牡荆素调节环磷酸腺苷激活的交换蛋白1_钙_钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ信号对大鼠心肌梗死后心肌肥大与纤维化的作用.pdf

10 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2牡荆素调节环磷酸腺苷激活的交换蛋白 1/钙/钙调素依赖性蛋白激酶信号对大鼠心肌梗死后心肌肥大与纤维化的作用赵天昊.袁慧.麻祖青.陶星宇.张宇.董六一【摘要】目的 探讨牡荆素调控环磷酸腺苷激活的交换蛋白 1（Epac1）/钙/钙调素依赖性蛋白激酶（CaMK）信号通路抑制大鼠心肌梗死（MI）后心肌细胞肥大与纤维化的作用。方法 24只SD大鼠随机分为：假手术组、MI组、牡荆素组。大鼠进行心脏左前降支结扎建立MI模型，假手术组只穿线不结扎。检测大鼠心功能变化；苏木精-伊红（HE）染色观察心脏病理学变化，天狼星红染色观察心脏纤维化，电镜观察心肌线粒体损伤情况；Western Blot 检测 Epac1、CaMK 等蛋白变化。结果（1）大鼠 MI 4 周后，与假手术组比较 MI 组大鼠左心室短轴缩短率（LVFS）和左心室射血分数（LVEF）均降低（P 0.01），左心室收缩末期内径（LVIDs）、左心室舒张末期内径（LVIDd）和舒张末期左心室后壁厚度（LVPWd）、收缩末期左心室后壁厚度（LVPWs）增加（P 0.01），牡荆素组大鼠心脏 LVIDs、LVIDd、LVPWs 和 LVPWd 较 MI 组降低，LVFS 和 LVEF均升高，差异有统计学意义（P 0.05）；（2）牡荆素可降低大鼠心脏重量指数（P 0.01），并减小 MI 组大鼠心肌细胞横截面积，同时减轻大鼠左心室壁心肌纤维化程度（P 0.01），牡荆素组大鼠心肌胞浆内线粒体肿胀较 MI 组减轻，线粒体形态较完整，空泡形成较少；（3）Western Blot结果显示牡荆素抑制大鼠 MI 后 Epac1 激活（P 0.01），抑制其下游 CaMK 激活与细胞外调节激酶的磷酸化（P 0.01），同时可抑制 B 淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）相关 X 蛋白（Bax）上调（P 0.05），上调 Bcl-2（P 0.01），抑制凋亡蛋白裂解半胱天冬酶 3（Cleaved-Caspase 3）的活化（P 0.05）。结论 牡荆素可通过抑制 Epac1/CaMK 通路，改善大鼠 MI 后心脏功能，抑制心肌肥大和纤维化。【关键词】牡荆素；心肌缺血；凋亡；环磷酸腺苷激活的交换蛋白 1；钙/钙调素依赖性蛋白激酶DOI:10.3969/j.issn.1009-816x.2024.02.003基金项目：安徽省自然科学基金（2108085MH254）作者单位：230032 合肥，安徽医科大学基础医学院药理学教研室通信作者：董六一，Email：基础研究Effects of vitexin on cardiac hypertrophy and fibrosis after myocardial infarction in rats through modulation of the exchange proteins activated directly by cyclic adenosinemonophosphate 1/calcium/calmodulin-dependent protein kinase pathway Zhao Tianhao,Yuan Hui,Ma Zuqing,Tao Xingyu,Zhang Yu,Dong Liuyi.Department of Pharmacology,School of Basic Medicine,Anhui Medical University,Hefei 230032,ChinaCorresponding author:Dong Liuyi,Email:【Abstract】Objective To explore the role of vitexin in regulating the exchange proteins activated directly by cyclic adenosinemonophosphate1(Epac1)/calcium/calmodulin-dependent protein kinase(CaMK)signaling pathway and inhibiting myocardial cell hypertrophy and fibrosis in rats after myocardial infarction(MI).Methods Twenty-four SD rats were randomly divided into sham surgery group,MI group,and vitexin group.The MI model was established by left anterior descending coronary artery ligation.In the