建立超高效液相色谱法测定莫匹罗星软膏含量.pdf

，评价技术与方法 基金项目 外用半固体制剂国内研发动态及监管科学工具研究（课题号：）作者简介 路丽华，女，硕士，研究方向：药物分析与质量控制。：通讯作者 宁保明，男，研究员，研究方向：化学药品质量控制及研究。：；郑萍，女，主任药师，研究方向：药品质量分析与研究。：建立超高效液相色谱法测定莫匹罗星软膏含量路丽华，许卉，宁保明，郑萍（烟台大学，山东 烟台 ；中国食品药品检定研究院，北京 ；四川省药品监督管理局化学药品质量研究及控制重点实验室，四川 成都 ）摘要 目的：建立莫匹罗星软膏含量测定超高效液相色谱法，提高检测效率。方法：采用超高效液相色谱法（，），色谱柱为 （，）；流动相为 磷酸二氢钠（调节 至 ）乙腈（）；检测波长为 ；流速为 。结果：建立了莫匹罗星软膏含量测定超高效液相色谱方法，此方法精密度好，准确度高，其线性范围为 ，为 。结论：相比于高效液相色谱（，）法，本文所提方法更便捷高效，可有效地控制莫匹罗星软膏含量。关键词 莫匹罗星软膏；含量测定；超高效液相色谱 中图分类号 文献标志码 文章编号 （），（，；，；，）：，（）（，），（）（），：（），；（）莫匹罗星软膏为外用半固体制剂，包括莫匹罗星（）、聚乙二醇 和聚乙二醇 。适用于革兰阳性菌引起的疖肿、毛囊炎、脓疱病及浅表性创伤、湿疹合并感染的继发性皮肤感染 。莫匹罗星软膏具有局部吸收量小，不易产生交叉耐药性，且对常见的致病菌有强大的抗菌活性等特点，临床已将其列为首选的 抗 局 部 感 染 特 效 药 。美 国 药 典 版（）、英国药典 年版 中均收载了莫匹罗星软膏。目前各国药典均采用反向液相色谱法对莫匹罗星进行含量测定，但分析时间较长，不便于对大批量药品进行含量测定。近年来，法因具有小颗粒填料、低系统体积、专属性强、稳定性好及快速检测等特点，在药物 年第 卷第 期分析、生 化 分 析、食 品 分 析 等 多 个 领 域 应 用 广泛 。本研究建立了 法，既可在保证专属性的基础上测定莫匹罗星含量，又能提高实验效率。仪器与试剂液相色谱仪：，工作站：；超高效液相色谱仪：，工作站：；超纯水系统；电子天平，计。莫匹罗星对照品（，批号：，中国食品药品检定研究院），盐酸（北京益利精细化学品有限公司）；磷酸二氢钠、氢氧化钠（国药集团化学试剂有限公司）；四氢呋喃、乙腈（）。实验方法反相色谱系统：色谱柱为 ，（，）；流动相 为 磷酸二氢钠（取磷酸二氢钠 ，用水溶解稀释制 ，再用 调节 至 ）乙腈（）；流动相 为：甲醇。检测波长为 ；流速为 ；柱温为 ；进样体积为 。超高效液相色谱系统：色谱柱为 （，），流动相为 磷酸二氢钠缓冲液 乙腈（）；流速为 ；检测波长为 ；柱温 ，进样体积为 。分别称取 份莫匹罗星对照品约 ，置 容量瓶中，加 流动相溶解后并定容至刻度，作为溶液 。另一份用 盐酸调节 为 ，静置约 ，用 调节 至 ，滤过，续滤液为溶液 ，分别取 注入液相色谱仪。实验结果 色谱条件的确定目前各国药典及部颁标准中，莫匹罗星含量测定方法主要包括 种不同色谱系统，分别为 磷酸二氢钠 乙腈系统；磷酸二氢钠 乙腈系统以及 磷酸二氢钠 乙腈 四氢呋喃系统。分别采用 种不同色谱系统对溶液 进行分析，所得结果见图、表。由图和表所示，磷酸二氢钠 乙腈系统相比于 磷酸二氢钠 乙腈系统，其分析时间更短，莫匹罗星与前后相邻杂质的分离效果更好而在四氢呋喃系统中，虽然莫匹罗星出峰时间早，但与相邻杂质分离较差，且色谱图中基线噪音较大，影响检测灵敏度，对仪器性能要求较高。综上所述，确定莫匹罗星含量测定色谱系统为 磷酸二钠 乙腈（）。超高效液相色谱法的建立建立好高效液相色谱系统后，利用色谱系统模拟软件对高效液相色谱条件进行转换，建立超高效液相色谱法 ，并对其方法进行优化和评价。建立过程见图 。利用 方法转换计算器，对高效液相色谱方法进行转换，模拟转换后得到的预设超高效液相色谱系统条件为：流动相 为 磷酸二氢钠缓冲液 乙腈（：），流速为 ，检测波长为 ，柱温 ，进样体积为 。按此实验条件对溶液进行分析，结果见图。由图 可知，杂质峰并未与主峰分离，为此，需要对此实验条件进行优化。由于 管路较细，色谱柱内径较小，不宜采用较高浓度的缓冲盐作为流动相，故将磷酸二氢钠浓度调整为 。实验中发现，适当提高色谱柱温度以及降低流速均可使莫匹罗星与相邻杂质分离度增加。为提高方法灵敏度将进样量提高为 ，最终确定了最优的 色谱系 统。按 此 色 谱 系 统 对 溶 液 进 行 分 析，结 果见图 。比较 和 方法可知，法对莫匹罗星及相邻杂质分离效果更好（分离度分别为 及 ），且 法分析时间短，提高实验专属性的同时也提高了实验效率。