基于生物信息学分析TSPAN9在宫颈鳞状细胞癌中的表达和预后意义.pdf

本文引文格式:张容铖,张添淼,张钟祺,等.基于生物信息学分析T S P AN 9在宫颈鳞状细胞癌中的表达和预后意义J.右江民族医学院学报,2 0 2 4,4 6(2):1 8 5-1 9 1.【论著与临床报道】基于生物信息学分析T S P AN 9在宫颈鳞状细胞癌中的表达和预后意义张容铖1,张添淼1,张钟祺1,向未来1,郭雪峰1,朱小年1,陈卓2,谭盛葵1,3(1.桂林医学院公共卫生学院,广西 桂林 5 4 1 0 0 4;2.湖南省岳阳妇幼保健院,湖南 岳阳 4 1 4 0 0 0;3.右江民族医学院,广西 百色 5 3 3 0 0 0)摘 要:目的 通过生物信息学方法,基于T C GA数据和多种在线数据库分析T S P AN 9在宫颈鳞状细胞癌(C E S C)中的表达和预后意义。方法 应用U C S C数据库中下载的肿瘤数据集和T I ME R2.0数据库分别分析T S P AN 9在泛癌中的表达情况;使用UA L C AN数据库、H P A数据库和K a p l a n-M e i e rP l o t t e r数据库分析T S P AN 9在C E S C中的表达和预后情况;运用R语言分析T S P AN 9与免疫检查点、免疫微环境、免疫浸润细胞的相关性,并进行T S P AN 9在C E S C中的富集分析。结果 T S P AN 9在多种癌症中异常表达,其中在C E S C中低表达,与C E S C患者的预后密切相关。T S P AN 9在C E S C中与4 5个免疫激活剂、免疫抑制剂的标记基因相关,与C D 4T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞浸润显著相关。G O富集分析显示在C E S C中T S P AN 9参与了上皮-间质转化、WN T的细胞信号转导等生物过程;K E G G通路富集分析显示在C E S C中T S P AN 9在T G F-信号通路、P 5 3信号通路等发挥作用。结论 T S P AN 9在C E S C中的低表达对于C E S C患者的预后具有临床意义,有望成为肿瘤免疫治疗的新靶点。关键词:T S P AN 9;宫颈肿瘤;生物信息学;免疫中图分类号:R 7 3 7.3 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 1-5 8 1 7(2 0 2 4)0 2-0 1 8 5-0 7d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 1-5 8 1 7.2 0 2 4.0 2.0 0 7E x p r e s s i o na n dp r o g n o s t i c s i g n i f i c a n c eo fT S P A N 9i nc e r v i c a ls q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a:Ab i o i n f o r m a t i c sa n a l y s i sZ h a n gR o n g c h e n g1,Z h a n gT i a n m i a o1,Z h a n gZ h o n g q i1,X i a n gW e i l a i1,G u oX u e f e n g1,Z h uX i a o n i a n1,C h e nZ h u o2,T a nS h e n g k u i1,3(1.S c h o o l o fP u b l i cH e a l t h,G u i l i nM e d i c a lU n i v e r s i t y,G u i l i n5 4 1 0 0 4,G u a n g x i,C h i n a;2.Y u e y a n gM a t e r n a la n dC h i l dH e a l t hH o s p i t a l,Y u e y a n g4 1 4 0 0 0,H u n a n,C h i n a;3.Y o u j i a n gM e d i c a lU n i v e r s i t yf o rN a t i o n a l i t i e s,B a i s e5 3 3 0 0 0,G u a n g x i,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T oa n a l y z et h ee x p r e s s i o na n dp r o g n o s t i cs i g n i f i c a n c eo fT S P AN 9i nc e r v i c a l s q u a-m o u sc e l lc a r c i n o m a(C E S C)t h r o u g hb i o i n f o r m a t i c sa n a l y s i sb a s e do