不同浓度伏立康唑对人急性单核细胞白血病细胞株来源巨噬细胞免疫功能的影响.pdf

论著不同浓度伏立康唑对人急性单核细胞白血病细胞株来源巨噬细胞免疫功能的影响滕国杰 聂秀红(首都医科大学宣武医院呼吸与危重症医学科,北京 1 0 0 0 5 3)【摘要】目的 探讨不同伏立康唑药物浓度对人急性单核细胞白血病细胞株(h u m a n a c u t e m o n o c y t i c l e u k e m i a c e l l l i n e,THP-1细胞株)来源巨噬细胞免疫功能的影响。方法 TH P-1来源巨噬细胞中加入最终浓度为0、0.2 5、0.5、1、2、4、8、1 6、3 2、6 4 g/m L的伏立康唑,加入灭活烟曲霉菌液(i n a c t i v a t e d A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s l i q u i d,I A F L),培养箱孵育6 h。检测培养上清液中肿瘤坏死因子-(t u m o r n e c r o s i s f a c t o r-,TN F-)、白细胞介素-1(i n t e r l e u k i n-1,I L-1)及白细胞介素-1 0(i n-t e r l e u k i n-1 0,I L-1 0)的浓度;流式细胞仪检测THP-1来源巨噬细胞膜表面T o l l样受体-2(T o l l l i k e r e c e p t o r-2,T L R 2)、T o l l样受体-4(T o l l l i k e r e c e p t o r-4,T L R 4)、树突状细胞相关C型凝集素-1(d e n d r i t i c c e l l-a s s o c i a t e d C-t y p e l e c t i n-1,D e c t i n-1)的表达。结果 加入浓度46 4 g/m L伏立康唑时,培养上清液中TN F-、I L-1的浓度较对照组(仅含TH P-1来源巨噬细胞和灭活烟曲霉菌液)明显升高(P均0.0 5)。加入浓度16 4 g/m L伏立康唑时,巨噬细胞膜表面T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1平均荧光强度(m e d i a n f l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y,MF I)较灭活烟曲霉菌液对照组均明显升高(P0.0 5)。在伏立康唑浓度为4 g/m L、4 g/m L、1 g/m L时,细胞膜表面T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1的平均荧光强度分别达到峰值。结论 在灭活烟曲霉菌液存在时,伏立康唑浓度在46 4 g/m L时可以刺激TH P-1来源巨噬细胞TN F-、I L-1分泌明显增加,细胞膜表面T L R 2、T L R 4和D e c t i n-1的表达增强。但这种加强并不是随伏立康唑剂量增加而持续增高。【关键词】伏立康唑;巨噬细胞;模式识别受体;细胞因子【中图分类号】R 9 7 8.5 【文献标志码】A 【文章编号】1 6 7 3-3 8 2 7(2 0 2 3)1 8-0 3 8 5-0 6E f f e c t s o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f v o r i c o n a z o l e o n T H P-1-i n d u c e d m a c r o p h a g e i mm u n e f u n c t i o nT E NG G u o j i e,N I E X i u h o n g(D e p a r t m e n t o f r e s p i r a t o r y a n d c r i t i c a l c a r e m e d i c i n e,X u a n w u H o s p i t a l C a p i t a l M e d i c a l U n i v e r s i t y,B e i j i n g 1 0 0 0 5 3,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T h e a i m o f t h i s s t u d y w a s t o e x p l o r e t h e e f f e c t s o f c o n c e n t r a t i o n s o f v o r i c o n a z o l e o n t h e m a c r o p h a g e s i mm u n e f u n c t i o n i n d u c e d b y THP-1 c e l l s.M e t h o d s D i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f