实验室病原微生物危害评估综合报告.doc

试验室病原微生物危害评定汇报第1版生效日期：08月01日驻马店市人民医院检验科目 录第一章 检验科试验活动生物危害评定汇报3第二章 人类免疫缺点病毒HIV生物危害评定汇报8第三章 结核分枝杆菌生物危害评定汇报10第四章 霍乱弧菌生物危害评定汇报14第五章 沙门氏菌危害评定汇报18第六章 梅毒螺旋体生物危害评定汇报22第七章 分枝杆菌生物危害评定汇报24第八章 布鲁氏菌生物危害评定汇报28第九章 淋病奈瑟氏菌生物危害评定汇报33第十章 鼠疫耶尔森菌生物危害评定汇报36第十一章 伤寒杆菌生物危害评定汇报39第十二章 肝炎病毒生物危害评定汇报42第十三章 炭疽芽胞杆菌生物危害评定汇报46第一章 检验科试验活动生物危害评定汇报为确保试验室工作人员在工作中不被危害性生物及物品所侵害，确保危害性物品不外泄，对试验室工作环境进行评定，以判定生物安全防护等级，确保生物安全。一、危害程度分类及生物安全防护水平评定本检验科是为医院诊疗、预防、诊疗人体疾病或评定人体健康提供信息为目标，对来自人体材料进行临床生物化学、临床微生物、临床免疫学、临床血液、细胞遗传学等检验试验室。生物源危害关键是由多种检验标本中微生物，尤其是病原微生物引发，包含细菌、病毒、寄生虫等，含有潜在危险性，可能引发试验室感染；检验科微生物室还进行一定数量多种条件致病性细菌及真菌分离培养工作，工作过程存在病原微生物对试验人员、环境污染风险；除之以外试验室还存在触电、火灾、化学品腐蚀、偷窃等危险。依据试验室生物安全通用要求，本检验科不包含人间传染病原微生物名目中高致病性微生物分离培养及高致病性微生物菌、毒种保藏，试验室采取一定防护方法就能控制感染或防范灾难，或对对应病原体存在有效免疫方法。评定我检验科生物安全防护水平按二级试验室（BSL-2）生物安全要求。二、试验人员和试验室安全防护通常要求1.吸烟危害评定及防护（1）试验室工作区内绝对严禁吸烟；（2）点燃香烟是易燃液体潜在火种；（3）香烟、雪茄或烟斗全部是传染细菌和接触毒物路径。2. 试验区内食用食物、饮料及其它危害评定及防护（1）试验工作区内不得有食物、饮料及存在“手口”接触可能其它物质（2）试验室工作区内冰箱严禁存放食物。专用存放食物冰箱应放置在许可进食、喝水休息区内。3.使用化妆品危害评定及防护试验工作区内严禁使用化妆品进行化妆，但许可并提议常常洗手试验人员使用护手霜。4. 试验中眼睛和面部风险评定及防护（1）处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜、面罩或其它保护眼睛和面部防护用具。（2）工作人员在试验室危险区内不要佩戴隐形眼镜，除非同时使用护目镜或面罩。（3）使用、处理能够经过粘膜和皮肤感染试剂，或有可能发生试剂溅溢情况时，必需佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。5. 试验中服装和个人防护装备通常要求（1）应穿着符合试验室工作需要服装，工作服应洁净、整齐。当工作中有危险物喷溅到身上可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。（2）采血员和其它需要接触病员工作人员，在接触病员时需穿试验服或工作服。（3）个人防护服装应定时更换以保持清洁，遇被危险物品严重污染，则应立即更换。（4）不得在试验室内设值班床，严禁在试验室内住宿。6. 试验中足部防护通常要求在工作区内，应穿舒适、防滑、并能保护整个脚面鞋。在有可能发生液体溅溢工作岗位，可加套一次性防渗漏鞋套。帆布鞋可吸收化学物品和有传染性液体，所以最好穿皮革或其它防渗漏合成材料鞋。7. 试验中头发和饰物风险评定及防护留长发工作人员应将头发盘在脑后，以预防头发接触到被污染物和避免人体脱屑落入工作区。头发不得垂肩，应和离心机、切片机等正在运转器械保持一定距离8. 试验中胡须风险评定及防护蓄有胡须男性工作人员必需遵守上项（7）要求。9.洗手要求试验室工作人员在脱下手套后、离开试验室前、接触患者前后、和在进食或吸烟前全部应该洗手。