输血前配合性试验技术ppt课件.ppt

输血前配合性血前配合性试验技技术1.主要内容主要内容一、一、ABOABO和和RhRh血型血型鉴定定二、抗体二、抗体筛选和和鉴定定三、交叉配血三、交叉配血试验四、抗人球蛋白四、抗人球蛋白试验五、血小板五、血小板输注前的抗体注前的抗体检测及配合及配合试验六、血六、血浆输注前配合注前配合试验2.输血血风险免疫反免疫反应 输血血传播疾病播疾病 红细胞胞 白白细胞胞 血小板血小板血血浆 乙乙肝肝丙丙肝肝艾艾滋滋病病 HTLV/I CMV其其它它急急性性溶溶血血反反应 迟发性性溶溶血血反反应 FNHTR输血血相相关关急急性性肺肺损伤TA/GVHDPTPPTR荨麻麻疹疹过敏敏性性休休克克/死死亡亡3.血型定型是基血型定型是基础 目的：准确定型，目的：准确定型，选择相容相容血液血液意意义：输血安全、有效血安全、有效4.一、一、ABOABO和和RhRh血型血型鉴定定1.ABO1.ABO定型定型 最适的反最适的反应温度温度为44，但在室温反，但在室温反应良良好，常好，常规的的ABOABO定型定型试验仅在室温在室温进行。行。5.红细胞常胞常规ABOABO定性定性 血型血型 正定型正定型 反定型反定型 抗抗 A A 抗抗 B Ac Bc B Ac Bc OcOc A +-+-B -+-O -+-AB +-6.鉴定方法介定方法介绍1 1）玻片法、）玻片法、试管法管法(经典方法典方法)玻片法和试管法的实验原理基本相同，二者的共同点是操作简便，玻片法只做正定型,试管法进行ABO血型鉴定的正定型和反定型。缺点：操作不易自缺点：操作不易自动化、批量化、化、批量化、结果果不易保存不易保存7.2 2）微柱凝胶法）微柱凝胶法过滤介介质为颗粒直径粒直径26-103 nm26-103 nm的葡聚糖的葡聚糖100100凝胶，凝胶，凝胶凝胶间缝隙只允隙只允许游离游离红细胞通胞通过，与抗，与抗 体反体反应的的红细胞不能通胞不能通过。工作程序和工作程序和结果的判果的判读易于易于标准化，自准化，自动化。化。该实验方法方法还具有所需具有所需标本少、本少、结果准确、抗干果准确、抗干扰能力能力强、溶血和脂血影响少、重复性好等、溶血和脂血影响少、重复性好等优点，点，有利于有利于实验室的室的质量控制，提高工作效率量控制，提高工作效率。8.微柱凝胶法微柱凝胶法结果果9.3 3）PCRPCR血型基因分型血型基因分型 包括包括PCR-SSP(PCR-PCR-SSP(PCR-序列特异性引物序列特异性引物)技技术、PCR-SSO(PCR-PCR-SSO(PCR-序列特异性寡核苷序列特异性寡核苷酶探探针)技技术、PCR-SSCP(PCR-PCR-SSCP(PCR-单链构象构象多多态性性)技技术、基因芯片等。、基因芯片等。10.基因分型技基因分型技术的的应用：用：疑疑难血型血型鉴定：定：ABO ABO 血型血型亚型的型的鉴定、定、血型抗原减弱个体的血型血型抗原减弱个体的血型鉴定、抗体消定、抗体消失的血型失的血型鉴定、定、获得性得性B B的的鉴定等定等 直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白试验阳性的患者血型阳性的患者血型鉴定定 亲子子鉴定及法医定及法医应用等用等11.4)ABO4)ABO血型的流式血型的流式细胞胞术检测方法和原理是用方法和原理是用荧光素光素标记人源抗人源抗-A-A、抗、抗-B B 单克隆抗体，与待克隆抗体，与待测标本中的本中的红细胞反胞反应,然后用流式然后用流式细胞胞术检测待待测标本中本中细胞胞与抗与抗-A-A、抗、抗-B-B 单克隆抗体的克隆抗体的结合情况合情况成本高、操作复成本高、操作复杂,非常非常规方法方法利用流式利用流式细胞胞术对孕孕妇血流中微量的胎儿血流中微量的胎儿红细胞胞进行行检测可以可以实现非侵入性胎儿血非侵入性胎儿血型型鉴定定12.抗原抗体比例：一般抗原抗体比例：一般认为增加抗体量能提增加抗体量能提高高检测敏感性，极少有敏感性，极少有显著性抗体著性抗体过量而量而抑制凝集反抑制凝集反应者（者（前前带现象象）。）。2 2滴血清滴血清+1+1滴滴 2%2%5%5%红细胞胞必要必要时血清增加到血清增加到10102020滴滴前前带现象象：一种抗原：一种抗原-抗体反抗体反应的的现象。以定量抗原象。以定量抗原检测抗体，若抗体抗体，若抗体过剩，可使所形成的免疫复合物反而减少，剩，可使所形成的免疫复合物反而减少，而不出而不出现凝集。凝集。13.盐水水试验多采用多采用立即立即离心法离心法,正确的操作是正确的操作是红细胞胞悬液加到血清后立即离心并液加到血清后立即离心并观察察结果。反果。