350 mL 组培瓶中加入 20 g 大米，料水比（g/mL）为1:1，接种量为 6%，分别在 21、23、25、27、29 下发酵 5 d，检测戴氏虫草多糖含量。1.2.2.2 接种量对戴氏虫草多糖含量的影响在350 mL 组培瓶中加入 20 g 大米，料水比（g/mL）为1:1，接种量分别为 4%、6%、8%、10%、12%，在 25 下发酵 5 d，检测戴氏虫草多糖含量。1.2.2.3 料水比对戴氏虫草多糖含量的影响在350 mL 组培瓶中加入 20 g 大米，料水比（g/mL）分别为 1:0.5、1:1、1:1.5、1:2、1:2.5，接种量为 8%，在25 下发酵 5 d，检测戴氏虫草多糖含量。1.2.2.4 基质重量对戴氏虫草多糖含量的影响在350 mL 组培瓶中分别加入 10、20、30、40、50 g 大米，料水比（g/mL）为 1:1，接种量为 8%，在 25 下发酵 5 d，检测戴氏虫草多糖含量。1.2.2.5 发酵时间对戴氏虫草多糖含量的影响在350 mL 组培瓶中加入 10 g 大米，料水比（g/mL）为1:1，接种量为 8%，在 25 下分别发酵 3、5、7、9、11 d，检测戴氏虫草多糖含量。1.2.3 Plackett-Burman 试验为确定影响戴氏虫草多糖含量的三个主要因素，根据单因素实验的结果，利用软件 Minitab 15 对发酵温度、接种量、料水比、基质重量和发酵时间 5 个因素设计出 N=12 的 5 因素 2 水平 Plackett-Burman（PB）试验，三组平行实验。各因素对应因子代码如表 1 所示。表 1 Plackett-Burman 试验设计各因素水平及分析Table 1 Levels of the variables and factors analysis of Plackett-Burman design因素水平11A：发酵温度（）2325B：接种量（%）68C：料水比（g/mL）1:11:2D：基质重量（g）1020E：发酵时间（d）35 1.2.4 最陡爬坡试验参考陈立功等29最陡爬坡试验设计，将三个影响戴氏虫草多糖含量的主要因素设计最陡爬坡试验，通过实验值的递增来设定爬坡方向，三组平行实验。试验设计与水平如表 2 所示。表 2 最陡爬坡试验设计Table 2 Design of the steepest ascent experiment实验号X：发酵温度（）Y：接种量（%）Z：料水比（g/mL）12361:122471:1.532581:2 1.2.5 Box-Behnken 试验根据 Plackett-Burman 试验和最陡爬坡试验的结果，设计出以发酵温度 X、接种量 Y、料水比 Z 为响应因素，虫草多糖含量为响应第 44 卷 第 14 期韩鹏飞，等：戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化 131 值的 3 因素 3 水平的 Box-Behnken（BB）试验，以获取最优发酵戴氏虫草真菌产多糖的发酵条件。三组平行实验。试验设计与水平如表 3 所示。表 3 响应面试验因素设计和水平Table 3 Response surface test factor design and level因素水平101X：发酵温度（）232425Y：接种量（%）678Z：料水比（g/mL）1:11:1.51:2 1.2.6 戴氏虫草多糖的提取取出发酵产物，在 60 下烘干至恒重，研磨成粉末，加入料水比（g/mL）为1:30 的单蒸水，80 浸提 2 h，再以 6000 r/min 离心 10 min，取上清，使用 Sevag 法30除两次蛋白，所得液体加入无水乙醇使其终浓度达到 70%，4 醇沉 24 h，离心弃上清即为戴氏虫草多糖。1.2.7 戴氏虫草多糖含量的测定葡萄糖标准曲线：采用苯酚硫酸法测多糖含量31，标准曲线的方程为：Y=102.1X16.66，R2=0.996，其中 Y 表示葡萄糖质量浓度，单位为 g/mL，X 为 490 nm 下的吸光度值。样品测定：取 100 L 戴氏虫草多糖溶液，加入50 L 6%苯酚溶液和 300 L 浓硫酸，混匀后静置5 min，沸水浴 10 min，之后在 490 nm 下测其吸光度值，每组三个平行。戴氏虫草多糖含量计算公式如下：多糖含量=CNV106m100式（1）式中：C 为根据标准曲线计算得出的多糖质量浓度，g/mL；N 为稀释倍数；V 为戴氏虫草多糖含量定容的体积，mL；m 为戴氏虫草发酵物质的干重，g。1.3数据处理利用软件 GraphPad Prism 8.0 和 SPSS 26.0 进行数据处理和绘制图形，采用软件 Minitab 15 对Plackett-Burman 实验设计和结果分析，响应面试验结果分析采用软件 Design-Expert 8.0.6，所有实验均重复三次。2结果与分析 2.1单因素实验结果 2.1.1 发酵温度对戴氏虫草多糖含量的影响发酵温度对戴氏虫草多糖含量的影响如图 1 所示。