接触血液、体液或其它污染物时，应立即洗手。10.用口移液危害评定及防护用口液移可造成多个病原体试验室感染。全部试验室操作严禁用口液移，应使用助吸器具。11.锐利物品危害评定及防护谨慎处理针头、解剖刀、和碎玻璃等锐利物品。使用后针具不要折断、弯曲、破损、反复使用或用手重装在针管上。一次性注射器上针头用后不要取下。锐利物品应立即放置在专用锐器盒内，在完全装满之前或48小时之内更换。12.隔离方法要求接触患者时，试验室工作人员应遵守医院隔离方法。13.工作环境要求（1）“清洁”区和“非清洁”区依据试验室具体工作情况由主任选择并确定“清洁”和“非清洁”工作区，在清洁区和非清洁区之间设“缓冲室”。被指定为“清洁”区域，则应努力保持清洁，如采取预防方法，预防电话、视频显示器终端、键盘、门柄及其它常常被手或手上手套触摸物品污染，要求工作人员在触摸设备（如计算机键盘及电话保护罩等）前取下手套，制订仪器设备和工作面常规消毒和清洁制度和对严重污染紧急处理方法措施。被指定为“非清洁”区域，许可戴手套接触全部物品（如电话、门柄、计算机终端和其它物品），全部这些物品表面全部认为是不清洁。未戴手套人员假如使用该区域内电话、计算机终端或其它设备，应该戴上手套，或在使用后立即根本洗手。“清洁”和“非清洁”区全部应保持整齐。试验台最少应天天清洁、消毒一次，如有必需能够数次清洗、消毒。在处理溅溢样品或严重污染工作面时，应戴上手套和其它个人防护装备、使用对应适宜清洁剂清除全部溅溢物。（2）冰箱、冷冻柜、水浴和离心机应该定时清洗和消毒（时间由试验室主任来决定），在发生严重污染后应立即进行清洗和消毒。进行清洗、消毒时要戴上手套，穿上工作服或其它适宜防护服。（3）外衣：外衣（试验服、工作服、和围裙）应悬挂在远离散热器、蒸汽管道、供暖装置、和有明火地方，不要挂在压缩气瓶或灭火器上，也不要挂在门玻璃隔板上，妨碍视线。“清洁”和“非清洁”个人防护服要分开存放。（4）垃圾处理：天天最少清理垃圾一次。（5）装饰：不得在电灯、灯座或仪器上进行装饰，更不要使用电子装饰物、蜡烛、圣诞树等有引发火灾危险装饰品。（6）为便于清洁消毒，试验室内不应有织物装饰用具或椅子。（7）个人物品：试验工作区不得存放个人物品，如钱包、外套、皮靴、咖啡杯、运动服、预包装食品和药品等。（8）试验室内应配置应急设备，如应急洗眼装置，酒精等消毒用具。（9）试验室应安装非手触式洗手装置。（10）试验室内应安装防蚊蝇装置，应定时投撒灭蟑螂、老鼠药品。（11）用后废弃物品：试验工作区内用后废弃物品存量不要太大。具危险性液体如酸或碱性液体应放在视平线以下。较大废弃物容器应靠近地面存放。（12）出口通路：试验室出口和通道必需保持通畅无阻，不准堆放物品、垃圾、装置、或设备。安全门必需保持通畅，不得堵塞。注意：不管任何时间、何种原因全部不得阻塞通往灭火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口道路。14.使用玻璃器具危害评定及防护操作玻璃器具时应遵照下述安全规则：（1）不使用破裂或有缺口玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃试管上塞子，粘紧试管可用刀切开分离。（3）接触过传染性物玻璃器具，清洗之前，应先行消毒。（4）破裂玻璃器具和玻璃碎片应丢弃在有专门标识、单独、不易刺破容器里。（5）高热操作玻璃器具时应戴隔热手套。（6）在不影响试验质量前提下，应尽可能降低使用玻璃器具。15. 使用离心机危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）极少经血（虫媒介）极少（1）气溶胶：离心过程中应控制气溶胶产生在最低水平。（2）操作：离心机只有在盖好盖板后，才能开启。（3）传染性物品：全部能够产生气溶胶进行播散生物制品或标本，全部应使用密封离心管，并在盖紧离心头或转头中进行。（4）为预防气溶胶飞溢，应在离心停止30分钟后打开离心物。（5）清洗：根据消毒隔离制度要求清洗离心机。