circRNA CPT1A调控PTEN在糖尿病视网膜病变患者神经组织病变中的作用.pdf

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负性调控 的表达，从而参与 的发生、发展。【关键词】肉碱棕榈酰转移酶 ；磷酸酶 张力蛋白基因；糖尿病视网膜病变；神经组织病变【中图分类号】糖尿病患者眼底发生特征性病变前，神经组织就已出现不同严重程度的损伤，且往往难以逆转，糖尿病视网膜病变（）患者神经组织病变情况已成为 早期诊断的评价指标及治疗方向 。有研究表明 ，现有的治疗手段仍无法达到阻止视网膜神经病变或者修复、逆转神经组织损伤的目的，因此，深入研究 患者神经组织病变的潜在机制对于指导药物研发具有重要价值。持续的高血糖状态引起的氧化应激损伤是 患者神经组织病变的重要原因，磷酸酶 张力蛋白基因（）属于抑癌基因，具有双重磷酸酶活性，可维持细胞内氧化还原状态，保护细胞免受氧化应激损伤 。近年来，越来越多研究发现内源性环状 （）与多种神经退行性疾病密切关联，同时 还参加代谢性疾病（高血糖、胰岛素抵抗）的发生、发展过程 。既往研究也证实 ，可在人胰岛中大量表达，并差异化调控血糖状态，而 肉碱棕榈酰转移酶 （）基因异常高表达可增加代谢性疾病 ：眼 科新进展 年 月第 卷第 期 发生风险，且与空腹血糖呈正相关性，基于以上研究推测 可能在 患者神经组织病变发生发展过程中存在调控作用。目前，有关 与 、患者神经组织病变的关系，以及 调控疾病的机制尚未完全明确，因此，本研究将对此进行初步探讨。资料与方法 临床资料与分组选取我院 年 月至 年 月收治的 型糖尿病患者 例（眼），其中无 （）患者 例（眼）为 组，非增生型 （）患者 例（眼）为 组，增生型 （）患者 例（眼）为 组，年龄 （）岁，男 例（眼），女 例（眼）。本研究已获得衡水市人民医院伦理委员会批准（批号：）。纳入与排除标准纳入标准：（）均为 型糖尿病患者；（）眼压 （），眼轴长度（），屈光度 ；（）能配合眼部相关检查，依从性较好；（）资料完整。排除标准：（）合并老年性黄斑变性、青光眼、白内障等其他眼部疾病；（）合并神经退行性疾病、心脑血管疾病等可影响视网膜神经改变的全身疾病；（）既往眼部外伤史、眼部治疗史，如玻璃体内注射药物、激光光凝；（）图像扫描质量指数（）低于 ；（）屈光间质混浊，影响眼底检查。方法 检查组患者入组后先采集外周静脉血，然后采用 仪（美国 公司）扫描受检眼视盘和黄斑区，均由同一名经验丰富的眼科医师操作。模式扫描，范围 ，共 次，选取最佳清晰度图像进行保存。借助 程序（版本号：）计算视盘周围视网膜神经纤维层（）厚度，包括整体、上半部分、下半部分。神经节细胞复合体（）模式扫描，以黄斑中心凹为中心的 区域，软件测量黄斑 厚度，包括整体、上半部分、下半部分。厚度指从内界膜至内丛状层边界的黄斑各层总平均厚度，上半部分、下半部分以水平子午线为分界的黄斑上半、下半部分区域 。厚度指在视盘中心 直径范围内的 厚度。患者外周血 水平检测采用 法检测患者外周血 ，采集 组患者空腹肘静脉全血 ，共 管，置于抗凝管（乙二胺四乙酸二钾）中，其中 管采用 裂解液提取总蛋白，凝胶上样、电泳分离，转移至 膜，加入 脱脂奶粉室温封闭 ，缓冲液洗涤 次，加入兔抗人 （，英国 公司）一抗，孵育过夜，缓冲液洗涤 次，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗（，武汉博士德生物工程公司）室温孵育 ，洗涤 次，加入 发光液，凝胶成像系统采集图片，以 为内参，分析蛋白条带灰度值，计算 相对表达量。