nT h eC a n c e rG e n o m eA t l a s(T C GA,T I ME R2.0,UA L C AN)d a t a a n dm u l t i p l eo n l i n ed a t a b a s e s.M e t h o d s T h e c a n c e r d a t a s e t d o w n l o a d e d f r o mU C S Cd a t a b a s e a n dT I ME R2.0d a t a b a s ew e r eu t i l i z e d t oa n a l y z e t h e e x p r e s s i o no fT S P AN 9 i np a n-c a n c e r.T h ee x p r e s s i o na n dp r o g n o s i so fT S P AN 9i nC E S Cw e r ea n a l y z e du s i n gT h eUA L C ANd a t a b a s e,H u m a nP r o t e i nA t l a s(H P A)d a t a b a s e,a n dK a p l a n-M e i e rP l o t t e rd a t a b a s e.Rs o f t w a r ew a su s e d t oa n a l y z e t h e c o r r e l a t i o nb e-581第4 6卷 第2期 右江民族医学院学报 V o l.4 6N o.22 0 2 4年4月 J o u r n a l o fY o u j i a n gM e d i c a lU n i v e r s i t yf o rN a t i o n a l i t i e s A p r.2 0 2 4基金项目:广西基础医学协同创新研究生联合培养基地技术开发(2 0 2 1 J C J D 0 3)第一作者:张容铖,硕士,研究方向:肿瘤分子流行病学,E-m a i l:6 7 5 4 4 7 9 3 6q q.c o m 通讯作者:谭盛葵,博士,教授,博士、硕士研究生导师,研究方向:肿瘤分子流行病学,E-m a i l:s k t a n 2 0 0 8s i n a.c o mt w e e nT S P AN 9a n d i mm u n ec h e c k p o i n t s,i mm u n em i c r o e n v i r o n m e n t a n d i mm u n e-i n f i l t r a t i n gc e l l s,a sw e l l a st h ee n r i c h m e n to fT S P AN 9 i nC E S Cw e r e c o n d u c t e du s i n gRs o f t w a r e.R e s u l t s T S P AN 9e x h i b i t e dd y s r e g u-l a t e de x p r e s s i o na c r o s sm u l t i p l ec a n c e r t y p e s,w i t hn o t a b l y l o we x p r e s s i o n i nC E S C,w h i c hw a s c l o s e l yr e l a t e dt ot h ep r o g n o s i so fC E S Cp a t i e n t s.T S P AN 9e x p r e s s i o nw a s a s s o c i a t e dw i t h4 5m a r k e rg e n e so f i mm u n o s t i m u-l a n t s a n d i mm u n o s u p p r e s s a n t s,a sw e l l a s s i g n i f i c a n t l yc o r r e l a t e dw i t ht h e i n f i l t r a t i o no fC D 4+Tc e l l s,n e u t r o-p h i l s,m a c r o p h a g e s,a n dd e n d r i t i cc e l l s i nC E S C.G e n eO n t o l o g y(GO)e n r i c h m e n t a n a l y s i s r e v e a l e dt h a tT S-P AN 9 i s i n v o l v e di nb i o l o g i c a lp r o c e s s e ss u c ha se p i t h e l i a l-m e s e n c h y m a lt r a n s i t i o na n d Wn ts i g n a lt r a n s d u c-t i o n.K y o t