多功能酶标仪的操作作业规程.doc

多功能酶标仪SpectraMax i3原则操作规程Standard Operation of SpectraMax i3部门Department签名/日期Signature/Date起草人：Prepared by樊小川， Xiaochuan FanQC审核人：Reviewed by黄思佳， Sijia HuangQC审核人：Reviewed by褚夫兰， Fulan ChuQA批准人：Approved by张伯彦， Boyan Zhang质量负责人颁发部门Issued by质量保证部-QA执行日期Effective Date替代文献Replaced ForVersion 00复审日期Review Date分发部门Distributed toQA，QC1 目建立多功能酶标仪SpectraMax i3原则操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪检测时操作。2 合用范畴 本规程合用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3操作3 术语或定义多功能酶标仪：指功能较强、精度较高单体台式酶标仪，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FL)、时间辨别荧光（TRF)、化学发光（Lum)等。4 责任4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪寻常及定期维护，浮现故障时负责联系厂家维修，保证运营正常。4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用记录，且使用后及时清理台面，保持仪器干净。5 EHS规定N/A6 程序6.1 仪器安装仪器与电脑连接完毕并连接电源后来，按仪器背面按钮可以直接启动仪器，通过几分钟后仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源状况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。6.2 SoftMax Pro软件操作基本环节 6.2.1 打开软件点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，浮现 Plate Setup Helper对话框。若无则点击图标。6.2.2 连接仪器点击 Choose a diffecient instrument，打开Instrument Connection对话框， 在 “Availible Instruments”菜单中选取仪器连接线与电脑所接串标语(COM)。选取所购买酶标仪型号SpectraMax i3或添加模块卡盒型号。最后点击“OK”键连接。6.2.3 仪器检测参数设定点击图标后浮现 “Settings”对话框，对话框最上方浮现Read Mode（读板模式）和Read Type（读板类型）两个选项，读板模式有ABS(光吸取)、FL(荧光强度)、LUM(化学发光)和TRF(时间辨别荧光)，读板类型有终点检测（Endpoint）、动力学（Kinetic）、单孔扫描（Well Scan）和光谱扫描（Spectrum）四种。使用者依照实验需要选取适当读板模式和读板类型。对话框下方左侧列表有如下选项，从上往下依次用鼠标点中选项，并在右栏中选取相应参数设定。1）Wavelengths（波长）可以选取检测几种波长，光吸取模式最多为6 种，其她模式均为4 种。a) 对于光吸取模式，可以在 Lm1 背面框中填入检测所用波长。b) 对于荧光强度，时间辨别荧光和荧光偏振模式，可以在2个框中分别填入激发波长和发射波长。Cutoff 普通选为自动(Auto)。c) 对于化学发光模式，普通使用All。当同步检测不止一色化学发光时候可填入相应检测波长。2） Plate Type（板型）对于不同实验可以选取6-384 孔板及其详细板型。3） Read Area （读板区域）可用鼠标先选中起始孔按住不放，进行拖曳直到选中微孔板上所有需要检测孔。4） PathCheck（光径校正）仅用于光吸取模式，即将微孔板检测得到原始光吸取值通过参比校正到1cm 光径长度时光吸取值。可选取“Water Constant”(以水做参比)和“Cuvette Refence”(在比色皿中加入相应溶液预读一次作为参比)。普通状况下可以不用校正。5） shake选中Before First Read 后可以选取读板之前震板，可选取0-999 秒。普通不选取。6） Speed Read可加速读数速度，为精确所读数值，默认不加速，普通不选取。7） More SettingRead order 可按实验规定选取 按列（Column ）、排（Row ）或者孔（Well）扫描读数。所有设定完后按对话框右下角“OK”确认，回到Plate Setup Helper对话框。6.2.4 检测样品分组设定按键后浮现 Template Edite对话框，先用鼠标拖曳选中要进行编辑孔，被选中空会变黑，然后点击Groups 栏中下拉菜单选取所要进行分组。详细设定环节如下：1) 设定本底参照(BLANK)进入上述界面后，点击Assignment Option栏中下拉菜单选中“Plate blank”，则其她数据成果均显示为扣除本底平均值成果。