（6）平衡：离心时应保持适宜平衡，以确保离心顺利进行。16采集血样危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）极少呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少偷窃可能化学腐蚀极少放射无（1）天天早晨用500mg/L”84”消毒液擦拭抽血台面及其它物表，并开紫外灯消毒最少30分钟，并做好统计。（2）工人天天早晨更换消毒液，包含浸泡锐器、止血带消毒液和手消毒液。（3）工作人员必需穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格一次性用具。严禁使用包装破损，超出使用期一次性用具。（5）严格实施无菌技术操作规程、静脉采血必需一人一针一管一巾一带。微量采血应做到一人一针一管一片，对每位病人操作前洗手或手消毒。（6）无菌物品如棉球需天天更换，开启后使用不得超出二十四小时。（7）工作人员需对锐器如采血针采取高度预防方法，用过采血针需浸泡在含有消毒液厚壁容器中。17. 标本(血清、血浆、全血、尿)上检验分析仪检测过程危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤极少粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）极少经血（针刺伤、切割伤）极少经血（虫媒介）极少偷窃可能化学腐蚀无放射无（1）为了避免液滴和气溶胶和扩散，试验室仪器加样、加液，清洗等过程应在封闭罩内进行。（2）试验中使后比色盘，反应杯等废弃物应该搜集在封闭容器内，集中处理。（3）在每一步完成后应依据操作指南对对仪器进行消毒。血液、体液污染物表时，应立即消毒。（4）工作人员要戴手套进行操作。18. 标本(血清、血浆、全血、尿、粪)手工检测过程危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）极少偷窃可能化学腐蚀可能放射无（1）天天早晨做好试验室清洁消毒工作。（2）工作人员要戴口罩、手套进行操作。（3）试验中使用竹签用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）废弃标本连同试管、盖帽要用1000mg /L“84”消毒液浸泡，由工人统一清洁后进行无害化处理。（5）试验中使用吸头、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（6）标本污染物表时，应立即消毒。（7）离心时，发生试管破裂或标本溅出，由操作者负责用有效消毒剂对离心机内部进行立即消毒处理。19微生物分离判定药敏试验及基因扩增试验活动危害评定及防护感染路径危害评定感染路径危害评定感染路径危害评定皮肤可能粘膜（眼结膜）可能呼吸道可能消化道（经手-口）可能经血（针刺伤、切割伤）可能经血（虫媒介）可能偷窃可能化学腐蚀极少放射无（1）天天早晨开紫外灯消毒空气最少30分钟，同时做好各物表、仪器清洁消毒工作。（2）试验人员要戴手套、帽子进行操作。当估量会出现微生物和危险物溅出时要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用接种环、镊子等金属物品要在酒精灯火焰上烧灼灭菌。（4）可能产生致病性微生物气溶胶或出现溅出操作如涂片、接种时，应在生物安全柜内操作，并使用个体防护设备。（5）试验室内多种标本、菌种、培养基和其它废弃物在运出试验室前必需灭活（高压、浸泡），需运出试验室灭活物品必需放在专用密闭容器中。（6）操作过程中发生菌种污染物表时，应立即采取方法进行物表消毒。（7）当发生致病性微生物气溶胶污染时，应立即进行人员疏散，通知责任人到现场进行指导消毒。（8）对菌种保留应严格遵守菌种保留制度，严禁私自保留多种国家法定传染病菌株或毒株。（9）试验人员离开试验室前要去除手套，确定无污染或污染已排除，后方可洗手离去。