oE n c y c l o p e d i ao fG e n e sa n dG e n o m e s(K E G G)p a t h w a ye n r i c h m e n t a n a l y s i ss h o w e dt h a tT S P AN 9p l a y e da r o l e i n t h eT G F-s i g n a l i n gp a t h w a y,p 5 3s i g n a l i n gp a t h w a ya n do t h e r p a t h w a y s i nC E S C.C o n c l u s i o n T h e l o we x p r e s s i o no fT S P AN 9 i nC E S Ch a s c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e f o r t h ep r o g n o s i so fC E S Cp a t i e n t s,s u g g e s-t i n g i t sp o t e n t i a l a san o v e l t a r g e t f o rc a n c e r i mm u n o t h e r a p y.K e yw o r d s:t e t r a s p a n i n9;u t e r i n ec e r v i c a ln e o p l a s m s;b i o i n f o r m a t i c s;i mm u n i t y 宫颈癌(c e r v i c a l c a n c e r,C C)是发生在女性子宫颈部位的恶性肿瘤,病理类型多为宫颈鳞状细胞癌(c e r-v i c a l s q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a,C E S C),其与人乳头瘤病毒(h u m a np a p i l l o m av i r u s,H P V)的持续感染密切相关1。目前宫颈癌是全球女性癌症死亡的主要类型之一,2 0 2 0年全球新增病例约6 0 40 0 0例,死亡约3 4 20 0 0例2。随着H P V疫苗接种计划和宫颈癌筛查项目的不断落实,我国宫颈癌的发病率和死亡率虽然都有所下降,但其对我国女性健康造成的危害仍不容忽视,C C是导致我国4 05 9岁的女性个体致死的主要癌症类型之一3。宫颈癌目前的治疗方法仍以根治性切除手术为主,对患者的生理和心理均有不同程度的影响4。免疫疗法作为其新兴的治疗手段,引发了研究热潮,它对人体的伤害远小于传统的手术方式5,但在宫颈癌中的免疫治疗还处于初步阶段,需要发掘新的标记基因和目标靶点。四跨膜蛋白家族(t e t r a s p a n i n s,T S P AN s)主要定位于生物细胞的胞膜上,通过形成自身二聚体结构或与其他相关蛋白结合成复合体行使相应的功能6。在肿瘤中,T S P AN s通过结合整合素蛋白、金属蛋白水解酶等调控细胞增殖、迁移和侵袭性,影响肿瘤的发生和发展过程7。其中T S P AN 9(t e t r a s p a n i n9)是四跨膜蛋白家族成员之一,于2 0 0 0年首次发现,具有经典的四跨膜蛋白家族结构,主要由4个跨膜片段、2个细胞外环、N-氨基和C-羧基组成,表达于多种免疫细胞和肿瘤细胞,包括淋巴细胞、T细胞、宫颈癌细胞、肺癌细胞和结肠癌细胞等8。近年来,随着对T S P AN s研究的不断深入,T S P AN 9在多种肿瘤中的生物学作用逐渐被揭示,目前研究发现:在胃癌中,抑制T S P AN 9的表达可以显著促进癌细胞的迁移和侵袭,其能和EM I L I N 1协同表达增强对肿瘤的抑制作用9。T S-P AN 9在肝细胞癌中低表达,过表达T S P AN 9的肝细胞癌患者预后较好1 0。这些结果都证明T S P AN 9作为标志物在肿瘤中具有巨大的潜在价值。因此,本文采用肿瘤基因组图谱(T C GA)、G T E x数据库资料和多种在线数据库分析T S P AN 9在不同肿瘤中的表达差异和预后价值,同时进一步分析其在C E S C中的表达和预后情 况,并且在C E S C中进行T S P AN 9与免疫相关的分析、单基因的G S E A富集分析,以期为后续的C E S C科研实验和临床治疗提供帮助。1 材料与方法1.1 数据来源 U C S C(h t t p s:/x e n a b r o w s e r.n e t/)数据库中下载了经统一标准化的泛癌数据集:T C GAT A R G E TG T E x(P AN C AN,N=1 9 1 3 1,G=6 0 4 9 9),从中提取T S P AN 9基因在各个样本中的表达数据,进一步分别提取每种肿瘤的基因表达谱。