新疆某医院侵袭性念珠菌感染的菌种分布、药物敏感性及耐药基因初步分析.pdf

论著新疆某医院侵袭性念珠菌感染的菌种分布、药物敏感性及耐药基因初步分析张松迪 王晓东 艾柯代玉苏甫 哈地利亚哈斯木 帕丽达阿布利孜(新疆医科大学第一附属医院皮肤科,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 1)【摘要】目的 了解新疆某医院侵袭性念珠菌感染的菌株分布、药敏特征,探讨菌株对唑类抗真菌药的耐药机制。方法 对分离自临床诊断深部真菌病患者的1 2 5株菌行形态学和分子生物学鉴定,分析念珠菌菌种分布特点、对9种抗真菌药的体外敏感性以及对唑类药物耐药菌株行E R G 1 1和P D R 1基因测序分析。结果 鉴定成功的1 1 1株酵母菌株中,分离率在前三位的菌种次为白念珠菌(5 0.4 5%)、光滑念珠菌(1 8.0 2%)和热带念珠菌(1 5.3 2%)。药敏结果显示多数菌株对两性霉素B、5-氟胞嘧啶和棘白菌素类药物敏感,2株光滑念珠菌菌株对棘白菌素类药物耐药。白念珠菌对唑类药物体外敏感性较好,泊沙康唑和伏立康唑对光滑念珠菌和热带念珠菌的体外抑菌活性较低(6 0%)。3 3株唑类耐药念珠菌(6株白念珠菌、1 4株光滑念珠菌、1 1株热带念珠菌、1株克柔念珠菌和1株近平滑念珠菌)中有9株存在E R G 1 1基因错义突变,所有唑类耐药光滑念珠菌均存在PD R 1基因错义突变。结论 侵袭性念珠菌感染的主要致病菌为白念珠菌;棘白菌素类、两性霉素B、5-氟胞嘧啶对念珠菌整体的体外抑菌活性较好,唑类药物对光滑念珠菌和热带念珠菌的抑菌活性较低;念珠菌E R G 1 1和P D R 1基因突变可能与唑类耐药相关。【关键词】念珠菌;菌种分布;药敏特征;E R G 1 1基因;P D R 1基因;突变【中图分类号】R 5 1 9.3 【文献标志码】A 【文章编号】1 6 7 3-3 8 2 7(2 0 2 3)1 8-0 4 9 3-0 8P r e l i m i n a r y a n a l y s i s o f s t r a i n s d i s t r i b u t i o n,d r u g s u s c e p t i b i l i t y c h a r a c t e r i s t i c s a n d r e s i s t a n c e g e n e o f i n v a s i v e C a n d i d a i n f e c t i o n s i n a h o s p i t a l i n X i n j i a n gZ HAN G S o n g d i,WANG X i a o d o n g,A I K E D A I Y u s u f u,HA D I L I YA H a s i m u,P A L I D A A b u l i z i(D e p a r t m e n t o f D e r m a t o l o g y,t h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m q i,R e g i o n 8 3 0 0 1 1,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e d i s t r i b u t i o n o f s t r a i n s,d r u g s u s c e p t i b i l i t y c h a r a c t e r i s t i c s,a n d a z o l e r e s i s t a n c e m e c h a n i s m s o f i n v a s i v e C a n d i d a i n f e c t i o n s i n a h o s p i t a l i n X i n j i a n g.M e t h o d s 1 2 5 s t r a i n s i s o l a t e d f r o m c l i n i c a l l y d i a g n o s e d i n v a s i v e f u n g a l i n f e c t i o n s p a t i e n t s w e r e i d e n t i f i e d b y f u n g a l m o r p h o l o g y a n d m o l e cl a r b i o l o g y t o a n a l y s e t h e d i s t r i b u t i o n o f C a n d i d a i s o l a t e s,t h e s u s c e p t i b i l i t y c h a r a c t e r i s t i c s o f 9 a n t i f u n g a l d r u g s,a n d s e q u e n c i n g o f E R G 1 1 a n d P D R 