高脂血症性急性胰腺炎患者血...、PTEN水平变化及其意义_蒋梦萍.pdf

山东医药2023 年第 63 卷第 19 期高脂血症性急性胰腺炎患者血清 miR-372、PTEN水平变化及其意义蒋梦萍1，李秀芬1，邬宇美1，尉秀清21 深圳市第三人民医院消化内科，广东深圳518112；2 中山大学附属第三医院消化内科摘要：目的探讨高脂血症性急性胰腺炎（HLAP）患者血清微小RNA-372（miR-372）、第10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张素同源物（PTEN）水平变化及其意义。方法选取150例HLAP患者为HLAP组，根据病情严重程度将HLAP患者分为轻症组（n=41）、中度重症组（n=43）、重症组（n=66），根据预后分为死亡组（n=34）和存活组（n=116）；同期另选取62名体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-372，酶联免疫吸附法检测PTEN。Pearson相关法分析HLAP患者血清miR-372与PTEN水平的相关性，多因素Logistic回归分析HLAP患者预后不良的影响因素，受试者工作特征曲线分析血清miR-372、PTEN水平对HLAP患者预后的预测价值。结果HLAP组血清miR-372水平高于对照组，PTEN水平低于对照组（P均0.05）。轻症组、中度重症组、重症组血清miR-372水平依次升高，PTEN水平依次降低（P均0.05）。HLAP患者血清miR-372与PTEN水平呈负相关（r=0.729，P0.05）。重症HLAP、住ICU时间长和C反应蛋白、miR-372水平升高为HLAP患者预后不良的独立危险因素，PTEN升高为独立保护因素 OR（95%CI）分别为4.208（1.42412.432）、1.724（1.2432.390）、1.030（1.0101.050）、1.672（1.2712.200）、0.936（0.9040.969）。血清miR-372、PTEN水平联合预测HLAP患者预后的曲线下面积大于二者单独预测（P均0.05）。结论HLAP患者血清miR-372水平升高、PTEN水平降低，二者与病情严重程度和预后有关，可作为HLAP患者预后不良的预测指标。关键词：高脂血症性急性胰腺炎；微小RNA-372；第10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张素同源物；病情；预后doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.19.003 中图分类号：R657.5 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）19-0009-05Changes in levels of serum miR-372 and PTEN in patients with hyperlipidemic acute pancreatitis and their significanceJIANG Mengping1，LI Xiufen，WU Yumei，WEI Xiuqing1 Department of Gastroenterology，The Third Peoples Hospital of Shenzhen，Shenzhen 518112，ChinaAbstract：Objective To investigate the changes in levels of serum microRNA-372（miR-372）and phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10（PTEN）in patients with hyperlipidemic acute pancreatitis（HLAP）and their significance.Methods Totally 150 HLAP patients were selected as the HLAP group.HLAP patients were divided into the mild（n=41），moderately severe（n=43）and severe（n=66）groups according to their severity，and into death（n=34）and survival（n=116）groups according to their prognosis；another 62 examined healthy people in the same period were selected as the control group.Serum miR-372 level was measured by quantitative real-time polymerase chain reaction and PTEN level was measured by ELISA.Pearson correlation coefficient was used to analyze the correlation between serum miR-372 and PTEN levels in HLAP patients，multi-factor Logistic regression was used to analyze the factors influencing poor prognosis of HLAP patients，and ROC curve was used to analyze the predictive value of serum miR-372 