检验系统分析性能评价.doc

检测系统及其分析性能评价程序 1目标 规范检测系统分析性能评价程序，对新购置检测系统在正式用于检测标本前对检测系统分析性能进行评价，确定检测系统分析性能符合临床要求，以确保检验结果可靠性。2范围 适适用于生化定量检验项目标各类检测系统。3职责技术责任人和科主任共同负责检测系统分析性能评价试验方法设计。科主任负责组织检测系统分析性能评价试验。4定义和术语4.1检测系统 完成一个项目检测所包含仪器、试剂、校准品、操作程序、质量控制程序、保养计划等组合为检测系统，若手工操作还包含具体操作人员。4.2检测系统分析性能 检测系统分析性能包含：精密度、正确度、病人结果可汇报范围、分析灵敏度、分析特异性和生物参考区间等。4.3检测系统分析性能评价方法4.3.1检测系统分析性能评价：对试验室自行开发或研究新检测系统或检验方法分析性能进行确定，包含：精密度、正确度、病人结果可汇报范围、分析灵敏度、分析特异性和生物参考区间等基础性能试验评价，使其检验结果符合临床要求，以说明检测系统检测结果可靠性。432检测系统分析性能确实定：对试验室新购置已被政府相关部门认可了其分析性能检测系统，试验室在投入进行常规病人标本检测前，需对厂商提供性能资料中多个分析性能进行试验以确定该检测系统是否含有预期水平。对检测系统分析性能确实定包含：精密度、正确度和病人结果可汇报范围三种性能评定。对于低值在临床上尤其有意义项目需要增加分析灵敏度性能评定。 433检测系统分析性能核实：对试验室新购置已被很多试验室广泛应用检测系统，试验室期望核实该系统已被认可性能而进行评定试验为核实。评定时以最少必需试验去核实，说明能够得到和厂商汇报一致精密度和正确度，也能够和其它用户性能一致。对检测系统分析性能核实包含不精密度和不正确度二种性能核实。5 程序检测系统分析性能评价步骤及采取评价方法见图6-1-1。精密度性能评价正确度性能评价正确度性能评价分析灵敏度性能评价分析测试范围性能评价分析干扰性能评价生物参考区间确定 图 6-1-1 检验系统分析性能评价步骤及方法 第二节 精密度性能评价程序 1目标规范检测系统精密度分析性能评价程序，对新购置检测系统在正式用于检测标本前对其精密度性能进行评价，确定检测系统随机分析误差符合临床要求。2范围 本操作规程适适用于免疫室全部定量及半定量检测项目标检测精密度验证试验。3职责 技术责任人和免疫室共同负责检测系统精密度分析性能评价试验方案设计，免疫室组长负责组织检测系统精密度分析性能评价试验。4定义和术语4.1精密度(precision)指在要求条件下所取得独立测量结果靠近程度。4.2 精密度：指特定条件下各独立测量结果分散程度。4.3反复性条件：指独立检测结果是在较短时间内，在同一试验室由同一操作人员于相同仪器上利用同一方法对同一检测物质进行检测所取得。4.4批内精密度：指在相同检测条件下对同一待测物进行连续测量所得结果靠近程度，以前称作。4.5重现性条件：指检测结果由不一样操作人员在不一样仪器上利用同一方法对相同检验项目进行测定所取得。4.6重现性：指在改变检测条件下对同一待测物进行检测所取得结果靠近程度。4.7批：指在检测系统真实性和精密度稳定间隔期，通常不超出24h或少于2h。4.8样本：指源白总体一个或多个部分，能提供总体信息，通常作为总体结论基础。4.9中间精密度：指同一试验室中间精密度条件下精密度。4.10中间精密度条件：指测量结果是在不一样操作条件下在同一仪器上利用相同检验方法对同一检验项目进行测量所取得。411精密度分类：可分为批内、批间、日内、日问、仪器内和“室内不精密度。5程序511基础要求和注意事项5111试验样品要稳定，其基质组成应尽可能和临床样本相同。试验样品浓度尽可能选择和厂商申明性能相近浓度或靠近该项目医学决定水平浓度。通常选择稳定性好、血清基质质控物作为试验样品。 