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132024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著CD147、MMP-2 在胃癌组织中的表达及临床意义王浩1，孙思思2*（1 山东医学高等专科学校附属医院，山东临沂 276000；2 临沂市人民医院，山东临沂 276000）【摘要】目的 研究胃癌组织中 CD147、MMP-2 的表达，并分析其与胃癌病理特征的关系。方法 制备组织芯片，采用免疫组织化学法和原位杂交技术分别检测 CD147、MMP-2 在 170 例胃癌组织和 30 例正常胃黏膜组织中的表达情况。结果 CD147、MMP-2 蛋白在胃癌组织的阳性表达率为 72.9%和 77.1%；CD147、MMP-2 mRNA 在胃癌组织中阳性表达率为 68.8%和 74.7%，均明显高于在正常胃黏膜组织（P 0.05）。CD147、MMP-2 蛋白和 CD147、MMP-2 mRNA 与胃癌分化程度无关，但与肿瘤浸润程度、淋巴结转移、临床分期有关（P0.05）。胃癌组织中CD147、MMP-2蛋白和CD147、MMP-2 mRNA 的阳性表达，分别具有显著正相关性（P0.05）。结论 检测胃癌组织中 CD147、MMP-2 的表达，可预估胃癌的浸润和转移，对抗肿瘤综合治疗和预后评估具有重要意义。【关键词】胃肿瘤；CD147；MMP-2；免疫组化；原位杂交Expression and clinical significance of CD147 and MMP-2 in gastric carcinoma tissuesWANG Hao*,SUN Si-si.*Affiliated Hospital Of Shandong Medical College,Linyi 276000,China.【Abstract】Objective To investigate the expression of CDl47 and MMP-2 in gastric cancer tissues and their correlation with clinicopathological features of gastric cancer.Methods Preparation of tissue chips(TC)and detection of the expression levels of CDl47 and MMP-2 in 170 cases of gastric cancer tissue and 30 cases of normal gastric mucosa tissue using immunohistochemistry and in situ hybridization(ISH)techniques.Results In gastric cancer tissues,the positive expression rates of CD147、MMP-2 protein were 72.9%and 77.1%respectively and the positive expression rates of CD147、MMP-2 mRNA were 68.8%and 74.7%respectively.They were all significantly higher than those in normal gastric mucosa tissues(P0.05).The expression of CD147、MMP-2 protein and CD147、MMP-2 mRNA have no association with the differentiated degree of gastric cancer,but they were closely correlated with the tumor infiltrating degree,lymph nodes metastasis and clinical stage(P0.05).There was a significant positive correlation between the expressions of CD147 and MMP-2 protein,CD147 and MMP-2 mRNA respectively in gastric cancer tissues(P0.05).Conclusion Detecting the expressions of CD147 and MMP-2 in gastric cancer tissues can predict the invasion and metastasis of gastric cancer,which is of great significance for anti-tumor comprehensive treatment and estimation of prognosis【Key words】Gastric tumor；CD147；MMP-2；Immunohistochemistry；In situ hybridization胃癌是消化系统常见恶性肿瘤，世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）2020 年公布的数据显示，2020 年全球胃癌新发病例数 108.9 万，死亡病例数 76.8 万1。胃癌的浸润和转移是多因素多通路调控参与的结果2，肿瘤细胞通过各种因子和途径降解细胞外基质和破坏基底膜是其重要组成过程。