急性期布鲁氏菌病患者外周血中调节性T细胞水平与多西环素治疗效果的关系研究.pdf

113临床研究 2023 年 11 月第 31 卷第 11 期作者简介：苏营霞，主治医师，本科。研究方向：内科结合传染病方向。临床治疗急性期布鲁氏菌病患者外周血中调节性 T 细胞水平与多西环素治疗效果的关系研究苏营霞(河南省淇县疾病预防控制中心 传染病科，河南 鹤壁 456750)摘要：目的 探讨急性期布鲁氏菌病患者外周血中调节性 T 细胞(Treg)水平与多西环素治疗效果的关系。方法 回顾性分析 2015 年 1 月至 2020 年 1 月河南省淇县疾病预防控制中心收治的 60 例急性期布鲁氏菌病患者的临床资料作为研究组，另选取同期于河南省淇县疾病预防控制中心行健康体检的 54 例健康志愿者的临床资料作为对照组，比较两组调节性 T 细胞水平。研究组接受多西环素治疗，治疗 12 周后按照临床疗效分为有效组(47 例)及无效组(13 例)，于治疗前及治疗 12 周后检测外周血中调节性 T 细胞水平，分析外周血调节性 T 细胞水平与多西环素治疗效果的关系。结果 治疗前研究组调节性 T 细胞水平高于对照组；治疗后研究组调节性 T 细胞水平低于治疗前，且无效组治疗前调节性 T 细胞高于有效组；经 Logistic 回归分析结果显示，外周血中调节性 T 细胞水平高表达是导致急性期布鲁氏菌病患者多西环素治疗无效的危险因素，差异有统计学意义(OR 1，P 0.05)。ROC 曲线显示，调节性 T 细胞水平预测布鲁氏菌病治疗效果的 AUC 0.7，有一定预测价值，当调节性 T 细胞取最佳阈值取值时(3.08%)，可获得最佳预测价值。结论 外周血中调节性 T 细胞水平与急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果密切相关，临床可通过检测患者调节性 T 细胞水平预测治疗效果，为进一步提升治疗效果提供依据。关键词：布鲁氏菌病急性期；外周血调节性 T 细胞；多西环素中图分类号：R361.3文献标志码：B DOI：10.12385/j.issn.2096-1278(2023)11-0113-04Study on the Relationship Between the level of Regulatory T cells in Peripheral Blood and the Therapeutic Effect of Doxycycline in Patients with acute BrucellosisSU Yingxia(Department of Infectious Diseases,Disease Control and Prevention Center,Hebi Henan 456750,China)Abstract:Objective To investigate the relationship between the level of regulatory T cells(Treg)in peripheral blood and the therapeutic effect of Doxycycline in patients with acute Brucellosis.Methods The clinical data of 60 patients with acute Brucellosis admitted to the Center for Disease Control and Prevention in Qixian County,Henan Province from January 2015 to January 2020 were retrospectively analyzed as the study group,and the clinical data of 54 healthy volunteers who underwent physical examination in our hospital during the same period were selected as the control group.Compare the levels of regulatory T cells between two groups.The study group was treated with Doxycycline.After 12 weeks of treatment,they were divided into effective group(n=47 cases)and ineffective group(13 cases)according to the clinical efficacy.The level of regulatory T cells in peripheral blood was detected before and after 12 weeks of treatment,and the relationship