1 g e n e i n a z o l e-r e s i s t a n t/n o n-w i d e-t y p e(NWT)C a n d i d a i s o l a t e s.R e s u l t s O f t h e 1 1 1 y e a s t s t r a i n s s u c c e s s f u l l y i d e n t i f i e d,t h e t o p t h r e e w e r e C a n d i d a a l b i c a n s(5 0.4 5%),C a n d i d a g l a b r a t a(1 8.0 2%)a n d C a n d i d a t r o p i c a l i s(1 5.3 2%).M o s t f u n g a l i s o l a t e s w e r e s u s c e p t i b l e t o a m p h o t e r i c i n B,5-f l u o r o c y t o s i n e a n d e c h i n o c a n d i n s,a n d o n l y t w o s t r a i n s o f C.g l a b r a t a w e r e r e s i s t a n t t o e c h i n o c a n d i n s.A z o l e s h a d g o o d i n v i t r o s u s c e p t i b i l i t y t o C.a l b i c a n s,w h i l e t h e a n t i f u n g a l a c t i v i t i e s o f p o s a c o n a z o l e a n d v o r i c o n a z o l e a g a i n s t C.g l a b r a t a a n d C.t r o p i c a l i s w e r e l o w(6 0%).M i s s e n s e m u t a t i o n s o f E R G 1 1 g e n e w a s f o u n d i n 9 o f 3 3 s t r a i n s o f a z o l e-r e s i s t a n t C a n d i d a s t r a i n s(6 C.a l b i c a n s s t r a i n s,1 4 C.g l a b r a s t r a i n s,1 1 C.t r o p i c a l i s s t r a i n s,1 C.k r u s e i s t r a i n a n d 1 C.p a r a p s i l o s i s s t r a i n),a n d m i s s e n s e m u t a t i o n s o f P D R 1 g e n e w a s f o u n d i n a l l a z o l e-r e s i s t a n t C.g l a-b r a.s t r a i n s.C o n c l u s i o n C.a l b i c a n s i s t h e p r e d o m i n a n t c a u s a t i v e a g e n t o f i n v a s i v e C a n d i d a i n f e c t i o n s.E c h i n o c a n d i n s,a m p h o t e r i c i n B,a n d 5-F C s h o w g o o d i n v i t r o a n t i f u n g a l a c t i v i t y a g a i n s t C a n d i d a i s o l a t e s,a n d a z o l e s a r e l e s s e f f e c t i v e a-g a i n s t C.g l a b r a t a a n d C.t r o p i c a l i s;a z o l e r e s i s t a n c e m a y b e a s s o c i a t e d w i t h t h e m u t a t i o n s o f E R G 1 1 a n d PD R 1 g e n e.