5112注意冰冻保留试验样品内分析物稳定性。严格控制冻融时间、混匀操作手法。 5113试验过程中严格根据厂商操作规程进行检测系统校准，根据室内质量控制程序进行常规室内质控，用于室内质量控制控制品不能够作为试验样品。假如出现失控数据，则应查找原因，重做试验。5114在正式试验前操作者应熟练掌握仪器操作程序、校准程序、保养程序和检测程序等，熟悉评价方案。512试验具体程序5121试验程序：对稳定试验样品每日进行2批试验，批间相隔时间不少于2h，每批样品做双份测定，共做20d试验。5122结果统计：20d共有80个结果，40对。每对结果间差是每批批内差。在20d共有40批，这些差值客观地反应了较长时间内批内不精密度；对每批双份结果以均值表示，每日做2批，2批均值间差值表示这一天批问差，减去其中批内差成份，即为批间不精密度。求每日均值，20d共有20个每日均值，这些均值间差值表示天间差，扣除内含批间差原因即为天间不精密度。计算公式以下： S批内= 式中，S批内：批内不精密度标准差；i=1：总和从第1天始计；2：一天内试验批数；j：批数序号；j=l：总和要从天天第1批开始计，4I：组成总和试验数据个数。 A= 式中，A：批间变异估量值，I：试验总天数，xi小第i1天第l批结果均值，Xi2第i天第2批结果均值，2I：在I天内试验总批数。式中，B：天间变异估量值；xi，：第i天2批4个结果均值；x：试验在i天内全部结果总均值。 式中，S天间：天间标准差；S总:总标准差，CV总：总不精密度。 5123结果判定：从美国临床试验室室间质量评定许可误差表中查阅评价项目标许可误差范围，由试验数据统计批内不精密度和天间不精密度小于许可误差范围14和13作为检测系统不精密度性能可接收标准，且又小于厂商提供精密度性能指标，说明由试验估量检测系统不精密度性能可接收，符合要求。若大于判定限，检测系统不精密度是否符合要求；应再深入做统计学处理作出判定。52参考美国国家临床和试验室标准化委员会(CLSI)EP 1 5A2文件用户对精密度和正确度性能核实试验同意指南(第2版)进行检测系统精密度性能评价。521参考EP 1 5一A2文件进行精密度性能评价试验基础要求和注意事项同上。522试验程序：试验方案依据厂家申明批内精密度(内)和总室内精密度(仃总)百分比关系分为3种情况： 假如万批内23仃总：天天分析1个批次，2个浓度，每个浓度反复测定3次，连续3d。 假如仃批内和仃总相对关系未知：天天分析1个批次，2个浓度，每个浓度反复测定4次，连续5d。523结果统计5231批内不精密度(S批内)计算：其中：代数和；D：总天数(3或5)；n：每批反复测定次数(3或4)；Xdi：天天每次结果； ：一天中全部结果均值。5232总不精密度(S总)计算：先计算变量B其中： ：某天全部结果均值；X：全部结果均值。利用公式计算S总：其中形：每批反复测定次数(3或4)。5233估量批内精密度和申明批内精密度比较：经过估量批内精密度和厂家申明精密度比较，验证厂家所申明批内精密度。假如厂家申明批内精密度用变异系数(CV)表示，按下列公式转换为分析物全部检测结果均值标准差：其中CV批内是厂家申明批内CV。 假如估量批内标准差小于厂家申明，则核实了批内精密度和厂家申明一致。假如批内标准差大于厂家申明批内标准差，有可能这种差异无统计学意义，可利用下面步骤来进行差异显著性检验： 计算批内精密度自由度V，一个试验连续D天，每批反复n次，V=D(n一1)。对于推荐连续3 d和5d试验：V=6或1 5。确定自由度为V百分点为(lai)x 2分布值C。其中a为错误拒绝率(通常为5)，l是测试水平个数。对于水平个数为2、3、4试验，和C对应百分点分别975、98.33%和98.75%。对于推荐3D和5D试验方案，水平，C值分别为14.45和27.49。