between the level of regulatory T cells in peripheral blood and the therapeutic effect of Doxycycline was analyzed.Results The level of regulatory T cells in the study group before treatment was higher than that in the control group,and the difference was statistically significant(P 0.05);the level of regulatory T cells in the study group after treatment was lower than that before treatment,and the difference was statistically significant(P 0.05);the level of regulatory T cells in the ineffective group before treatment was higher than that in the effective group,and the difference was statistically significant(P 0.05);Logistic regression analysis showed that high expression of regulatory T cells in peripheral blood was a risk factor for ineffective Doxycycline treatment in patients with acute Brucellosis(OR 1,P 0.05);The Receiver operating characteristic shows that the AUC of the level of regulatory T cells to predict the treatment effect of Brucellosis is greater than 0.7,which has certain predictive value.When the regulatory T cells take the best threshold value(3.08%),the best predictive value can be obtained.Conclusion The level of regulatory T cells in peripheral blood is closely related to the therapeutic effect of Doxycycline in patients with acute brucellosis.The clinical effect can be predicted by detecting the level of regulatory T cells in patients,which provides a basis for further improving the therapeutic effect.Key Words:brucellosis in acute stage;peripheral blood regulatory T cells;doxycycline布鲁氏菌病在我国属乙类传染病，由布鲁杆菌引起，表现为关节、肌肉，甚至全身多个的系统损伤，是人兽共患传染性疾病。本病在世界范围内均有分布，全球每年大约有 50 万人患有此病1。该病发生、发展较为复杂，布鲁氏菌主要寄生在上皮细胞、巨噬细胞等细胞中，患病后会严重损害人体的多种器官，包括淋巴结、肝、脾等，显著降低患者生活质量2。目前，针对布鲁氏菌病的治疗主要以防止复发及慢性化为原则，多西环素为临床常用抗菌药物，其能够抑制细菌肽链增长及蛋白质合成，起到抑制细菌生长作用3。文献报道4，布鲁氏菌对调制先天免疫系统有一定的作用，而调节性 T 细胞为自身固有免疫系统的一种反应性 T 细胞亚群，可抑制自身反应性 T 细胞，且可对其他免疫系统的免疫功能起到抑制作用，这提示调节性 T 细胞亚群可能与布鲁氏菌病患者多西环素治疗效果也存在一定关系。鉴于此，本探究将探讨急性期布鲁氏菌病患者外周血中调节性 T 细胞水平与多西环素治疗效果的关系，现总结如下。114Clinical Research,Nov.2023,Vol.31 No.111资料与方法1.1一般资料采取回顾性分析，收集 2015 年 1 月至 2020 年 1 月河南省淇县疾病预防控制中心经治的 60 例急性期布鲁氏菌病患者作为研究组。其中男 48 例，女 12 例；年龄 20 45 岁，平 均(33.485.64)岁；体 质 量 指 数18.5 28.7kg/m2，平均(22.131.22)kg/m2；病程 1 4个月，平均(2.140.45)个月；合并临床表现：高热 14例，乏力 26 例，关节疼痛 46 例，多汗 21 例。