下载的肿瘤类型包 括 肾 上 腺 皮 质 癌(a d r e n o c o r t i c a lc a r c i n o m a,A C C)、膀胱尿路上皮癌(b l a d d e ru r o t h e l i a lc a r c i n o-m a,B L C A)、乳腺浸润癌(b r e a s t i n v a s i v ec a r c i n o m a,B R C A)、宫颈鳞状细胞癌(c e r v i c a l s q u a m o u sc e l l c a r-c i n o m a,C E S C)、胆 管 癌(c h o l a n g i o c a r c i n o m a,CHO L)、结肠癌(c o l o na d e n o c a r c i n o m a,C OA D)、结直肠癌(c o l o na d e n o c a r c i n o m a/r e c t u ma d e n o c a r c i n o-m ae s o p h a g e a l c a r c i n o m a,C OA D R E A D)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(l y m p h o i dn e o p l a s m d i f f u s el a r g eb-c e l ll y m p h o m a,D L B C)、食 管 癌(e s o p h a g e a lc a r c i n o m a,E S C A)、多形成 性 胶 质 细 胞 瘤(g l i o b l a s t o m a m u l t i-f o r m e,G BM)、胶质瘤(g l i o m a,G BML G G)、头颈部鳞状细胞癌(h e a da n dn e c ks q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a,HN S C)、肾 嫌 色 细 胞 癌(k i d n e y c h r o m o p h o b e,K I CH)、肾透明细胞癌(k i d n e yr e n a lc l e a rc e l lc a r c i-n o m a,K I R C)、肾乳头状细胞癌(k i d n e yr e n a lp a p i l l a-r yc e l l c a r c i n o m a,K I R P)、急性髓细胞样白血病(a c u t em y e l o i dl e u k e m i a,L AML)、脑 低 级 别 胶 质 瘤(b r a i nl o w e rg r a d eg l i o m a,L G G)、肝细胞肝癌(l i v e rh e p a t o-6812 0 2 4年 右江民族医学院学报 第2期c e l l u l a rc a r c i n o m a,L I HC)、肺腺癌(l u n ga d e n o c a r c i-n o m a,L UA D)、肺 鳞 状 细 胞 癌(l u n gs q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a,L U S C)、间皮瘤(m e s o t h e l i o m a,ME S O)、卵巢浆液性囊腺癌(o v a r i a ns e r o u sc y s t a d e n o c a r c i n o-m a,OV)、胰 腺 癌(p a n c r e a t i c a d e n o c a r c i n o m a,P AA D)、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(p h e o c h r o m o c y t o-m aa n dp a r a g a n g l i o m a,P C P G)、前列腺腺癌(p r o s t a t ea d e n o c a r c i n o m a,P R A D)、直肠腺癌(r e c t u ma d e n o c a r-c i n o m a,R E A D)、肉 瘤(s a r c o m a,S A R C)、胃 腺 癌(s t o m a c ha d e n o c a r c i n o m a,S T A D)、皮 肤 黑 色 素 瘤(s k i nc u t a n e o u sm e l a n o m a,S K CM)、睾丸癌(t e s t i c u-l a rg e r mc e l l t u m o r s,T G C T)、甲状腺癌(t h y r o i dc a r-c i n o m a,THC A)、胸腺癌(t h y m o m a,THYM)、子宫内膜癌(u t e r i n ec o r p u se n d o m e t r i a l c a r c i n o m a,U C E C)、子宫肉瘤(u t e r i n ec a r c i n o s a r c o m a,U C S)、葡萄膜黑色素瘤(u v e a lm e l a n o m a,UVM)、骨 肉 瘤(o s t e o s a r c o-m a,O S)、白 血 病(a c u t el y m p h o b l a s t i cl e u k e m i a,A L L)、神经母细胞瘤(n e u r o b l a s t o m a,N B)和肾母细胞瘤(h i g h-r i s kw i l m st u m o r,WT)。