在发酵温度从 21 到 25 时，多糖含量随着温度升高而增加，上升趋势较明显，说明温度过低可能不利于虫草真菌生长，从而影响虫草多糖的产生量；当发酵温度高于 25 时，多糖含量下降，表明温度过高可能会不适合虫草的生长代谢使菌丝快速老化，抑制产物的表达，进而使得虫草多糖含量降低32。发酵温度为 25 时，多糖含量最高，为 5.27%，故最优发酵温度为 25。2.1.2 接种量对戴氏虫草多糖含量的影响接种量在 4%8%范围内时，随着接种量的增加，多糖含量也随之提高，表明接种量较小时，使得虫草真菌的生物量较低，表达的虫草多糖含量较少；当接种量高于8%时，过高的接种量使营养物质消耗加快，导致虫草细胞养分缺乏，进而使虫草真菌停止生长，虫草多糖含量降低31。接种量为 8%时，多糖含量最高，为5.32%，故最优接种量为 8%。接种量对戴氏虫草多糖含量的影响如图 2 所示。aabcbcc接种量(%)024多糖含量(%)68101241086图 2 接种量对戴氏虫草多糖含量的影响Fig.2 Effect of inoculation amount on polysaccharides contentof Cordyceps taii 2.1.3 料水比对戴氏虫草多糖含量的影响当料水比（g/mL）为 1:0.5 时，发酵培养基中的可利用的水分较少，可能会影响菌体对营养物质的降解和利用，进而影响真菌生长和代谢物质的产生，多糖产生量较低；料水比（g/mL）在 1:11:2.5 范围内时，过多的水分使培养基变得粘稠，不利于空气流通，水分对菌体生长和代谢产物的合成胁迫导致多糖含量降低32。料水比（g/mL）为 1:1 时，多糖含量最高，为 5.21%，故最优料水比（g/mL）为 1:1。料水比对戴氏虫草多糖含量的影响如图 3 所示。2.1.4 基质重量对戴氏虫草多糖含量的影响当基质重量为 10 g 时，多糖含量最高，为 5.33%；当基质重量超过 10 g 时，多糖含量逐渐降低，原因可能是随 发酵温度()024多糖含量(%)6810acdbe2921272523图 1 发酵温度对戴氏虫草多糖含量的影响Fig.1 Effect of fermentation temperature on polysaccharidescontent of Cordyceps taii注：不同小写字母之间表示各组间差异性显著（P0.05）；图 2图 5 同。132 食品工业科技2023 年 7 月着基质厚度的增加，使培养基底部氧气含量较少，不能满足虫草真菌生长需求，进而影响多糖含量28。基质重量为 20 g 时，与基质重量为 10 g 的多糖含量接近，原因可能是基质重量为 10 和 20 g 时，虫草真菌的生长量近似，导致代谢产物的产生量也相似，从而使多糖含量相近，故最优的发酵基质重量为 10 g。基质重量对戴氏虫草多糖含量的影响如图 4 所示。aabcd基质重量(g)024多糖含量(%)68105010403020图 4 基质重量对戴氏虫草多糖含量的影响Fig.4 Effect of substrate weight on polysaccharides content ofCordyceps taii 2.1.5 发酵时间对戴氏虫草多糖含量的影响发酵时间从 3 到 5 d 时，多糖含量略微升高，表明随着发酵时间的延长，虫草真菌的生长量提高，致使代谢产物的合成也逐渐增加，多糖含量提高；当发酵时间超过 5 d，多糖含量降低，原因可能是随着发酵时间的延长，营养物质逐渐被消耗，不能维持虫草真菌的正常生长和代谢，导致产物合成速率下降3132。发酵时间为 5 d 时，多糖含量最高，为 5.32%，故最优发酵时间为 5 d。发酵时间对戴氏虫草多糖含量的影响如图 5 所示。2.2Plackett-Burman 试验结果根据表 1 影响多糖含量的各因素和水平，利用Minitab 15 软件设计出 N=12 的 Plackett-Burman 试验，将发酵后的基质进行多糖提取和测定，获得多糖的产量。所有实验均三组平行，实验结果如表 4 所示。表 4 Plackett-Burman 试验设计及结果Table 4 Experimental design and results of Plackett-Burman实验号A：发酵温度（）B：接种量（%）C：料水比（g/mL）D：基质重量（g）E：发酵时间（d）虫草多糖含量（%）12381:11034.990.2722381:21054.520.2132581:12035.130.1542561:21034.630.1752361:11034.960.0462361:12054.840.1472581:21054.750.1382581:12055.370.1292381:22034.540.28102561:22034.320.14112361:22054.350.18122561:11055.140.13 根据 Plackett-Burman 试验结果（表 5）可得，P0.05 的因素有发酵温度、接种量、料水比，这三个因素对戴氏虫草真菌产多糖的影响均高于 95%，达到显著水平。因此选用这三个因素进行响应面试验，其它因素的选值按照单因素实验的最优结果进行选择。