2) 设定原则样品(Standards) 当有一系列已知浓度梯度样品做为原则样品时，点击Groups 栏中“Standards”，再点击“assign”进行标记，继而点击“series”进行设定，新浮现对话框中“Start from”中“Top to Bottom”、“Bottom to Top”、“Left to Right”或“Right to Left”表达该组内样品排列顺序，依照实验进行选取；右上方“pattern of Replicates”会自动显示复孔数目；下方“Starting value”表达起始样品浓度，可以在框内填入相应数值，“Step by”表达以什么方式设立浓度梯度，前面下拉框可以选取“+ 、-、*、/”，背面框内可以填入相应值，例如起始浓度是2，增长2，则选取“+”，输入“2”。设定完毕，点对话框右下角“OK”确认。在上一界面中点右边“Edit”，新对话框中“Sample Descriptor”下“Column name”依照实验状况命名，默认是“Concentration”，“Units”背面可以填入恰当浓度单位，设立好后退出“Template Edite”。3）设定未知样品(Unknowns) 对未知样品进行分组设定期，进入“Template Edite”界面，选中微孔，点击“Groups”栏“Unknowns”下“Unknowns”，若未知样品已知浓度，选“Unk-dilution”，详细设定同原则样品。4) 有各种原则样品或样品时点Groups 栏中“add”，可以添加新组，其他设立同上。 6.2.5 数据分析设定1) 在“standardCurve”进行数据分析设定，点击图标，进入Plot Edite-standardcurve进行图表设立，在该对话框中，“Grafe Title”中填入该图名称，即后来在数据计算中要引用名字。“Plot Name”中填入该条曲线名称，“X-Axis”和“Y-Axis”可以通过下拉栏选取该曲线横坐标和纵坐标所引用数据，如选取“Concentration”和“MeanValue”。在“Plot Attributes”中可选取图中每个点形状和颜色。一张图中可以有多条曲线，按“add”可在该图中增长曲线。2)“Curve Fit”右边下拉菜单可选取曲线拟合方式，如四参数方程“4-Parameter”，依照实验规定进行选取。6.2.6 设定温度仪器可以设定温度，可在室温以上加温。当启动温度控制后需使仪器微孔板插槽置于关闭状态保持所设温度，如果处在打开状态，仪器会发出报警声，然后自动关闭微孔板插槽。6.2.7 参数设立保存实验检测参数都设定完毕后，所有检测条件设定、样品类型设定、实验成果、数据分析成果等，可以另存为两种格式：1） *.sda 格式，即数据格式。该文档具有涉及参数设定，实验数据，成果分析等所有实验内容。2） *.spr 格式，即模版格式。该文档具有参数设定，分析公式等实验设定内容，可以应用于多次重复实验而使用统一模版。为避免覆盖原有数据，每次使用需新建模板或专属检测模版读数，禁止使用已保存原始检测数据作为模版。 6.2.8 运营程序1） 按 “open/close”可以控制仪器微孔板插槽打开和关闭，微孔板插槽打开后，将酶标板水平放置到微孔板插槽，点“open/close” 关闭微孔板插槽。2） 点击开始读数。读数完毕后保存文献即可。软件安装后默认顾客在做完实验后自己保存数据。如果顾客但愿每次实验检测后自动保存可以在“Save Data After Read”前打勾。6.3 成果分析 在实验结束后，自动依照所设参数进行成果分析以及曲线拟合。在成果中涉及了所读数值及曲线有关数据，内容涉及样品序号、样品数值（value）、SD （Standard Deviation）值和CV值（coefficient of variation），在曲线图下方，软件还会自动计算出曲线各种参数如EC50值等。数据分析完后，建议将其属性更改为只读，以防止误删。6.4 其她分析SpectraMax i3还涉及有关性分析等分析模块，可依照不同实验需要选用。6.5 仪器保养注意1） 有良好电源，保持 24 小时开机。2） 保持避光和干净室内环境，维持一定湿度(30%-80%)。3） 维持室内比较恒定温度，以 20-22 度为最适当。4） 合用 6-384 孔板。96 孔微孔板内每孔可检测100-300ul 溶液，最佳检测体积为200ul。 384孔微孔板内每孔可检测50-100ul 溶液，最佳检测体积为80ul。5） 检测后微孔板不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。6） 对于可见光吸取检测，使用全透明微孔板；紫外光吸取检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读用黑色底透微孔板；化学发光和时间辨别荧光，使用白色不透明微孔板。7 附件N/A8 参照或引用文献SoftMax Pro Microplate Data Acquisition and Analysis Software -Version 6 User Guide9 文献版本修改历史版本号执行日期修订因素重要修订内容00新订新订01到期复审，版本升级1、 将“多功能酶标仪SpectraMax i3操作管理程序”改为“功能酶标仪SpectraMax i3原则操作程序”；2、 增长“为避免覆盖原有数据，每次使用需新建模板或专属检测模版读数，禁止使用已保存原始检测数据作为模版”；3、 增长“数据分析完后，建议将其属性更改为只读，以防止误删”。