sham surgery group,the left anterior descending coronary artery was only threaded without ligation.Changes in rat cardiac function were assessed.Cardiac pathological changes were observed using hematoxylin-eosin(HE)staining,and fibrosis was assessed using Sirius Red staining.Mitochondrial damages in cardiocytes were examined by electron microscopy.Western blot was used to 11 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2心肌梗死（myocardial infarction,MI）后发生的心脏重构机制十分复杂，现有研究远没有完全阐明 MI后心脏重构的病理生理机制1，临床上对 MI 后心脏重构仍缺乏特异性的干预措施和有效治疗手段。环磷酸腺苷激活的交换蛋白（exchange proteins activated directly by cyclic adenosinemonophosphate,Epac）有两种不同的亚型，即 Epac1 和 Epac 2，分别由 RAPGEF3和RAPGEF4基因编码2。Epac1主要存在于心脏、肾脏、血管、脂肪等组织器官中，并参与一些心脏疾病的病理发生过程。Epac1 可调节心脏兴奋-收缩耦联，心肌肥大和纤维化3，减少血管内皮细胞通透性。最近的研究表明 Epac 对心脏肥大发生和 Ca2+稳态具有内在的调节作用4。尽管Epac可以调节Ca2+，但这种调节作用在生理学中的意义还不太清楚。钙/钙调素依赖性蛋白激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinase,CaMK）能够广泛参与各种信号转导过程，从而影响机体的生理活动和病理变化，是一种重要的蛋白激酶5-6。在心脏应激情况下，CaMK 的激活可以调节一系列的信号蛋白，这些信号蛋白参与调节心肌兴奋-收缩耦联与舒张、细胞死亡、心肌肥大的转录调控、炎症反应等。但 Epac 是如何激活CaMK 的，目前仍不清楚。牡荆素是一种黄酮类化合物，来源于广泛使用的传统民间药物山楂7，具有抗氧化、抗炎8、抗癌以及神经保护等多种生物活性9。有文献报道，在心肌缺血再灌注损伤中牡荆素也能够发挥很好的保护作用10-11，但是其在 MI 中的作用及作用机制仍有待研究。本文初步探讨 Epac1/CaMK 信号在 MI 后心脏重构中的作用及表达特征，验证牡荆素可能通过调控此信号通路从而改善心室重构。1 材料与方法1.1 实验动物 雄性SPF级SD大鼠，体重230250 g，由安徽医科大学省级实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（皖）2022-001。温度（223）、湿度 55%5%条件下饲养，照明周期：12 h明/12 h 暗。所有操作均符合安徽医科大学实验动物伦理委员会要求 SYXK（皖）2022-001。1.2 药品与试剂 牡荆素由合肥七星医药科技有限公司提供，冻干粉剂，规格：30 mg/瓶。RIPA 强裂解液（Beyotime Biotechnology，P0013B）；BCA 蛋 白 浓度检测试剂盒（Beyotime Biotechnology，P0010）；戊巴比妥钠（Sigma，57-33-0）；4%多聚甲醛（Biosharp，BL539A）；2.5%电镜固定液（Solarbio，P1126）；苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色试剂盒（Solarbio，G1120）；天狼星红染色试剂盒（Solarbio，G1472）；SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒（Beyotime Biotechnology，ST788）；Epac1抗体（Affinity，DF4381）；CaMK抗体（Abcam，ab32678）；B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）单克隆抗体（ZSGB-BIO，TA803003）；Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）单克隆抗体（ZSGB-BIO，A328048）；裂解半胱天冬酶 3（Cleaved-Caspase 3）单克隆抗体（Affinity，AF7022）；磷酸化细胞外调节激酶（phospho-extracellular regulated kinases,p-ERK）单克隆抗体（Affinity，AF1015）；细胞外调detect protein changes,including