计算验证值：假如S批内小于验证值，厂家申明批内精密度经过验证。假如申明批内精密度未被验证，应联络厂家技术部门。5.2.3.4估量总精密度和厂家申明总精密度比较：假如厂家申明总精密度以CV表示，转换为分折物全部检测结果均值标准差： 其中CV总为厂家申明总CV值。假如估量总标准差小于厂家申明总标准差，则核实了总精密度和厂家申明一致；假如总标准差大于厂家申明，有可能这种差异无统计学意义，可利用下面4步来进行统计学显著性检验： 计算总精密度自由度T，一个试验连续D天，每批反复n次：确定自由度为V时百分点为（ia/i）dx 分布值C。（同上） 计算机验证：假如S总小于验证值，厂家申明总精密度经过用户核实。假如S总超出验证值，厂家申明总精密度未经过用户核实，应联络厂家技术部门。 第三节 正确度性能评价程序 1目标 规范检测系统正确度性能评价程序，对新购置检测系统在正式用于检测标本前对检测系统不正确度分析性能进行评定，确定新检测系统偏倚是否在许可误差范围内。 2范围 适适用于本试验室全部检测项目。 3职责 技术责任人和免疫室组长共同负责检测系统正确度分析性能评价试验方法设计，免疫室负责组织进行本室检测系统正确度分析性能评价试验。 4定义和术语 4.1正确度（accuracy) 指检测结果和被测量真值之间一致程度。 4.2不正确度（inaccuracy） 指检测值和真值数量上差异。通常见来衡量正确度好坏。 4.3正确度（truness) 指大批检测结果均值和真值一致程度。通常见统计量“偏倚（bias）”来表示。 4.4偏倚 （bias） 指测量结果预期值和可接收值间差异。以检测计量单位或百分率表示，即平均值和参考值差异。 45误差（error）指对于真值或对于可接收、预期真值或参考值偏离，分为随机误差和系统误差。 4.6系统误差(systematic error) 指可反复条件下，对相同被测量无数次检测结果均值和被测量真值差异。用统计量偏倚表示。 4.7随机误差(random error) 在可反复条件下，对相同被测量无数次检测结果和检测结果均值差异。以该均值下标准差大小来衡量。 4.8总误差(total error) 能影响分析结果正确度确实定误差组合，包含随机误差和系统误差，是不正确度估量值。 5程序51参考美国临床试验室标准化协会(CLSI)于颁布EP9一A2文件即用患者样本进行方法学比对及偏倚评定同意指南(第2版)进行检测系统正确度性能评价。 51.1基础要求和注意事项 5.1.1.1样本准备：在整个试验中，根据操作规程搜集新鲜患者标本。最少搜集40个标本，每个样本必需有足够量以备两种方法作双份测定。各个标本分析物含量越宽越好，尽可能使50试验标本分析物含量不在参考区间内，避免使用对任一方法有干扰标本。 5.1.1.2比较方法选择：试验室原有方法、厂家申明方法和公认参考方法全部可作为比较方法。比较方法应含有比试验方法愈加好精密度，不受已知干扰物质干扰，使用和试验方法相同单位，结果含有溯源性。另外，比较方法分析测量范围应和试验方法大致相同。 5.1.1.3在正式试验前操作者应熟练掌握仪器操作程序、校准程序、保养程序和检测程序等，熟悉评价方案。 5.1.1.4试验过程中严格根据室内质量控制程序进行常规室内质控，任一方法出现失控时应重新测定，直抵达成要求样本数为止。 5.1.2试验程序 使用两种方法天天测定8个样本，每个样本反复测定2次，共测定5d。每种方法进行样本反复测定中，指定第一次测定次序，按反向次序检测第2次。在2h内测定完成，以确保分析物稳定。 5.1.3试验数据统计分析 5.1.3.1对试验数据进行初步检验：设定比较方法测定结果为X值，试验方法测定结果为y值，若有n个标本，则有2n个X和y正确结果。检验每一方法内双份测定有没有离群值，以4倍各方法差值均值为判定限，全部差值全部在限值内说明双份测定结果符合要求。 