基金项目:国家自然科学基金(8 1 9 6 0 3 6 6);新疆维吾尔自治区自然科学基金(2 0 2 1 D 0 1 E 3 0);自治区重点研发计划项目(2 0 2 1 B 0 3 0 0 1-3)作者简介:张松迪,女(汉族),硕士,住院医师.E-m a i l:6 0 2 1 2 6 4 6 9q q.c o m通信作者:帕丽达阿布利孜,E-m a i l:p a l i d a e a l i y u n.c o m394 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6【K e y w o r d s】C a n d i d a;s t r a i n s d i s t r i b u t i o n;d r u g s u s c e p t i b i l i t y c h a r a c t e r i s t i c s;E R G 1 1 g e n e;P D R 1 g e n e;m u t a t i o nC h i n J M y c o l,2 0 2 3,1 8(6):4 9 3-5 0 0 随着糖皮质激素、抗生素、介入性操作技术的广泛应用以及老龄化、免疫受损人群数量增多,侵袭性真菌感染的发病率呈明显上升趋势。侵袭性念珠菌病是最常见的侵袭性真菌感染,死亡率达5 0%左右,已成为危重症患者面临的巨大威胁1。由于日渐广泛的预防性和经验性应用抗真菌药,菌株的耐药现象日趋严峻,特别是多重耐药“超级真菌”耳念珠菌的出现已引起了全世界范围的密切关注2。由于侵袭性念珠菌病的流行病学和耐药情况存在地域差异,本文将调查分析本院侵袭性念珠菌感染分离菌株的流行分布情况以及耐药特点,并在此基础上探讨真菌耐药的分子机制,以期为当地侵袭性真菌病的临床诊治提供科学依据。1 材料与方法1.1 标本来源收集2 0 2 2年6月2 0 2 3年6月新疆医科大学第一附属医院确诊为侵袭性真菌病住院患者的无菌体液、分泌物、支气管肺泡灌洗液、痰液等标本中的菌株,共计1 2 5株。剔除同一患者同一部位重复送检的同种菌株以及首次培养阳性前一周内接受抗真菌治疗患者的分离菌株。1.2 设备与试剂S e n s i t i t e r Y e a s t O n e YO 1 0真 菌 药 敏 板(T h e r m o F i s h e r公 司);E z u p柱 式 真 菌 基 因 组 D NA 抽提试剂盒和聚合酶链反应试剂盒购自上海生工生物工程有限公司;P C R引物的合成及产物双向测序委托上海生工生物工程有限公司。P C R仪(美国A B I公司)、高速离心机(湖南湘仪实验仪器开发有限公司)、凝胶成像仪(上海复日科技有限公司)、电泳仪(北京六一仪器厂)。1.3 方法菌种培养及鉴定 所有标本接种于显色培养基(法国科玛嘉)上并置于3 5 培养箱中培养12 d,观察菌落形态及颜色进行形态学鉴定,并对菌株核糖体D NA内转录间区(i n t e r n a l t r a n s c r i b e d s p a c e,I T S)测序进行分子生物学鉴定。抗真菌药体外敏感性检测 按照 S e n s i t i t e r Y e a s t O n e YO 1 0真菌药敏板说明书进行操作,测定菌株对药敏板上所包被的9种抗真菌药(氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、卡泊芬净、阿尼芬净、米卡芬净、两性霉素B、5-氟胞嘧啶)的最低抑菌浓 度(m i n i m a l i n h i b i t c o n c e n t r a t i o n,M I C)。药敏结果依据美国临床和实验室标准化协会最新文件3的临床折点(c l i n i c a l b r e a k p o i n t s,C B P s)判读,没有临床折点的参考流行病学界值(e p i d e r m i-o l o g i c a l c u t o f f v a l u e s,E C V s)4来判读。选择近平滑念珠菌AT C C 2 2 0 1 9、克柔念珠菌AT C C 6 2 5 8为质控菌株。目的基因的提取、扩增和测序 按照E z u p 柱式真菌基因组 D NA 抽提试剂盒说明书对分离出的3 3株唑类耐药念珠菌提取基因组D NA。依据G e n B a n k数据库中念珠菌E R G 1 1基因序列(g e n-B a n k a c c e s s i o n n o.N C_0 3 2 0 9 3.1(白 念 珠 菌);M 2 3 6 7 3.1(热带念珠菌);L 4 0 3 8 9.1(光滑念珠菌);A F 5 3 1 4 2 8.1(克柔念珠菌);NW_0 2 3 5 0 3 2 7 9.1(近平滑念珠菌)和N C_0 0 5 9 6 7.2(光滑念珠菌)的P D R 1基因设计引物来测序,引物序列见表1。