反应时间过长而延而延误立即离心的立即离心的时间对ABOABO血型系血型系统的抗体的抗体检出影响出影响较大。大。如果在室温放置如果在室温放置2 2分分钟后离心后离心,可能使凝可能使凝集减弱集减弱,并伴有溶血并伴有溶血现象。象。如果在室温放置如果在室温放置5 5分分钟后离心后离心,原有的凝原有的凝集可能消失集可能消失,并有溶血。并有溶血。14.常常规定型定型试剂要求要求第一、高度特异，只能与相第一、高度特异，只能与相应的的红细胞胞抗原抗原发生凝集生凝集第二、抗第二、抗A A血清效价在血清效价在1 1：128128以上，抗以上，抗B B血清效价在血清效价在1 1：6464以上以上第三、第三、亲和力要求抗体和抗原和力要求抗体和抗原发生的速生的速度度应在两者相加后在两者相加后1515秒内出秒内出现凝集，其凝集，其强度度为3 3分分钟时凝凝块不小于不小于1mm1mm2 2第四，冷凝集素效价在第四，冷凝集素效价在1 1：4 4以下以下15.ABOABO定型定型试验中的常中的常见问题 1 1）技）技术和管理和管理错误：标本、本、试剂、器材原因；器材原因；离心力离心力过度或不足；阳性反度或不足；阳性反应产生溶血生溶血现象未象未能能识别；漏加；漏加试剂、结果果记录和判断和判断错误；细胞与血清胞与血清间比例不适当。比例不适当。2 2）血清异常：）血清异常：WhartonWharton胶或血清蛋白引起胶或血清蛋白引起缗 钱状形成，影响反定型状形成，影响反定型结果。果。3 3）红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，胞，在含高蛋白介在含高蛋白介质的的试剂中，可中，可发生凝集。生凝集。4 4）异常基因型：）异常基因型：ABOABO亚型的型的检查中，中，A A、B B抗抗 原可能原可能为弱抗原，弱抗原，难以以检出。出。16.5 5）近期）近期输血：血：试验前前输入入ABOABO血型不一致的血型不一致的红细胞，胞，使血液使血液标本成本成为混合血型的混合血型的红细胞胞悬液，定型液，定型时显示示“混合外混合外观凝集凝集”现象。象。6 6）嵌合体血型（开米拉，）嵌合体血型（开米拉，chimerismchimerism）:这种血型者种血型者体内有两体内有两类红细胞群体，定型胞群体，定型时可以出可以出现“混合混合外外观凝集凝集”现象。象。7 7）疾病因素）疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者和致抗原减弱：某些白血病患者和难治性治性贫血患者等。血患者等。8 8）红细胞多凝集胞多凝集现象：象：红细胞因胞因遗传或或获得性的得性的表面异常，表面异常，发生多凝集生多凝集现象。象。17.9 9）获得性得性B B：由于革：由于革兰阴性杆菌的作用，阴性杆菌的作用，红细胞可胞可获得得“类B B”的活性。的活性。1010）血型特异性物）血型特异性物质过高：一些卵巢囊高：一些卵巢囊肿病例，血病例，血型物型物质的的浓度很高，可中和抗度很高，可中和抗A A和抗和抗B B定型定型试剂，要，要得到正确的正定型得到正确的正定型结果果，必必须洗洗涤红细胞多次。胞多次。1111）近期内）近期内进行大量的血行大量的血浆置置换治治疗：由于使用大：由于使用大量的非同型的血量的非同型的血浆作置作置换治治疗，造成反定型，造成反定型错误。1212）异常的血）异常的血浆蛋白：受蛋白：受检者血者血浆中异常的白蛋白、中异常的白蛋白、球蛋白比例和高球蛋白比例和高浓度的度的纤维蛋白原等蛋白原等导致致缗钱状形状形成，造成假凝集成，造成假凝集现象。象。18.13 13）不）不规则抗体的存在抗体的存在 1414）低丙种球蛋白血症）低丙种球蛋白血症:低丙种球蛋白血症（丙种球低丙种球蛋白血症（丙种球蛋白量减低）病例，可能会因免疫球蛋白水平下降蛋白量减低）病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型而使血清定型时不凝集或弱凝集反不凝集或弱凝集反应。1515）药物等因素：物等因素：药物、右旋糖物、右旋糖酐及静脉注射某些造及静脉注射某些造影影剂引起引起红细胞凝集或胞凝集或类似凝集。似凝集。1616）年）年龄因素：免疫系因素：免疫系统尚未健全的尚未健全的婴儿、由母儿、由母亲被被动获得抗体的得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出可出现异常的异常的结果。果。1717）防腐）防腐剂因素因素19.