5.1.3.2作图了解线性关系和观察有没有显著离群点：试验结果点于X、y坐标纸上，图中标出斜率为1经过零点直线，另外作(Y-X)、X关系图，绘出斜率为O、截距为1直线，看图了解试验结果是否含有良好线性关系，检验试验点有没有显著离群点。若有，应对X、y配对值作离群值计算。以4倍平均差值为判定限，全部差值全部不应超出限值。 5.1.3.3检验标本内分析物含量分布是否合适：用相关系数r检验X取值范围是否合适，通常要求rO975或rO95，认为X范围是适宜。若rO975，应继续做试验，扩大数据范围。5.1.3.4线性回归统计：以回归式r=bX+a_口表示2n对数据直线趋势，b和a分别表示两种方法间百分比误差和恒定误差。依据临床使用要求，可在各个临床决定水平浓度Xc处，了解y方法引入后相对于X方法系统误差(SE)。 514临床可接收性能判定 和美国临床试验室修正法规(CLIA8 8)性能要求比较，以其许可误差12作为评价标准，由方法学比较评定系统误差(姬)或预期偏倚小于许可误差12，认为不一样检测系统间系统误差或相对偏差属临床可接收水平。新检测系统或新方法可应用于临床。 521基础要求和注意事项 5211样本准备：根据操作规程搜集20份患者标本，其浓度应分布整个线性范围，不使用超出线性范围标本。每个标本应储存搜集足够标本量。5212比较方法选择、人员、操作等方面注意事项同5.211。 522试验程序：试验方法和比较方法全部有质控程序控制情况下，用二种分析方法分别检测这20份标本。可在同一天检测完20个标本；也可连续3至4d，每日测定57个标本。后者得到结论较前者可靠。每种分析方法检测全部应在4h内完成，假如是储存标本应在复融后12h内检测完成。 523试验数据处理和统计分析 5231计算每个标本两种方法间结果差值 偏偏 (bi)=(试验方法结果i比较方法结果i) 偏偏百分比(bi)=1 00 X(试验方法结果i比较方法结果i)比较方法结果i。 5232画出每个标本两种方法结果偏倚或百分比偏倚图，水平轴代表比较方法，垂直轴代表偏倚或百分比偏倚。观察偏倚图，检验两种方法间在检测浓度范围内标本结果差异是否相对一致，假如一致则可用下面平均偏倚去和厂家申明比较；假如没有一致性，将数据分割成几部分，每部分数据独立计算平均偏倚。 5233计算两种方法间平均偏偏 5234计算偏倚或百分比偏倚标准差 5235估量偏倚和厂家申明偏倚比较：假如偏倚或百分比偏倚小于厂家申明偏倚或百分比偏倚，则已核实了偏倚和厂家申明偏倚一致。假如大于厂家申明偏倚或百分比偏倚，有可能这种差异无统计学意义，可用下面步骤进行差异统计学检验：假设一个错误拒绝率为a，通常选a=1或a=5；确定tx9n一1值，n代表病人标本数量；计算偏倚验证值： 其中P是厂家申明偏倚值。假如估量偏倚万小于验证值，就核实偏倚和厂家申明偏倚一致。 假如使用百分比偏倚，计算百分比偏倚验证值： 其中是厂家申明百分比偏倚值。假如估量百分比偏倚小于验证值，就核实百分比偏倚和厂家申明百分比偏倚一致。 53参考EP 1 5A文件对定值参考物质检测，对检测系统正确度性能进行评价。 531定值参考物起源：定值参考物能够有多个起源，能够是已用参考方法或决定性方法定值新鲜冰冻人血清或其它部分未掺入成份人物质，可从美国国家标准局(NIST)和CAP取得；从能力比对试验中取得参考物；厂家提供正确度确定物或质控物；试验室室间质评物；由第三方提供已用部分不一样方法定值物质。532经过检测参考物进行正确度核实程序：选择适合评价检验方法最易取得材料。最少要求测定2个水平，选择水平应能代表该方法最低和最高测量范围。试验前充足混匀分析物，用试验方法反复测定2次，将检测结果和说明书标示值或靶值进行比对，计算偏倚，以CLIA，8 812作为评价标准，偏倚小于CLIA8 812，认为新检测系统偏倚属临床可接收水平，新检测系统或新方法可应用于临床。 