（10）微生物、PCR试验室要设置纱窗、挡鼠板。三、特定试验活动危害评定（见以下章节之多种病原体危害评定）四、 工作人员素质本试验室共有技术人员20名，其中申请进入BSL-2试验室20名。学士学位3名，3名曾经从事微生物学试验，3名曾经从事无菌试验室活动经历，5名技术人员学习过生物安全手册并经过定时培训及考评成绩合格，经体检无现患严重疾病，本试验室除HBV携带者1名无其它患传染性疾病技术人员，健康状态良好。五、评定结论此次评定本试验室共19项可能潜在危险试验活动，在试验操作试验施过程中在无控制方法情况下可能产生高危害度5项，中度14项，低度0项；对危害发生可能性分析，试验危害较大可能发生有0项，可能发生5项，较少可能发生14项；这些危害造成高度严重后果5项，后果严重性中度14项，后果严重性低度0项。依据拟采取预防控制方法后仍然存在残留风险为高度0项，中度0项，低度危害19项。评 估：驻马店市人民医院检验科 评定人： 审 核：驻马店市人民医院生物安全管理委员会 审核人： 8月1日第二章 人类免疫缺点病毒HIV生物危害评定汇报人类免疫缺点病毒（HIV）病毒特异性地侵犯CD4+T淋巴细胞，造成机体细胞免疫受损。临床上初始表现为无症状病毒感染者，继续发展为连续性全身淋巴结肿大综合征和艾滋病综合征，最终并发多种严重机会性感染和恶性肿瘤，成为AIDS，病死率极高。到现在为止，还没有找到一个治愈该病方法。1. 病原学11 HIV是单链RNA病毒，属逆转录病毒科，慢病毒属，包含HIV-1型和HIV-2型，二者均能引发AIDS。但多数AIDS乃由HIV-1型引发。HIV现有嗜淋巴细胞性又有嗜神经性，关键感染CD4+T淋巴细胞，也能感染单核巨噬细胞，B细胞和小神经胶质细胞、骨髓干细胞等。12 HIV抵御力：HIV对外界抵御力较弱，对热敏感，5630分钟能灭活。25%以上浓度酒精即能灭活病毒，70%效果最好；0.2%次氯酸钠、5%8%甲醛及有机氯溶液等均能灭活病毒。但对0.1%甲醛溶液、紫外线和射线不敏感。在试验室条件下，HIV在干燥环境中很快失去活性，在厚血块中可存活十几天，在干燥玻璃上可维持几天。美国CDC证实干燥环境中HIV浓度在几小时内降低90%99%。2 流行病学21 传染源：病人和无症状病毒携带者是关键传染源，前者传染性最强，后者在流行病学上意义更大。病毒关键存在于血液、精液、子宫和阴道分泌物中；乳汁、唾液、泪水等均能检出病毒。22 传输路径：世界公认传输路径有三种，即性传输、血液传输及母婴传输。23 人群易感性：各个年纪均可感染，但同性恋和性乱交者，静脉毒瘾者，血友病患者，接收血、血制品或器官移植者，父母是HIV感染者儿童，受感染危险性比较大，属高危人群，发病年纪关键为40岁以下青状年。3 临床表现本病潜伏期较长，HIV-1侵入机体后2左右能够发展为AIDS，HIV-2所需时间更长。HIV感染人体后分为、四期，HIV对CD4+T淋巴细胞有特殊亲嗜性，发病和HIV含量、毒力、变异及CD4+T淋巴细胞数量、功效和机体免疫情况相关。临床上可表现为原因不明免疫缺点，往往以淋巴结肿大、厌食、慢性腹泻、体重减轻、发烧、乏力等全身症状起病，逐步发展至多种机会性感染、继发性肿瘤、精神神经障碍而死亡。4 试验模式及危害原因分析41 HIV抗体和抗原检测：最常见样品是血液，包含血清、血浆和全血。HIV关键传输路径就是血液传输，在进行采样和检测等过程中，全部可能接触到血液，所以对于未知样品检测含有潜在危险性；而对于直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液时，试验危险性较高，更应注意个人防护。42 HIV核酸检测：样品有全血、血浆、组织和其它分泌物，有时还包含生物制品，这类标本含有潜在危险性，对于HIV感染者或艾滋病病人样品，试验危险性较高。43 HIV病毒培养：培养物中含大量HIV，对于试验人员含有相当高传染危险性。应该在P3试验室内进行操作，同时严格做好个人防护工作。5安全保障方法51 个人防护511 高标准个人保健对于降低感染危险性很关键。