Epac1 and CaMK .Results(1)Four weeks after MI,compared with the sham surgery group,left ventricular fractional shortening(LVFS)and left ventricular ejection fraction(LVEF)in the MI group decreased(P 0.01),and left ventricular internal diameter at end-systolic(LVIDs),left ventricular internal diameter at end-diastolic(LVIDd),left ventricular posterior wall thickness at end-diastolic(LVPWd),and left ventricular posterior wall thickness at end-systolic(LVPWs)inceased(P 0.01).The vitexin group showed significant decreases in LVIDs,LVIDd,LVPWs,and LVPWd and increases in LVFS and LVEF compared to the MI group(P 0.05).(2)Vitexin reduced the heart weight index(P 0.01)and decreased the cross-sectional area of myocardial cells in rats of MI group,while alleviating myocardial fibrosis in the left ventricular wall(P 0.01).In the vitexin group,myocardial cytoplasmic mitochondrial swelling was reduced,mitochondrial morphology was more intact,and vacuole formation was decreased compared to the MI group.(3)Western blot results showed that vitexin inhibited Epac1 activation(P 0.01),suppressed the activation of downstream CaMK and the phosphorylation of extracellular regulated kinase(ERK)(P 0.01),simultaneously inhibited upregulation of B-cell lymphoma-2(Bcl-2)-associated X protein(Bax)(P 0.05),upregulated Bcl-2(P 0.01),and inhibited the activation of apoptotic protein Cleaved-Caspase 3(P 0.05).Conclusion Vitexin may improve cardiac function,inhibit myocardial hypertrophy,and reduce fibrosis after MI by suppressing the Epac1/CaMK pathway.【Key words】Vitexin;Myocardial ischemia;Apoptosis;Exchange proteins activated directly by cyclic adenosinemonophosphate 1;Calcium/calmodulin dependent protein kinase 12 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2节激酶（extracellular regulated kinases,ERK）单克隆抗体（Affinity，BF8004）；山羊抗兔-actin 单克隆抗体（ZSGB-BIO，TA-09）；Western Blot一抗稀释液（Beyotime Biotechnology，P0023A）；PVDF 转印膜（Immobilon，000189435）。1.3 实验方法1.3.1 实验模型建立 建立SD大鼠在体MI模型24只，随机分为三组：假手术组、MI 组、牡荆素组，每组8 只。在模型建立前 20 min 预给予牡荆素组大鼠尾静脉注射牡荆素（6 mg/kg），假手术组与 MI 组给等量的生理盐水。以 2%戊巴比妥钠（0.25 mL/100 g）对大鼠腹腔注射麻醉，仰卧位固定在固定架上，进行气管插管后与动物呼吸机（Aclbio，ALC-V8S）连接（呼吸时比 1.5:1，60 次/min，潮气量 70 mL/kg），在胸骨左缘的 34 肋间打开胸腔，使心脏暴露，在肺动脉圆锥左缘与左心耳下缘2 mm 处用6-0无损伤缝线进针，经浅层心肌穿出，使左冠状动脉前降支（left anterior descendingcor,LAD）位于其上。