v o r i c o n a z o l e w e r e a d d e d t o TH P-1 i n d u c e d m a c r o p h a g e s,t h e f i n a l c o n c e n t r a t i o n o f v o r i c o n a z o l e w a s 0,0.2 5,0.5,1,2,4,8,1 6,3 2,6 4 g/m L,a n d t h e i n a c t i v a t e d A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s l i q u i d(I A F L)w a s a d d e d,i n c u b a t e f o r 6 h o u r s.T u m o r n e c r o s i s f a c t o r-(T N F-),i n t e r l e u k i n-1(I L-1),a n d i n t e r l e u k i n-1 0(I L-1 0)c o n c e n t r a t i o n i n t h e c u l t u r e s u p e r n a t a n t w e r e d e t e c t e d.F l o w c y t o m e t r y w a s u s e d t o d e-t e c t t h e e x p r e s s i o n o f T o l l l i k e r e c e p t o r-2(T L R 2),T o l l l i k e r e c e p t o r-4(T L R 4),a n d d e n d r i t i c c e l l-a s s o c i a t e d C-t y p e l e c t i n-1(D e c t i n-1)o n t h e m a c r o p h a g e s m e m b r a n e s u r f a c e.R e s u l t W h e n t h e c o n c e n t r a t i o n o f v o r i c o n a z o l e w a s b e t w e e n 4 a n d 6 4 g/m L,t h e c o n c e n t r a t i o n s o f TN F-a n d I L-1 w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e o f t h e c o n t r o l g r o u p(c o n t a i n i n g o n l y THP-1-d e r i v e d m a c r o p h a g e s a n d i n a c t i v a t e d A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s l i q u i d)(P0.0 5).W h e n t h e c o n c e n t r a t i o n o f v o r i c o n-a z o l e w a s 1-6 4 g/m L,t h e m e d i a n f l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y o f T L R 2,T L R 4,a n d D e c t i n-1 o n t h e c e l l m e m b r a n e s u r f a c e w a s作者简介:滕国杰,女(汉族),博士,副主任医师.E-m a i l:t e n g 1 9 9 71 6 3.c o m通信作者:聂秀红,E-m a i l:n i e x i u h o n g 2 0 1 91 6 3.c o m583 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t o f t h e I A F L c o n t r o l g r o u p(P0.0 5).Wh e n v o r i c o n a z o l e c o n c e n t r a t i o n w a s 4 g/m L,4 g/m L a n d 1 g/m L,t h e a v e r a g e f l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y o f T L R 2,T L R 4 a n d D e c t i n-1 o n t h e c e l l m e m b r a n e s u r f a c e r e a c h e d t h e p e a k.C o n c l u s i o n I n t h e p r e s e n c e o f