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（Extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN）又称 CD147，在肿瘤细胞表面高表达，参与各种基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMPs）的活化合成，促进肿瘤的浸润和转移3。本研究采用免疫组织化学法和原位杂交技术检测胃癌组织和正常胃黏膜组织中 CD147、基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloproteinase-2，MMP-2）的表达，旨在探讨其与胃癌病理特征的关系。1 资料和方法1.1 一般资料 收集 2019 年 5 月 2022 年 5 月山东医学高等专科学校附属医院和临沂市人民医院手术切除的胃癌标本 170 例，其中男106 例，女 64 例，年龄 43 80 岁，中位年龄 64 岁。所选病例均排除：合并糖尿病；合并高血压、冠心病等心脑血管病；伴其他系统原发或继发肿瘤；伴免疫系统疾病；术前行放化疗等肿瘤相关治疗；近半年有手术史。参照 2022 版美国国立综合癌症网络（NCCN）指南对标本进行病理学评估。另随机选取 30 例癌旁 5 cm 以上正常胃黏膜组织作为对照组。1.2 方法 1.2.1 组织芯片制备 所有标本经 10%福尔马林固定、常规脱水、浸蜡、包埋、4 m 连续切片，分别进行免疫组化和原位杂交染色。1.2.2 免疫组化*通信作者：孙思思，Email：2024医师在线杂志 第4期-拼.indd 132024医师在线杂志 第4期-拼.indd 132024/4/18 10:12:412024/4/18 10:12:41142024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著兔抗人 CD147 单克隆抗体和兔抗人 MMP-2 单克隆抗体均购自温州科淼生物科技有限公司。免疫组化试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司。聚合二抗的单价 Fab 片段和辣根过氧化物酶（HRP），采用二步法，参照说明书步骤严格操作，DAB 显色，阳性信号为棕黄色或褐黄色。PBS 缓冲液作为阴性对照。1.2.3 原位杂交CD147、MMP-2 原位杂交检测试剂盒购自上海西格生物科技有限公司，该探针对人 CD147 靶基因的 mRNA 序列为：5-GACTCCGACGACCAGTGGGGAGAGTACTCCTGCGT-35-GAACATGGAGGCCGACCCCGGCCAGTACCGGTGCA-35-CAGCACCAGAATGACAAAGGCAAGAACGTCCGCCA-3该探针对人 MMP-2 靶基因的 mRNA 序列为：5-TTCTATGGCTGCCCAAGGAGAGCTGCAAC-35-GACAGCCCTGCAAGTTTCCATTCCGCTTCC-35-GAACCAAAGTCTGAAGTGCGTGAAGTTTGG-3参照说明书严格操作，DAB显色。PBS缓冲液作为阴性对照。1.2.4 结果判断 免疫组化法以肿瘤细胞内表现黄色至棕褐色颗粒为阳性表达，其中 CD147 蛋白主要定位于细胞质（和）或细胞膜，MMP-2 蛋白主要定位于细胞质。原位杂交法以肿瘤细胞内表现黄色至棕褐色颗粒为阳性表达，CD147 mRNA 和 MMP-2 mRNA 均定位于细胞质。间质细胞内黄染表达均不作为阳性表达。见图 1。每例标本随机取 5 个高倍视野（400），观察并计算每个视野下阳性细胞率，取平均值，阳性细胞率 5计 0 分，6%25%计 1 分，26%50%计 2 分，51%75%计 3 分，75%计 4 分。着色深度计分：0 分为基本不着色，1 分为浅黄色，2 分为棕黄色，3 分为棕褐色。采用积分法半定量判定结果：阳性细胞率计分与着色深度计分乘积，912分记强阳性（+），58分记中度阳性（+），34分记弱阳性（+），02分记阴性（），+均为阳性表达。染色结果均由 3 位副高及副高以上职称的病理医师分别阅片。1.3 统计学分析应用 SPSS 22.0 软件进行统计学分析，组间比较采用四格表2检验，CD147、MMP-2 蛋白及其 mRNA 与胃癌临床病理特征之间的关系采用 Mann-Whitney 两样本比较的秩和检验和Kruska1-wallis 多样本比较的秩和检验，相关性采用 Spearman秩相关性检验。P 0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 CD147、MMP-2 的表达及其与胃癌临床病理特征的关系CD147、MMP-2 蛋白在胃癌组织的阳性表达率分别为72.9%和 77.1%；CD147、MMP-2 mRNA 在胃癌组织的阳性表达率为 68.8%和 74.7%，均明显高于正常胃黏膜组织中的阳性表达率，差异有统计学意义（P 0.05）。详见表 1。CD147、MMP-2 蛋白和 CD147、MMP-2 mRNA 在胃癌不同分化组别中的表达无明显差异；随着胃癌浸润程度的增加，其阳性表达均明显增加；淋巴结转移组的阳性表达均显著高于淋图 1 免疫组化结果判断A：MMP-2在胃癌组织中的阳性表达，免疫组化法B：CD147在胃癌组织中的阳性表达，免疫组化法C：MMP-2在正常胃黏膜组织中的阴性表达，免疫组化法D：CD147在正常胃黏膜组织中的阴性表达，免疫组化法表 1 CD147、MMP-2在胃癌组织及正常胃黏膜中的表达 例（%）组别CD147 蛋白MMP-2 蛋白CD147 mRNAMMP-2 mRNA正常胃黏膜组织（n=30）25（83.3）5（16.7）23（76.7）7（23.3）26（86.7）4（13.3）25（83.3）5（16.7）胃癌组织（n=170）46（27.1）124（72.9）39（22.9）131（77.1）53（31.2）117（68.8）43（25.3）127（74.7）2值35.26834.4132.85638.279P值0.0000.0000.0000.0002024医师在线杂志 第4期-拼.indd 142024医师在线杂志 第4期-拼.indd 142024/4/18 10:12:422024/4/18 10:12:42152024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著巴结无转移组；临床分期方面，在、期的阳性表达均明显高于、期。