不同批次桑叶药材及其配方颗粒质量的初步研究.pdf

不同批次桑叶药材及其配方颗粒质量的初步研究77不同批次桑叶药材及其配方颗粒质量的初步研究吴登莉1，王祥培2，张洪连1，吴红梅1*（1.贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025；2.贵州民族大学，贵州 贵阳 550025）基金项目：贵州省一流学科建设项目（2017008号）、广西壮瑶药重点实验室（桂科基字201432号）、壮瑶药协同创新中心（桂教科研201320号）、广西壮族自治区民族药资源与应用工程研究中心（桂发改高技函20202605号）、广西中医药重点学科壮药学（GZXK-Z-20-64）、广西一流学科中药学（民族药学）（桂教科研201812号）第一作者：吴登莉，硕士研究生，研究方向为中药、民族药质量控制及新药研发*通讯作者：吴红梅，副教授 博士，研究方向为中药、民族药质量控制及新药研发【摘 要】目的：建立能鉴别桑叶药材及其配方颗粒的方法，以期为桑叶的质量控制提供参考。方法：在中国药典2020年版桑叶质量标准基础上进行改进，利用薄层鉴别（TLC）法，以咖啡酸对照品作为对照，采用TLC对桑叶药材及其配方颗粒进行研究，利用硅胶G薄层板，在甲苯-乙酸乙酯-甲酸（521）的系统下展开，于紫外灯365nm下观察。结果：第1第3批桑叶药材在硅胶G薄层板上都为5个斑点，颜色均为淡蓝色；第4第5批药材均有淡蓝色和淡红色斑点，其斑点数分别为7个、8个；第6第11批药材的6个斑点均为淡蓝色和粉色；第12第13批配方颗粒均有3个淡蓝色斑点。发现其药材及其配方颗粒之间化学成分信息存在差异。结论：改进后的样品制备方法和薄层条件能鉴别桑叶药材及其颗粒，且该方法分离度、重复性好，为桑叶药材及其颗粒质量标准的薄层鉴别提供依据。【关键词】桑叶；质量控制；薄层鉴别Preliminary study on quality of different batches of mulberry leaf and its dispensing granulesWu Dengli1，Wang Xiangpei2，Zhang Honglian1，Wu Hongmei1*（1.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，Guizhou；2.Guizhou Minzu University，Guiyang 550025，Guizhou）【Abstract】Objective：To establish a method for the TLC identification of mulberry leaf and its dispensing granules，providing reference for the quality control of mulberry leaf.Methods：Based on the quality standard of mulberry leaves（The Pharmacopoeia of the People s Republic of China 2020 Edition），TLC identification method was used to study the medicinal materials of mulberry leaves and its dispensing granules with caffeic acid as the control.The thin-layer chromatography G silica gel plate was used in the system of toluene-ethyl acetate-formic acid（521）.It was observed under UV lamp 365 nm.Results：The first to third batches of mulberry leaf showed 5 spots and light blue color on the thin-layer chromatography G silica gel plate.There were light blue and light red spots in the 4th to 5th batches，and the number of spots were 7 and 8，respectively.The 6 spots of batch 6 to 11 were light blue and pink.The 12th to 13th batch of dispensing granules had 3 light blue spots.It was found that there were differences in the information of chemical composition between the medicinal materials and its dispensing granules.Conclusion：The improved sample preparation method and thin layer condition can identify mulberry leaf and its dispensing granules，and the method has good separation and repeatability，which provides the basis for the TLC identification of mulberry leaf and its dispensing granules quality standard.【Keywords】mulberry leaf；quality control；TLC identification桑叶，桑科桑属桑种（Morus alba L.），为多年生木本植物桑树的干燥叶，是一种重要的药用植物资源。目前关于桑叶配方颗粒与桑叶药材的薄层色谱研究较多1-2，但缺乏桑叶配方颗粒与原药材薄层色谱的整体研究，不能反映桑叶配方颗粒与原药材的成分含量差异，故建立桑叶配方颗粒与原药材的成分含量差异的分鉴定资源Identification&SourceGendingSwhyenz 78析方法很有必要。本文在中国药典2020年版桑叶质量标准基础上改进，运用薄层色谱法对桑叶药材及其配方颗粒的化学成分进行研究。1 材料、仪器1.1 实验材料药 材 S 1 S 1 1 的 来 源 批 依 次 为 贵 州 六 盘 水（20191201）、贵州毕节（20200105）、贵州遵义（20210201）、贵州铜仁（20210205）、贵州安顺（20210207）、湖北汉口（20200601）、四川绵阳（20200401）、四川成都（20200310）、河北安国（20073104）、贵州贵阳（20200301）、贵州贵阳（20200502）、配方颗粒S12S13的来源批次分别为广东一方制药有限公司（0020971）、广东一方制药有限公司（0021402）、咖啡酸对照品S14的来源批次为中国食品药品检定研究院（CP13-D4ZB）、甲醇（分析纯）、甲苯（分析纯）、甲酸（分析纯）、乙酸乙酯（分析纯）、无水乙醇（分析纯）。