and PTEN levels for poor prognosis of HLAP patients.Results Serum miR-372 level was higher in the HLAP group than in the control group，and PTEN level was lower than that in the control group（both P0.05）.Serum miR-372 levels in the mild，moderately severe，and severe groups increased in turn，while PTEN levels decreased in turn（all P0.05）.Serum miR-372 was negatively correlated with PTEN level in HLAP patients（r=-0.729，P0.05）.Multi-factor Logistic regression analysis showed that severe HLAP，prolonged intensive care unit（ICU）time and elevated C-reactive protein and miR-基金项目：广东省医学科研基金项目（A2019063）。第一作者简介：蒋梦萍（1990-），女，硕士研究生，主治医师，主要研究方向为炎症性肠病、急性胰腺炎、门脉高压的临床诊治。E-mail：开放科学（资源服务）标识码（OSID）9山东医药2023 年第 63 卷第 19 期372 were independent risk factors for poor prognosis in HLAP patients，and elevated PTEN was an independent protective factor OR（95%CI）：4.208（1.424 to 12.432），1.724（1.243 to 2.390），1.030（1.010 to 1.050），1.672（1.271 to 2.200），and 0.936（0.904 to 0.969）.The area under the curve of serum miR-372 combined with PTEN in predicting prognosis in HLAP patients was greater than either alone（all P0.05）.Conclusion Increased serum miR-372 level and decreased PTEN level in HLAP patients are associated with severity of disease and prognosis，and may be the predictors of poor prognosis in patients with HLAP.Key words：hyperlipidemic acute pancreatitis；microRNA-372；phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10；state of an illness；prognosis急性胰腺炎（AP）是常见的消化系统急症，其病情进展迅速，极易引发全身炎性反应综合征，导致多器官功能障碍或衰竭，具有致残率和致死率高的特点1。近年来随着国民生活水平的提高，饮食偏向高油、高脂食物，高脂血症发病率逐年上升，由此导致高脂血症性AP（HLAP），高脂血症已成为AP第二大病因2。尽管近年来针对HLAP的诊治已取得较大进展，但部分重症患者病情仍难以控制，预后较差3。研究表明，微小RNA（miRNA）和脂质代谢紊乱、免疫炎症参与AP的发生、发展 4-5。微小RNA-372（miR-372）是一个高度保守 miRNA，其在胰腺癌中表达下调6，且参与炎症过程7。第10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张素同源物（PTEN）是肿瘤抑制基因，能通过调节磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B（PI3K/AKT）信号通路参与脂质代谢和炎性反应8-9。目前关于血清miR-372、PTEN水平与HLAP病情及预后的关系尚不清楚。本研究就此探讨如下。1 资料与方法 1.1临床资料选取2019年1月2022年6月深圳市第三人民医院收治的 150 例 HLAP 患者为HLAP 组，男 85 例，女 65 例；年龄 2879（57.45 10.31）岁；体质量指数（BMI）20.0832.24（24.91 2.55）kg/m2。纳入标准：符合 美国亚特兰大急性胰腺炎新分级、分类系统（2012）11HLAP诊断标准；发病至入院时间0.05）。两组均签署知情同意书，本研究经医院医学伦理委员会批准。1.2资料收集收集HLAP患者性别、年龄、BMI、合并症、住ICU时间及入住ICU时心率、血压、实验室指标（血红蛋白、白细胞计数、血小板计数、血尿素氮、血肌酐、血淀粉酶、C反应蛋白、TG等）。1.3血清miR-372、PTEN检测采集HLAP患者入院时和对照组体检时静脉血3 mL，3 000 r/min离心10 min（半径10 cm），取血清保存于-80 冰箱。取血清标本，采用TRIzol法提取总RNA后反转录为cDNA，按照SYBR Premix Ex Taq试剂盒（上海赫果生物科技有限公司）说明书进行实时荧光定量PCR检测。