表1 P C R引物T a b.1 P C R p r i m e r s引物引物序列(5 -3)扩增长度(b p)C A-E R G 1 1-FA T G G C TA T T G T T GAAA C T G T C A T T GA约1 3 0 0 b pC A-E R G 1 1-RT TAAAA C A T A C AA G T T T C T C T T T T T TC G-E R G 1 1-FA T G T C C A C T GAAAA C A C T T C约1 3 0 0 b pC G-E R G 1 1-RC T A G T A C T T T T G T T C T G GA T G T CC T-E R G 1 1-FA T G G C T A T T G T T GA TA C T G C C约1 3 0 0 b pC T-E R G 1 1-RC T AAA C C A T A C AA G T AT C T C494 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6(续表)引物引物序列(5 -3)扩增长度(b p)C K-E R G 1 1-FG G T T G T T T G T T C A T T T AA T G T G T G T约1 3 0 0 b pC K-E R G 1 1-RGAA G G G G GAAA GAAA G G GAAC P-E R G 1 1-FC GAGA T AA T C A T C AA C GAA C AT T C约8 0 0 b pC P-E R G 1 1-RAAA GA C C G C A T T GA C T A C C GA TC G-P D R 1-FG G T AAA G T C A T T C T T T A G C T A C G约2 0 0 0 b pC G-P D R 1-RT A C A G G C T A T G C A C A C T G T C T注:C A为白念珠菌;C G为光滑念珠菌;C T为热带念珠菌;C K为克柔念珠菌;C P为近平滑念珠菌。P C R反应总体系为2 5 L:上下游引物各1 L,d NT P(m i x)1 L,T a q酶0.2 L,P C R缓冲液2.5 L,d d H2O 1 8.3 L。P C R产物经1%凝胶电泳观察结果。P C R反应参数:预变性:9 4 5 m i n;扩增:9 4 变性3 0 s、5 5 退火3 0 s、7 2 延伸6 0 s,共3 5次循环扩增;终延伸:7 2 8 m i n;于4 下保存。由上海生工生物工程有限公司对纯化后的P C R产物采用S a n g e r法行双向测序。利用S n a p G e n e 4.1.8软件将扩增的产物基因序列与G e n B a n k数据库提供的基因序列进行比对以确定基因突变位点。1.4 统计学分析用S P S S 2 2和O r i g i n 2 0 1 8软件进行统计学分析和作图。计数资料以频数或构成比表示,采用?2检验或F i s h e r精确检验分析数据;P0.0 5认为差异有统计学意义。2 结 果2.1 菌种鉴定及分布情况送检样本经形态学和分子生物学鉴定后,共鉴定1 1 1株酵母菌,包括两株少见酵母菌W i c k e r h a-m o m y c e s o n y c h i s和M a g n u s i o m y c e s c a p i t a t u s以及1 0 9株念珠菌,其中最常见的是白念珠菌(5 6/1 1 1,5 0.4 5%),然后依次为光滑念珠菌(2 0/1 1 1,1 8.0 2%)、热带念珠菌(1 7/1 1 1,1 5.3 2%)和克柔念珠菌(8/1 1 1,7.2 1%),见图1、2。菌株的体液标本来源 主 要 来 自 于 痰 液(8 7,7 8.3 8%)、尿 液(1 7,1 5.3 2%)、支气管肺泡灌洗液(4,3.6%)。除了粪便和咽拭子之外,其他的体液标本中最常分离的前几位菌种依次为白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌,见表2。分离的菌株主要来自1 3个科室,主要分布于呼吸科(4 1.4 4%)、重症监护病房(I C U)(3 0.6 3%)和感染科(9.0 1%),见表3。2.2 体外抗真菌药物敏感性实验结果本研究仅对有C B P s和E C V以及例数3的菌株进行分析。多数念珠菌对两性霉素B及5-氟胞嘧 啶(5-f l u o r o c y t o s i n e,5-F C)高 度 敏 感(见 表4)。三种棘白菌素类药物对常见念珠菌均表现出良好的体外抗真菌活性,其中白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌和葡萄牙念珠菌对所有的棘白菌素类药物均敏感。热带念珠菌对阿尼芬净和米卡芬净的敏感率为1 0 0%(5.8 8%的菌株对卡泊芬净表现为中介)。光滑念珠菌对阿尼芬净、米卡芬净、卡泊芬净的敏感率分别为9 0%、9 0%和8 5%。此外,发现1株光滑念珠菌同时对3种棘白菌素类药物耐药(见表4)。念珠菌对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑的耐药率分别是7.1%、7.1%、3.6%、1 0.7%;光滑念珠菌对伏立康唑和泊沙康唑耐药率较高(7 0%和4 5%),明 显 高 于 氟 康 唑 和 伊 曲 康 唑(5%);热 带 念 珠 菌 对 泊 沙 康 唑 的 耐 药 率 最 高(6 4.7 1%),对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的耐药率分别为2 3.5 3%、1 1.7 6%和1 7.6 5%。