另选取同期于本院行健康体检的 54 例健康志愿者作为对照组，其中男 44 例，女 10 例；年龄 18 44 岁，平均(33.215.32)岁；体质量指数 18.3 28.5kg/m2，平均(22.071.18)kg/m2。两组一般资料比较，差异无统计学意义(P0.05)，具有可比性。经治疗后，将研究组治疗效果为治愈、显效患者纳入有效组，将治疗效果为无效患者纳入无效组。本次研究的所有内容均经淇县疾病预防控制中心医学伦理委员会审核并通过(伦理批号：20140523001)。纳入标准：符合相关诊断标准5，且虎红平板凝集试验(RBT)结果为阳性；患者均已对所研究内容知情并同意；均可按照课题研究要求完成各项检查；患者语言、认知功能正常，具备正常沟通能力。排除标准：合并免疫功能障碍、血液疾病者；肝肾功能不全者；对本次研究药物过敏者；精神疾患、意识障碍者。1.2方法1.2.1治疗方法口服多西环素(江西新赣江药业股份有限公司；生产批号 20180425、20190516；0.1g)，0.1g/次，2 次/d，治疗 6 周后，增服利福平(福建东瑞制药有限公司；国药准字 H35020481；0.15g)，0.6 0.9g/次，1 次/d，继续治疗 6 周。1.2.2调节性 T 细胞检测收 集 所 有 患 者 治 疗 前 及 治 疗 12 周 后 空 腹 静 脉血 5mL，混 匀 后 取 100L 全 血 加 入 异 硫 氰 酸 荧 光素(FITC)，标记抗体分化簇 3(CD3)及巯基化藻红蛋白(PE)标记 CD4 抗体，在混匀后置于室温下 25min；之后将溶血素红细胞裂解液 1.5mL 加入并继续保持在室温中孵育 15min，采用迈瑞 BriCyteE6 流式细胞仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；粤食药监械(准)字 2014 第 2400295 号)检测调节性 T 细胞水平。1.2.3疗效评估参照文献6于治疗 12 周后进行疗效评估，其中治愈为治疗后临床症状均消失，体温恢复正常且无肝脾及淋巴结肿大等；显效为治疗后患者临床症状得到明显改善，体温趋于正常且无肝脾及淋巴结肿大；无效为治疗后未达到上述标准甚至病情加重。治疗有效率=(治愈例数+显效例数)/总例数 100%。1.3观察指标取所有受检者入院时静脉血 5mL 及患者入院时、治 疗 12 周 后 静 脉 血 5mL，使 用 全 自 动 生 化 分 析 仪cobasc311 罗氏诊断产品(上海)有限公司；国械注进 20162400035 检测患者 Treg 水平。比较对照组和研究组调节性 T 细胞水平及治疗前后调节性 T 细胞水平，并分析调节性 T 细胞水平对急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果的影响。1.4统计学方法采用 SPSS23.0 统计分析软件，用sx 来表示计量资料，两组间采用独立样本t检验；用%来表示计数资料，行 2检验，采用 Logistic 回归分析检验调节性 T 细胞水平对治疗效果的影响；绘制 ROC 曲线得到曲线下面积(AUC)，检验调节性 T 细胞水平对急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果的预测价值：AUC 0.5 无价值，0.5 AUC 0.7 诊断价值较低，0.7 AUC 0.85 诊断价值中等，0.85 诊断价值高；P 0.05 表示差异有统计学意义。2结果2.1对照组和研究组治疗前调节性 T 细胞水平变化情况比较对照组治疗前调节性T细胞水平为(2.540.22)%，研究组治疗前调节性 T 细胞水平(3.090.36)%高于对照组，差异有统计学意义(t=9.711，P 0.001)。2.2研究组治疗前后调节性 T 细胞水平变化情况比较60 例 患 者 治 疗 前 调 节 性 T 细 胞 水 平为(3.090.36)%，治 疗 后 调 节 性 T 细 胞 水 平为(2.730.25)%，治疗后调节性 T 细胞水平低于治疗前，差异有统计学意义(t=6.362，P 0.001)。2.3有效组和无效组 T 细胞水平比较有效组治疗前调节性T细胞水平为(3.050.35)%，无效组治疗前为(3.280.38)%，无效组水平高于有效组，差异有统计学意义(t=2.059，P=0.044)。2.4调节性 T 细胞水平对急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果的回归影响分析将调节性 T 细胞水平作为协变量，布鲁氏菌病治疗 效 果 作 为 因 变 量(0=有 效，1=无 效)，经 Logistic回归分析结果显示，外周血调节性 T 细胞水平 过 表达(3.08%)可能是导致治疗无效的危险因素，差异有统计学意义(OR 1，P 0.05)。见表 1。