正反定型不符的解决正反定型不符的解决 正定型中意外阳性或阴性的解决正定型中意外阳性或阴性的解决办法：法：加入自身加入自身对照照增加血清增加血清/细胞比例胞比例降低孵育温度降低孵育温度,延延长孵育孵育时间 4 /22 /37 15min-30min4 /22 /37 15min-30min镜检洗洗涤红细胞胞用不同来源的抗体用不同来源的抗体试验用人源性用人源性试剂作吸收放散作吸收放散(并作相并作相应对照照)20.反定型中意外阳性或阴性的解决反定型中意外阳性或阴性的解决办法：法：血清和筛选A1细胞阳性、A2细胞阴性、自身阴性：可能是含有抗A1的A或AB型部分筛选细胞阳性、自身阴性：血清中含有意外抗体,用一组谱细胞,确定抗体特异性室温盐水反应抗体：MN、P、Lewis排除冷抗体及缗钱状凝集排除多凝集 21.正反定型不一致的思考及解决正反定型不一致的思考及解决1 1）首先考）首先考虑人人为因素和因素和试剂因素。因素。重新采集血重新采集血样，核，核对试剂、离心条件等、离心条件等2 2）分析可能）分析可能导致正、反定型不一致的原因致正、反定型不一致的原因3 3）针对性性试验验证22.ABOABO正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析抗抗A A 抗抗B B 抗抗A,B Ac Bc OcA,B Ac Bc Oc 2 2 4 4 4 4 3 3 2 2 2 2分析：患者血型可能是分析：患者血型可能是B B型，体内有冷凝集型，体内有冷凝集素。素。输血：确血：确认血型之前可血型之前可输O O型洗型洗涤红细胞，胞，确确认后后输B B型型红细胞。胞。23.ABOABO正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析抗抗A A 抗抗B B 抗抗A,B Ac Bc OcA,B Ac Bc Oc 4 4 4 4 2 2 4 4 2 2分析：患者的血型可能是分析：患者的血型可能是A A型。型。巨球蛋白血症或部分多巨球蛋白血症或部分多发性骨髓瘤患者，性骨髓瘤患者，血液中异常球蛋白升高，血液中异常球蛋白升高，导致致缗钱状凝集。状凝集。输血：血：A A型型红细胞、血小板胞、血小板24.ABOABO正反定型不符病例分析正反定型不符病例分析抗抗A A 抗抗B B 抗抗A,B Ac Bc A,B Ac Bc OcOc 4 4 2 2 4 4 3 3 分析：患者血型可能是分析：患者血型可能是A A型，型，获得性得性B B。核核对患者患者诊断，断，进行相关行相关试验。输血：血：A A型型红细胞胞25.正反定性不符病正反定性不符病历 正定型正定型 反定型反定型 抗抗A A 抗抗B B 抗抗A A1 1 Ac Bc Oc Ac Bc Oc 4+-4+1+2+-4+-4+1+2+-患者患者 王某王某 女女 6060岁 低蛋白血症，重度低蛋白血症，重度贫血。抗体血。抗体筛选使用聚凝胺法、使用聚凝胺法、抗人球法均阴性抗人球法均阴性 ，显示血型正反示血型正反定型不符。定型不符。结果有待果有待PCRPCR基因分型基因分型进一步确一步确认。患者。患者5 5月月2727日日Hb 50g/LHb 50g/L，情况差情况差,当日当日给予予输注配合的注配合的O O型洗型洗涤红胞胞2U2U，于，于5 5月月2828日再次日再次检测HbHb达达69g/L69g/L，显示示红细胞胞输注有效。注有效。26.正反定型的意正反定型的意义准确的血型判定利于指准确的血型判定利于指导临床用血床用血发现亚型型抗原抗原强度的改度的改变与疾病相关与疾病相关新抗原出新抗原出现与疾病相关与疾病相关排除假阴性或假阳性排除假阴性或假阳性结果干果干扰27.美美国国FDAFDA分分析析了了1976197619851985年年间输血血导致致的的死死亡亡原原因因，发现ABOABO血血型型错误输血血导致致的的死死亡亡占占总死死亡亡数数的的5151。而而这种种错误一一般般都都是是责任任事事故故，基基本本没没有有技技术原原因因，主主要与管理有关。要与管理有关。28.2 2RhRh血型血型鉴定定 RhRh血型血型鉴定方法定方法1)1)盐水法水法 常常规检测RhDRhD抗原抗原,单克隆克隆RhDRhD诊断断试剂IgM IgM 2)2)抗人球蛋白法或抗人球蛋白法或酶介介质法法 RhRh抗体属抗体属IgGIgG类，一般不能在，一般不能在盐水介水介质中与中与红细胞胞发生凝集，生凝集，IgMIgM型抗体型抗体盐水介水介质阴性阴性时，必，必须加做加做IgGIgG型抗人球蛋白法或型抗人球蛋白法或酶介介质法法3)3)微柱凝胶法微柱凝胶法29.D D抗原决定抗原决定RhRh是否阳性。是否阳性。