克柔念珠菌对唑类药物的耐药率为1 2.5%(氟康唑除外)。葡萄牙念珠菌对所有唑类药物均敏感,近平滑念珠菌对泊沙康唑和伊曲康唑1 0 0%敏感,对氟康唑和伏立康唑的耐药率分别是3 3.3 3%和0(对伏立康唑有3 3.3%表现为中介),见表5。本研究中共发现3 3株念珠菌(6株白念珠菌、1 4株光滑念珠菌、1 1株热带念珠菌、1株克柔念珠菌和1株近平滑念珠菌)为唑类耐药/非野生株。2.3 目的基因测序结果对3 3株唑类耐药或非野生型念珠菌菌株所提取的目 的 基 因 进 行P C R扩 增 均 获 得 了 大 小 与D NA M a r k e r位置相符并且无非特异性产物的条带。将上述菌株的E R G 1 1和P D R 1基因测序结果594 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6 图1 菌种鉴定情况:A.念珠菌钙荧光白染色镜下形态(4 0 0),:白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌;B.念珠菌科玛嘉显色培养基鉴定,a d分别为克柔念珠菌、光滑念珠菌、白念珠菌、热带念珠菌;C.部分念珠菌I T S区基因P C R扩增琼脂糖凝胶电泳图F i g.1 I d e n t i f i c a t i o n o f t h e f u n g a l i s o l a t e s:A.M o r p h o l o g y u n d e r m i c r o s c o p e b y c a l c o f l u o r f l u o r e s c e n t w h i t e s t a i n i n g o f C a n d i d a i s o l a t e s(4 0 0),:C.a l b i c a n s,C.g l a b r a t a,C.t r o p i c a l i s a n d C.k r u s e i.B.C o l o n y m o r p h o l o g y o f C a n d i d a i s o l a t e s o n c h r o m o g e n i c m e d i u m(C HROM a g a r),a d:C.k r u s e i,C.g l a b r a t a,C.a l b i c a n s a n d C.t r o p i c a l i s.C.A g a r o s e g e l e l e c t r o p h o r e s i s f o r P C R a m p l i f i c a t i o n o f I T S r e g i o n o f C a n d i d a i s o l a t e s分别进行b l a s t比对,将起始密码子AT G中的A计作1来确定突变位点。E R G 1 1基因测序结果显示6株白念珠菌共发现两处错义突变(E 2 6 6 D 和(V 4 8 8 I);在1 1株热带念珠 菌 中 仅 有1株 发 生 错 义 突 变(Y 1 3 2 F和S 1 5 4 F),还有8株发生同义突变,另外2株未发生突变;1 4株光滑念珠菌中有两株发生错义突变,分别为K 1 0 8 N和T 2 9 3 I,其余菌株均发生同义突变;而在克柔念珠菌和近平滑念珠菌中未发现错义突变。1 4株光滑念珠菌中P D R 1基因共发现7处错义突变(D 2 4 3 N、S 7 6 P、V 9 1 I、L 9 8 S、T 1 4 3 P、F 9 4 8 S、K 4 2 5 R),见表6。图2 菌株分布情况F i g.1 D i s t r i b u t i o n o f t h e f u n g a l i s o l a t e s表2 菌株标本类型分布T a b.2 D i s t r i b u t i o n o f t h e f u n g a l i s o l a t e s b y s p e c i m e n t y p e菌株种类痰液例数构成比/%尿液例数构成比/%粪便例数构成比/%咽拭子例数构成比/%支气管肺泡灌洗液例数构成比/%合计例数构成比/%白念珠菌4 95 6.3 252 9.4 10011 0 012 5.0 05 65 0.4 5光滑念珠菌1 61 8.3 931 7.6 5000012 5.0 02 01 8.0 2热带念珠菌1 21 3.7 931 7.6 515 0.0 00012 5.0 01 71 5.3 2克柔念珠菌44.6 031 7.6 515 0.0 0000087.2 1葡萄牙念珠菌22.3 015.8 8000012 5.0 043.6 0近平滑念珠菌11.1 521 1.7 600000032.7 0乳酒念珠菌11.1 50000000010.9 0W i c k e r h a m o m y-c e s o n y c h i s11.1 50000000010.9 0M a g n u s i o m y c e sc a