肺腺癌组织中piR-30636的表达、临床意义及对迁移的影响.pdf

年第卷第期医学理论与实践肺腺癌组织中 的表达、临床意义及对迁移的影响张小丹 王喻烨 严雪冰 王成海 扬州大学医学院江苏省扬州市 东台市中医院摘要 目目的的:研究 在肺腺癌()中的表达水平探讨其与肺腺癌临床病理资料的相关性以及对肺腺癌细胞迁移的影响 方方法法:实时荧光定量聚合酶链反应()检测 对 组织中 的表达水平 原位杂交()检测 在 组织中的阳性表达并分析 表达与临床病理资料的相关性 实验检测 对肺癌细胞 的迁移影响 结结果果:检测发现在 组织中 的表达水平明显高于癌旁正常肺组织两组间差异有统计学意义(.)检测结果显示在 组织中 主要为阳性表达阳性细胞胞浆中显现棕黄色 阳性率为.(/)明显高于邻近正常组织的.(/)两组间差异有统计学意义(.)表达水平与临床病理资料关系分析表明:阳性表达与肿瘤分级、淋巴结转移密切相关(.)实验结果提示过表达 促进了癌株 的迁移而沉默 表达则阻碍了癌株 的迁移与对照组相比两组间差异有统计学意义(均 .)结结论论:在 组织表达水平上调其表达水平与患者的淋巴结转移和肿瘤分化密切相关能促进肺癌细胞的迁移 本次实验为进一步研究肺腺癌伴有淋巴结转移机制提供了一定的理论依据 有可能成为治疗转移性肺腺癌的新靶点 江苏省卫生健康委科研项目()通信作者:王成海关键词 肺腺癌 临床意义 迁移中图分类号:.文献标识码:/.:().:().().:(.).(/).(/)(.).(.).(个月患者具有良好的器官功能()排除标准:合并其他部位恶性肿瘤者合并脑转移药物不可控制的高血压收缩压(.)舒张压心、肝、肾功能不全自身免疫性疾病、感染性疾病患者有出血倾向或正接受抗凝治疗者 收集 例配对的 组织和邻近的正常肺组织以及相关病理资料 本实验经扬州大学医学院伦理委员会批准并与患者签署知情同意书.质 粒 和 细 胞 和 质粒合成于南京金斯瑞生物科技公司 肺上皮细胞系 和人肺腺癌细胞系 购自上海中科院细胞库 通过 细胞转染试剂盒将 和 质粒转染至 宫颈癌细胞株并将细胞株均放置在含 胎牛血清 培养基的培养瓶中然后放置在 含有 浓度细胞培养箱内进行培育.实时荧光定量 实验肺腺癌总 的抽提是通过 试剂裂解萃取并通过分光光度计测定 浓度 然后通过 公 司 的 合成 试 剂 盒 合 成 实 时 荧 光 定 量 运 用 试 剂 盒(公 司)并 按 试 剂 说 明 书 进 行 的 上 游 引 物 为 下游引物为 将包含反应体系的检测样本在 进行 实验实验步骤包括:()预变性:时间为 ()反应:重复:个循环 时间为 时间为.原位杂交检测 的表达 例新鲜标本进行组织切片 在室温下过氧化氢处理可消除内源性过氧化物酶 使用胃蛋白酶消化组织切片 用预杂交液在培养箱中孵育组织切片然后加入杂交液孵育 清洗后加入密封液 加入生物素化地高辛 组织中加入 加入生物素化过氧化物酶 组织进行 染色、苏木精复染、洗涤、脱水、透明、封闭 用预杂交液代替含有探针的杂交液作为空白对照 寡核苷酸探针序列为:()()每个样本取 个高倍视野计算阳性细胞比例:阳性细胞数/总细胞数.迁移实验首先将细胞在无血清的培养液饥饿 胰酶消化后制备无血清培养液重悬细胞(/)取细胞悬液 加到 小室中央中下室加入.的 培养液将小室放进 、培养箱中培养 取出 小室 清洗后甲醇固定 将 小室适当风干.结晶紫染色 左右用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞用 洗 次 倍光学显微镜下随即挑选 个视野观察迁移的细胞并计数穿膜的 细胞个数并拍照 分组包括过表达 组、沉默表达()组和正常 细胞()组.统计学方法使用.和 .软件分析数据和编辑图片 计数资料组间采用 法 检验计量资料采用均数 标准差表示符合正态分布两组间行 检验多组间行 检验 .为差异有统计学意义结果.组织中 的表达实验结果如图 所示在 组中 的表达水平为.明显高于癌旁正常肺组织的表达水平(.)两组间差异有统计学意义(.).检测 的阳性表达采用 原位分子杂交()检测 对 组织和癌旁正常肺组织中 的阳性表达情况 如图 年第卷第期医学理论与实践图 检测 的表达水平所示在 组织中 主要为阳性表达胞浆着色为棕黄色的是阳性细胞 阳性率为.