RhRh阴性分布阴性分布频率：白种人率：白种人151520%20%中国人中国人 0.4%0.4%中国中国汉族族0.34%0.34%大大约1/31/3的的RhRh阴性的人，阴性的人，经RhRh阳性抗原阳性抗原 免疫后，不免疫后，不产生抗生抗D D。30.RhRh血型抗原的免疫原性血型抗原的免疫原性 RhRh血型抗原的抗原性血型抗原的抗原性强度可能度可能仅次于次于A A和和B B抗原抗原，RhRh血型抗原中的免疫原性血型抗原中的免疫原性强弱弱顺序序为 D D E cE c C C e e31.RhRh血型血型鉴定出定出现假阳性的原因假阳性的原因1 1）受）受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或胞已被免疫球蛋白致敏，或标本本血清中含有引起血清中含有引起红细胞凝集的因子。胞凝集的因子。2 2）受）受检细胞与抗血清孵育的胞与抗血清孵育的时间过长，含，含高蛋白的定型高蛋白的定型试剂会引起会引起缗钱状形成。状形成。3 3）标本抗凝不当，受本抗凝不当，受检过程中出程中出现凝血或凝血或小的小的纤维蛋白凝蛋白凝块，误判判为阳性。阳性。32.4 4）定型血清中含有事先未被）定型血清中含有事先未被检测的其它的其它特异性抗体，造成假阳性定型特异性抗体，造成假阳性定型结果。果。5 5）多凝集）多凝集细胞造成定型的假阳性。胞造成定型的假阳性。6 6）鉴定器材或抗血清被定器材或抗血清被污染，造成假阳染，造成假阳性。性。33.RhRh血型血型鉴定出定出现假阴性的原因假阴性的原因1 1）受）受检细胞胞悬液液浓度太高，与抗血清比度太高，与抗血清比例失例失调。2 2）漏加或）漏加或错加定型血清。加定型血清。3 3）离心后重）离心后重悬细胞扣胞扣时，摇动用力用力过度，度，摇散微弱的凝集。散微弱的凝集。4 4）抗血清保存不当，）抗血清保存不当，导致失效。致失效。5 5）定型血清的使用方法）定型血清的使用方法错误，没有按，没有按说明明书进行。行。34.弱弱D D型型弱弱D D抗原与大部分抗原与大部分盐水抗水抗D D试剂不不产生直生直接凝集反接凝集反应，而与部分的，而与部分的IgGIgG抗抗D D血清用血清用间接抗人球蛋白接抗人球蛋白试验反反应阳性。阳性。因此当我因此当我们初次得到初次得到RhRh阴性阴性结果果时，必，必须进行行Rh(D)Rh(D)阴性确阴性确认试验，即用三种不，即用三种不同批号的同批号的IgGIgG抗抗D D定型，如果全部阴性方定型，如果全部阴性方可可认为该被被检者者为Rh(D)Rh(D)阴性，否阴性，否则，只，只要有一批要有一批为阳性，阳性，则可可认为是弱是弱D D型。型。35.弱弱D D型的型的临床意床意义 尽管弱尽管弱D D比正常阳性比正常阳性细胞抗原弱胞抗原弱 ，但，但输给Rh(D)Rh(D)阴阴 性的受血者后，性的受血者后，自然有免疫自然有免疫产生抗生抗D D的可能。同的可能。同时若若接受接受Rh(D)Rh(D)阳性的阳性的细胞后，弱胞后，弱D D型人也有可能型人也有可能产生生 抗抗D D抗体。因此，作抗体。因此，作为供血者，弱供血者，弱D D型型归类为Rh(D)Rh(D)阳阳性性 ，作，作为受血者弱受血者弱D D型型归类为Rh(D)Rh(D)阴性。阴性。献血者献血者为弱弱D D型，作型，作为RhDRhD阳性血液阳性血液(AABB(AABB标准准)受血者受血者为弱弱D D型，作型，作为RhDRhD阴性受血者阴性受血者(AABB(AABB标准）准）36.红细胞胞其他血型系其他血型系统KellKell血型系血型系统 在在该血型系血型系统的二个基因的二个基因座上共有四个抗原：座上共有四个抗原：K K与与k,k,和和KpaKpa与与KpbKpb。K K与与k k抗原都具有一定程度的免疫原性。因中抗原都具有一定程度的免疫原性。因中国人几乎国人几乎100%K100%K抗原阴性，故无抗抗原阴性，故无抗-K-K。凝聚凝聚胺法无法胺法无法检测K K抗原和抗体。因此，凝聚胺抗原和抗体。因此，凝聚胺法只适合中国人。法只适合中国人。37.二、不二、不规则抗体抗体筛选和和鉴定定1 1）抗体）抗体筛选所所谓不不规则抗体是指抗抗体是指抗A A和抗和抗B B以外的血型抗体。以外的血型抗体。筛选细胞胞 通常是由通常是由2-32-3个个单人份的人份的O O型型红细胞胞组成一套成一套筛选细胞胞试剂，包括以下常，包括以下常见的抗原：的抗原：RhRh系系统 、MNSsMNSs系系统、P P系系统、LewisLewis系系统、DuffyDuffy系系统等。等。不能将不能将过多人份多人份红细胞混合，以避免胞混合，以避免红细胞混合后，胞混合后，对弱抗原弱抗原红细胞的稀胞的稀释。38.