此外,使用多种在线 数 据 库,包 括T I ME R2.0(h t t p:/t i m e r.c i s-t r o m e.o r g/)、M e t a s c a p e在线数据库(h t t p s:/m e t a s-c a p e.o r g/g p/)、UA L C AN数 据 库(h t t p s:/u a l c a n.p a t h.u a b.e d u/)、人类蛋白质图谱数据库(H P A,h t-t p s:/www.p r o t e i n a t l a s.o r g)和K a p l a n-M e i e rP l o t-t e r数据库(h t t p s:/k m p l o t.c o m/a n a l y s i s/)。1.2 T S P AN 9在 不 同 肿 瘤 中 的 差 异 分 析 使 用T I ME R2.0数据库选择C a n c e rE x p l o r a t i o n进行T S-P AN 9在泛癌和正常组织表达水平的在线分析,得到T S P AN 9在泛癌和正常组织表达差异图。同时使用R软件(v e r s i o n3.6.4)计算了T C GA和G T E x数据集中每个肿瘤中正常样本和肿瘤样本的表达差异。1.3 T S P AN 9在C E S C中的差异分析和生存分析 使用UA L C AN数据库选择T C GA进行T S P AN 9在C E S C和正常组织中的表达差异分析,得到结果柱状图。从H P A数据库中检索T S P AN 9蛋白在C E S C中的表达图,得到C E S C组织和正常组织的免疫组化对 比 图。使 用K a p l a n-M e i e rP l o t t e r数 据 库 选 择C E S C,截取总体生存期在03 6个月的患者数据进行T S P AN 9在C E S C中的生存分析,得到生存曲线。1.4 T S P AN 9在C E S C中的免疫相关分析 从泛癌数据集中提取T S P AN 9和免疫激活剂、免疫抑制剂途径的标记基因在C E S C各个样本中的表达数据,过滤了所有的正常样本,对每一个表达值进行了l o g 2(x+0.0 0 1)变换,将基因表达谱映射到G e n eS y m b o l上,分别使用R语言计算T S P AN 9和标记基因的P e a r-s o n相 关 性;使 用R软 件 包E S T I MAT E根 据T S-P AN 9的表达计算C E S C中每个患者的E S T I MAT Es c o r e s,评分结果使用R软件包p s y c h(v e r s i o n2.1.6)的c o r r.t e s t函数计算C E S C中T S P AN 9与免疫浸润评分的关联;使用R软件包I O B R的T i m e r方法,根据基因表达重新评估每个C E S C患者的B细胞、C D 4T细胞、C D 8T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞的浸润评分,获得所有C E S C样本的6类免疫细胞浸润评分并使用R软件包P s y c h的c o r r.t e s t函数计算T S P AN 9与免疫细胞浸润评分的相关性。1.5 T S P AN 9在C E S C中的G S E A富集分析 从G S E A网站下载G S E A数据,根据T S P AN 9的表达水平将 样 本 分 成 高 表 达 组(5 0%)和 低 表 达 组(5 0%),并 从M o l e c u l a rS i g n a t u r e sD a t a b a s e下 载 了c 2.c p.k e g g.v 7.4.s y m b o l s.g m t子集合,用以评估相关途径和分子机制,基于基因表达谱和表型分组,设定最小基因集为5,最大基因集为50 0 0,一千次重抽样,Pv a l u e 0.0 5,F D R0.2 5。1.6 统 计 学 方 法 通 过W i l c o x o n检 验 分 析T S-P AN 9在不同肿瘤中的表达差异;采用单因素方差分析和L o g-r a n k检验分别计算T S P AN 9在C E S C中的差异表达和不同表达水平患者的生存时间差异;应用皮尔逊系数法进行T S P AN 9在C E S C中的免疫相关分析。P0.0 5认为差异具有统计学意义。2 结果2.1 T S P AN 9在不同类型肿瘤中的表达 T I ME R2.0数据库结果显示T S P AN 9在大部分肿瘤中的差异表达差异均具有统计学意义,其中在B R C A、C O-A D、E S C A、HN S C、K I CH、K I R C和THC A中表达上调,而在C E S C、K I R P、L UA D、L U S C和U C E C中表达下调(P0.0 5),见图1 A。