第四节 分析测量范围性能评价程序 1目标 对新购置检测系统在正式用于检测标本前对其分析测量范围进行评定；确定该方法分析测量范围，以确保临床检测结果正确性。 2范围 适适用于生化科定量检验项目标各类检测系统。 3职责 技术责任人和生化科主任共同负责检测系统分析测量范围性能评价试验方法设计，生化科主任负责组织进行本组检测系统分析测量范围性能评价试验。 4定义和术语 41分析测量范围(analytical measurement range，AMR) 指患者样本未经任何处理，由检测系统直接测量得到可靠结果范围，在此范围内一系列不一样本分析物测量值和其实际浓度呈线性百分比关系。 42临床可汇报范围(clinical reportable range，CRR) 指定量检验项目向临床能汇报检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其它预处理。多数定量检测项目标CRR比AMR窄，可经过最大浓缩度来确定CRR。对于CRR大于AMR检验项目需进行最大稀释度验证试验，并结合临床决定水平和功效灵敏度来共同确定该项目标CRR。43线性范围(1inear range)指覆盖检测系统可接收线性关系范围，非线性误差小于设定标准。 44线性(1inearity) 检测样本时，在一定范围内能够直接按百分比关系得出分析物含量能力。 5程序 51参考平均斜率法进行检测系统分析测量范围性能评价。 511基础要求和注意事项 5111试验前具体查阅评价项目标试剂说明书，统计全部评价项目标分析测量范围方便于选择适宜浓度样本。 5112进行分析测量范围试验样品必需和真实标本尽可能相同，和真实标本含有相同基质状态。尽可能搜集5个或以上系列浓度试验样品，浓度范围遍布整个预期分析测量范围，最高浓度样品应达成分析测量范围上限，各试验样品内含分析物浓度呈等百分比关系。 5113可经过在低浓度水平病人样本中添加分析物储存液方法制备高浓度水平试验样本。加入量标准上少于总体积10%。 5114低浓度样本尽可能直接从患者样本中搜集，若难以搜集到低限样品，可搜集高值样品，用生理盐水作系列不一样程度稀释，形成系列评价样品。5115在正式试验前操作者应熟练掌握仪器操作程序、校准程序、保养程序和检测程序等，熟悉评价方案。试验过程中严格根据室内质量控制程序进行常规室内质控，在质控在控情况下进行试验。试验过程注意检测系统或方法批间重现性。按不一样测量次序完成检测。 512试验程序：在临床试验室内手机高值和低集，按1 L、O8L+O2H、O6L+O4H、O4L+O6H、O2L+O8H、1H等不一样稀释浓度形成系列浓度血清，对系列血清在检测系统上检测，每个样本按随机方法反复测定4次。在一个分析内完成。 513试验数据统计分析 5131初步数据检验和离群值检验：检验数据有没有显著大差异，假如确定为分析或技术性问题，纠正后整批数据重做；若无显著大差异，目视每组数据内有没有离群值。一个离群值能够从数据中删除。假如发觉两个或以上不可解释离群值，就应怀疑检测系统性能。查找问题原因，必需时请求生产厂家帮助。观察每个浓度水平各响应量间差异，若为线性，各组斜率大致相等。斜率上 增加或降低是非线性指示。 5132在坐标纸上，以x表示各试验样品预期值，以y表示各试验样品实测值，将全部试验结果图上。513.3若全部试验点在坐标纸呈显著直线趋势，用直线回归统计对数据作处理，得直线回归。若b很靠近1，a近于O，则可直接判定该测定方法分析测量范围在试验已包含浓度。5134若b不靠近1，以较大；如6103，有可能是b和1之间有统计上显著性差异。重新对全部试验结果进行分析，是高浓度处还是低浓度处实测值和预期值之间有较大偏倚。