皮肤受损、生病全部会增加感染危险性。皮肤伤口和擦伤全部应以防水敷料覆盖。512 进试验室前要摘除首饰，修剪长带刺指甲，以免刺破手套。513 进入试验室应穿隔离衣，戴手套。假如接触物传染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。514 离开试验室前必需脱去隔离衣并洗手。515 严禁在艾滋病检测试验室内进食、饮水、吸烟和化妆。516 降低试验室内利器使用。52 带入和带出试验室物品521 对全部带入试验室物品全部应进行检验。含有测试样品包裹应在安全柜或其它合适装置内打开。522 将HIV测试样品转送其它试验室时，应预防对人员和环境污染。护送样品人应明确接收地点和接收人，试验室责任人或其指定人员应立即确定样品已送达指定试验室，被转入安全位置并得到妥善处理。523 污染或可能造成污染材料在带出试验室前应进行消毒。53 消毒方法531 废弃物缸：10%（V/V）次氯酸钠（含10，000ppm有效氯）。532 生物安全柜工作台面和仪器表面：70%乙醇。533 溢出物：10%次氯酸钠（V/V）。534 污染台面和器具：40%甲醛水溶液，也能够用过氧化氢或过氧乙酸。第三章 结核分枝杆菌生物危害评定汇报结核病是由结核分枝杆菌（偶然可由牛型或非洲型分枝杆菌）引发一个细菌性疾病。结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最为常见。该病含有传染性强，散播面广，不分地域均可发生。结核病可由呼吸道、消化道、皮肤等路径感染，但其关键传输路径是以空气为传输因子呼吸道传染，而排菌肺结核病人传染性更大，是传输感染关键传染源。传输路径呼吸道感染（respirator tract infection）是肺结核关键传染路径（routes of infection），飞沬传染（droplet infection）为最常见方法。传染源关键是排菌肺结核患者（尤其是痰涂片阳性未经诊疗者）。飞沬核（droplet nuclei） 10m时可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打喷嚏时喷出带菌飞沫而受感染。 危害程度分级微生物按其是否致病、致病力强弱、危害人体严重性、传染性大小、临近人群抵御力、有没有免疫制剂和特效诊疗药品等综合评价，可分为四个不一样危害等级。结核分枝杆菌属于3级危险。3级危险（对个体含有极大危害，对群体含有较大危害性）：指有特殊危险致病菌。感染后症状较重，并可能危及生命，或缺乏有效预防方法、发病后不易诊疗微生物。试验室感染原因及预防（一）技术操作可能造成感染及其预防方法。1. 接种：应使用无弹力铂丝接种环，结核菌接种后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要尤其注意。2. 混匀：吸管吸吹菌液时不要产生气泡，应沿容器壁排出。3. 研磨：最好使用组织研磨器，乳钵易产生气溶胶。4. 移液：吸管上端棉花松紧要适度，吸液时要从管底吸收，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免产生气泡，形成气溶胶。5. 开封：要避免压力和气流急剧改变。6. 离心：离心管套底垫要完好，使用匹配管、套、离心头，加盖。7. 注射：做好个人防护，正确使用注射器。8. 搬运：室内移动要避免滑落，移出室外要有坚实密闭外包装。（二）技术保障1. 双人标准，不许可单人操作1、2类病原。2. 入口处应有危险警示标识，并标明所操作微生物种类。3. 培训考评上岗，掌握相关技术操作要领，熟悉规章制度，适应工作环境。4. 完备管理方法，技术操作规范。5. 良好工作行为可降低生物危害风险。试验室中分枝杆菌及分枝杆菌气溶胶结核病试验室工作人员，在分枝杆菌检验过程中，会接触到多种潜在感染源标本和多种危险物，尤其是很多操作易产生分枝杆菌气溶胶。含有结核分枝杆菌微滴核（1-5微米）经过呼吸进入人体肺泡，能够黏附在肺泡内生长繁殖。