岛津型高效液相色谱仪的图文操作基础手册.doc

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪图文操作手册贮液瓶DGU-20A3真空脱气机LC-20AT溶液传播单元CBM-20A系统控制器SPD-M20A二极管阵列检测器SIL-20A自动进样器RF-10AXL荧光检测器CTO-20A柱温箱手动进样器Varian380-LC蒸发光检测器一、 岛津LC-20AT型高效液相色谱仪：岛津LC-20AT型高效液相色谱仪二、 功能和用途：1、 功能：本仪器采用高压梯度通过高压输液泵分别独立精准控制流量、调节溶剂浓度比例，实现高效率、高精度混合；即配备了可提供全波长三维信息二极管阵列检测器，全新光路设计与有效梯形狭缝池设计保证了高辨别率和高敏捷度；也配备了敏捷度更高、选取性更好荧光检测器；还配备了具备高敏捷度、检测范畴更广蒸发光检测器。2、 用途：本仪器可以高效地分离分析高沸点、热不稳定有机及生化试样；二极管阵列检测器对大某些有机化合物有响应；荧光检测器可以检测产生荧光物质，对如多环芳烃、维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；蒸发光散射检测器对碳氢化合物、表面活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油和挥发性低于流动相任何样品、不含发色团化合物有响应。三、 操作环节：1、 色谱柱安装本仪器配备了SPD-M20A二极管阵列检测器、RF-10AXL荧光检测器和Varian380-LC蒸发光散射检测器。样品分析前一方面要拟定用什么检测器，然后把色谱柱连接到所需检测器上。2、 开机a、 一方面打开UPS，然后依次打开DGU-20A3真空脱气机、LC-20AT溶液传播单元（泵）、CBM-20A系统控制器、所选用检测器、自动进样器SIL-20A，CTO-20A柱温箱电源打开。（HPLC组件电源开关大都在仪器右下角）b、 将两个泵上部中间黑色旋钮逆时针旋转90180度，按purge键进行自动脱气，普通设立为3分钟；然后按自动进样器软键盘purge键，对自动进样器上样品进行脱气，普通为25分钟。c、 双击Lc solution图标。输入顾客名Admin，点击OK。单击系统配备图标，浮现系统配备对话框。单击自动配备，仪器自动将能找到仪器配备，也可以用图示中蓝色和红色箭头分别添加和去掉配备仪器。需要注意是，仪器优先选取自动进样器，如果需要手动进样，需将自动进样器去掉。单击仪器（通讯设立），选取对的仪器类型，然后单击自动获取IP地址。单击系统控制器，浮现系统控制器对话框，继电器四个选项需要设立为start。d、 单击仪器开关按钮，将软件与仪器连接e、 仪器参数视图里面，简朴设立里面，模式选取二元高压梯度，设立总流速，泵B浓度，时间，柱温箱温度，时间程序。然后选取下载，跑基线。单击绘图，可以看查看基线。3、 办法编辑a、下图中看到仪器参数视图，选取高档，然后依次变化其中参数。如果仪器为PDA检测器时，则按如下进行设立。数据采集：LC停止时间为0.01。采集时间打勾，结束时间为分析样品时间。LC时间程序：如果等度洗脱，则设立如图中0.01 controller stop。进行梯度洗脱时需要如图所示进行设立。单击绘制曲线，可查看梯度曲线。泵：模式选取二元高压梯度，设立泵B浓度。最大压力依照色谱柱最大压力进行设立。PDA：普通同步选取D2和W等，然后输入开始和结束时波长。柱温箱：设立柱温箱温度。控制器：将四个时间所有打勾。自动进样器：不需要重新设立。自动排气：不需要重新设立。办法设立完后，选取文献，另存为办法文献。当仪器稳定，基线稳定后，可如下载办法，进行样品分析。b、如果选取荧光检测器，一方面需要色谱柱接荧光检测器，打开荧光检测器电源，系统配备自动配备荧光检测器。仪器参数设立某些检测器需要输入激发光和发射光波长。其她同PDA检测器。c、4、如果选取蒸发光检测器，将色谱柱连接蒸发光散射检测器。打开Varian-380电源开关，打开Varian ELSD Control软件办法编辑器单击Method，出来一对话框，Use my own instrument sett，则可以变化参数，设立新办法。也可以不打勾，直接选取已经设立好办法。仪器启动时即处在STANDBY模式，加热块关闭，雾化气流速设定为较低1.2SLM。Standby模式下顾客可设定仪器参数（雾化气流速，雾化温度，蒸发温度），然后将模式切换至RUN。Run模式是正常工作模式，仪器处在完全设定控制状态。在加热或降冷却程中，仪器会显示“NOT READY”，表白仪器未达设定条件。