后面使用R软件分析了T C GA和G T E x数据集中每个肿瘤中正常样本和肿瘤样本的表达差异,发现T S P AN 9在C E S C中的表达低于正常组织,与T I ME R2.0数据库结果一致(P=0.0 0 2 2),见图1 B。2.2 T S P AN 9在C E S C中的表 达和预后 UA L-C AN数据库分析得出T S P AN 9在C E S C组织和正常宫颈 组 织 中 的 表 达 水 平。结 果 如 图2 A所 示,T S-P AN 9在C E S C组织中的表达水平低于正常宫颈组织(P=0.0 3 9)。通 过H P A数据库进 一步分析T S-P AN 9在C E S C组织和正常宫颈组织中蛋白水平的表达,可见正常组织中的特异性染色明显高于C E S C组织(见图2 B、图2 C)。最后,截取生存期在03 6个月的C E S C患者数据进行生存分析(见图2 D),高表达组的生 存 期 均 高 于 低 表 达 组 H R=0.5 7(0.3 31.0 0),L o g-R a n kP=0.0 4 7。7812 0 2 4年 右江民族医学院学报 第2期注:A.基于T I ME R数据库的T S P AN 9泛癌分析;B.基于T C G A和G T E x数据库的T S P AN 9泛癌分析。*P0.0 5,*P0.0 1,*P0.0 0 1,*P0.0 0 0 1。图1 T S P AN 9在不同肿瘤组织和正常组织中的表达情况注:A.基于UA L C AN数据库分析T S P AN 9在C E S C和正常组织的mR NA表达水平差异;B、C.基于H P A数据库分析T S P AN 9在C E S C和正常组织中的蛋白表达水平差异:抗体编号H P A 0 1 4 0 0 2,病人I D3 3 3 3;D.基于K a p l a n-M e i e rP l o t t e r数据库T S P AN 9表达和C E S C患者生存分析。*P0.0 5。图2 T S P AN 9在C E S C组织和正常组织中的表达情况以及与C E S C患者生存分析8812 0 2 4年 右江民族医学院学报 第2期2.3 T S P AN 9在C E S C中的免疫相关分析 免疫激活剂、免疫抑制剂分析结果显示,在C E S C中T S P AN 9与4 5个标记基因相关,包括T G F B 1、C T L A 4、T N F、C D 8 0、I L 1 0等(P0.0 5),见图3 A。免疫浸润评分结果显示在C E S C中T S P AN 9与E S T I MAT Es c o r e s呈正相关(r=0.1 5 6,P=0.0 0 7 7 2),见图3 B。免疫浸润细胞的结果显示T S P AN 9在C E S C中的表达水平和C D 4T细胞(r=0.1 6 6,P=0.0 0 4 4 3)、中性粒细胞(r=0.1 6 4,P=0.0 0 5 1 3)、巨 噬 细 胞(r=0.1 6 5,P=0.0 0 4 6 9)和树突状细胞(r=0.1 8 2,P=0.0 0 1 7 7)浸润呈正相关,见图3 C。注:A.基于U C S C数据库分析T S P AN 9与免疫激活剂、免疫抑制剂的相关性;B.基于U C S C数据库分析T S P AN 9与宫颈癌患者E S T I MA T Es c o r e s的相关性;C.基于U C S C数据库分析T S P AN 9与免疫浸润细胞的相关性。图3 在C E S C中T S P AN 9与免疫激活剂、免疫抑制剂、免疫微环境和免疫浸润细胞的相关性分析2.4 T S P AN 9在C E S C中的单基因G S E A富集分析 GO富集分析结果显示,在T S P AN 9高表达组中,其可能参与维持胃肠上皮、减数分裂、线粒体mR NA稳定性调控等生物学过程,见图4 A。在C E S C中T S-P AN 9低表达组,细胞内相关功能被激活,包括白细胞迁移、上皮-间质转化(e p i t h e l i a l-m e s e n c h y m a l t r a n s i-t i o n s,EMT)、WNT细胞信号转导、凋亡信号通路等,见图4 B。K E G G通路富集分析结果显示,T S P AN 9高表达在叶酸合成、乙醛酸和二羧酸酯代谢等途径发挥作用,见图4 C。在C E S C中T S P AN 9低表达与B细胞信号转导通路、WNT信号转导通路、MA P K信号转导通路、T细胞受体信号通路、T G F-信号通路、P 5 3信号通路等有关,见图4 D。9812 0 2 4年 右江民族医学院学报 第2期注:A.基于T C G A数据库的T S P AN 9高表达组GO富集分析;B.基于T C G A数据库的T S P AN 9低表达组G O富集分析;C.基于T C GA数据库的T S P AN 9高表达组K E G G路通富集分析;D.基于T C G A数据库的T S P AN 9低表达组K E G G通路富集分析。