1.2 实验仪器硅胶G预制板（青岛海洋化工有限公司）、超声提取器（昆山市超声仪器有限公司）、暗箱式紫外分析仪（北京顺科达科技有限公司）、远红外干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司）。2 实验方法2.1 供试品溶液、对照品溶液的制备中国药典项下薄层色谱鉴别的供试品制备方法：精密称定桑叶粉末2.00 g，加30 mL石油醚，加热回流30 min，倒掉石油醚液，挥干药渣，加30 mL乙醇，超声处理20 min，过滤，滤液蒸干，残渣加10 mL热水，置水浴上搅拌使溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。优化的薄层色谱鉴别的供试品制备方法：精密称定桑叶药材粉末2.00 g，桑叶配方颗粒0.20 g，加甲醇20 mL，密塞，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10 mL，置80 水浴上搅拌使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容到1 mL，作为供试品溶液。精密称取咖啡酸对照品5.00 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀即得对照品。2.2 显色剂溶液的制备及薄层层析条件10硫酸乙醇：先量取9 mL无水乙醇，再量取1 mL硫酸，摇匀即得显示剂；0.5G CMC-Na（13）硅胶，厚约0.25 mm，105 活化30 min；展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（521）。2.3 薄层色谱方法学研究2.3.1 不同制备方法的选择分别吸取上述2.1.1项下的供试品溶液各3 L，点于同一种硅胶G预制薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（521）的上层溶液为展开剂，置用展开剂预饱和10 min的展开缸中，展开约至8 cm，取出，晾干，于紫外光灯（365 nm）下检视，结果见图1。采用中国药典方法制备的供试品色谱图中仅有药材有斑点，而配方颗粒无斑点。但优化后的方法药材及其配方颗粒均有斑点。同时通过图中斑点数目、斑点清晰度确定优化的制备方法为最佳方法。中国药典项下制备方法优化的制备方法图1 不同制备方法的薄层色谱图2.3.2 不同点样量的考察以优化后的制备方法为条件，分别吸取供试品溶液4 L、5 L，点于硅胶G预制薄层板上，按2.4.1的步骤展开，结果见图2。从图中的斑点清晰度和圆润度，确定5 L为最佳点样量。4 L5 L图2 不同点样量的薄层色谱图不同批次桑叶药材及其配方颗粒质量的初步研究792.3.3 不同薄层板的考察以上述最佳点样量为条件，分别吸取供试品溶液各5 L，点于不同硅胶G薄层板上，按步骤展开，结果见图3。硅胶G预制板效果优于自制硅胶G板。硅胶G预制板自制硅胶G薄层板图3 不同薄层板的薄层色谱图2.3.4 显色剂的考察分别吸取供试品溶液5 L，点于硅胶G预制板上，按2.4.1的步骤展开，取出，晾干，其中一块薄层板喷以10硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，另一块不喷显色剂，于紫外光灯（365 nm）下检视，结果见图4。通过斑点的个数以及清晰度确定喷10硫酸乙醇的效果好。无显色剂10硫酸乙醇图4 显色剂的薄层色谱图2.3.5 不同温度的考察分别在低温（5）、室温（25）以及高温（40）条件下，吸取供试品溶液5 L，对照品溶液2 L，点样，按2.4.1步骤展开，再喷以10硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，于紫外光灯（365 nm）下检视。结果见图5，3个温度下室温下的薄层色谱效果较好。低温（5）室温（25）高温（40）图5 不同温度的薄层色谱图2.3.6 不同湿度的考察以上述室温为最佳温度，分别在低湿度18、中湿度58、高湿度88的条件下，吸取供试品溶液5 L，对照品溶液2 L，点于硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（521）的上层溶液为展开剂，置用展开剂预饱和10 min的展开缸中，展开约至8 cm，取出，晾干，再喷以10硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，于紫外光灯（365 nm）下检视，结果表明，不同湿度对斑点的分离有一定影响，结果见图6。3个湿度下湿度为58所呈现的效果最好。185888图6 不同湿度的薄层色谱图2.3.7 不同批次桑叶药材及其配方颗粒薄层色谱鉴别分别吸取对照品溶液2 L和不同批次的桑叶药材及其配方颗粒供试品各5 L，点于同一硅胶G预制薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（521）的上层溶液为展开系统展开，取出，晾干，喷以10硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，于紫外光灯（365 nm）下检视，见图7。图7 不同批次桑叶样品与对照品薄层色谱图鉴定资源Identification&SourceGendingSwhyenz 80图7显示，13批样品在咖啡酸对照品相应的位置上，均有显相同颜色的斑点，说明13批样品中均含有咖啡酸。第13批桑叶药材在硅胶G薄层板上均为5个斑点，颜色均为淡蓝色；第45批药材均有淡蓝色和淡红色斑点，其斑点数分别为7个、8个；第6批、711批药材的6个斑点均为淡蓝色和粉色；第1213批配方颗粒均有3个淡蓝色斑点。第4、第5批是所有批次中所含化学信息、斑点最多的两个批次，可能是受地理位置或当地气候的影响。不同批次桑叶药材在相应位置上有5个相同颜色的斑点，桑叶药材及其配方颗粒在相应位置上有3个相同颜色的斑点。不同批次桑叶药材及其配方颗粒的斑点大小、位置以及Rf值差异都不大，但斑点深浅度不一，说明对应的化学成分含量有所差异。3 讨论故本实验在该条件下优化提取方法，不经过回流提取，采用甲醇超声20 min的提取方式，此方法对药材及其配方颗粒均有展开效果，最终以优化后的提取条件为最佳方法。优化后的提取方法所需时间较中国药典短，斑点数目多且其配方颗粒在相同位置出现相同颜色的斑点。鉴于薄层色谱法的不稳定特点，该方法比较了不同温度（5、25、40）、不同湿度（18、58、88）和不同点样量（4 L、5 L）对展开效果的影响，并以斑点的数目、圆润度为指标。结果以温度25、湿度58、点样量5 L为最佳薄层条件。参考文献1李玲，朱卫敏，张琴，孙莲.新疆药桑叶中五种活性成分的薄层色谱鉴别J.山东化工，2017，46（4）：78-79，83.2雷丸，康玉霞，王莹，郭飞燕，周婷，王晓娟.清口颗粒与无糖清口颗粒质量控制J.医药导报，2017，36（3）：312-316.