多功能酶标仪的操作作业规程.doc

多功能酶标仪SpectraMax i3原则操作规程
Standard Operation of SpectraMax i3

部门
Department
签名/日期
Signature/Date
起草人：
Prepared by
樊小川， Xiaochuan Fan
QC

审核人：
Reviewed by
黄思佳， Sijia Huang
QC

审核人：
Reviewed by
褚夫兰， Fulan Chu
QA

批准人：
Approved by
张伯彦， Boyan Zhang
质量负责人

颁发部门
Issued by
质量保证部-QA
执行日期
Effective Date

替代文献
Replaced For
Version 00
复审日期
Review Date

分发部门
Distributed to

QA，QC

1 目
建立多功能酶标仪SpectraMax i3原则操作程序，规范SpectraMax i3 多功能酶标仪检测时操作。
2 合用范畴
本规程合用于所有对多功能酶标仪SpectraMax i3操作
3 术语或定义
多功能酶标仪：指功能较强、精度较高单体台式酶标仪，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FL)、时间辨别荧光（TRF)、化学发光（Lum)等。
4 责任
4.1 仪器负责人负责多功能酶标仪寻常及定期维护，浮现故障时负责联系厂家维修，保证运营正常。
4.2 实验操作人员需严格按照本规程执行，保证仪器正常使用，每次用完后填写仪器使用记录，且使用后及时清理台面，保持仪器干净。
5 EHS规定
N/A
6 程序
6.1 仪器安装
仪器与电脑连接完毕并连接电源后来，按仪器背面按钮可以直接启动仪器，通过几分钟后仪器自检后就可以开始用于检测。在连有电源状况下，保持24小时开机，不要罩防尘罩以保持透气，隔1-2月关机重启一次。
6.2 SoftMax Pro软件操作基本环节
6.2.1 打开软件
点击“SoftMax Pro 6.3”图标，打开SoftMax Pro 软件，浮现 "Plate Setup Helper"对话框。若无则点击图标。
6.2.2 连接仪器
点击‘ Choose a diffecient instrument’，打开‘Instrument Connection’对话框， 在 “Availible Instruments”菜单中选取仪器连接线与电脑所接串标语(COM)。选取所购买酶标仪型号SpectraMax i3或添加模块卡盒型号。最后点击“OK”键连接。
6.2.3 仪器检测参数设定
点击图标后浮现 “Settings”对话框，对话框最上方浮现Read Mode（读板模式）和Read Type（读板类型）两个选项，读板模式有ABS(光吸取)、FL(荧光强度)、LUM(化学发光)和TRF(时间辨别荧光)，读板类型有终点检测（Endpoint）、动力学（Kinetic）、单孔扫描（Well Scan）和光谱扫描（Spectrum）四种。使用者依照实验需要选取适当读板模式和读板类型。
对话框下方左侧列表有如下选项，从上往下依次用鼠标点中选项，并在右栏中选取相应参数设定。
1）Wavelengths（波长）
可以选取检测几种波长，光吸取模式最多为6 种，其她模式均为4 种。
a) 对于光吸取模式，可以在 Lm1 背面框中填入检测所用波长。
b) 对于荧光强度，时间辨别荧光和荧光偏振模式，可以在2个框中分别填入激发波长和发射波长。Cutoff 普通选为自动(Auto)。
c) 对于化学发光模式，普通使用‘All’。当同步检测不止一色化学发光时候可填入相应检测波长。
2） Plate Type（板型）
对于不同实验可以选取6-384 孔板及其详细板型。
3） Read Area （读板区域）
可用鼠标先选中起始孔按住不放，进行拖曳直到选中微孔板上所有需要检测孔。
4） PathCheck（光径校正）
仅用于光吸取模式，即将微孔板检测得到原始光吸取值通过参比校正到1cm 光径长度时光吸取值。可选取“Water Constant”(以水做参比)和“Cuvette Refence”(在比色皿中加入相应溶液预读一次作为参比)。普通状况下可以不用校正。
5） shake
选中Before First Read 后可以选取读板之前震板，可选取0-999 秒。普通不选取。
6） Speed Read
可加速读数速度，为精确所读数值，默认不加速，普通不选取。
7） More Setting
Read order 可按实验规定选取 按列（Column ）、排（Row ）或者孔（Well）扫描读数。
所有设定完后按对话框右下角“OK”确认，回到"Plate Setup Helper"对话框。
6.2.4 检测样品分组设定
按键后浮现 ‘Template Edite’对话框，先用鼠标拖曳选中要进行编辑孔，被选中空会变黑，然后点击Groups 栏中下拉菜单选取所要进行分组。详细设定环节如下：
1) 设定本底参照(BLANK)
进入上述界面后，点击Assignment Option栏中下拉菜单选中“Plate blank”，则其她数据成果均显示为扣除本底平均值成果。
2) 设定原则样品(Standards)