表 1调节性 T 细胞水平对急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果的影响因素回归分析项目S.EWald2POR95%CI常量-7.3282.01813.189 0.001-调节性T细胞(3.08%)2.0000.62110.379 0.0017.3862.188 24.9282.5调节性 T 细胞水平对急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果预测价值分析将调节性 T 细胞水平作为检验变量，将布鲁氏菌病治疗效果作为状态变量(0=有效，1=无效)，绘制 ROC曲线，结果显示，调节性 T 细胞水平预测布鲁氏菌病治疗效果的 AUC=0.750；AUC 的 95%CI：0.602 0.897；最佳阈值：3.080%；敏感度：0.769；特异度：0.660；约登指数：0.429。见图 1。115临床研究 2023 年 11 月第 31 卷第 11 期3讨论布鲁氏菌病是一种变态反应性传染性疾病，多见于春秋季，主要通过患病疫畜进行传播，传播途径主要通过破损的皮肤黏膜、呼吸消化道、蜱叮咬等，与患者职业及生活、饮食习惯密切相关。布鲁氏病菌主要通过受损皮肤和黏膜进入人体，虽然人体的吞噬细胞可以把病菌吞噬掉，但它可以通过淋巴液进入到淋巴结从而生长和繁殖，当病菌数量达到一定程度后便可越过淋巴结屏障进入血液，侵入机体肝、脾、淋巴结、骨关节等多脏器，通过在宿主细胞内不停地生长与繁殖，出现发热等中毒症状，之后随血液中细菌逐渐消失，症状逐渐消退，但繁殖到一定程度时，会再次释放血液中，再次出现发热症状，导致病情反复发作7。该病病情复杂，临床症状多种多样，急性期体内多处于菌血症状态，以高热为主要表现，临床针对布鲁氏菌病的病程及病情严重程度给予患者相关药物进行治疗，临床对已确诊慢性感染的布鲁氏菌病的患者暂无非常有效的治疗手段，主要以降低其并发症、改善其生活质量为主，而针对急性期布鲁氏菌病的患者可采取采用抗菌药物积极治疗，以有效抑制布鲁氏菌生长、繁殖，发挥显著的抗菌作用。其中多西环素作为四环类抗生素具有良好抑菌效果，常联合利福平进行治疗以控制病情进展。但临床治疗发现部分布鲁氏菌病患者给予多西环素治疗效果不佳，且应用此药物治疗易出现病情反复、副作用大、易产生耐药性等。因此分析影响布鲁氏菌病患者给予多西环素治疗效果的相关因素有重要意义。研究表明8，T 细胞介导的细胞免疫在布鲁氏菌病中发挥关键的作用。本研究结果显示，研究组治疗 前 调 节 性 T 细 胞 水 平(3.090.36)%高 于 对 照组(2.540.22)%，该结果提示与健康者相比，患布鲁氏菌病患者体内调节性 T 细胞水平明显较高。分析原因在于布鲁氏菌病的发生可导致免疫效应 T 细胞的功能降低且与免疫抑制状态密切相关。相关研究发现9，布鲁氏菌病的发生与动物疫苗的免疫效果较差有关，疫苗保护能力减弱会导致调节性 T 细胞过度表达并增殖至较高水平，进而影响 T 淋巴细胞的免疫功能。调节性 T 细胞能够抑制多种自身免疫性疾病，且它具有过度免疫反应调节作用，使病原菌更易在宿主体内生存，甚至导致宿主长期携带病原菌。故机体遭受布鲁氏菌感染的过程中，可能存在调节性 T 细胞过度表达，导致细胞免疫遭受到抑制，最终造成机体持续感染。刘熔10研究显示，布鲁氏菌感染中后出现调节性 T 淋巴细胞增多，亦是导致持续感染的重要原因，与本研究结果具有一致性，这证实调节性 T 细胞参与了布鲁氏菌病的发生与发展。本研究结果还显示，患者治疗后调节性 T 细胞水平(2.730.25)%低于治疗前(3.090.36)%，这提示多西环素治疗可降低急性期布鲁氏菌病患者调节性T 细胞水平，说明调节性 T 细胞可能与多西环素治疗效果相关。多西环素是半合成的四环素类光谱抗生素，通过对氨基酸 tRNA 与细菌核蛋白体 30S 亚基上的作用点结合进行干扰，可阻断氨基酰 tRNA 与核酸体-mRNA 复合体结合，从而对蛋白质合成产生抑制，最终起到较强的抑制布鲁氏菌作用，使调节性 T 细胞逐步降低或恢复至正常水平。同时该药物口服吸收较快，可迅速在人体内发挥作用，有效对抗细菌，且作用时间持久。此外，结果还显示，无效组治疗前调节性 T 细胞(3.280.38)%高于有效组(3.050.35)%，且经 Logistic 回归分析结果显示，外周血中调节性 T 细胞水平高表达(3.08%)是导致急性期布鲁氏菌病患者多西环素治疗无效的危险因素，差异有统计学意义(OR 1，P 0.05)。上述结果提示外周血中调节性 T 细胞水平升高是急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗无效的影响因素。分析原因可能是由于调节性 T 细胞的功能主要为调节免疫 T 细胞引起的机体病理反应，但其水平在调控作用下升高会导致慢性感染的宿主免疫系统与感染病原体出现相互妥协，导致布鲁氏菌摆脱免疫系统的攻击，因此治疗前调节性 T 细胞水平高患者即使给予多西环素治疗，也会导致治疗效果欠佳。