当仪器平衡完毕，会显示“READY”。办法使用打开机器后，选取适当办法。将工作模式设定为RUN，使仪器加热平衡。打开LC solution 软件，自动配备选取AD2，即选取了蒸发光检测器。其他设立同PDA检测器。仪器平衡后检察基线。在洗脱液未接入时噪音应低于0.2mv，这表白雾化气干净干燥。基线毛刺普通是由雾化气中粒子或水分导致。引入洗脱液并待其平衡15min。再次检查基线，应不超过1mv，如是为纯水应不超过0.25mv，纯有机溶剂也应不超过1mv。缓冲体系和稳定剂可明显增长噪音。然后进行样品分析。4、 运营a、 单次运营单击单次运营，浮现对话框，选取已经编辑办法，输入文献名，输入样品瓶，样品架和样品体积，单击拟定可以进行样品分析。点击辅助栏停止或者停止快捷键，可以将分析停止。b、 批解决运营单击批解决，打开二级菜单，单击向导，可以新建，也可以附加一种批解决文献。选取办法文献，输入开始样品瓶，样品架，进样体积。下一步。输入样品组数，选取原则品和未知。下一步。输入原则品名字，ID，校准级别，数据文献名。下一步。输入未知品名字，ID，数据文献名。下一步。下一步，完毕。浮现批解决文献。另存批解决文献。单击批解决开始，开始分析样品。5、 关机样品分析完毕，按照色谱柱冲洗规定进行冲洗。冲洗完后，仪器参数视图，将总流速设为0，下载。然后单击仪器开关，关闭软件，最后将电源关掉，关闭UPS。6、 积分单击再解析，打开已经完毕数据，会看到数据、办法、报告格式、批解决、所有文献形式。点击分析图标，选取多色谱，提取所要波长下峰。在积分页面，选取通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，普通选取面积选项。辨认页面，运用时间窗或时间带限制峰。也可以选取积分页面程序，进行手动积分。如果不理解办法，可以单击协助。点击拟定，分析完毕。成果在视图，峰表内查看。7、 原则曲线a、外标法定量单击向导，打开化合物表向导窗口，选取通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，普通选取面积选项，下一步。选取要标定峰，下一步。选取外标法。计算面积。输入校准级别，曲线拟合类型，普通选取线性。零点，一种校准级别，选取强制通过，其他选取未强制。加权办法无。输入浓度，下一步。辨认，选取时间窗或者时间带。普通来说保存时间小用时间窗。下一步。定义峰名字和标样浓度。完毕。保存办法。单击校准，双击已经建立办法。然后将标样图谱拖动到左下角数据文献级别中，有几种级别，则相应拖到相应级别中。则自动生成原则曲线。另存为办法。b、内标法定量定量办法为内标法，拟定内表物峰。8、 运用原则曲线计算样品浓度打开需要计算谱图，文献选取需要加载办法参数，查看峰表可以当作果。9、 报告编辑单击报告模板，拖动到报告模板中即可，然后另存为报告格式文献。显示报告，将数据拖动到报告模板中即显示报告。四、 注意事项：1、 高压恒流泵维护：泵密封圈是最易磨损部件，密封圈损坏可引起系统许多故障，要注意保养和定期更换。应采用下列办法以延长使用寿命：绝对不容许在没有流动相或流动相还没有进入泵头状况下启动泵而导致柱塞杆干磨。每天使用后应将整个系统管路中缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲溶液或有机溶剂中。长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。要用HPLC级试剂。 输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。要注意防止管路阻塞导致压力过高而损坏仪器。压力下限应设立在0.51MPa，以防止储液器中流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞干磨。2、 流动相使用：必要使用HPLC级或相称于该级别流动相，并先经0.45m薄膜过滤。过滤后流动相必要通过充分脱气，以除去其中溶解气体O2等，如不脱气易产气愤泡、基线噪声增长、敏捷度下降，甚至无法分析。如果管路中使用peek树脂部件，不可使用浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜等试剂。特别注意HPLC使用过后系统清洗：具有缓冲溶液流动相清洗办法：a、先用100%纯水冲洗，打开排放阀，用35ml/min流量，洗20min左右后停泵，重要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大空间清洗。