I A F L,t h e s e c r e t i o n o f T N F-a n d I L-1 f r o m m a c r o p h a g e s i n d u c e d b y THP-1 c o u l d b e s t i m u l a t e d b y v o r i c o n a z o l e.T h e e x p r e s s i o n o f T L R 2,T L R 4 a n d d e c t i n-1 o n t h e s u r f a c e o f m a c r o p h a g e m e m b r a n e w a s e n-h a n c e d.H o w e v e r,t h e e n h a n c e m e n t d i d n o t i n c r e a s e c o n t i n u o u s l y w i t h t h e i n c r e a s e o f v o r i c o n a z o l e d o s e.【K e y w o r d s】v o r i c o n a z o l e;m a c r o p h a g e s;p a t t e r n r e c o g n i t i o n r e c e p t o r s;c y t o k i n e sC h i n J M y c o l,2 0 2 3,1 8(5):3 8 5-3 9 0 既往研究表明,多种抗真菌药物除了对真菌的杀灭作用外,还具有免疫调节作用,其可能通过宿主免疫细胞信号通路,调节炎症反应,影响免疫细胞对真菌的作用。两性霉素B可以促进炎性细胞因子释放1,而氟康唑可以减少曲霉菌丝刺激后人全血I L-6、I L-8和T N F-的释放2。伏立康唑作为三唑类抗真菌药物,也具有免疫调节作用。S i m-i t s o p o u l o u等3的研究显示伏立康唑通过T L R 2的上调来增强吞噬细胞的促炎程序,F i d a n等4发现,伏立康唑作用下,白念珠菌刺激的外周血单个核细胞的I L-2、干扰素(i n t e r f e r o n,I F N-)和I L-6水平显著增加。在伏立康唑作用下,烟曲霉诱导TH P-1细胞更加显著的炎症基因表达,包括干扰素-和T N F-等基因的表达明显增强,释放T N F-、I L-1明显增加5。伏立康唑浓度差异是否会对免疫状况存在不同影响,目前国内外文献鲜有报道。为此,本研究观察TH P-1来源巨噬细胞加入不同浓度伏立康唑及灭活烟曲霉菌液,检测细胞培养上清液中T N F-、I L-1、I L-1 0分泌水平及细胞膜表面模式识别受体T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1表达的变化,探讨伏立康唑药物浓度对巨噬细胞免疫功能的影响差异。1 材料与方法1.1 材料细胞及试剂 人急性单核细胞白血病细胞株(h u m a n a c u t e m o n o c y t i c l e u k e m i a c e l l l i n e,TH P-1细胞株)来源于中科院细胞库,R PM I 1 6 4 0培养基(美国G i b c o-I n v i t r o g e n 公司),胎牛血清(f e t a l b o v i n e s e r u m,F B S)(美 国G i b c o-I n v i t r o g e n 公司),青霉素-链霉素-二抗溶液(美国G i b c o-I n v i t r o-g e n 公司),肉豆蔻酸佛波醇乙酸酯(p h o r b o l-1 2-m y r i s t a t e-1 3-a c e t a t e,PMA)(中国碧云天试剂公司),伏立康唑(美国辉瑞公司生产),二甲基亚砜(d i m e t h y l s u l f o x i d e,DM S O)(美国S i g m a公司)。烟曲霉菌液的制备 烟曲霉感染患者的分离株,接种在沙堡弱葡萄糖琼脂培养基上于3 7 和5%C O2培养箱下培养5 d,以形成分生孢子。分生孢子通过7 0 n m细胞筛进行过滤,使用R PM I 1 6 4 0重悬分生孢子,在3 7 和5%C O2的完全培养基中进行孵育,1 2 h部分分生孢子形成菌丝,进行收集,将孵育后的烟曲霉分生孢子和菌丝形成的菌液在玻璃管中于1 2 0 高压灭活3 0 m i n6-7。伏立康唑药液配置 伏立康唑粉剂微量电子天平称取1 0 m g,无菌操作下溶解于二甲基亚砜,国外文献报道二甲基亚砜对细胞无明显毒性作用8,加入无内毒素蒸馏水补足至1 m L,进行分装,使用时加入完全培养基,倍比稀释至所需浓度。1.2 方法TH P-1来源的细胞诱导为巨噬细胞 文献报道,TH P-1细胞使用1 0 0 n g/m L佛波酯(PMA)诱导4 8 h分化为巨噬细胞9,具有与人外周血单核细胞来源巨噬细胞类似的功能1 0。