稳定10 min后，套上双层塑料套管，把线结扎即完成左冠状动脉闭塞致心肌缺血。以心电图出现MI表现（ST段抬高或T波高尖）及心脏局部出现紫绀作为心肌缺血的判断标准。心肌缺血 1 h 后把内层套管抽出，松开线结使血流复通即再灌注。假手术组只穿线不对 LAD 进行结扎。在大鼠心肌缺血再灌注手术后关闭胸腔，大鼠恢复自主呼吸并呼吸平稳时，将气管插管拔出，移除呼吸机，正常饲养 27 d，并在第 28 天时禁食 24 h，正常饮水，进行后续实验。1.3.2 小动物B超检测大鼠心脏功能变化 在大鼠饲养28 d后，麻醉，取仰卧位，胸部脱毛后行小动物B超（苏州飞依诺，VINNOvet）检测大鼠心脏功能变化。记录大鼠的左心室短轴缩短率（left ventricular fraction shortening,LVFS）、左心室射血分数（left ventricular ejection fraction,L VEF）、左心室收缩末期内径（left ventricular internal diameter at end-systolic,LVIDs）、舒张末期左心室后壁厚度（left ventricular posterior wall thickness at end-diastolic,LVPWd）、收缩末期左心室后壁厚度（left ventricular posterior wall thickness at end-systolic,LVPWs）和 左 心室舒张末期内径（left ventricular internal diameter at end-diastolic,LVIDd）等心脏功能指标变化情况。1.3.3 HE 染色、天狼星红染色、心脏重量指数计算 通过心脏重量指数（mg/g）反映心功能不全的严重程度，饲养 28 d 后称量大鼠体重并在小动物 B 超检测后处死大鼠，称量心脏重量，计算心脏重量指数即心重体重比值（heart weight/body weight,HW/BW）。取大鼠心脏组织于 4%的多聚甲醛中固定 24 h，组织脱水并用石蜡包埋。把心脏组织切成 4 m 的石蜡切片后进行 HE 染色和天狼星红染色。使用光学显微镜（卡尔蔡司，Axio Scope 5）拍摄病理照片，通过 HE染色观察心肌细胞病理变化，并使用 Image J 图像分析软件计算心肌细胞横截面积，观察心肌肥大程度。天狼星红染色将沉积的胶原染成红色，由此观察心肌细胞纤维化情况，并使用 Image J 图像分析软件计算纤维化面积。1.3.4 透射电镜观察大鼠心脏组织线粒体形态变化 将大鼠心肌组织分割为 1 mm3大小组织块置于2.5%戊二醛中固定，超薄切片处理后使用透射电镜（赛默飞，Talos L120C G2）观察线粒体形态变化。1.3.5 Western Blot 检测 取 50 mg 的心脏组织加入至400 L RIPA强裂解液中充分研磨，提取蛋白后使用BCA法检测蛋白浓度。不同组别的蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分离，转至PVDF膜，5%脱脂牛奶封闭液封闭1 h，分别加入Epac-1（1:1 000），CaMK（1:1 000），ERK（1:1 000），p-ERK（1:1 000），Bax（1:1 000），Bcl-2（1:1 000），Cleaved-Caspase3（1:1 000），-actin（1:1 000）一抗 4孵育过夜，洗膜，加入对应的二抗（1:10 000）室温孵育1 h，洗膜，用Bioshine ChemiQ 4600（Bioshine，ChemiQ 4600）荧光成像系统进行蛋白条带显影，通过 Image J 图像分析软件计算各条带的灰度值。以-actin蛋白作为内参校正蛋白表达量。1.4 统计学处理 运用 SPSS 16.0 版做统计分析，实验数据采用xs 表示，多组间比较行单因素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验，以 P 0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 牡荆素对MI大鼠心脏功能的影响 大鼠MI 28 d 后，通过超声心动图可以看到，与假手术组比较，MI组大鼠的心功能明显恶化，心脏 LVEF 和 LVFS 降低（均 P 0.01），LVIDs、LVPWd、LVPWs 和 LVIDd 增加（均P 0.01）。牡荆素组大鼠心脏LVIDs、LVIDd、LVPWs 和 LVPWd 较 MI 组降低，LVFS 和 LVEF 均升高，差异有统计学意义（P 0.05），见图1。