表 5 Plackett-Burman 试验设计各因素主效应分析结果Table 5 Results of the main effect of each factor in Plackett-Burman design因素T值P值重要性显著性A：发酵温度（）2.990.0242*B：接种量（%）2.780.0323*C：料水比（g/mL）8.70.0011*D：基质重量（g）1.150.2934E：发酵时间（d）1.050.3355注：*表示该因素对多糖含量影响显著（P0.05）；*表示该因素对多糖含量影响极显著（P0.01）。2.3最陡爬坡试验结果最陡爬坡试验设计和结果如表 6 所示，由于最陡爬坡试验是为了确定响应面试验的中心点，故根据表 6 显示，3 组平行实验得到的最佳因子组为第2 组。最佳因子组的条件为：发酵温度（X）为 24，接种量（Y）为 7%，料水比（Z）为 1:1.5 g/mL。acabb料水比(g/mL)024多糖含量(%)68101:2.51:0.51:2.01:11:1图 3 料水比对戴氏虫草多糖含量的影响Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on polysaccharides content ofCordyceps taii aabbccd发酵时间(d)024多糖含量(%)6810113975图 5 发酵时间对戴氏虫草多糖含量的影响Fig.5 Effect of fermentation time on polysaccharides contentof Cordyceps taii 第 44 卷 第 14 期韩鹏飞，等：戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化 133 表 6 最陡爬坡试验设计及结果Table 6 Design and results of the steepest ascent experiment实验号X：发酵温度（）Y：接种量（%）Z：料水比（g/mL）虫草多糖含量（%）12361:14.660.1522471:1.55.220.1232581:24.910.09 2.4Box-Behnken 试验结果根据 Plackett-Burman 试验和最陡爬坡试验结果，以发酵温度（X）、接种量（Y）、料水比（Z）作为自变量设计出 N=17 的 3 因素 3 水平的 Box-Behnken试验，三组平行实验，试验结果如表 7 所示。表 7 Box-Behnken 设计和结果Table 7 Box-Behnken experiment design and results实验号X：发酵温度（）Y：接种量（%）Z：料水比（g/mL）虫草多糖含量（%）12361:1.54.790.1522481:24.730.0832381:1.54.920.0342571:14.880.0352461:24.550.0662581:1.55.340.0572371:14.680.1382561:1.55.010.0692471:1.55.340.08102471:1.55.290.08112461:14.690.04122481:14.780.09132471:1.55.240.07142471:1.55.330.14152471:1.55.340.16162371:24.500.07172571:24.580.10 对 Box-Behnken 试验结果分析，确定影响戴氏虫草真菌产多糖的二次回归方程为：Y回归=5.31+0.12X+0.091Y0.084Z+0.05XY0.03XZ+0.023YZ0.16X20.13Y20.49Z2。回归模型的方差分析见表 8。由表 8 可知，模型 P0.05，说明该模型构建成功。自变量 X、X2、Y2、Z2对响应值影响极显著（P0.01），自变量 Y 和 Z 对响应值影响显著（P0.05），且模型的决定系数 R2=0.97500.9，校正系数 R2adj=0.94300.9，这表明该二次回归模型的模型相关度良好，能够用来分析和预测实验结果。由 F 值分析可知：Box-Behnken 试验因素对响应值的影响顺序为 X（发酵温度）Y（接种量）Z（料水比）。根据二次多项式回归模型作出实验因素两两交互作用的曲面图，如图 6 所示。根据曲面图可知，所有图形的开口均朝下，表明发酵温度、接种量、料水比在本实验参数中均存在影响戴氏虫草多糖含量的最优值，即：发酵温度 X 为 24.43，接种量 Y 为 表 8 Box-Behnken 试验的方差分析结果Table 8 Analysis of variance of Box-Behnken方差来源平方和自由度均方差F值P值显著性模型1.5190.1730.390.0001*X0.1110.1119.130.0033*Y0.06710.06712.050.0104*Z0.05610.05610.150.0154*XY1.000E-00211.000E-0021.810.2206XZ3.600E-00313.600E-0030.650.4463YZ2.025E-00312.025E-0030.370.5642X20.1110.1119.560.0031*Y20.07410.07413.420.0080*Z21.0011.00181.16 0.0001*残差0.03975.529E-003失拟项0.03130.0105.570.0653纯误差7.480E-00341.870E-003总值1.5516注释：*表示该因素对多糖含量影响显著（P0.05）；*表示该因素对多糖含量影响极显著（P0.01）。