尝试舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范围后回归式有显著改善b近于1，a于O，则缩小分析范围是真实分析测量范围。52参考CLSI EP 6-A文件进行检测系统分析测量范围性能评价。521基础要求和注意事项 5211人员准备：在正式试验前操作者应熟练掌握仪器操作程序、校准程序、保养程序和检测程序等，熟悉评价方案，正确搜集标本。 5212试验时间：全部试验数据尽可能在较短时间内搜集，如可能，单个分析试验最好在1 d内完成。5213试验样本：试验样本应和临床测试所用样本类型相类似，样本要有足够量，所用样本没有使试验无效干扰，全部试验数据尽可能在较短时间内搜集；5个浓度是可靠确定线性范围和进行多项回归最小数，推荐用高值和低值浓度样本按百分比正确配成等间距不一样浓度样本，通常情况下，用厂家推荐稀释液对病人样本进行稀释。盐水因为基质效应可能会影响到检测结果，此时稀释液尽可能用最小量；评价分析测量范围时，要包含下 522试验程序：在临床试验室内搜集高值和低值病人样本血清，按1 L、O8L+O2H、O6L+O4H、O4L+O6H、O2L+O8H、1H等不一样稀释浓度形成系列浓度血清，对系列血清在检测系统上检测，每个样本按随机方法反复测定2次。 523试验数据统计分析5231依据系列浓度血清配制稀释关系计算出各试验样品内含分析物浓度，为系列浓度样品预期值。按试验要求对系列浓度血清进行反复测定，计算均值，此值为系列浓度样品实测值，和预期值形成6对预期值、实测值。 5232确定线性范围：借助Excel、SPSS统计软件对试验数据进行二元一次、二元二次、二元三次回归统计。各个多项式回归方程表示式及自由度见表6-4-1。一次多项式模式为直线，这是判定分析方法是否为线性最好模CHAPTER 检测系统分析性能评价程序式。二次多项式模式为抛物反应曲线，有曲线上升或下降二种。三次多项式模式为“S形反应曲线，在测量范围两端呈非线性。 回归系数用6f表示，在二项式中，62是非线性系数；在三次式中，62和易3是非线性系数。计算每个非线性系数斜率求标准差SEi，然后进行多检验，以检验非线性系数是否在统计学上是显著，即系数和O是否有显著性差异。前2个系数60和6】不用分析，因为它们不反应非线性。对62和63检验为： 自由度为 是线性试验样品或浓度组数；尺是每个样品反复检测次数,Rdf是回归分析时占用自由度。计算出df值，查t值表t值(双侧，a=O05)，假如没有一个非线性系数b2和b3(pO05)，说明数据是显著，存在线性关系。假如二次多项式模式中62或三次多项式模式中b2和b3中任一个和0比较有显著差异(p005)，说明该数据组存在非线性关系。 5233非线性程度判定：当检测到数据组呈非线性时，需经过计算回归标准误(Syx)，确定最适二次多项式或三次多项式模型。Syx是测量均值和模型对应值差值量度，所以Syx越小，说明该模型越适合数据组。先经过以下公式计算每一个浓度处线性偏离(deviation from linearity，DL)： X取值范围从x1到x5，p(xi)为最适多项式回归模型在xi处值，所以DLi，为在每个不一样浓度处二次多项式模型和一次多项式(线性)模型差值，或三次多项式模型和一次多项式(线性)模型差值，也即非线性模型和线性模型在每个浓度点差值。DLi单位应和预先设定目标一致，方便进行比较。 将每个浓度水平处DLi和设定误差范围比较，假如DLi小于预先设定误差，即使检测到统计学上非线性，引入误差不超出临床许可误差，在临床上能够接收。假如任二个点DLi超出设定目标，则代表该点可能是非线性，应试图找到非线性原因(样本准备、干扰物质、仪器校准等)和观察测量值和预期值散点图，判定非线性是在分析浓度范围两端或是中间。若在两端，尝试舍去DL，最大值浓度点，重新进行统计分析。