2.2 牡荆素对 MI 大鼠心肌病理及纤维化的影响 光学显微镜下的 HE 染色结果显示，假手术组大鼠心肌细胞形态、大小、结构正常，无肥大、无凋亡、无坏死，细胞核清晰；MI 组大鼠心肌细胞肥大明显，梗死部位心肌细胞大量凋亡、坏死，结构异常，其间可见大量炎性细胞浸润；通过天狼星红染色可以看到大 13 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2图 3 牡荆素对心肌梗死后大鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响（12 000）A图 1 牡荆素对心肌梗死后大鼠心脏功能的影响（A：各组大鼠心脏超声心动图；B：各组大鼠心脏功能参数；LVIDd：左心室舒张末期内径；LVIDs：左心室收缩末期内径；LVPWd：舒张末期左心室后壁厚度；LVPWs：收缩末期左心室后壁厚度；LVFS：左心室短轴缩短率；LVEF：左心室射血分数；与假手术组比较aP 0.01，与心肌梗死组比较bP 0.05）BaaaaaabbbbbbLVIDd(cm)LVPWd(cm)LVEF(%)LVFS(%)LVPWs(cm)LVIDs(cm)图 2 牡荆素对心肌梗死后大鼠心脏重量指数及心脏组织病理结果的影响 A：各组大鼠心脏组织苏木精-伊红染色结果（200）；B：各组大鼠心脏组织天狼星红染色结果（200）；C：各组大鼠心脏重量指数；D：各组大鼠心肌细胞横截面积比较；E：各组大鼠心脏间质纤维化情况；HW/BW：心重体重比值；realtive cell area：相对细胞面积；fibrotic area：纤维化区域；与假手术组比较aP 0.01，与心肌梗死组比较bP 0.01HW/BW(mg/g)realtive cell areafibrotic area(%)aaabbbCEDAB量红色的型胶原沉积在 MI 组大鼠 MI 和梗死周边区域，梗死区域发生了心肌纤维排列紊乱和断裂的情况。MI 组大鼠心肌细胞横截面积大于假手术组，且心肌纤维化程度较假手术组增加，差异有统计学意义（P 0.01）；牡荆素治疗后 MI 大鼠心肌细胞横截面积降低，且大鼠左心室壁心肌纤维化程度减轻，差异均有统计学意义（P 0.01）。另外，MI 组大鼠心脏重量指数（HW/BW）较假手术组升高，牡荆素组大鼠心脏重量指数较 MI 组降低，差异均有统计学意义（P 0.01），见图 2。2.3 牡荆素对 MI 大鼠心肌细胞超微结构的影响 大鼠 MI 4 周后，透射电镜观察心肌细胞线粒体的超微结构显示，MI 组大鼠心肌细胞内线粒体肿大，线粒体内部出现空泡，线粒体嵴排列紊乱或断裂，牡荆素组胞浆内线粒体肿胀较 MI 组减轻，线粒体形态较完整，空泡形成较少，见图3。2.4 牡荆素对 MI 大鼠心肌组织中 Epac1、CaMK、p-ERK、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3 蛋白表达的影响 MI 4 周后，MI 组大鼠较假手术组心肌组织中Epac1 表达上调，其下游 CaMK 增加，ERK磷酸化增加，同时心肌组织中促凋亡蛋白 Bax 上调，抑制凋亡蛋白Bcl-2下调，活化的凋亡蛋白Cleaved-Caspase 3 表达增多（均 P 0.01）；牡荆素处理后可抑制大鼠 MI 后 Epac1 激活，抑制其下游 CaMK 激活与ERK 的磷酸化，同时可抑制 Bax 上调，上调 Bcl-2，抑制凋亡蛋白 Cleaved-Caspase 3 的活化（P 0.05），见图 4。3 讨论心力衰竭是各种心脏疾病的终末阶段。心血管病临床药物治疗虽有较大进步，但心力衰竭的死亡率却 14 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.2始终居高不下12。心力衰竭患者如何通过有效的干预手段降低发病率和死亡率，已成为一大公共卫生问题，亟待破解。心脏重构是心力衰竭发生的重要一环。而发生心脏重构的主要机制是机械应力、神经体液分泌异常、氧化应激、炎症因子等应激因素通过调节信号转导通路导致相应靶基因的转录、靶蛋白的表达异常，进而引起心脏结构和功能的改变13-14。但发生心脏重构的具体病理生理机制仍不清楚。Epac1是环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）直接激活的交换蛋白，在第二信使 cAMP 介导的多种细胞事件中起关键作用，在肌细胞水平上，Epac1 与细胞的肥大生长有关，包括细胞大小增加，蛋白质合成，肌原纤维生成。虽然 Epac1 对钙离子的调节尚不明确，但已有研究证明Epac1 是钙离子和心肌细胞肥大的阳性调节剂3。作为 Epac1 的下游调节因子，CaMK 的激活引起心肌细胞钙离子超负荷，引发一系列导致心肌细胞死亡、肥大和纤维化等心肌功能障碍的事件15。心肌细胞对于细胞外信号的反应都依赖于细胞内效应器，ERK 是最重要的效应子，它起到整合各种细胞外事件的信号的作用，所以ERK的磷酸化会响应某些应激刺激从而引起病理性心脏肥大16。本实验结果显示，牡荆素抑制大鼠 MI 后Epac1 激活，抑制其下游 CaMK 激活与 ERK 的磷酸化，从而减少大鼠 MI 后心肌的病理损伤及心脏纤维化。此外牡荆素明显降低大鼠心脏 LVIDs、LVIDd、LVPWs 和 LVPWd 值，升高 LVFS 和 LVEF 值，提示牡荆素可通过抑制心肌细胞纤维化，减少病理性心肌肥大，改善大鼠 MI 后的心脏功能。