此外，调节性 T 细胞能够维持机体处于免疫耐受的稳定状态，当机体内调节性 T 细胞水平升高，机体免疫平衡状态被打破，导致治疗后仍可出现布鲁氏菌难以被彻底清除的现象，降低治疗效果。同时本次研究中，将调节性 T 细胞水平作为检验变量，将布鲁氏菌病治疗效果作为状态变量(0=有效，1=无效)，绘制 ROC 曲线，结果显示，调节性 T 细胞水平预测布鲁氏菌病治疗效果的 AUC 0.7，有一定预测价值，当各指标取最佳阈值时，可获得最佳预测价值。因此临床可通过检测患者调节性 T 细胞水平预测治疗效果，针对性干预，以提升疗效。然而由于本次整体样本量不大其结果可能有一定的偏差，后期应增加样本量进行深入研究，从而准确评估治疗效果，并指导临床合理应用抗菌药物。综上所述，外周血中调节性 T 细胞水平与急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果密切相关，是影响治疗效果的影响因素，同时临床可通过检测患者调节性 T 细胞水平，预测治疗效果，在未来临床可通过调节外周血中调节性 T 细胞水平，以提高多西环素治疗效果。参考文献1黎舒,陈秋兰,殷文武,等.20132018年全国布鲁氏菌病诊断现状分析J.疾病监测,2019,34(12):1052-1057.2郑永智,陈飞飞,王上增.多西环素联合利福平对慢性布鲁杆菌病骨关节疼痛疗效分析J.中国地方病防治杂志,2016,31(3):331.3王刚.利福平联合多西环素治疗布鲁氏杆菌病感染的临床效果研究J.现代诊断与治疗,2022,33(17):2568-2570.4王敏,刘鑫.布鲁氏菌感染的固有免疫机制研究进展J.基础ROC 曲线敏感度1-特异度图 1调节性 T 细胞水平对急性期布鲁氏菌患者多西环素治疗效果预测价值分析116Clinical Research,Nov.2023,Vol.31 No.11作者简介：赵佳，主管药师，本科。研究方向：化疗药和肠外营养用药方面。医学与临床,2018,38(9):1352-1355.5中华人民共和国卫生部.布鲁氏菌病诊疗指南(试行)J.传染病信息,2012,25(6):323-324,359.6刘瑾,刘爱军,幕卫东.多西环素联合复方磺胺甲噁唑治疗急性期布鲁氏菌病的疗效观察J.检验医学与临床,2019,16(22):3376-3378.7杨晓彤,张莹辉,李巧玲,等.布鲁氏菌粗糙型RA343株与光滑型A19株免疫小鼠后特异性T细胞和抗体动态变化分析J.微生物学通报,2022,49(7):2700-2714.8纪丽丽,李晴,孔妍霓,等.布鲁氏菌病患者菌型鉴定及T淋巴细胞亚群和IL-6与IFN-的诊断价值J.中华医院感染学杂志,2023,33(4):502-506.9赵青松,方瑞,刘亢亢,等.CD4+CD25+调节性T淋巴细胞在儿童传染性单核细胞增多症的变化及作用J.安徽医学,2019,40(2):175-177.10刘熔,王昌敏,郝立君,等.调节性T细胞在布鲁氏菌感染中的变化特点研究J.中国人兽共患病学报,2020,36(10):847-851.临床治疗白蛋白结合型紫杉醇与溶剂型紫杉醇对 HER2 阴性晚期胃癌患者进行二线化疗的药学观察赵佳(郑州大学第五附属医院 药学部，河南 郑州 450000)摘要：目的 对比分析白蛋白结合型紫杉醇与溶剂型紫杉醇对人表皮生长因子受体-2(HER2)阴性晚期胃癌患者进行二线化疗的药学疗效。方法 选取郑州大学第五附属医院在 2021 年 3 月至 2023 年 3 月期间收治的 62 例 HER2 阴性晚期胃癌患者作为研究对象，依据区间随机法将其分为对照组、研究组，各纳入 31 例。对照组采用白蛋白溶剂型紫杉醇二线化疗，研究组采用白蛋白结合型紫杉醇二线化疗。比较两组治疗效果，治疗前后肿瘤标志物指标，胃肠功能量表及不良反应发生情况。结果 对照组治疗有效率(83.87%)低于研究组(87.10%)，差异无统计学意义(P 0.05)。治疗前，两组肿瘤标志物水平对比，差异无统计学意义(P 0.05)；治疗后，两组癌胚抗原、糖链抗原 19、糖链抗原19-9、癌链抗原 72-4、胃蛋白酶原较治疗前均有明显下降，差异有统计学意义(P 0.05)，治疗后组间比较，差异无统计学意义(P 0.05)。治疗前，两组胃肠功能量表评分(GSRS)对比，差异无统计学意义(P 0.05)；治疗后，两组 GSRS 评分较治疗前均明显下降，差异有统计学意义(P 0.05)，治疗后组间比较，差异无统计学意义(P 0.05)。研究组化疗期间不良反应发生率(9.68%)低于对照组(35.48%)，差异有统计学意义(P 0.05)。结论 HER2 阴性晚期胃癌采取白蛋白结合型紫杉醇、溶剂型紫杉醇的进行二线化疗的疗效对比无显著差异，但前者不良反应相对较少，安全性更高，值得应用。