miR-372 上游引物 5-GCCCGCAAAGTGCTGCGACAT-3，下游引物 5-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3；内参 U6 上游引物 5-CGCTTCGGCAGCACATATACTA-3，下游引物5-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCA-3。反应条件：95 90 s 循环 1 次，95 30 s、63 30 s、72 15 s循环40次。采用2-CT法计算血清miR-372表达。另取血清标本，采用酶联免疫吸附法（上海谷研实业有限公司）检测PTEN。1.4HLAP病情程度、预后评估及分组HLAP患者入院后48 h参考 美国亚特兰大急性胰腺炎新分级、分类系统（2012）10分为轻症（无并发症和器官功能衰竭）组 41例、中度重症（有局部或全身并发症，可伴有持续时间48 h的器官功能衰竭）组66 例。以 HLAP 患者康复出院或死亡为终点，将HLAP患者分为存活组116例和死亡组34例。1.5统计学方法采用SPSS28.0统计学软件。符合正态分布的计量资料以-x s表示，两组比较采用t检验，多组比较采用方差分析，组间两两比较采用Bonferroni法；非正态分布的计量资料以M（P25，P75）表示，两组比较采用U检验。计数资料比较采用2检验。Pearson相关法分析HLAP患者血清miR-372与 PTEN 水平的相关性；多因素 Logistic 回归分析HLAP患者预后不良的影响因素；绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清 miR-372、PTEN 水平对HLAP患者预后不良的预测价值，曲线下面积比较采用Z检验。P0.05为差异有统计学意义。10山东医药2023 年第 63 卷第 19 期2 结果 2.1HLAP组与对照组血清miR-372、PTEN水平比较HLAP组血清 miR-372水平高于对照组，PTEN水平低于对照组（P均0.05）。见表1。2.2轻症组、中度重症组、重症组血清 miR-372、PTEN水平比较轻症组、中度重症组、重症组血清miR-372水平依次升高，PTEN水平依次降低（P均0.05）。见表2。2.3HLAP患者血清miR-372与PTEN的相关性经www.targetscan.org 网站预测，miR-372 与 PTEN 的3-非翻译区存在6个结合位点。Pearson相关分析显示，HLAP患者血清miR-372水平与PTEN水平呈负相关（r=-0.729，P0.05）。2.4HLAP患者预后的影响因素2.4.1单因素分析结果死亡组与存活组病情严重程度、住 ICU 时间、C 反应蛋白、TG、miR-372、PTEN比较差异有统计学意义（P均0.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.052.4.2HLAP 患者预后影响因素多因素分析以病情严重程度（轻症为“1”；中度重症为“2”；重症为“3”）、住ICU时间、C反应蛋白、TG、miR-372、PTEN为自变量，预后（死亡为“1”；存活为“0”）为因变量。多因素Logistic回归分析显示，重症HLAP、住ICU时间长及C反应蛋白、miR-372水平升高为HLAP患者表1HLAP组与对照组血清miR-372、PTEN水平比较（-x s）组别HLAP组对照组Pn150 62miR-3728.00 2.562.54 0.840.05PTEN（ng/L）145.29 31.68228.77 31.930.05表2轻症组、中度重症组、重症组血清miR-372、PTEN水平比较（-x s）组别轻症组中度重症组重症组Pn414366miR-3725.27 1.487.30 0.95a10.16 1.82ab0.05PTEN（ng/L）178.95 17.38155.75 17.94a117.56 18.42ab0.05注：与轻症组比较，aP0.05；与中度重症组比较，bP0.05。11山东医药2023 年第 63 卷第 19 期预后不良的独立危险因素，PTEN水平升高为独立保护因素（P均0.05）。见表4。2.6血清miR-372、PTEN水平对HLAP患者预后的预测价值ROC曲线分析显示，血清miR-372、PTEN水平联合预测 HLAP 患者预后的曲线下面积大于miR-372、PTEN单独预测（P均0.05）。见表5。3 讨论 HLAP是因高TG血症患者血浆中游离脂肪酸、乳糜颗粒大量沉积于胰腺毛细血管床，阻塞胰腺毛细血管造成胰腺微循环障和钙超载12。临床中大多HLAP患者为轻症，病程呈自限性且病死率极低，但也有部分患者可发展为中度重症或重症，并发单个或多个器官功能障碍甚至衰竭，病死率较高13。因此，早期评估HLAP患者病情对促进预后改善具有重要意义。研究表明，炎性反应在HLAP发生发展中发挥重要作用2。miRNA是一类小核苷酸分子，通过与mRNA的3-非翻译区互补配对调控基因表达，参与调控细胞增殖、分化、凋亡、炎性反应等多种过程，在HLAP发生发展中发挥重要作用。如miR-153能靶向固醇调节元件结合蛋白1c延迟HLAP大鼠的胰腺修复14，miR-192-5p能靶向硫氧还蛋白互作蛋白抑制HLAP大鼠胰腺炎症和细胞凋亡15。miR-372定位于人19号染色体前臂13.42，既往研究多报道其与结直肠癌、肺癌等恶性肿瘤相关16-17。马瑾等18研究显示，miR-372能靶向多配体聚糖1抑制胰腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化。提示miR-372可能与胰腺疾病有关。miR-372是介导炎症信号“核因子-B（NF-B）”的主要分子19。FAN等20研究显示，miR-372是诱导TG积累的关键因子，能靶向烷基甘油酮磷酸合酶/载脂蛋白 C4 通路破坏脂质稳态。