受不同微环境的影响,使用PMA诱导TH P-1细胞为巨噬细胞,该细胞可以向M 1表型进一步分化,也可以向M 2表型进一步分化1 1。用1 0 0 n g/m L PMA在3 7 诱导TH P-1细胞4 8 h,倒置显微镜动态观察细胞变化。培养4 8 h后显微镜下观察细胞形态改变,细胞由悬浮细胞改为贴壁、并出现聚集、伪足伸出。诱导TH P-1细 胞 形 成 巨 噬 细 胞。将 细 胞 加 入0.0 2%乙二胺四乙酸溶液,使细胞脱离贴壁,离心收集。C C K-8法检测不同浓度伏立康唑联合灭活的烟曲霉 菌 液 对TH P-1来 源 巨 噬 细 胞 的 毒 性 TH P-1细胞诱导形成的巨噬细胞,以每孔1 0 0 L培养液中包含51 03个细胞的浓度,接种于9 6孔培养板。每个孔加入浓度分别为0.2 5、0.5、1、2、4、8、1 6、3 2、6 4 g/m L的伏立康唑后,再加入浓度为51 02个/m L的灭活烟曲霉液,并且设置仅含有TH P-1来源巨噬细胞和灭活烟曲霉菌液的对照683 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 孔。分别3 7、5%C O2培养箱中孵育6、1 2、2 4 h。之后每孔加入1 0 L的C C K-8溶液培养2 h后,用酶标仪在4 5 0 n m处测量吸光度值。实验重复3次,取平均值。不同浓度伏立康唑联合灭活烟曲霉菌液体外刺激TH P-1来源巨噬细胞 每孔1 m L培养基中包含11 06个TH P-1细胞形成的巨噬细胞,接种于2个6孔培养板。孵育过夜。在培养板中,第1孔作为空白孔,其余各孔中加入终浓度为1 05个/m L的灭活烟曲霉菌液之后,再加入浓度分别为0、0.2 5、0.5、1、2、4、8、1 6、3 2、6 4 g/m L的伏立康唑。并且设置仅含有TH P-1来源巨噬细胞和灭活烟曲霉菌液的对照孔,在3 7 和5%C O2培养箱孵育6 h1 2。培养后,收集培养板中每孔的上清液测定培养上清液中的细胞因子T N F-、I L-1、I L-1 0的水平。收获贴壁的巨噬细胞,流式细胞仪检测细胞表面的T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1表达。实验重复3次,取平均值。流式 细 胞 检 测 体 外 培 养 细 胞 表 面T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1表达 流式管中加入荧光标记抗体:B D P h a r m i n g e nTM P E M o u s e A n t i-H u m a n C D 3 6 9(C l e c 7 A)(D e c t i n-1),B D H o r i z o nTM B B 5 1 5 M o u s e A n t i-H u m a n C D 2 8 2(T L R 2),B D O p t i B u i l dTM B V 4 2 1 M o u s e A n t i-H u m a n C D 2 8 4(T L R 4),各5 g,加入待检测的细胞,同型对照管加 入 同 型 抗 体:B D P h a r m i n g e nTM P E M o u s e I g G 2 a I s o t y p e C o n t r o l,B D H o r i z o nTM B B 5 1 5 M o u s e I g G 1 I s o t y p e C o n t r o l,B D H o r i z o nTM B V 4 2 1 M o u s e I g G 2 a I s o t y p e C o n t r o l,各5 g,震荡混匀,应用B D F A C S C a n t o型流式细胞仪进行细胞表面T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1的表达检测。通过F l o w j o软件进行分析,计算表达的平均荧光强度。1.3 统计学处理采用S P S S 2 0.0软件(I BM,A r m o n k,NY,U S A)进行统计分析,正态分布的计量资料以均数标准差表示,组间的比较采用D u n n e t t-t检验。非正态分布的计量资料以中位数及四分位数表示,组间比较采用K r u s k a l-W a l l i s检验。统计学假设检验采用双侧检验,P0.0 5),作用1 2 h,伏立康唑浓度6 4 g/m L时,显示1 9.9%1.6%的抑制作用(P0.0 5);作用2 4 h后,伏立康唑浓度8 g/m L及6 4 g/m L时,显示2 3.1%7.0%和2 8.7%8.1%的抑制作用(P均0.0 1)。结果表明,随时间延长和伏立康唑浓度升高,伏立康唑对TH P-1来源巨噬细胞毒性作用显示出随时间和剂量依赖的增强。2.3 不同浓度伏立康唑联合灭活烟曲霉菌液体外刺激TH P-1来源巨噬细胞培养上清液中T N F-、I L-1、I L-1 0浓度变化文献报道,人巨噬细胞细胞在受到外界刺激后,T N F-等炎症因子释放在6 h内达到峰值1 2,本研究最终选择6 h作为细胞功能研究的时间。