(/)明显高于邻近正常组织的.(/)两 组 间 有 统 计 学 差 异(.)图 显示 组织中 的阳性表达 的棕黄色阳性着色主要位于胞浆中而癌旁正常肺组织主要为阴性表达.阳性表达及其临床病理意义根据 的阳性表达情况将 病例分为阳性表达组 例和阴性表达组 例 如表 所示 阳性表达与肿瘤分级、淋巴结转移密切相关(.)提示 参与了肺腺癌的淋巴结转移过程表 阳性表达及其临床病理意义项 目阳性表达组(例)阴性表达组(例)值年龄 岁.岁性别男.女吸烟有.无肿瘤大小.肿瘤分级.淋巴结转移有.无 分期.实验检测 对肺癌细胞迁移的影响上述临床病理意义结果表明 与 的淋巴结转移密切相关因此通过 实验进一步研究 对肺癌细胞迁移的影响 首先验证过表达或沉默 表达的有效性:应用 转染实验将过表达或沉默 表达的质粒载体转染 细胞结果发现过表达 后 的表达水平升高而沉默表达 后 的表达水平降低(如图 所示)与未转染相关质粒的对照组()相比两组间差异均有统计学意义(均.)说明过表达和沉默 表达的质粒有效图 在 中过表达或沉默 的有效性分析结果然后进行 迁移实验结果如图 所示 的过表达显著促进了肺癌细胞株 的迁移而沉默表达 则明显阻碍了 的迁移与对照组相比差异均有统计学意义(均 .)实验结果表明 对肺癌细胞的迁移作用图 检测 对肺癌细胞的迁移结果讨论目前在中国肺癌的发病率已排在恶性肿瘤的首位每年发病人数约.万死亡人数也达医学理论与实践 年第卷第期 到.万左右患者死亡的主要原因在于肺癌的转移、复发和耐药性 近年来随着临床治疗方案的不断改进越来越多的靶向药物和新的生物免疫疗法的综合应用肺癌患者的生存和预后得到了明显的提高和改善与 蛋白相作用的非编码单链小 称为 其生物学功能包括沉默转录基因过程、维持生殖系和干细胞功能调节翻译和 的稳定性等 目前 已成为恶性肿瘤研究的热点之一 例如在非小细胞肺癌中 表达水平上调能促进肺癌细胞的迁移、侵袭和转移 等检测发现肺癌组织中 的表达水平下调能促进肺癌细胞凋亡而抑制细胞增殖具有抑癌基因的作用 在 中表达水平升高是一个新的促癌基因能促进肺癌淋巴结的转移 本文通过 实 验 发 现 在 例 组 织 中 的表达上调验证了 在表达谱测序的结果这也说明了 是一个致癌基因 本文以 作为研究对象研究其在 生物学作用 显示 组织中 主要呈阳性表达而正常肺组织中主要为阴性表达 实验结果进一步表明 在 中表达上调发挥促癌基因的作用 在分析 不同的阳 性 表 达 水 平 与 临 床 资 料 的 关 系 时 发 现 的阳性表达与 的肿瘤分级和淋巴结转移密切相关该结果说明 表达水平越高则肿瘤越容易 发 生 淋 巴 结 转 移 可作为判断患者预后的一个指标 为了进一步证明 对 肺癌细胞转移的影响我们进行了 迁移实验 本研究表明 的过表达显著促进了肺腺癌 细胞的 迁 移 降 低 表 达 则 明 显 阻 碍 了 的迁移该结果表明 能促进肺腺癌细胞的迁移和远处转移也为 作为靶点治疗转移性肺腺癌提供依据 本研究不足之处在于目前只研究了 在肺腺癌中的功能并没有对促转移作用机制进行探究总之本文认为 与肺腺癌的生物学行为有一定的相关性 在肺腺癌组织中表达水平上调是一个新的促癌基因高表达的 与 肿 瘤 淋 巴 结 转 移 有 相 关 性 有促进肺癌细胞迁移作用本次实验为进一步研究肺腺癌伴有淋巴结转移机制提供了一定的理论依据 有可能成为治疗转移性肺腺癌的新靶点参考文献 .():.:.:.:.:.:.:.:.:.():./.():.():.():.李国雨何明.非小细胞肺癌罕见靶点靶向治疗最新研究进展.协和医学杂志():./.():.():.():.():.郭虹韩微马怡君等.非小细胞肺癌中高表达 的临床病理意义及对肿瘤转移的影响.实用医学杂志():.收稿日期 (编辑 羽飞)(上接第 页)张嘉皓李娟苏连久等.新型冠状病毒肺炎相关性急性肾损伤的临床特点及危险因素分析.中华危重病急救医学():.张津京李艳.初诊多发性骨髓瘤合并肾功能不全患者的临床特点和疗效分析.中国医科大学学报():.:.():.收稿日期 (编辑 倩楠)