5.65.45.25.04.8虫草多糖含量(%)4.64.48.07.57.06.56.023.023.524.024.525.0接种量(%)发酵温度()5.65.45.25.04.8虫草多糖含量(%)4.64.41:2.01:1.81:1.21:1.41:1.61:1.06.06.57.07.58.0料水比(g/mL)接种量(%)1:2.01:1.81:1.21:1.41:1.61:1.0料水比(g/mL)5.65.45.25.04.8虫草多糖含量(%)4.64.423.023.524.024.525.0发酵温度()图 6 两两交互作用对多糖含量影响的响应面图Fig.6 Response surface diagram of the effect of two-twointeraction on the content of polysaccharides 134 食品工业科技2023 年 7 月7.42%，料水比 Z（g/mL）=1:1.46，此时戴氏虫草多糖含量的理论值为 5.36%。考虑到实际实验操作的情况，对模型的预测值进行验证，故将软件分析得出的最佳发酵条件调整为：发酵温度 25，接种量 8%，料水比（g/mL）=1:1.5，基质重量为 10 g，发酵时间为5 d，将此实验条件进行三组平行实验，得出的虫草多糖含量为 5.31%0.11%，与理论值之间的误差为0.93%1.8%，误差较小，表明 Box-Behnken 试验法优化戴氏虫草多糖含量的发酵工艺是可行的。3结论通过单因素实验缩小了各个因素影响虫草多糖含量的范围值，并在此基础上进行 Plackett-Burman试验，确定了发酵温度、接种量、料水比是影响戴氏虫草多糖含量的重要因素。利用最陡爬坡试验确定了响应面试验的中心值，并通过响应面试验设计和结果分析得出最优的实验条件为发酵温度为 24.43，接种量为 7.42%，料水比（g/mL）=1:1.46，虫草多糖含量的理论值为 5.36%。结合实际情况，将实验条件调整为发酵温度 25，接种量 8%，料水比（g/mL）=1:1.5，基质重量为 10 g，发酵时间为 5 d，在此发酵条件下，虫草多糖含量为 5.31%0.11%，与理论值相近。本研究在单因素实验的基础上，通过 Plackett-Burman 试验和响应面试验研究，系统性地完成了戴氏虫草真菌在 350 mL 组培瓶中产多糖的发酵条件优化，进一步提高了戴氏虫草多糖含量，为戴氏虫草发酵大米产多糖提供了更优的发酵条件，利于实验中获取高产量的戴氏虫草多糖，也为其它虫草真菌生产虫草多糖提供了理论参考，同时给戴氏虫草多糖在工业化生产和功能机制的研究方面提供了理论支持。参考文献 1 全宇,刘永翔,刘作易,等.贵州绿僵菌和戴氏绿僵菌分类地位的确证J.贵州农业科学，2012，40（5）：8487.QUAN Y,LIU Y X,LIU Z Y,et al.Identification of the taxonomic status ofMetarhizium guizhouense and Metarhizium taiiJ.Guizhou Agri-cultural Sciences，2012，40（5）：8487.2 刘柏岑,潘卫东,娄华勇,等.戴氏虫草菌丝体抗肿瘤化学成分研究J.江苏农业科学，2017，45（5）：174178.LIU B C,FAN W D,LOU H Y,et al.Study of the anti-tumor chemical con-stituents of Cordyceps sinensis myceliumJ.Jiangsu AgriculturalSciences，2017，45（5）：174178.3 郭锡勇,郭莉莉,陈芳.戴氏虫草与冬虫夏草化学成分的比较J.中药材，1995（8）：403404.GUO X Y,GUO L L,CHEN F.Comparison of chemical constituents between Cordyceps taii andOphiocordyceps sinensisJ.Journal of Chinese Medicinal Materi-als，1995（8）：403404.4 钟韩,甘莉霞,章卫民,等.戴氏虫草活性成分分析及其对小鼠免疫功能的影响J.食用菌学报，2008（3）：5558.ZHONGH,GAN L X,ZHANG 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