在对照组中(L A F L组:仅含TH P-1来源巨噬细胞和灭活烟曲霉菌液),培养上清液中T N F-、I L-1浓 度 分 别(4 7 1.9 45 6.5 1)p g/m L和(1 1 0.5 61 5.0 4)p g/m L,加入不同浓度伏立康唑后,上清液中T N F-、I L-1浓度逐渐升高,在伏立康唑浓度46 4 g/m L之间时,T N F-、I L-1浓度较对照组出现显著升高(P均0.0 5),见图3。2.4 不同浓度伏立康唑联合灭活烟曲霉菌液体外刺激TH P-1来源巨噬细胞膜表面T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1表达 在对照组中(L A F L组:仅含TH P-1来源巨噬783 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 细胞和灭活烟曲霉菌液),流式细胞仪检测巨噬细胞膜表面模式识别受体T L R 2、T L R 4的平均荧光强度位于较低水平。加入不同浓度伏立康唑后,细胞膜表面T L R 2、T L R 4的平均荧光强度逐渐增强,在伏立康唑浓度为16 4 g/m L时,T L R 2、T L R 4的平均荧光强度与对照组相比显著增强(P0.0 5),在伏立康唑浓度为4 g/m L时,细胞膜表面T L R 2、T L R 4的平均荧光强度达到峰值。模式识别受体D e c t i n-1对伏立康唑浓度变化更为敏感。伏立康唑浓度在0.56 4 g/m L时,D e c t i n-1的平均荧光强度与对照组相比出现显著升高(P0.0 1),在伏立康唑浓度为1 g/m L时,D e c t i n-1的平均荧光强度即达到峰值,见图4、5。图1 加入1 0 0 n g/m L的PMA刺激4 8 h TH P-1细胞分化为巨噬细胞(4 0)图2 不同浓度伏立康唑联合灭活烟曲霉菌液对TH P-1来源巨噬细胞的毒性:作用1 2 h:*P0.0 5,作用2 4 h:#P0.0 1(与未加入伏立康唑的对照组相比)图3 不同浓度伏立康唑联合灭活烟曲霉菌液刺激TH P-1来源巨噬细胞,培养上清液中TN F-、I L-1、I L-1 0浓度。*P0.0 5,#P0.0 1(与I A F L组相比)图4 流式细胞仪检测TH P-1来源巨噬细胞膜表面受体表达F i g.1 TH P-1 c e l l s w e r e s t i m u l a t e d w i t h 1 0 0 n g/m L PMA f o r 4 8 h a n d d i f f e r e n t i a t e d i n t o m a c r o p h a g e s(4 0)F i g.2 T o x i c i t y o f v o r i-c o n a z o l e c o m b i n e d w i t h I A F L t o TH P-1-d e r i v e d m a c r o p h a g e s:1 2 h:*P0.0 5,2 4 h:#P0.0 1(c o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p w i t h o u t v o r i c o n a z o l e)F i g.3 L e v e l s o f T N F-,I L-1 a n d I L-1 0 i n c u l t u r e s u p e r n a t a n t o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f v o r i c o n a z o l e c o m b i n e d w i t h I A F L s t i m u l a t e d TH P-1-d e r i v e d m a c r o p h a g e s,*P0.0 5,#P0.0 1(c o m p a r e d w i t h I A F L g r o u p)F i g.4 T h e e x p r e s s i o n o f TH P-1-d e r i v e d m a c r o p h a g e m e m b r a n e s u r f a c e r e c e p t o r w a s d e t e c t e d b y f l o w c y t o m e t r y883 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 图5 不同浓度伏立康唑联合灭活烟曲霉菌液刺激TH P-1来源巨噬细胞膜表面T L R 2、T L R 4、D e c t i n-1平均荧光强度。