患者外周血 水平检测采用荧光定量聚合酶链式反应（）法进行检测。全血中加入细胞裂解液，异硫氰酸胍 酚 氯仿法抽提总 ，采用 逆转录试剂盒（美国 科技有限公司）将 反转录成 ，并进行 扩增，以 为内参基因。扩增参数：预变性 、变性 、退火 ，延伸 ，共 个循环。以 实时定量 仪进行检测，建立 产物的熔解曲线，根据 与内参的 值计算相对表达量，以 表 示，其 中 （目的基因 内参）（对照目的基因 对照内参）。统计学处理所有数据均采用 软件进行统计学分析，符合正态分布的计量资料以 珋 表示，多组间比较采用 检验，组间两两比较采用 检验。计数资料以例数（）表示，采用 检验。采用 相关性分析法评估患者外周血 与 以及受检眼神经组织病变相关指标 、厚度的相关性。检验水准：。结果 组患者一般资料比较组患者性别、年龄、糖尿病病程、比较差异均无统计学意义（均为 ）（表 ）。表 组患者一般资料比较组别性别（男 女）例年龄 岁糖尿病病程 年 组 组 组 组患者外周血 、水平比较组患者外周血 、差异均有统计学意义（均为 ）。其中 组患者外周血 均高于 组、组，而 均低于 组、组（均为 ）。组与 组患者外周血 、差异均无统计学意义（均为 ）（表 ）。患者外周血 与 的相关性 相关性分析显示，患者外周血 眼 科新进展 年 月第 卷第 期 ：与 呈负相关性（，）（图 ）。表 组患者外周血 、水平比较组别 组 组 组 组患者受检眼神经组织病变相关指标比较组患者受检眼的整体、上半部分、下半部分 厚度以及 厚度差异均有统计学意义（均为 ）。随着疾病严重程度的增加，厚度以及 厚度均呈降低趋势，组患者的整体、上半部分、下半部分 厚度以及 厚度均高于 组（均为 ）；组患者以上指标均高于 组（均为 ）（表 ）。图 患者外周血 与 的相关性表 组患者受检眼神经组织病变相关指标比较组别 厚度 整体上半部分下半部分 厚度 整体上半部分下半部分 组 组 组 患者外周血 与受检眼神经组织病变相关指标的相关性 相关性分析结果显示，患者外周血 分别与受检眼的整体、上半部分、下半部分 厚度（分别为 、）以 及 厚 度（分 别 为 、）均呈负相关性（均为 ）。讨论目前普遍认为 的发生机制主要为持续的高血糖状态激活多元醇途径、氧化应激反应，促进细胞因子、生长因子的表达，进而诱导血管功能障碍、神经炎症 。随着 进展，进一步加重视网膜毛细血管损伤，降低血管灌注、增加血管通透性等，并引起局部缺血、缺氧以及血管新生，最终进展至增生型 。近年来，随着神经血管概念的引入，有研究证实糖尿病患者眼底病变过程中视网膜神经组织病变也同步发生，在微血管相关临床征象前视网膜神经组织病变已经发生 ，尽早检测 患者视网膜神经对于评估疾病进展、治疗具有重要指导意义。厚度反映视网膜轴突变化情况，厚度反映视网膜轴突、树突以及细胞体变化情况 。本研究中 例 型糖尿病患者，其中 患者 例、患者 例、患者 例，随着视网膜病变严重程度加重，组患者受检眼的整体、上半部分、下半部分 厚度以及 厚度均呈降低趋势，表明 厚度以及 厚度可反映 患者严重程度，与尹玉如等 研究结果一致，即糖尿病患者黄斑 、厚度异常增厚。等 研究证实，糖尿病患者的 、厚度与 严重程度呈负相关性，结合本研究结果进一步证实，检查 、厚度可有效监测视网膜神经病变，有助于临床筛查 患者神经损伤。