p i t a t u s11.1 50000000010.9 0合计8 77 8.3 81 71 5.3 221.8 010.9 043.6 01 1 11 0 0694 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6 表3 菌株科室分布T a b.3 D i s t r i b u t i o n o f t h e f u n g a l i s o l a t e s i n c l i n i c a l d e p a r t m e n t s科室例数构成比/%呼吸科4 64 1.4 4I C U3 43 0.6 3感染科1 09.0 1肝病科54.5 0心内科54.5 0康复科21.8 0全科21.8 0其他76.3 2合计1 1 11 0 0.0 03 讨 论近年来侵袭性念珠菌病的发病率逐渐上升,但治疗侵袭性真菌感染的药物种类有限,耐药菌株的出现常引起治疗失败而给临床带来了极大挑战5。随着抗真菌药物的广泛应用,侵袭性念珠菌病的致病菌种分布有一定变异和地区差异,非白念珠菌感染比例逐渐增高,在某些地区甚至已经超过了白念珠菌6。本研究收集的侵袭性念珠菌病菌种以白念珠菌为主,与我国两项大型多中心研究7-8结果一致。非白念珠菌以光滑念珠菌和热带念珠菌的分离率最高,与国外部分研究报道9-1 0一致。我国一些单中心研究1 1-1 4显示非白念珠菌的优势菌种是光滑念珠菌,但在一些大样本的多中心研究1 5-1 7中最常分离的非白念珠菌是近平滑念珠菌,可见致病菌种的分布存在一定的地域差异,可能与菌株分离标本的来源及种类、不同的患病人群以及抗真菌药物的选择应用等多种因素有关,这提示我们有必要对当地侵袭性念珠菌的流行病学进行动态监测。表4 常见念珠菌对棘白菌素、5-氟胞嘧啶和两性霉素B的体外药敏结果T a b.4 I n v i t r o d r u g s e n s i t i v i t y p r o f i l e o f c o mm o n C a n d i d a i s o l a t e s t o e c h i n o c a n d i n s,5-f l u o r o c y t o s i n e a n d a m p h o t e r i c i n B菌株种类菌株数阿尼芬净S/WT/%I/%R/NWT/%米卡芬净S/%I/%R/%卡泊芬净S/%I/%R/%5-氟胞嘧啶WT/%NWT/%两性霉素BWT/%NWT/%白念珠菌5 61 0 0001 0 0001 0 0001 0 001 0 00光滑念珠菌2 09 0559 0558 551 09 551 0 00热带念珠菌1 71 0 0001 0 0009 4.1 2 5.8 801 0 009 4.1 25.8 8克柔念珠菌81 0 0001 0 0001 0 0001 0 001 0 00葡萄牙念珠菌41 0 0001 0 0001 0 0001 0 001 0 00近平滑念珠菌31 0 0001 0 0001 0 0001 0 001 0 00合计1 0 89 8.1 5 0.9 30.9 39 8.1 5 0.9 3 0.9 39 6.3 0 1.8 5 1.8 59 9.0 70.9 39 9.0 70.9 3注:S为敏感;WT为野生型;R为耐药;NWT为非野生型;I为中介。表5 常见念珠菌对唑类的体外药敏结果T a b.5 I n v i t r o d r u g s e n s i t i v i t y p r o f i l e o f c o mm o n C a n d i d a i s o l a t e s t o a z o l e s菌株种类菌株数泊沙康唑WT/%NWT/%伏立康唑S/WT/%I/%R/NWT/%伊曲康唑WT/%NWT/%氟康唑S/WT/%I/%S D D/%R/NWT/%P白念珠菌5 68 9.2 91 0.7 19 2.8 6 3.5 73.5 79 2.8 67.1 49 2.8 60.0 07.1 40.5 8a光滑念珠菌2 05 5.0 04 5.0 03 0.0 07 0.0 09 5.0 05.0 00.0 09 5.0 05.0 00.0 1b热带念珠菌1 73 5.2 96 4.7 13 5.2 94 7.0 6 1 7.6 58 8.2 41 1.7 66 4.7 11 1.7 62 3.5 30.0 1b克柔念珠菌88 7.5 01 2.5 08 7.5 0 0.0 01 2.5 08 7.5 01 2.5 0I RI RI RI R1a葡萄牙念珠菌41 0 0.0 00.0 01 0 0.0 00.0 01 0 0.0 00.0 01 0 0.0 00.0 0近平滑念珠菌31 0 0.0 00.0 06 6.7 03 3.3 00.0 01 0 0.0 00.0 06 6.6 70.0 03 3.3 31aP0.0 1a0.0 1a0.8 2 1a0.1 2 5a注:S D D为剂量依赖性敏感,a为F i s h e r精确检验法,b为?2检验法。