详见表 2。2.2 CD147、MMP-2 在胃癌组织中表达的相关性Spearman 秩相关性检验表明，胃癌组织中 CD147、MMP-2 蛋白和 CD147、MMP-2 mRNA 的阳性表达，分别具有显著正相关性（P 0.05），详见表 3。3 讨论恶性肿瘤的发生发展与肿瘤细胞侵袭浸润周围组织和发生远处转移密切相关。该过程是多种因子参与和多种通路调控的共同结果，除肿瘤细胞与周围正常组织细胞的细胞间相互作用外，肿瘤细胞诱导或产生各种蛋白酶类通过多种途径降解细胞外基质并破坏基底膜也为其播散创造了可行条件2。MMPs 是锌离子依赖的内肽酶家族4，参与介导降解细胞外基质和破坏基底膜过程5，是肿瘤细胞播散转移的重要介质。MMP-2 作为 MMPs 家族重要成员之一，可特异性降解细胞外基质及基底膜的主要成分型胶原和型胶原（又称明胶酶 A或型胶原酶），同时参与激活 MMP-9 及 MMP-13，并与其协同作用降解细胞外基质成分，在肿瘤的侵袭浸润和发展转移过程中发挥着重要的作用6。有研究阐述，过表达 miR-141-3p 和沉默 CBX1，能抑制 MMP-2 的表达，继而抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭7。本研究中，胃癌组 MMP-2 阳性率显著高于癌旁正常胃黏膜组，且随着肿瘤浸润深度递进，淋巴结转移发生，临床分期发展，MMP-2 阳性表达明显增强。这与杨阳等8 关于胆囊癌研究结果类似。CD147 作为高度糖基化的跨膜蛋白，是免疫球蛋白超家族重要组成之一，由 Biswas 等9 最早发现，其纯化后可诱导间质成纤维细胞分泌 MMPs。在恶性肿瘤中，CD147 呈高表达状态10，并可以诱导血管内皮生长因子（VEGF）、MMPs 等各种分子参与细胞粘附、基底膜降解、血管增生等肿瘤侵袭过程11。研究12 表明，通过直接转染 CD147 或重组 CD147分子间接刺激肿瘤细胞，可诱导肿瘤细胞产生 MMPs，尤其是MMP-2 表达量显著增加。另有研究13 表明，CD147 表达的增加可能刺激 MMP-2 的产生和分泌，继而加快细胞外基质的破坏和降解，促进肿瘤细胞的侵袭和播散。Zheng 等14 发现，表 2 CD147、MMP-2的表达与胃癌临床病理特征的关系（例）项目例数CD147 蛋白MMP-2 蛋白CD147 mRNAMMP-2 mRNA 2/Z值P值 2/Z值P值 2/Z值P值 2/Z值P值分化程度0.5530.7583.6880.1582.3340.3111.3100.520高分化143173217433625441中分化5312112281014254172012411181410低分化10331113526272534173335241127273217浸润深度14.7050.0017.0450.0307.4290.0247.0320.030T1188352683176417461T2502181381313168201992152087T3 T410217124627201947162633291421253620淋巴结转移-3.2130.001-2.7840.005-2.0850.037-2.3560.018无6126818922151682028121162988有10920154628172550173330301627204220临床分期-3.1900.001-2.4840.013-2.1650.030-2.7860.005期8431112913242328922471321939215期8615103526151738163111291524102923表 3 CD147、MMP-2在胃癌组织中表达的相关性（例）MMP-2 蛋白CD147 蛋白r值P值MMP-2 mRNACD147 mRNAr值P值207750.2570.0012614120.4100.0006915101226651264088122738121476872024医师在线杂志 第4期-拼.indd 152024医师在线杂志 第4期-拼.indd 152024/4/18 10:12:432024/4/18 10:12:43162024,14(4)医师在线 第 14 卷 第 4 期论著CD147 可以通过诱导肿瘤微环境中 MMP 和 VEGF 的合成，促进肿瘤的侵袭和转移。Hu 等15 发现，CD147 低表达的胃癌患者比 CD147 高表达的胃癌患者具有更长的生存时间，可以作为一个独立的预后生物标志物。Li 等16 研究证实，食道癌组织中CD147 表达明显高于癌旁正常组织，且 CD147 的高表达与浸润深度、淋巴转移、肿瘤临床分期有关，并降低了食道癌患者的生存率。这与本研究结果类似，即 CD147 随肿瘤浸润深度增加和临床分期发展阳性表达逐渐增强，且与MMP-2阳性表达成正相关性。本研究证实了 CD147、MMP-2 二者的表达与胃癌临床病理特征间的关系，及其二者的相关性，对胃癌发展的监测及预后的判断提供了新的方法。但 CD147 诱导 MMP-2 产生的机制仍有待进一步探索，以期促进CD147、MMP-2拮抗剂研究的开展，例如相关单克隆抗体药物，为胃癌生物学治疗方向开辟新的途径。参考文献1Sung H,Ferlay J,Siegel RL,et al.Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 CountriesJ.CA Cancer J Clin,2021,71(3):209-249.2Okusa Y,Ichikura T,Mochizuki H.Prognostic impact of stromal cell-derived urokinase-type plasminogen activator in gastric carcinomaJ.Cancer,1999,85(5):1033-1038.3Rodriguez CM,Gilardoni MB,Remedi MM,et al.Tumor-stroma interaction increases CD147 expression in neoplastic B lymphocytes in chronic lymphocytic leukemiaJ.Blood Cells Mol Dis,2020,82:102405.4刘明明,李爱玲,修瑞娟.基质金属蛋白酶的研究进展J.中国病理生理杂志,2018,34(10):1914-1920.5Utispan K,Niyomtham N,Yingyongnarongkul BE,et al.Ethanolic Extract of Ocimum sanctum Leaves Reduced Invasion and Matrix Metalloproteinase Activity of Head and Neck Cancer Cell LinesJ.Asian Pac J Cancer Prev,2020,21(2):363-370.6Jobin PG,Butler GS,Overall CM.New intracellular activities of matrix metalloproteinases shine in the moonlightJ.Biochim Biophys Acta Mol Cell Res,2017,1864(11 Pt A):2043-2055.7盛树海,郑进,佟易凡.miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭J.中国老年学杂志,2020,40(11):2418-2423.8杨阳,贾万理,晋婕.miR-187、MMP2、CEA在胆囊癌患者中的表达水平及临床意义J.检验医学与临床,2022,19(16):2239-2241,2245.9Biswas C,Zhang Y,DeCastro R,et al.The human tumor cell-derived collagenase stimulatory factor(renamed EMMPRIN)is a member of the immunoglobulin superfamilyJ.Cancer Res,1995,55(2):434-439.10Xin X,Zeng X,Gu H,et al.CD147/EMMPRIN over-expression and prognosis in cancer:A systematic review and meta-analysisJ.Sci Rep,2016,6:32804.11吴雪峰,孙洪帅,李晓鸥,等.CD147在多种肿瘤患者血清中的表达及其临床意义J.中国实验诊断学,2018,22(10):1760-1761.12Lucchetti D,Colella F,Perelli L,et al.CD147 Promotes Cell Small Extracellular Vesicles Release during Colon Cancer Stem Cells Differentiation and Triggers Cellular Changes in Recipient CellsJ.Cancers(Basel),2020,12(2):260.13Urbaniak-Kujda D,Kapelko-Slowik K,Prajs I,et al.Increased expression of metalloproteinase-2 and-9(MMP-2,MMP-9),tissue inhibitor of metalloproteinase-1 and-2(TIMP-1,TIMP-2),and EMMPRIN(CD147)in multiple myelomaJ.Hematology,2016,21(1):26-33.14Zheng HC,Gong BC.CD147 expression was positively linked to aggressiveness and worse prognosis of gastric cancer:a meta and bioinformatics analysisJ.Oncotarget,2017,8(52):90358-90370.15Hu C,Dong X,Wu J,et al.CD147 overexpression may serve as a promising diagnostic and prognostic marker for gastric cancer:evidence from original research and literatureJ.Oncotarget,2017,8(19):30888-30899.16Li H,Jiang C,Wu D,et al.The prognostic and clinicopathologic characteristics of CD147 and esophagus cancer:A meta-analysisJ.PLoS One,2017,12(7):e0180271.2024医师在线杂志 第4期-拼.indd 162024医师在线杂志 第4期-拼.indd 162024/4/18 10:12:432024/4/18 10:12:43