*P0.0 5,#P0.0 1(与I A L F组相比)F i g.5 MF I o f T L R 2,T L R 4 a n d D e c t i n-1 o n t h e m e m b r a n e s u r f a c e o f TH P-1-d e r i v e d m a c r o p h a g e s s t i m u l a t e d b y d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f v o r i c o n a z o l e c o m b i n e d w i t h I A F L.*P 0.0 5,#P 0.0 1(c o m p a r e d w i t h I A F L g r o u p)3 讨 论对于曲霉感染患者而言,指南推荐长期口服抗真菌药物治疗,以防止曲霉感染的复发。侵袭性肺曲霉病指南推荐持续治疗61 2周1 3,慢性肺曲霉病指南推荐至少口服治疗6个月,对于存在持续性免疫抑制的患者,则可能需要终身治疗1 4。在如此长时间里,药物对机体免疫功能的影响尤为明显。不同组织中伏立康唑的浓度不同,伏立康唑在肺泡上皮衬液中的浓度最高,约为血浆浓度的1 1倍1 5;脑组织中的浓度为血浆浓度的23倍1 6;房水中的浓度仅仅为血浆浓度的0.5 3倍1 7。指南推荐伏立康唑血药浓度应维持在0.56 g/m L,故而推测在肺泡上皮衬液中的浓度约5.56 6 g/m L,房水中的浓度为0.2 53 g/m L。在不同组织中,伏立康唑的浓度范围是0.2 56 6 g/m L。本研究观察了浓度为0.2 56 4 g/m L时伏立康唑对TH P-1来源巨噬细胞免疫功能的影响。T N F-、I L-1均为促炎因子,在抗曲霉感染中起重要作用1 8。本研究结果显示,加入灭活烟曲霉菌液后,TH P-1来源巨噬细胞分泌T N F-、I L-1浓度显著升高,在灭活烟曲霉菌液存在情况下,伏立康唑的浓度为46 4 g/m L时,刺激TH P-1来源巨噬细胞分泌T N F-、I L-1较对照组显著升高(P0.0 5)。参与曲霉识别的模式识别受体主要是T L R 2、T L R 4和D e c t i n-1,其中细胞膜表面D e c t i n-1可以特异性识别真菌细胞壁中的-葡聚糖2 0-2 4。有研究表明,伏立康唑通过上调固有免疫系统中模式识别受体T L R 2 mR NA表达,增强吞噬细胞促炎程序,促进炎症因子T N F-的分泌3。本研究结果表明,在灭活烟曲霉菌液存在情况下,浓度为16 4 g/m L伏立康唑可以刺激TH P-1来源巨噬细胞膜表面T L R 2、T L R 4和D e c t i n-1表达。推测伏立康唑可以通过刺激巨噬细胞膜表面模式识别受体T L R 2、T L R 4和D e c t i n-1的表达增强,促进宿主对曲霉的识别,进而杀灭曲霉。但这种表达的增强同样不随伏立康唑浓度的倍增而持续递增,在伏立康唑浓度为4 g/m L、4 g/m L、1 g/m L时,T L R 2、T L R 4和D e c t i n-1的表达分别达到峰值。出现这种情况的原因,推测与高浓度的伏立康唑对细胞的毒性作用有关。文献报道,伏立康唑浓度达1 0 0 g/m L以上时会降低小鼠成骨细胞和成纤维细胞的生长2 5。伏立康唑浓度1 0 0 g/m L时增加人角膜内皮损伤的风险。本研究结果显示,浓度6 4 g/m L伏立康唑联合灭活烟曲霉菌液作用于巨噬细胞1 22 4 h,表现出明显的细胞抑制作用,证实高浓度伏立康唑对TH P-1来源巨噬细胞具有的毒性作用。推测伏立康唑浓度高达6 4 g/m L时导致TH P-1来源巨噬细胞免疫活性的下983 中国真菌学杂志 2 0 2 3年1 0月 第1 8卷 第5期 C h i n J M y c o l,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.5 降,引起炎症因子释放减少以及细胞膜表面模式识别受体表达减少。本研究结果提示,对于需要长期口服伏立康唑治疗的曲霉病患者,适当浓度的伏立康唑可能更有利于促进患者巨噬细胞的免疫活性。宿主的免疫机制与曲霉的感染之间的关系错综复杂,涉及多种细胞及不同的作用机制,本研究仅进行了初步探讨。进一步对相关免疫细胞及其机制进行深入研究,将为临床工作提供更加有力的理论依据。参 考 文 献1 R A Z ONA B L E R R,HE NAU L T M,L E E L N,e t a l.S e-c r e t i o n o f p r o i n f l a mm a t o r y c y t o k i n e s a n d c h e m o k i n e s d u r i n g a m p h o t e r i c i n B e x p o s u r e i s m e d i a t e d b y c o a c t i v a t i o n o f t o l l-l i k e r e c e p t o r s 1 a n d 2 J.A n t i m i c r o b i a l a g e n t s a n d c h e m o-t h e r a p y,2 0 0 5,4 9(4):1 6 1 7-1 6 2 1.2 郑晓丽,陈官芝,刘维达.