抗体抗体筛选试验可在交叉配合可在交叉配合试验之前之前进行或一起行或一起进行，行，这样有利于有利于对患者抗体患者抗体的早期确的早期确认及及鉴定定临床上具有意床上具有意义的抗的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的体，避免一些可能的情况而造成病情的延延误。大大约有有0.3%0.3%2%2%的群体血清中含有的群体血清中含有同种抗体同种抗体。39.2 2）抗体）抗体鉴定定自身自身细胞胞检查：观察患者（受者）的察患者（受者）的血清与患者（受者）自身血清与患者（受者）自身细胞的反胞的反应情情况，确定血清内是否有自身抗体和同种况，确定血清内是否有自身抗体和同种抗体二者同抗体二者同时存在。存在。40.使用使用试剂细胞中的胞中的谱细胞（胞（panel panel cellcell）应用各种抗体用各种抗体检查技技术，检测患患者的血清，确定其抗体的特异性。者的血清，确定其抗体的特异性。当患者体内的同种抗体有二种或二种当患者体内的同种抗体有二种或二种以以 上上时，可采用吸收放散，可采用吸收放散试验。41.谱细胞：胞：一般是由8-16人份的已知血型表现 型 O型红细胞组成，具有各种不同的抗 原成分，根据谱红细胞的反应格局一 般可以鉴定常见的抗体。42.方法方法：作抗体作抗体鉴定定时，必，必须灵活灵活应用用盐水法、水法、抗人球蛋白抗人球蛋白试验、聚凝胺（、聚凝胺（PolybrenePolybrene）法）法及凝胶法等各种技及凝胶法等各种技术，再，再结合吸收放散等合吸收放散等血清学手段，血清学手段，对抗体的特异性作分析。抗体的特异性作分析。43.44.结果的判果的判读和解和解释溶血溶血和血液凝集意和血液凝集意义相同，都是抗原抗体相同，都是抗原抗体反反应阳性阳性结果。先果。先观察有无溶血，后察有无溶血，后观察察有无凝集。有无凝集。记录结果，并与以前果，并与以前结果果对照。照。45.结果的判果的判读和解和解释抗体抗体筛选试验不一定能不一定能检出所有出所有临床意床意义的抗的抗体，抗低体，抗低频率抗原的抗体或有率抗原的抗体或有剂量效量效应的抗体，的抗体，可能被漏可能被漏检。这时需要安排抗原性更完全和特需要安排抗原性更完全和特异性更异性更强的的筛选细胞做胞做试验，或用敏感度更高，或用敏感度更高的技的技术做做检查。与与纯合子抗原合子抗原红细胞反胞反应较强的抗体被称的抗体被称为具有具有“剂量效量效应”，具有具有剂量效量效应的血型系的血型系统包括包括RhRh（D D除外）、除外）、KiddKidd、DuffyDuffy、MNSsMNSs、LutheranLutheran系系统。剂量效量效应在在MNMN血型系血型系统和和RhRh血型系血型系统比比较明明显，在在ABOABO血型等其他系血型等其他系统不明不明显。46.三、交叉配血三、交叉配血交叉配血交叉配血试验也称也称配合性配合性试验，实际上上是是检查不配合性，使病人，献血者血液不配合性，使病人，献血者血液之之间没有可没有可测到的不相配合的抗原、抗到的不相配合的抗原、抗体成分，体成分，试验应在在3737下下进行。在配血行。在配血的任何步的任何步骤中均不中均不产生溶血或凝集献血生溶血或凝集献血者的血液才能者的血液才能给予病人予病人输注。注。47.交叉配血包括：交叉配血包括：1)1)主主侧配血配血:受血者血清受血者血清对供者供者红细胞，胞，检测对供者供者红细胞起反胞起反应的抗体。的抗体。2)2)次次侧配血配血:受血者受血者红细胞胞对供血者血清，供血者血清，检测对受者受者红细胞起反胞起反应的抗体。的抗体。48.交叉配血中可能出交叉配血中可能出现的一些特殊的一些特殊问题 （1 1）缗钱状的形成：血清在室温和状的形成：血清在室温和3737中，使中，使红细胞出胞出现了假凝集，造成配血了假凝集，造成配血错误，常，常见与多与多发性骨性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金病，以及其它表髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金病，以及其它表现为血沉加速的一些病例中。血沉加速的一些病例中。（2 2）交叉配血）交叉配血试验结果不相容，果不相容，显示有未知的同种示有未知的同种抗体的存在。抗体的存在。（3 3）在室温反）在室温反应中，中，显示有自身抗体。示有自身抗体。（4 4）血清中如含有溶血性抗体，）血清中如含有溶血性抗体，则相相应红细胞被溶胞被溶解而不是凝聚，解而不是凝聚，结果果为阳性若血清中存在阳性若血清中存在补体而溶体而溶血，血清血，血清应灭火后再做火后再做试验。49.