糖链的序列测定—Smith降解法.doc

个人收集整理 勿做商业用途糖链的序列测定Smith降解法摘要： Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠）还原成稳定的多羟基化合物。 然后进行适度的酸水解,用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序. 以葡聚糖为例，其反应式如下图: 以12位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸,并且无甲酸释放; Smith降解后产生甘油。以14位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放;Smith降解后产生赤藓醇。以13位键和的糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍为原来糖。以16位键和的糖基或非还原末端基（16)经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸 ;Smith降解后产生甘油。Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物（如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物,由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以12位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放;Smith降解后产生甘油。以14位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith降解后产生赤藓醇。以13位键和的糖基不被高碘酸氧化;Smith降解后仍为原来糖。以16位键和的糖基或非还原末端基（16）经高碘酸氧化,消耗二分子高碘酸,同时释放一分子甲酸； Smith降解后产生甘油.本实验通过纸层析检测终产物中的甘油、赤藓醇和糖. 【实验材料】 0。1mol/L醋酸. 2mol/L硫酸. 硼氢化钾。 纸层析试剂及器材：除显色剂外,同实验二。 硝酸银显色剂: A： 16%硝酸银水溶液： 丙酮为1：9（V/V）。 B： 1NaOH乙醇溶液(W/V）. C： 6mol/L氢氧化铵。 【实验操作】 1。 还原和水解 高碘酸氧化后经乙二醇处理的溶液对流水透析48小时，蒸馏水透析24小时，于40以下减压浓缩至10ml左右，加入70mg硼氢化钾于室温、暗处搅拌18小时24小时以还原多糖醛.用0.1 molL醋酸中和至pH67，对流水透析48小时,蒸馏水透析24小时，减压蒸干，加1 molL硫酸2ml，封管，100水解8小时，用碳酸钡粉末中和，定量滤纸过滤，滤液减压浓缩后，通过纸层析方法检测. 2. 纸层析 操作详见实验2（单糖组成分析）.展层后,将滤纸取出，自然干燥,喷上试剂A ,自然干燥，将滤纸浸入试剂B中，待斑点显出后,再浸入试剂C中以洗去滤纸上的氧化银，然后用水冲洗1小时左右，风干。以正丁醇：乙酸:水=4：l：5为展层剂时,甘油的Rf为:0.48，赤藓醇的Rf为：0。35。