当有一系列已知浓度梯度样品做为原则样品时，点击Groups 栏中“Standards”，再点击“assign”进行标记，继而点击“series”进行设定，新浮现对话框中“Start from”中“Top to Bottom”、“Bottom to Top”、“Left to Right”或“Right to Left”表达该组内样品排列顺序，依照实验进行选取；右上方“pattern of Replicates”会自动显示复孔数目；下方“Starting value”表达起始样品浓度，可以在框内填入相应数值，“Step by”表达以什么方式设立浓度梯度，前面下拉框可以选取“+ 、-、*、/”，背面框内可以填入相应值，例如起始浓度是2，增长2，则选取“+”，输入“2”。设定完毕，点对话框右下角“OK”确认。在上一界面中点右边“Edit”，新对话框中“Sample Descriptor”下“Column name”依照实验状况命名，默认是“Concentration”，“Units”背面可以填入恰当浓度单位，设立好后退出“Template Edite”。
3）设定未知样品(Unknowns)
对未知样品进行分组设定期，进入“Template Edite”界面，选中微孔，点击“Groups”栏“Unknowns”下“Unknowns”，若未知样品已知浓度，选“Unk-dilution”，详细设定同原则样品。
4) 有各种原则样品或样品时点Groups 栏中“add”，可以添加新组，其他设立同上。
6.2.5 数据分析设定
1) 在“standardCurve”进行数据分析设定，点击图标，进入‘Plot Edite-standardcurve’进行图表设立，在该对话框中，“Grafe Title”中填入该图名称，即后来在数据计算中要引用名字。“Plot Name”中填入该条曲线名称，“X-Axis”和“Y-Axis”可以通过下拉栏选取该曲线横坐标和纵坐标所引用数据，如选取“Concentration”和“MeanValue”。在“Plot Attributes”中可选取图中每个点形状和颜色。一张图中可以有多条曲线，按“add”可在该图中增长曲线。
2)“Curve Fit”右边下拉菜单可选取曲线拟合方式，如四参数方程“4-Parameter”，依照实验规定进行选取。
6.2.6 设定温度
仪器可以设定温度，可在室温以上加温。当启动温度控制后需使仪器微孔板插槽置于关闭状态保持所设温度，如果处在打开状态，仪器会发出报警声，然后自动关闭微孔板插槽。
6.2.7 参数设立保存
实验检测参数都设定完毕后，所有检测条件设定、样品类型设定、实验成果、数据分析成果等，可以另存为两种格式：
1） *.sda 格式，即数据格式。该文档具有涉及参数设定，实验数据，成果分析等所有实验内容。
2） *.spr 格式，即模版格式。该文档具有参数设定，分析公式等实验设定内容，可以应用于多次重复实验而使用统一模版。
为避免覆盖原有数据，每次使用需新建模板或专属检测模版读数，禁止使用已保存原始检测数据作为模版。
6.2.8 运营程序
1） 按 “open/close”可以控制仪器微孔板插槽打开和关闭，微孔板插槽打开后，将酶标板水平放置到微孔板插槽，点“open/close” 关闭微孔板插槽。
2） 点击开始读数。读数完毕后保存文献即可。软件安装后默认顾客在做完实验后自己保存数据。如果顾客但愿每次实验检测后自动保存可以在“Save Data After Read”前打勾。
6.3 成果分析
在实验结束后，自动依照所设参数进行成果分析以及曲线拟合。在成果中涉及了所读数值及曲线有关数据，内容涉及样品序号、样品数值（value）、SD （Standard Deviation）值和CV值（coefficient of variation），在曲线图下方，软件还会自动计算出曲线各种参数如EC50值等。数据分析完后，建议将其属性更改为只读，以防止误删。
6.4 其她分析
SpectraMax i3还涉及有关性分析等分析模块，可依照不同实验需要选用。
6.5 仪器保养注意
1） 有良好电源，保持 24 小时开机。
2） 保持避光和干净室内环境，维持一定湿度(30%-80%)。
3） 维持室内比较恒定温度，以 20-22 度为最适当。
4） 合用 6-384 孔板。96 孔微孔板内每孔可检测100-300ul 溶液，最佳检测体积为200ul。 384孔微孔板内每孔可检测50-100ul 溶液，最佳检测体积为80ul。
5） 检测后微孔板不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。
6） 对于可见光吸取检测，使用全透明微孔板；紫外光吸取检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读用黑色底透微孔板；化学发光和时间辨别荧光，使用白色不透明微孔板。
7 附件
N/A
8 参照或引用文献
《SoftMax® Pro Microplate Data Acquisition and Analysis Software -Version 6 User Guide》
9 文献版本修改历史
版本号
执行日期
修订因素
重要修订内容
00

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新订
01

到期复审，版本升级
1、 将“多功能酶标仪SpectraMax i3操作管理程序”改为“功能酶标仪SpectraMax i3原则操作程序”；
2、 增长“为避免覆盖原有数据，每次使用需新建模板或专属检测模版读数，禁止使用已保存原始检测数据作为模版”；
3、 增长“数据分析完后，建议将其属性更改为只读，以防止误删”。