5234试验随机误差对判定影响：线性评定应考虑随机误差影响，反复测量两次时，能够用以下公式计算双份检测值差值(反复测量误差)： 巧l和12分别为反复结果2个值。假如用到百分比值，则用CVr, L为样本数，反复测量次数为2。 5235简明步骤：试验室先设定分析项目标反复性和线性许可误差范围。依据公式计算反复测量误差，若反复测量误差小于设定误差目标，不精密度符合要求。再对试验数据进行多项式回归分析处理，查f界值表，判定b2、b3显著性，分析试验结果是否呈线性。 第五节 分析灵敏度性能评价程序 1目标 规范检测系统分析灵敏度性能评价程序，对新购置检测系统在正式用于检测标本前对其分析灵敏度或检测限进行确定。 2范围 ， 适适用于生化科在低值有显著临床意义定量检验项目标检测系统。 3职责 技术责任人和生化科主任共同负责检测系统分析灵敏度评价试验方法设计，生化科主任负责组织进行本科检测系统分析灵敏度评价试验。 4定义和术语 41检钡IJ低限(LLD) 指样品单次检测能够达成非空白检测响应量对应分析物量。 42生物检测限(BLD) 指某样品单次检测可能含有最小响应量刚大于LLD响应量时，该样品内含有分析物浓度。 43功效灵敏度(FS) 指检测系统可定量汇报分析物最低浓度。 、 44空白限(LOB) 指在要求可能性条件下，空白样品被观察到最大检测结果。 45检出低值(LoD) 指在要求可能性条件下能够检出样本中分析物最小量。 46定量检测限(LoQ) 指在要求可接收精密度和正确度条件下，能定量检出样本中分析物最小量。 5程序 51检测低限、生物检测限和功效灵敏度评价 511样本准备 5111空白样本准备：空白样本是不含有分析物样本。理想空白样本应含有和患者样本相同基质，可使用术后已无某疾病病人样品。另外，常使用检测系统系列校准品中“零浓度校准品或不含分析物样品专用稀释液作为空白样本。 5112检测限样本准备：用空白样本加入分析物配制成几份检测限样品。加入分析物量应是厂商说明检测限浓度。检测限样品浓度应介于预期检测限浓度l4倍范围内。 512试验程序 5121 1陂集空白样本，一份空白样本用作空白，其它用于制备检测限样本。将纯化分析物加入该空白样本，并用空白样本作系列稀释，组成O(空白)、025、050、1O、20、40、80等浓度系列检测限样品。 5122空白样本批内反复测定1 2次；系列检测限样品天间反复测定1 2次。 513试验数据统计分析 5131求检测低限(LLD)：计算空白样品吸光度均值么空白和标准差s空白。采取997可能性来估量检测低限。空白样品吸光度均值加3倍标准差即为LLD。 5132求生物检测限(BLD)：生物检测限(BLD)计算公式为： 95可能性BLD=LLD+2S检测限样品 99可能性BLD=LLD+3S检测限样品 5133功效灵敏度(Fs)：以日间不精密度(cy)为20时对应检测限样品含有平均浓度即为FS。 521试验要求 ，5211整个试验过程检测系统应处于稳定工作状态，无试剂批号改变和校准改变，操作人员相对固定。 5212确定必需试验样品数和反复检测数。综合考虑精密度和费用，提议确定LoD最小检测数为60(包含空白样品和低浓度样品)，在验证厂商LoB和LoD H寸，应在LoB处和申明水平处样品最少进行20次检测。 5213空白和低浓度样品准备同本节511。 522试验程序 对一个或数个空白样本进行反复测定，测定次数为60次；对6个低浓度样品进行天间反复测定，样品浓度范围在LoB到4倍LoB之间，共1 0d。统计每次浓度值。 523试验数据统计分析 5231 LoB确实定程序，查看空白值试验数据，若试验数据呈正态分布，使用参数程序估量LoB，计算公式以下： LoB=,uB+1645 crb 式中，伽和印分别为空白样品检测值均值和标准差。 若空白值呈非正态分布，此时用非参数方法估量第95百分位数值，立即数据由小到大排列，依据大小排列NB值，估量第95百分位数所在位置为NB(951 00) +05值。