（5 5）存在抗体）存在抗体筛选试验阴性和交叉配血阴性和交叉配血结果阳性的果阳性的现象，提示可能有未知的抗体象，提示可能有未知的抗体存在。存在。（6 6）交叉配血）交叉配血试验中，离心力不当，造成中，离心力不当，造成假阴性和假阳性。假阴性和假阳性。（7 7）水浴箱温度不正确，造成）水浴箱温度不正确，造成错误结果。果。（8 8）红细胞不正确的洗胞不正确的洗涤和和悬浮，使抗球浮，使抗球蛋白蛋白试验出出现假阴性。假阴性。50.交叉配血的主要方法交叉配血的主要方法红细胞和血清在胞和血清在盐水溶液中直接反水溶液中直接反应特点是操作特点是操作简便，便，设备简单，缺点是影响因素多，灵敏度低，缺点是影响因素多，灵敏度低盐水凝集法水凝集法51.低离子低离子强度度盐水法水法通通过降低介降低介质溶液溶液的离子的离子强度，减少度，减少红细胞外胞外围离子云离子云的的强度，促度，促进IgGIgG分子在两个分子在两个红细胞胞间桥联，而促，而促进凝凝集集特点是特点是缩短抗原抗短抗原抗体反体反应时间，提高，提高反反应灵敏度灵敏度52.酶法法利用木瓜利用木瓜酶或菠或菠萝酶破坏破坏红细胞表面唾液酸，使胞表面唾液酸，使红细胞胞失去失去电荷，荷，缩小小细胞胞间距离距离同同时改改变红细胞膜表面胞膜表面结构，使某些构，使某些隐蔽的抗原暴露，蔽的抗原暴露，从而增从而增强凝集反凝集反应53.凝聚胺法凝聚胺法利用多聚季胺利用多聚季胺盐在介在介质溶液中溶液中产生大量生大量正正电荷中和荷中和红细胞表面的胞表面的负电荷，减少荷，减少红细胞胞间排斥，促排斥，促进凝集。凝集。54.抗人球蛋白法抗人球蛋白法在在盐水凝集法的基水凝集法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，上，加入抗人球蛋白抗体，通通过抗人球蛋白抗体的特异性抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促作用，促进红细胞的凝集胞的凝集55.凝胶卡式配血法凝胶卡式配血法将将红细胞和血清加在凝胶上部反胞和血清加在凝胶上部反应，离心后，离心后观察凝集的察凝集的红细胞，胞，被阻被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央，判断凝集反在小柱中凝胶的上部或中央，判断凝集反应阳性阳性游离游离的的红细胞，被胞，被挤过装有装有过滤介介质的小柱，而到达小柱的底部，的小柱，而到达小柱的底部，判断凝集反判断凝集反应阴性阴性 56.抗体抗体筛选和交叉配血和交叉配血结果分析果分析 抗体抗体筛选阴性，交叉配血相合阴性，交叉配血相合见于于临床上床上绝大多数大多数标本。本。抗体抗体筛选阴性，血清中仍有可能含有阴性，血清中仍有可能含有临床有意床有意义的抗体（方法或的抗体（方法或筛选细胞）胞）盐水介水介质试验作配血可能漏作配血可能漏检有意有意义的的IgGIgG类抗体。抗体。只有用非只有用非盐水介水介质交叉配血，才能保交叉配血，才能保证待待输的血的血和受者相合。和受者相合。57.抗体抗体筛选阴性，阴性，盐水直接离心交叉配血不合水直接离心交叉配血不合ABOABO血型血型错误。抗抗A A1 1存在于存在于A A2 2或或A A2 2B B，在直接，在直接盐水交叉配血水交叉配血实验中，抗中，抗A A1 1能引起大部分能引起大部分A A型型红细胞不相合。胞不相合。58.抗体抗体筛选阴性，抗人球蛋白交叉配血不合阴性，抗人球蛋白交叉配血不合献血者献血者红细胞胞DATDAT阳性（阳性（约1/100001/10000）患者抗体弱，献血者患者抗体弱，献血者红细胞抗原性很胞抗原性很强，表，表现为抗人球蛋白抗人球蛋白试验阳性。阳性。针对低低频抗原的抗体，如抗原的抗体，如DiegoDiego系系统抗抗-Wra-Wra。59.抗体抗体筛选阳性，交叉配血不合阳性，交叉配血不合同种抗体、自身抗体、同种抗体、自身抗体、试剂问题、缗钱状凝集，状凝集，应在在输血前血前查明原因。明原因。必必须进行包括抗人球蛋白行包括抗人球蛋白试验在内的交叉配血，在内的交叉配血，配合后方能配合后方能输注。注。若无法找到血清学配合的血液，若无法找到血清学配合的血液，输血科工作人血科工作人员必必须及及时告知主管医生告知主管医生输血存在的危血存在的危险。若患者病危且。若患者病危且临床床坚持要持要输，必，必须家属家属签署知情同意署知情同意书，并，并经主管医生主管医生签名名纳入病入病历后方可后方可发血。并建血。并建议输注去白加洗注去白加洗涤红细胞。胞。60.