作为共价闭合环状转录物，已成为基因表达的新型调节因子，如可通过沉默 而调节 的表达，从而在青光眼患者中发挥视神经保护作用，在 、糖尿病性黄斑水肿等多种视网膜缺血性神经变性疾病中高表达，参与调控糖尿病诱导的视网膜周细胞病变以及血管功能 。在人类胰岛中表达量较多，与多种糖尿病相关疾病（妊娠糖尿病、）的发生密切关联，上调 表达会活化 巨噬细胞，进而损伤胰岛，上调 表达则会引起高血糖、胰岛素抵抗。有研究表明 ，基因高表达会增加代谢性疾病发生风险，而本研究中随着 患者视网膜病变严重程度加重，外周血 呈增加趋势，进一步表明 与 进展密切关联。同时，相关性分析结果显示，外周血 与受检眼的整体、上半部分、下半部分 厚度以及 厚度呈负相关性，表明 参与调控 患者的神经组织病变过程。等 研究证实，基因与 ：眼 科新进展 年 月第 卷第 期 糖尿病的发生、发展密切关联，且其表达水平与空腹血糖呈正相关性，与 呈负相关性，结合本研究结果进一步证实，可通过影响血糖水平而参与 的病理过程，可作为治疗 的潜在靶标。参与糖尿病的发病过程 ，通过诱导胰岛 细胞功能缺陷，进而诱发高血糖，且表达水平与空腹血糖呈正相关性。因此，基于以上研究可认为 可能通过影响血糖水平而参与 的发生、发展，并诱发神经组织病变。在高血糖患者中，血糖控制效果越差，氧化应激越强，则 越低，缺失或者表达下降可引起糖尿病患者血管内皮细胞损伤，从而加重疾病进展 。有研 究 通 过 荧 光 素 酶 报 告 载 体 鉴 定 证实 ，可靶向调控 ，在 细胞系中，上调 表达可抑制细胞表达 ，进而诱导细胞发生上皮 间质转化，参与增生性玻璃体视网膜病变的发病过程，也能通过靶向 的表达，从而调控高糖引起的人视网膜色素上皮细胞凋亡，以上研究表明，容易受到体内核酸物质的调控，且与糖尿病、视网膜病变的发生密切关联。本研究结果显示，组患者的 均低于 组、组（均为 ），表明 患者血糖控制效果越差，氧化应激越强，更容易发生视网膜神经病变。同时，相关分析结果显示，患者外周血 与 呈负相关性，推测认为 可能通过下调 表达而增加血管内皮细胞损伤程度，进而加重氧化应激反应，引起视网膜血管功能障碍以及神经炎症，最终参与 患者的神经组织病变过程。本研究仍存在不足之处，其中对于 调控 患者神经组织病变的具体过程仍需通过机制研究进一步论证，后 续 会 开 展 双 荧 光 素 酶 实 验 验 证 与 的靶向关系，并借助细胞、分子水平实验进行探讨。结论随着 严重程度的增加，患者外周血 呈增加趋势，且与外周血 、黄斑 厚度以及 厚度呈负相关性，其作用机制可能为 负性调控 表达，从而参与 的发生、发展。参考文献 ，（）：，：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：赵鑫，杨静，辛向阳 基于 调控的 信号通路在糖尿病视网膜病变发生发展中的作用 眼科新进展，（）：，（）：尹玉如，焦万珍，赵博军 糖尿病患者视网膜神经组织变性及微血管损伤研究 中华眼底病杂志，（）：，（）：，（）：，?，（）：，（）：李玉平，王伶俐，陈震，宋辉，姚为华，刘易 通过靶向 轴诱导视网膜神经变性的分子机制 眼科新进展，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：王艳婷，金学民，李晓华，赵朝霞 在转化生长因子 诱导的人视网膜色素上皮细胞上皮 间质转化中的促进作用 中华实验眼科杂志，（）：，（）：眼 科新进展 年 月第 卷第 期 ：，（）：，：，：【】（）（）（），（）（），（）（），（）（）（）（），（），；（）（）（），；，（），（），（），【】；：眼 科新进展 年 月第 卷第 期