图4 T S P AN 9在C E S C中的单基因G S E A富集分析3 讨论T S P AN 9作为四跨膜蛋白家族的成员目前备受关注,它参与了肿瘤生长和生物信号转导的相关过程1 1,在肿瘤研究中具有重要价值,但目前对于T S-P AN 9在C E S C中的研究还比较匮乏。本研究基于生物信息学分析发现T S P AN 9在C E S C中呈现低表达,与患者的预后密切相关;在C E S C中,T S P AN 9相关的免疫检查点标记基因有4 5个,并且其和多种免疫细胞浸润显 著 相 关。另 外,通 过GO富 集 分 析 显 示 在C E S C中T S P AN 9参与了白细胞迁移、EMT等生物过程;K E G G通路富集分析显示在C E S C中T S P AN 9在多种肿瘤相关传导通路发挥作用。本研究首先利用T I ME R数据库和T C GA数据库进行泛癌分析发现T S P AN 9在1 6种肿瘤中显著下调,包括L G G、U C E C、C E S C、L UA D、E S C A、S T E S、K I R P、C OA D、C OA D R E A D、L U S C、L I HC、WT、S K CM、B L C A、OV和L AML。这和Q IY等9发现T S P AN 9是胃癌中的保护因素的研究成果是一致的。进一步探究T S P AN 9在C E S C中的表达和预后,通过UA L C AN和K a p l a n-M e i e rP l o t t e r数据库分析发现在C E S C中T S P AN 9显著低表达,并且T S P AN 9高表达C E S C患者的总体生存期比T S P AN 9低表达患者的总体生存期显著延长。此结果和本课题组在L I-HC中的研究认为T S P AN 9表达的下调对患者预后不良相关的结论一致1 0。为了探寻T S P AN 9在C E S C免疫治疗中的作用和价值,本课题组进行了相关的免疫分析。肿瘤突变负荷(TMB)与微卫星不稳定性(M S I)是肿瘤有效预后和免疫治疗预测的标记物1 2-1 3。免疫检查点基因的高度表达已被证明是影响肿瘤免疫治疗效果的关键因素,免疫检查点基因的表达可以使肿瘤细胞不同程度的逃脱免疫细胞的攻击,影响免疫治疗的效果1 4。通过研究T S P AN 9在C E S C中的表达与免疫激活剂、免疫抑制剂标记基因的关系发现T S P AN 9与细胞毒性T淋巴 细 胞 相 关 蛋 白4(C L T A 4)正 相 关,提 示 在C E S C中免疫治疗对T S P AN 9低表达患者可能会有更好疗效。另外,已有研究发现免疫细胞的浸润对于肿瘤免疫治疗的疗效也有一定影响1 5。免疫细胞作为肿瘤微环境中主要的非肿瘤成分,在肿瘤的侵袭和免疫逃逸等过程均发挥作用1 6。本研究发现在C E S C中,T S P AN 9的表达与C D 4T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞浸润呈正相关,其中相关性最强的是树突状细胞,相关系数为0.1 7。树突状细胞在诱导抗肿瘤T细胞应答中起到重要作用,K I L I AN M等1 70912 0 2 4年 右江民族医学院学报 第2期发现在肿瘤中浸润的树突状细胞和C D 4T细胞可以通过MHC 限制性抗原呈递相互作用从而影响肿瘤反应性C D 8T细胞的功能,这也提示了T S P AN 9在C E S C的细胞免疫应答中存在的潜在价值。最后,通过GO富集分析发现T S P AN 9在C E S C中的低表达参与机体的白细胞迁移、EMT的生物学过程;K E G G富集分析发现在C E S C中T S P AN 9在B细胞信号转导通路、T细胞受体信号通路、T G F-信号通路发挥作用。T G F-信号通路是参与调控EMT的主要通路之一,T G F-信号传导的丢失会通过抑制免疫系统和肿瘤细胞的分化进而促进肿瘤发生发展,即发生EMT1 8。这和S HAOSJ等1 9在骨肉瘤中发现T S P AN 9过度表达可以促进EMT活性的结论一致,进一步说明了T S P AN 9在C E S C中的表达和机体免疫的密切关联,以及在肿瘤发生发展中的重要地位。综上所述,T S P AN 9在C E S C中 表达下调,T S-P AN 9低表达患者的预后较差,其与C E S C中的多个免疫激活剂、免疫抑制剂的相关基因和免疫细胞浸润密切相关,可能成为C E S C免疫诊断和治疗的标志性基因和靶点。本研究仅基于T C GA和G T E x数据集进行分析,数据不够全面和具体,后续将在研究中进一步添加本地的人群数据并在细胞学实验中加以验证。参考文献:1 T S U V,J E R N I MOJ.S a v i n gt h eW o r l dsw o m e nf r o mc e r v i c a l c a n c e rJ.NE n g l JM e d,2 0 1 6,3 7 4:2 5 0 9-2 5 1 1.2 S UNG H,F E R L AYJ,S I E G E LRL,e ta l.G l o b a lc a n c e rs t a t i s t i c s2 0 2 0:G L