关键词：白蛋白结合型紫杉醇；白蛋白溶剂型紫杉醇；HER2 阴性晚期胃癌；二线化疗中图分类号：R735.2文献标志码：B DOI：10.12385/j.issn.2096-1278(2023)11-0116-04Medical observations of nab-paclitaxel or solvent-based paclitaxel in negative HER2 patients with late gastric cancer following the second-line chemotherapyZHAO Jia(Department of Pharmacy,Zhengzhou University Fifth Affiliated Hospital,Zhengzhou Henan 450000,China)Abstract:Objective To compare the medical effects of nab-paclitaxel or solvent-based paclitaxel in negative human epidermal growth factor receptor-2(HER2)patients with late gastric cancer following the second-line chemotherapy.Methods 62 negative HER2 patients with late gastric cancer admitted from March 2021 to March 2023 in our hospital were chosen as research subjects.According to the random interval method,patients were assigned to control group(n=31,second-line chemotherapy with solvent-based paclitaxel)and study group(n=31,second-line chemotherapy with nab-paclitaxel).Compare the overall treatment efficacy,tumor marker indicators,gastrointestinal function scale,and incidence of adverse reactions between the two groups before and after treatment.Results The total response rates between control group and study group were not significantly different(83.87%vs.87.10%,P 0.05);before therapy,the tumor markers between groups were not significantly different (P 0.05);after therapy,the carcino-embryonic antigen(CEA),carbohydrate antigen 19.9(CA19-9),carbohydrate antigen 72-4(CA72-4)and Pepsinogen I(PGI)levels for two groups were lower than before,but without statistically significant differences between groups(P 0.05);before therapy,the gastrointestinal symptom rating scale(GSRS)scores between groups were not significantly different(P 0.05);after therapy,GSRS scores for two groups were lower than before,but without statistically significant differences between groups(P 0.05);the toxic reaction rates in the study group were lower than control group(9.68%vs.35.48%)(P 0.05).Conclusion The second-line chemotherapy with nab-paclitaxel or solvent-based paclitaxel has the fair effects for negative HER2 patients with late gastric cancer,but the nab-paclitaxel can better reduce the patients toxic reactions.Key Words:nab-paclitaxel;solvent-based paclitaxel;negative HER2 with late gastric cancer;second-line chemotherapy