Bcl-2 家族成员Bax 蛋白的激活使线粒体的外膜透化，导致线粒体凋亡蛋白释放到细胞质中，引起细胞凋亡17，CaMK 诱导的细胞钙失衡在心肌细胞凋亡中同样起到关键作用18。本实验结果显示，牡荆素抑制 CaMK 激活的同时可明显抑制 Bax 上调，上调 Bcl-2，抑制凋亡蛋白 Cleaved-Caspase 3 的活化。另外透射电镜观察心肌细胞线粒体的超微结构显示，MI 组大鼠心肌细胞内线粒体肿胀，大量空泡形成，空泡内存在碎裂的线粒体嵴，牡荆素组胞浆内线粒体肿胀较 MI 组减轻，线粒体形态较完整，空泡形成较少，提示牡荆素可以减轻 MI 后心肌细胞线粒体损伤，减少 Bax 激活诱导的线粒体凋亡蛋白释放，减少心肌细胞凋亡。综上所述，牡荆素可抑制大鼠 MI 后 Epac1 信号与下游 CaMK 激活，抑制 MI 后大鼠心肌肥大与纤维化，减少心肌细胞凋亡，改善大鼠 MI 后的心脏重构，牡荆素抑制心脏重构作用可能与调控心脏 Epac1/CaMK信号通路有关。参考文献1 Gilbert CJ,Longenecker JZ,Accornero F.ERK1/2:an integrator of signals that alters cardiac homeostasis and growthJ.Biology(Basel),2021,10(4):346.2 Tan YQ,Li J,Chen HW.Epac,a positive or negative signaling molecule in cardiovascular diseasesJ.Biomed Pharmacother,2022,148:112726.3 Laudette M,Formoso K,Lezoualch F.GRKs and Epac1 interaction in cardiac remodeling and heart failureJ.Cells,2021,10(1):154.4 Kaur S,Kong CH,Cannell MB,et al.Depotentiation of intact rat cardiac muscle unmasks an Epac-dependent increase in myofilament Ca2+sensitivityJ.Clin Exp Pharmacol Physiol,2016,43(1):88-94.5 Laudette M,Sainte-Marie Y,Cousin G,et al.Cyclic AMP-binding protein Epac1 acts as a metabolic sensor to promote cardiomyocyte lipotoxicityJ.Cell Death Dis,2021,12(9):824.图 4 牡荆素对心肌梗死后大鼠心肌组织 Epac1、CaMK、p-ERK/ERK 及凋亡蛋白表达的影响（A：各组大鼠心肌组织中 Epac1 蛋白表达情况；B：各组大鼠心肌组织中 CaMK 蛋白表达情况；C：各组大鼠心肌组织中 p-ERK 与 ERK 蛋白表达情况；D：各组大鼠心肌组织中 Bax 蛋白表达情况；E：各组大鼠心肌组织中 Bcl-2 蛋白表达情况；F：各组大鼠心肌组织中 Cleaved-Caspase 3 蛋白表达情况；Epac1：环磷酸腺苷激活的交换蛋白 1；CaMK ：钙/钙调素依赖性蛋白激酶；p-ERK：磷酸化细胞外调节激酶；ERK：细胞外调节激酶；Bcl-2：B 淋巴细胞瘤-2；Bax：Bcl-2 相关 X 蛋白；Cleaved-Caspase 3：裂解半胱天冬酶 3；CC3:Cleaved-Caspase 3；与假手术组比较aP 0.01，与心肌梗死组比较bP 0.05）ACEBDFaaaaaabbbbbb 15 心脑血管病防治 2024 年 2 月第 24 卷第 2 期 Cardio-Cerebrovasc Dis Prev Treat,February 2024,Vol.24,No.26 Ohnuki Y,Umeki D,Mototani Y,et al.Role of cyclic AMP sensor Epac1 in masseter muscle hypertrophy and myosin heavy chain transition induced by 2-adrenoceptor stimulationJ.J Physiol,2014,592(24):5461-5475.7 Cui YH,Zhang XQ,Wang ND,et al.Vitexin protects against ischemia/reperfusion-induced brain endothelial permeabilityJ.Eur J Pharmacol,2019,853:210-219.8 Ozarowski M,Karpinski TM.Extracts and 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