所以，首先要对试验室中生物危险物产生路径和存在地点有充足认识，方便明确生物安全防护步骤。(一) 分枝杆菌存在地点1、多种临床标本，通常是痰，胃或支气管灌洗液、脑脊液、尿液等。2、被污染操作台、器械、仪器、试剂等。3、搜集结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌菌株等。4、细菌学试验室部分区域。(二) 产生分枝杆菌气溶胶1、试验室内可疑肺结核患者痰标本采集。2、样本制备和涂片火焰固定。3、分离培养或接种培养物。4、用火焰烧灼接种环。5、使用移液器混合培养物。6、培养管或培养瓶中含有培养物滴落物。7、溢出分枝杆菌悬浮液。8、高速混合含有分枝杆菌液体。9、转移液态培养物和上清液，或培养液、上清液倾倒。10、离心过程中离心管破碎。11、用做原代培养所需组织匀浆。安全防护(一) 严格遵守试验室安全操作规程，任何时侯全部要警惕分枝杆菌气溶胶产生。试验室技术人员必需经过生物安全培训后方可上岗。(二) 试验室应严格限制非试验人员进入，降低试验室内外交叉生物污染。完成试验工作离开试验室，要关好门窗。(三) 进入试验室应避免携带非必需物品。(四) 进入试验室，工作人员应穿着工作服，操作时应穿戴防护隔离衣、口罩、帽子和手套，长发者应将头发装束在帽子内。(五) 试验过程中绝对严禁吸烟、饮食等，不要以手抚头面部等。(六) 试验前须开启紫外线灯对试验室和操作区域进行照射消毒1小时以上；试验结束后，立即开启紫外灯进行照射消毒2小时以上。(七) 任何试验开始和结束后，操作人员要用70%酒精浸泡双手或仔细擦后，用清洁剂或清水洗净。(八) 每次试验结束后，必需清理好试验台，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗试验台面。(九) 试验室中生物危险品要依据检验项目和性质不一样，局限在对应试验区间，不得随意将其带到其它试验室。(十) 试验室内任何微生物样本，废弃物全部必需经高温高压灭菌后，方可按通常垃圾处理。安全保障(一) 首先各级试验室应按等级要求完善试验设施，如简易安全柜内抽气排风功效、紫外灯消毒功效，生物安全柜维护和除菌滤膜定时更换等。(二) 试验室采集病人痰标本时应在户外进行，避免因病人咳漱造成室内气溶胶污染。(三) 一般试验室应注意气流方向，试验过程中尽可能避免强气流改变而产生气溶胶（如涂片、染色过程中）。(四) 细菌分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作，各级试验室均应在简易安全柜或生物安全柜中进行。(五) 使用接种环进行操作时，接种环应在工作灯内焰中燃烧，以避免菌液或菌块飞溅。(六) 稀释菌液时，吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部，小心操作避免产生气泡或气溶胶。 (七) 使用注射器加样时，用过针头切勿再重新入套或拔开注射器和针头，应直接放入锐器搜集器，以免划破皮肤造成接种感染。(八) 菌株库要设专员管理，并根据国家微生物菌毒种管理措施实施。(九) 进行毒菌操作过程中，不要穿戴巳经污染防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域，避免因为粗心扩大污染范围。(十) 试验结束后，操作过程中全部可能和生物危险物接触或被污染试验器械和物品，能够高压消毒必需高压消毒，不能进行高压消毒设备、仪器，应使用有效消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。 (十一)试验中发生意外污染情况，应立即通知主管人员并做好处理污染物和对应区域准备，不得私自采取其它严禁方法进行消毒处理。(十二)试验室主任应制订规章和程序，只有通知潜在风险并符合进入试验室特殊要求(如，经过免疫接种)人，才能进入试验室。(十三)操作致病性微生物时，试验室入口处应贴有生物危险标志，并显示以下信息：相关病原、生物安全等级、免疫接种要求、研究人员姓名、电话号码、在试验室中必需佩带个人防护设施、出试验室所要求程序。