794 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6 表6 唑类耐药/非野生型念珠菌中相关基因突变T a b.6 M u t a t i o n s o f a z o l e r e s i s t a n c e-r e l a t e d g e n e s i n r e s i s t a n t/NWT C a n d i d a i s o l a t e s菌种基因耐药种类氨基酸变化*白念珠菌E R G 1 1 0 0 3P O S I T Z F Z VO RE 2 6 6 D 0 0 4P O S I T Z F Z VO RE 2 6 6 D 0 0 6P O S I T Z F ZE 2 6 6 D V 4 8 8 I 0 9 0P O S I T Z F ZE 2 6 6 D 1 1 8P O SE 2 6 6 D V 4 8 8 I 1 2 0P O SE 2 6 6 D热带念珠菌E R G 1 1 0 2 6P O S I T Z F Z VO RY 1 3 2 F S 1 5 4 F光滑念珠菌E R G 1 1 0 4 5P O S VO RK 1 0 8 N 1 3 8VO RT 2 9 3 I光滑念珠菌P D R 1 0 1 1P O S VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 0 4 5P O S VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 0 5 7P O S VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 0 6 4VO RV 9 1 I L 9 8 S D 2 4 3 N 0 6 5P O S VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 0 7 2P O S VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 0 7 5VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 0 9 1P O S I T Z F Z VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 0 9 7P O S VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 1 0 5P O S VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 1 1 2VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P 1 1 5P O S VO RV 9 1 I L 9 8 S D 2 4 3 N 1 3 7VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P K 4 2 5 R F 9 4 8 S 1 3 8VO RS 7 6 P V 9 1 I L 9 8 S T 1 4 3 P注:*为错义突变引起的氨基酸改变;P O S:泊沙康唑,VO R:伏立康唑,I T Z:伊曲康唑,F Z:氟康唑。从菌株分布科室来看,本研究收集的菌株主要分布于呼吸科、I C U和感染科,这可能因为这些科室患者病情相对复杂和危重,广谱抗生素的应用率较高以及侵入性操作技术和侵袭性生命支持的应用相对较多,导致机体微生态紊乱、菌群失调、免疫屏障破坏进而增加了条件致病菌感染的机率。在临床工作中我们应对这些科室重点关注、早期识别易感的高危人群,完善相应的防治措施。本研究体外抗真菌药物敏感性实验数据显示念珠菌整体对两性霉素B和5-F C高度敏感,对唑类药物表现出不同程度的耐药。白念珠菌对唑类药物较为敏感(敏感率8 9.2 9%9 2.8 6%),非白念珠菌对唑类药物的敏感性相对较低,如光滑念珠菌对伏立康唑、热带念珠菌对泊沙康唑的耐药率高达6 4.7%和7 0%,这与目前国内外研究1 8-1 9报道的耐药流行趋势相一致,与其他种类的念珠菌相比,光滑念珠菌和热带念珠菌对唑类药物具有天然的异质耐药性,更易发生唑类耐药。棘白菌素类药物因其对唑类耐药念珠菌具有良好的抗菌活性和独特的抗菌机制在临床上应用逐渐增多,目前棘白菌素类药物被推荐作为治疗侵袭性念珠菌病的一线治疗药物2 0-2 1,值得关注的是近年来棘白菌素类894 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 2月 第1 8卷 第6期 C h i n J M y c o l,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.6 药物的耐药现象正在逐渐增多,可能是随着药物的广泛应用而带来的选择性压力有关,耐药现象在光滑念珠菌中尤为显著。国内外学者均报道了光滑