血型、抗血型、抗筛、交叉配血是、交叉配血是输血前血前试验的的“三保三保险”相合相合%随机随机 64 ABO 99.4 Rh 99.8 抗抗筛 99.94 交叉配血交叉配血 99.95 自身自身输血血 10061.ABO ABO亚型漏型漏检 不不规则抗体漏抗体漏检 尤其是低效价尤其是低效价,低低亲合力不合力不规则抗体抗体 漏漏检 交叉配血漏交叉配血漏检 一般抗一般抗筛与配血方法相同与配血方法相同,抗抗筛漏漏检,配血自然也会漏配血自然也会漏检 62.病例探病例探讨患者患者 女女 ,46,46岁,2012,2012年年3 3月月7 7日因乙肝肝硬化，消化道出血日因乙肝肝硬化，消化道出血入院，入院，查Hb 46g/L,Hb 46g/L,血型血型A A型，型，Rh Rh 表型表型 ccDEE ccDEE，当日申，当日申请输注注A A型型悬浮浮红细胞胞4U4U，输完第一袋完第一袋1.5U1.5U，第二袋，第二袋输注注约50ml50ml后，出后，出现血尿、高血尿、高热，停止，停止输血。血。输血后立即复血后立即复查Hb Hb 62g/L 62g/L，1010余小余小时后再复后再复查Hb 53g/L Hb 53g/L。分析：分析：输血史：血史：2 2月月2323日于当地医院日于当地医院输过红细胞，胞，3 3月月3 3日出日出现不不明原因血尿明原因血尿 复复查供受者血型供受者血型 ：A A 型，型，RH(D)RH(D)阳性阳性 新旧新旧标本重做交叉配血、抗体本重做交叉配血、抗体筛选：聚凝胺法，抗人球法：聚凝胺法，抗人球法均阴性均阴性 输血后患者血后患者标本做本做CoombsCoombs试验 ：DATDAT阴性，阴性，标本外本外观溶血溶血63.四、抗人球蛋白四、抗人球蛋白试验抗人球蛋白抗人球蛋白试验是是19451945年由年由CoombsCoombs等人建等人建立的，又称立的，又称CoombsCoombs试验。分。分为直接抗球蛋直接抗球蛋白白试验（DATDAT）和）和间接抗球蛋白接抗球蛋白试验（IATIAT）64.抗人球蛋白抗人球蛋白试验原理原理IgGIgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如血型抗体（主要是免疫抗体，如RhRh血型血型抗体）分子量小，与抗体）分子量小，与红细胞相胞相应抗原抗原结合后，合后，在在盐水介水介质中不出中不出现肉眼可肉眼可见的凝集反的凝集反应，称之称之为不完全抗体，但在加入抗不完全抗体，但在加入抗-IgG-IgG后，以后，以其其搭搭桥作用作用则可出可出现凝集反凝集反应。补体成分在体内被体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激胞抗原抗体复合物激活以后，活以后，结合在合在红细胞表面。在体外含胞表面。在体外含补体体的多克隆抗体，或抗的多克隆抗体，或抗C3bC3b、抗、抗C3dC3d等等单特异性特异性抗体与抗体与补体致敏的体致敏的红细胞反胞反应，使之凝集也，使之凝集也称称为抗人球蛋白抗人球蛋白试验。65.抗人球蛋白抗人球蛋白试剂多特异性抗球蛋白多特异性抗球蛋白试剂：应含有抗含有抗IgGIgG和和抗抗-C3d-C3d。单特异性抗球蛋白特异性抗球蛋白试剂：抗：抗IgGIgG、抗、抗IgMIgM、抗抗IgAIgA、抗、抗C3C3、C4C4的片段。的片段。66.直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白试验DATDAT是用来是用来检测体内体内红细胞致敏情胞致敏情 况，尤其是况，尤其是IgGIgG和和C3dC3d包被的包被的红细胞。胞。用于：用于：HDNHDN和自身免疫溶血性和自身免疫溶血性贫血的血的诊断断红细胞被胞被药物抗体致敏的物抗体致敏的检查急性和急性和迟发性溶血性性溶血性输血反血反应的的检查67.68.间接抗人球蛋白接抗人球蛋白试验用于用于测定血清中存在的不完全抗体。定血清中存在的不完全抗体。用已知的不完全抗体来用已知的不完全抗体来测定定红细胞血胞血型，如型，如RhRh血型。血型。交叉配血。交叉配血。69.70.结果分析果分析-假阳性假阳性1)1)用免疫兔或羊制用免疫兔或羊制备的抗人球蛋白含有的抗人球蛋白含有种种间抗体。抗体。2)2)红细胞在用胞在用盐水洗水洗涤时已有凝集。已有凝集。3)IAT3)IAT试验中所用中所用O O型型红细胞本身胞本身DATDAT阳性。阳性。71.4)4)不抗凝不抗凝标本在冷本在冷环境里境里经过一段一段时间的保的保存后，自身冷抗体存后，自身冷抗体发生作用，激活生作用，激活补体，体，补体成分体成分结合在合在红细胞上，用多特异性抗胞上，用多特异性抗球蛋白球蛋白试剂会会发生假阳性。生假阳性。5)5)离心离心过度，度，红细胞胞压积过紧，不易充分，不易充分摇散散72.