超高效液相色谱系统方法验证 精密度取溶液 重复进样 次，所得保留时间及峰面积见表 。由表 可知，莫匹罗星色谱峰保留时间和峰面积的相对标准偏差（）均 ，说明此方法日内精密度较好。取溶液 分别于 天进样，所得保留时间及峰面积见表 。莫匹罗星色谱峰保留时间和峰面积的相对标准偏差（）均小于 ，说明此方法日间精密度较好。耐用性对色谱条件进行微调（改变流速、柱温、流动相 的 值），以莫匹罗星的保留时间、拖尾因子及分离度为指标，考察色谱条件的耐用性。结果见表 。由表 可知，色谱系统柱温、流速以及流动相 值的微小变动均未影响色谱系统对莫匹罗星及相邻杂质的分离效果，色谱系统的耐用性较好。，评价技术与方法：磷酸二氢钠 乙腈系统；：磷酸二氢钠 乙腈系统；：磷酸二氢钠 乙腈 四氢呋喃系统图 种不同色谱系统含量测定色谱图表 溶液 在 种不同色谱系统中系统适用性评价参数 磷酸二氢钠乙腈系统 磷酸二氢钠乙腈系统 磷酸二氢钠 乙腈四氢呋喃系统主峰与主峰前峰分离度 主峰与主峰后峰分离度 拖尾因子 检出限与定量限取莫匹罗星对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成一定浓度。精密量取 注入液相色谱仪，记录色谱图，将信噪比约为 时的进样量定为检测限，信噪比约为 时的进样量为定量限，结果见表 。图 超高效液相色谱法的建立 年第 卷第 期图 转换后色谱系统含量测定色谱图图 优化后色谱系统含量测定色谱图表 莫匹罗星日内精密度结果日内精密度保留时间（）峰面积 （）表 莫匹罗星日间精密度结果日间精密度保留时间（）峰面积 （）表 莫匹罗星色谱条件耐用性结果（柱温变动）柱温保留时间（）对称因子分离度 表 莫匹罗星色谱条件耐用性结果（流速变动）流速（）保留时间（）对称因子分离度 线性称取约 莫匹罗星对照品，置 容量瓶中，加 流动相溶解并稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液，对线性储备液进 ，评价技术与方法行分步稀释，分别制成 ，和 ）的溶液作为线性溶液，分别精密量取各线性溶液 注入超高效液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，考察其线性。所得结果如表 与图 所示。线性方程为 ，为 ，说明在 范围内，浓度与色谱峰面积线性关系良好。表 莫匹罗星色谱条件耐用性结果（流动相 的 值变动）值保留时间（）对称因子分离度 表 莫匹罗星检出限及定量限结果检出限定量限信噪比浓度（）信噪比浓度（）准确度 分别采用 和 方法对 个不同厂家莫匹罗星软膏含量进行测定，结果见表。个色谱系统所得含量结果基本一致，说明采用 方法对莫匹罗星软膏进行含量测定结果准确度较好。表 莫匹罗星浓度与色谱峰面积线性结果浓度（）峰面积 结论本文采用 法建立了莫匹罗星软膏含量测定方法，在缩短分析时间的基础上又可准确测定其含量，且方法的灵敏度，精确度，耐用性良好。实现了莫匹罗星与杂质的有效分离，适用于大批量样品的含量测定。y=2E+07x-145 797 R2=0.999 610 0005 010 00010 010 00015 010 00020 010 00000.20.40.60.81M0#(mg.mL-1)图 莫匹罗星浓度与峰面积线性关系图表 莫匹罗星软膏含量测定结果厂家 结果（）结果（）参考文献 陆雪华，陆艳萍，覃美玲，等 复方酮康唑、莫匹罗星联合治疗真菌性皮肤溃疡效果观察 中外医学研究，（）：郑永青，禹辉，王昱 磺胺嘧啶银锌霜联合莫匹罗星在烧伤创面治疗中的疗效观察 中国医学工程，（）：胡玉芬，王丽娟，薛富民 液相色谱 质谱联用测定不同软膏中的莫匹罗 山东科学，（）：梁亚伟，王小亮，张秉华，等 莫匹罗星软膏体外透皮吸收率的测定及质量评价 中国抗生素志，（）：魏长峰，李平原，宋玉平，等 法测定氨苄西林有关物质 药学研究，（）：，杨倩，袁雯玮 超高效液相色谱法测定盐酸博来霉素的有关物质 药物分析杂志，（）：王静文，黄湘鹭，曹进，等 超高效液相色谱法同时测定减肥类保健食品中非法添加的 种药物 色谱，（）：勾新磊，高峡，胡光辉，等 超高效液相色谱 串联质谱法同时测定中成药和保健品中 种抗抑郁药物 色谱，（）：张明，唐访良，俞雅云，等 固相萃取 超高效液相色谱 电喷雾串联质谱法同时测定地表水中 种全氟有机化合物 色谱，（）：邱盼子，郭欣妍，王娜，等 超高效液相色谱 串联质谱法同时测定制药废水中 种抗生素 色谱，（）：王立新，田冶，王晨等 盐酸莫西沙星片剂有关物质超高效液相色谱法的建立 中国药物评价，（）：（收稿日期：）