空白分布限值百分位数(PctB)，即空白分布尾部去掉百分口后临界值被称为空白限(LoB)。计算公式以下： LoB=PctB(100一a)。 5232 LoD确实定程序：若低水平样品检测结果呈正态分布，首先计算这些低水平精密度综合估量值，即多个低浓度样品综合标准差(SDs)，计算公式以下： 式中 ，代表不一样低浓度样品自由度( 依这类推) LoD暂定 =LoB+ SDs 式中， 是标准正态分布第95百分位数值校正因子=164511(4f 式中，f是估量综合标准差SDs自由度。 若低水平样品检测结果不呈正态分布，或不能转化为正态分布，按非参数方法估量LoD，计算公式以下： LoD=LoB+D 式中，D 是低浓度样品测定中位数值和低浓度样品第5个百分位数值间距。5233 LoQ确实定程序，LoQ是指能可靠检出分析物最低实际浓度，并在该浓度下总误差符合正确度要求(临床应用可接收)，室验室可依据试验室需求、室间质评结果和厂商申明白行设定总误差目标。一个样本反复测量均值和可接收参考值之间差异是偏差估量值；在同一水平使用多个样本，差异均数是正确度估量值；多个样本混合标准差(SDs)是精密度估量值。综合这些估量值即可取得该水平下总误差(TE)估量值：TE=偏差+2SDs，假如这个估量值小于设定总误差目标，则LoD=LoQ。 第六节 生物参考区间确实定和验证程序 1目标规范各生化检测项目生物参考区间确实定和验证程序，以满足医学试验室质量管理和试验室认可基础要求。 2适用范围 本程序适适用于生化检测项目生物参考值区间确实定和验证。 3职责 31生化科主任负责对本科各检测项目生物参考值区间确实定和验证。 32检验医学中心主任同意评审后生物参考区间。 4定义和术语 41参考个体 依据临床对某个检验项目标使用要求确定选择标准，以此选择检测参考值个体。确定参考个体健康状态很关键。 42参考总体 全部参考个体总和。注意：参考总体中参考个体数量通常未知，所以它是一个假设实体。 43参考抽样组 能够代表参考总体足够数量个体。 44参考值 经过对参考个体特殊类型量观察或测量而取得值。 45参考范围 全部参考抽样组各个参考值集合即为参考范围。 46参考限 依据全部参考值分布特征和临床使用要求，选择适宜统计方法进行归纳分析后确定限值，包含参考上限和参考下限。参考值一部分小于或等于参考下限，一部分大于或等于参考上限。47参考区间介于参考上限和参考下限之间值，包含参考上限和参考下限。在一些情况下可能只有一个参考上限，若该限为“X，则对应参考区间为OX。48观察值 即患者检测结果，经过观察或测量受试者某样本而取得值。临床可用该值和参考值、参考范围、参考限或参考区间相比较。上述8个术语之间关系，见图6-6-1。 图6-6-1 各术语之间关系 5程序 51试验室在开展新检验项目、改变现用检测系统和在工作过程中发觉某一特定参考区间对参考人群不适用时全部应重新对检验项目标生物参考值区间重新进行确定或验证。 52试验室应为检测全部检验项目提供可靠生物参考值区间。 53生物参考区间设置可直接采取国家权威机构或权威刊物发表适合试验室生物参考区间；也可白行建立生物参考区间或直接引用试剂供给商提供生物参考区间。但这种情况下需对引用生物参考区间进行验证确定。 54生物参考值区间确实定程序具体步骤以下： 541查阅文件，列出该项目标生物变异和分析干扰原因，供选择参考个体时参考。 542建立参考个体选择、排除和分组标准，并设计一个适宜调查表，该调查表能在潜在参考个体中显示这些标准。 543为参考区间研究参与者编制书面知情同意书，参考个体填写调查表。 544依据调查表和其它健康评价结果对参考个体进行分类。5.4.5依据排除标准从参考样品组中排除不符合要求候选对象。 546设定可信限，确定适宜参考个体数。