以上研究提示，miR-372 还参与炎症和 TG 积累，但关于miR-372与HLAP的关系犹未可知。本研究结果显示，HLAP患者血清miR-372水平升高，提示miR-372水平升高参与HLAP发生。结果还显示，HLAP患者血清miR-372水平随着病情加重而升高，是预后不良的独立危险因素。提示miR-372水平升高参与HLAP发生发展，考虑原因为miR-372能激活NF-B信号通路，触发炎性级联反应，破坏腺泡细胞结构，引起胰腺腺泡细胞凋亡，加重病情进展，导致预后不良。NF-B是介导HLAP胰腺腺泡细胞内炎症的主要信号通路21。miR-372介导NF-B信号通路激活19。PI3K/AKT是一种重要的信号通路，参与HLAP发生发展22。PTEN是一种位于细胞质和细胞核内的脂质磷酸酶，能将磷酸酰肌醇3磷酸水解为磷脂酰肌醇2磷酸，阻断PI3K对AKT的募集和激活，从而使PI3K/AKT信号通路受阻；同时脂质代谢紊乱和炎症也会影响 PTEN 表达8。既往研究报道，PTEN能靶向 PI3K/AKT信号通路抑制胰腺癌细胞生长和侵袭23。近年研究指出，上调PTEN能抑制胰腺泡细胞自噬和凋亡24。本研究结果显示，HLAP患者血清PTEN水平降低，随着病情加重而降低，说明血清PTEN水平降低与HLAP患者病情加重和预后不良有关。分析原因可能是PTEN能阻断PI3K/AKT信号通路，PTEN水平降低导致PI3K/AKT信号通路激活，通过活化下游靶点促进炎症发展，导致HLAP病情加重和预后不良。本研究通过网站预测发现，miR-372与PTEN存在结合位点，相关性分析也发现 HLAP 患者血清表4HLAP患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析因素病情严重程度（参考轻症）中度重症重症住ICU时间长C反应蛋白水平升高TG水平升高miR-372水平升高PTEN水平升高-0.2931.4370.5440.0300.1160.514-0.066SE-0.2150.5530.1670.0100.0990.1400.018Wald211.5411.8596.64110.6508.9981.37413.51713.929P0.050.050.050.050.050.05OR（95%CI）-1.341（0.8802.044）4.208（1.42412.432）1.724（1.2432.390）1.030（1.0101.050）1.123（0.9251.363）1.672（1.2712.200）0.936（0.9040.969）表5血清miR-372、PTEN水平对HLAP患者预后的预测价值指标miR-372PTEN2项联合曲线下面积（95%CI）0.789（0.7150.851）0.783（0.7090.846）0.876（0.8120.924）最佳截断值8.54128.78 ng/L-灵敏度（%）82.3564.7188.24特异度（%）73.2881.0372.41Youden指数0.5560.4570.60712山东医药2023 年第 63 卷第 19 期miR-372与PTEN水平呈负相关。单毓强25的研究亦显示，抑制miR-372表达能靶向PTEN抑制PI3K/AKT通路激活，从而抑制HLAP小鼠炎症反应。以上说明 miR-372 与 PTEN 可能共同通过 PI3K/AKT通路参与HLAP发生发展。本研究结果还显示，除重症AP外，住ICU时间延长和 CRP 升高也能增加 HLAP 患者预后不良风险。住ICU时间越长反映HLAP患者病情越危重，因此预后更差；CRP作为急性时相反应蛋白，CRP水平越高反映HLAP患者炎性反应越严重，能加重胰腺腺泡细胞破坏导致预后不良。本研究绘制 ROC 曲线发现，血清 miR-372、PTEN水平单独与联合预测HLAP患者预后的曲线下面积分别为 0.789、0.783、0.876，二者联合预测的曲线下面积更大。说明miR-372、PTEN可能成为HLAP患者预后的预测指标，且联合检测可提升预测价值。综上所述，HLAP患者血清miR-372水平升高，PTEN水平降低，二者可能共同影响HLAP病情进展和预后，为HLAP患者预后不良的预测指标。本研究为 HLAP 诊治和预后评估提供了新的思路，但miR-372、PTEN参与 HLAP的机制还需进一步深入研究。参考文献：1中华医学会外科学分会胰腺外科学组.中国急性胰腺炎诊治指南（2021）J.中华消化外科杂志，2021，20（7）：730-739.2高甘油三酯血症性急性胰腺炎诊治急诊共识专家组.高甘油三酯血症性急性胰腺炎诊治急诊专家共识 J.中华急诊医学杂志，2021，30（8）：937-947.3中国医疗保健国际交流促进会急诊医学分会，脓毒症预防与阻断联盟.重症急性胰腺炎预防与阻断急诊专家共识 J.中国急救医学，2022，42（5）：369-379.4ZHOU W，DONG S，CHEN Z，et al.New challenges for microRNAs in acute pancreatitis：progress and treatmentJ.J Transl Med，2022，20（1）：192.5郑智，曲元旭，丁乙轩，等.急性胰腺炎发病机制的研究进展J.中华肝胆外科杂志，2021，27（2）：152-155.6SOHRABI E，REZAIE E，HEIAT M，et al.An integrated data analysis of mRNA，miRNA and signaling pathways in pancreatic cancer J.Biochem Genet，2021，59（5）：1326-1358.7HEI 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