抗真菌药物的免疫调节作用 J.中国真菌学杂志,2 0 2 0,3(1 5):1 7 9-1 8 2.3 S I M I T S O P OU L OU M,R O I L I D E S E,P A L I OG I ANN I F,e t a l.I mm u n o m o d u l a t o r y e f f e c t s o f v o r i c o n a z o l e o n m o n o-c y t e s c h a l l e n g e d w i t h A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s:d i f f e r e n t i a l r o l e o f T o l l-l i k e r e c e p t o r s J.A n t i m i c r o b i a l a g e n t s a n d c h e m o t h e r a p y,2 0 0 8,5 2(9):3 3 0 1-3 3 0 6.4 F I D AN I,Y E S I L YUR T E,KA L KAN C I A,e t a l.I mm u-n o m o d u l a t o r y e f f e c t s o f v o r i c o n a z o l e a n d c a s p o f u n g i n o n h u-m a n p e r i p h e r a l b l o o d m o n o n u c l e a r c e l l s s t i m u l a t e d b y C a n-d i d a a l b i c a n s a n d C a n d i d a k r u s e i J.Am J M e d S c i,2 0 1 4,3 4 8(3):2 1 9-2 2 3.5 S I M I T S O P OU L OU M,R O I L I D E S E,L I KA R T S I S C,e t a l.E x p r e s s i o n o f i mm u n o m o d u l a t o r y g e n e s i n h u m a n m o n o-c y t e s i n d u c e d b y v o r i c o n a z o l e i n t h e p r e s e n c e o f A s p e r g i l l u s f u m i g a t u sJ.A n t i m i c r o b A g e n t s C h e m o t h e r,2 0 0 7,5 1(3):1 0 4 8-1 0 5 4.6 O E S T E R R E I C HE R Z,E B E R L S,Z E I T L I N G E R M.I m-p a c t o f d i f f e r e n t a n t i m y c o t i c s o n c y t o k i n e l e v e l s i n a n i n v i t r o a s p e r g i l l o s i s m o d e l i n h u m a n w h o l e b l o o d J.I n f e c-t i o n,2 0 2 0,4 8(1):6 5-7 3.7 L O E F F L E R J,HA D D A D Z,B ON I N M,e t a l.I n t e r a c t i o n a n a l y s e s o f h u m a n m o n o c y t e s c o-c u l t u r e d w i t h d i f f e r e n t f o r m s o f A s p e r g i l l u s f u m i g a t u sJ.J M e d M i c r o b i o l,2 0 0 9,5 8(P t 1):4 9-5 8.8 R I E S F,A L F L E N A,A R AN D A L O P E Z P,e t a l.A n t i f u n-g a l d r u g s i n f l u e n c e n e u t r o p h i l e f f e c t o r f u n c t i o n s J.A n t i-m i c r o b A g e n t s C h e m o t h e r,2 0 1 9,6 3(6):e 0 2 4 0 9-0 2 4 1 8.9 陈亮,孙毅凡,陈涛,等.佛波酯诱导TH P-1细胞分化条件的优化及自噬模型的建 立J.中国防 痨杂志,2 0 1 3,3 5(1 2):9 9 7-1 0 0 2.1 0 杨颖,李勤,张嘉敏,等.PMA活化TH P-1的巨噬细