结果分析果分析-假阴性假阴性1)1)致敏后的致敏后的红细胞洗胞洗涤不充分不充分,残留残留的球蛋白中和了的球蛋白中和了试剂中的抗球蛋白，中的抗球蛋白，造成假阴性。造成假阴性。2)2)操作操作过程不程不连续，时间过长，结合合在在红细胞上的抗体解离。胞上的抗体解离。3)3)红细胞、血清和抗人球蛋白胞、血清和抗人球蛋白试剂保保存不当都可能存不当都可能发生活性减弱或生活性减弱或丧失。失。73.4)4)红细胞胞过多，反多，反应减弱；减弱；红细胞胞过少，少，看看结果不准确，都影响果不准确，都影响结果。果。5)5)试剂中抗人球蛋白中抗人球蛋白浓度度过大，有大，有前前带现象象。6)6)孵育孵育时间和温度不当，会使反和温度不当，会使反应结果减果减弱或弱或变为假阴性。假阴性。观察察结果果时过度度摇动试管，管，摇散散细小凝小凝块。74.注意事注意事项每次每次试验要要设有阴性和阳性有阴性和阳性对照。照。阴性阴性结果要加入一滴果要加入一滴IgGIgG致敏致敏红细胞胞实验器材清器材清洁。注意抗原抗体比例、孵育注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等、温度等条件。条件。严格按照格按照实验方法操作。方法操作。排除自身抗体干排除自身抗体干扰。75.DATDAT阳性患者引起的疑阳性患者引起的疑难配血配血 主要有以下两种主要有以下两种:交叉配血主交叉配血主侧阳性阳性,次次侧阳性阳性 这种情况下患者种情况下患者血清往往含有自身抗体且伴有不血清往往含有自身抗体且伴有不规则抗体的存在。抗体的存在。（1 1）用自身）用自身红细胞胞进行吸收行吸收试验，去除患者血清中，去除患者血清中的自身抗体。的自身抗体。（2 2）取吸收去除自身抗体患者血清做不）取吸收去除自身抗体患者血清做不规则抗体抗体筛查和特异性和特异性鉴定，定，选与不与不规则抗体相抗体相对应抗原阴抗原阴性的性的红细胞做交叉配血胞做交叉配血试验的主的主侧试验。（3 3）患者）患者红细胞做放散胞做放散试验用放散掉自身抗体的用放散掉自身抗体的红细胞做交叉配血的次胞做交叉配血的次侧试验。76.交叉配血主交叉配血主侧阴性阴性,次次侧阳性阳性 这种情种情况下患者往往是况下患者往往是红细胞被自身抗体吸附胞被自身抗体吸附或致敏而血清中无同种不或致敏而血清中无同种不规则抗体的存抗体的存在，可先用患者在，可先用患者红细胞做放散胞做放散试验，用，用放散掉自身抗体的放散掉自身抗体的红细胞做交叉配血的胞做交叉配血的次次侧试验。77.所有所有输血前患者作血前患者作常常规DATDAT检测。DATDAT阳阳性一般建性一般建议输注主注主侧配合的洗配合的洗涤红细胞，胞，并且尽量避免血并且尽量避免血浆、血小板等血液成分、血小板等血液成分的的输注。注。78.五五.血小板血小板输注前的抗体注前的抗体检测及及 配合配合试验随着成分随着成分输血的广泛开展和血的广泛开展和应用，以及血用，以及血液成分保存技液成分保存技术的提高，的提高，单采血小板的采血小板的输注量逐年上升。随之而来的因血小板注量逐年上升。随之而来的因血小板输注注而引起的而引起的输注无效已成注无效已成为临床上极床上极为突出突出的的问题。因此，做好。因此，做好血小板血小板输注前的抗体注前的抗体检测及配合及配合试验将是目前行之有效的将是目前行之有效的办法。法。79.血小板血型系血小板血型系统血小板血型：血小板血型：19591959年，年，Van LoghemVan Loghem发现血小板血型抗原主要有二大血小板血型抗原主要有二大类 ：血小板非特异性抗原（血小板相关抗血小板非特异性抗原（血小板相关抗原）原）血小板特异性抗原血小板特异性抗原 （HPA)HPA)80.血小板非特异性抗原血小板非特异性抗原血小板表面存在的与其他血小板表面存在的与其他细胞或胞或组织共共有的抗原称血小板非特异性抗原。有的抗原称血小板非特异性抗原。包括主要包括主要组织相容性抗原（相容性抗原（HLAHLA）和）和红细胞血型系胞血型系统相关抗原相关抗原 。81.血小板表面的血小板表面的HLAHLA抗原系抗原系统血小板表面存在血小板表面存在HLA-AHLA-A、HLA-BHLA-B和和HLA-CHLA-C位点等位点等HLAHLA类抗原。抗原。未未发现血小板表面存在血小板表面存在HLA-DRHLA-DR、HLA-DPHLA-DP和和HLA-DQHLA-DQ等等类抗原。抗原。但是但是经过细胞因子的刺激，在血小板表面能胞因子的刺激，在血小板表面能产生生HLA-DRHLA-DR抗原。抗原。82.血小板表面的血小板表面的红细胞血型系胞血型系统血小板表面存在血小板表面存在ABOABO、Lewi