b、再用95/5甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min流量，洗3060min后停泵，重要是用水清洗整个系统中盐，用5%甲醇重要是为了保护色谱柱。c、最后用100%甲醇清洗整个系统，用1ml/min流量，洗2min左右，然后关机。 如果流动相中不含盐，则只使用上述第三步清洗即可。3、 更换流动相：在分析过程中，有时需要更换流动相进行分析。一定要注意前一种使用流动相和所更换流动相是不是可以相溶。如果前一种使用流动相和所更换流动相不可以相溶，要采用一种与这二种需更换流动相都能相溶流动相进行过滤、清洗。较为惯用过滤流动相为异丙醇，但实际操作中要看详细状况而定，原则就是采用与这二种需更换流动相都能相溶流动相。普通清洗时间为3040分钟，直至系统完全稳定。 更换流动相时，要用100ml烧杯，放入需要更换流动相，将虑头放入烧杯中，上下重复冲洗，然后将排液阀逆时针180度，purge。然后将排液阀顺时针180度。储液器注意事项： 保持流动相储液器清洁是保证仪器正常使用核心。要使用HPLC级溶剂，对试剂具有缓冲盐及非HPLC级流动相一定要用0.45m过滤器除区去其中微量物质。4、 色谱柱使用：a、使用前色谱柱储存液无特殊阐明，均为评价报告所示流动相。在使用前，一定要注意色谱柱储存液与要分析样品流动相与否互溶。在反相色谱中，如用高浓度盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10左右低浓度有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中盐在高浓度有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。b、样品样品也要尽量清洁，可选用样品过滤器或样品预解决柱（SPE）对样品进行预解决；若样品不便解决，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有溶剂和样品应严格脱水。c、色谱柱保存如色谱柱要长时间保存，必要存于适当溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后纯正己烷中，离子互换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送堵头堵上。储存温度最佳是室温。d、色谱柱再生 由于色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数增长，会浮现色谱峰高减少，峰宽加大或浮现肩峰现象，普通来说也许是柱效下降。（1）、反相柱再生：依次采用2030倍色谱柱体积甲醇/水=10/90 （V/V）、乙腈、异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完毕后再以相反顺序冲洗色谱柱。（2）、正相柱再生：依次以20-30倍色谱柱体积正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必要严格脱水。5、色谱柱在使用过程中易浮现问题和解决办法 色谱柱在使用中最常用问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增长，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），也许因素有如下几点：a、色谱柱头过滤筛板堵塞或污染；b、色谱柱头填料被样品污染；c、色谱柱内缓冲液中盐遇到高浓度甲醇或其她有机溶剂，形成结晶析出；d、流动相PH值过大或过小使固定相构造破坏或溶解。解决办法如下：a、如拟定是色谱柱头过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。b、如拟定色谱柱头填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染填料，用相似柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。c、如拟定是盐结晶，用10%甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐所有溶解，再换高浓度甲醇。d、如果因PH值使用不当，很难恢复。6、检测器为了节约检测器灯使用寿命，在暂时不使用时可在不关机状况下，只把灯关掉（建议：最佳在需要关灯时间4小时以上才关灯，由于频繁开关灯，同样会缩短灯使用寿命）。