(十四)试验室主任为试验室人员尤其制订标准操作程序或生物安全手册中，应包含生物安全程序。对于有特殊风险人员，要求阅读并在工作及程序上遵照实施。(十五)试验室主任确保试验及其辅助人员接收合适培训，包含和工作相关可能存在风险、预防暴露必需方法和暴露评定程序。（十六）试验室所用任何个人防护装备应符合国家相关标准要求。试验室应确保含有足够有合适防护水平清洁防护服供使用。还应穿戴其它个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。(十七)处理样本过程中易产生高危害气溶胶时，要求同时使用合适个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子气溶胶，应在合适生物安全柜中操作。(十八) 试验用鞋应舒适，鞋底防滑。应用皮制或合成材料不渗液体鞋类。在从事可能出现漏出工作时可穿一次性防水鞋套。在试验室特殊区域（比如有防静电要求区域）或BSL-3和BSL-4试验室要求使用专用鞋（比如一次性或橡胶靴子）。结核病试验室废物处理 一、试验室废弃物处理目标：(一) 将操作、搜集、运输、处理及处理废弃物危险减至最小；(二) 将试验室废弃物对环境有害作用减至最小。二、试验室污物处理及消毒(一) 试验室含有生物危险物临床标本及被污染一次性用具，试验完成后，应在操作台或试验区域内以紫外灯近距离照射消毒 2小时以上，再经高压消毒后方可丢弃或焚烧。 (二) 可反复使用试验用具及器材，完成试验后，应在操作台或试验区域内经紫外灯近距离照射消毒2小时以上后，再交相关人员进行高压消毒和煮沸洗刷。(三) 试验用试管、吸管、注射器，须装在加盖不漏容器内，经高压灭菌后取出。 (四) 培养物或试验室垃圾，在丢弃前必需经高压消毒和紫外灯近距离长时间照射处理。不许可积存垃圾和试验室废弃物。已装满容器应定时运走。在去污染或最终处理之前，应存放在指定安全地方，通常在试验室区内。(五) 试验室废弃物应置于合适密封且防漏容器中安全运出试验室。有害气体、气溶胶、污水、废液应经合适无害化处理后排放，应符合国家相关要求。 (六)试验过程中，如标本或含标本前消化处理液被打翻污染了操作台或地面，应以吸满70%酒精卫生纸覆盖污染区，15分钟以后卫生纸方可移去。 (七) 试验室内未经消毒污水，严禁直接排入公共排水系统，更不许可混入居民生活垃圾。 意外事故处理(一) 假如发生意外，必需立即通知试验室主管人员，并在相关人员指导监督下对出事现场进行处理，绝对严禁未经汇报而私自对出事现场给非规范处理。 (二) 试验过程中，如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等情况发生，应立即停止试验工作进行紧急处理，更换被污染试验服，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒或酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。 (三) 假如发生菌液溢出，含菌种培养管破碎等，造成中 、小面积污染，可用比污染面积大25%以上纱布覆盖污染区域，边缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或70%酒精，浸泡2小时以上（其间适量加溶液预防干燥），再经紫外灯近距离（1米内）照射2小时以上；被污染器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小时以上，试验完成后再进行高压消毒处理。 (四) 假如发生气溶胶污染或大面积污染，应立即停止试验并关闭试验室，对污染区域进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区进行二十四小时封闭空气熏蒸消毒（乙醛消毒法5ml乙醛2g高锰酸钾/m3空间）。(五) 绝对严禁使用事故处理方法1. 任何有可能造成污染面积扩大去污方法，如使用70%乙醇或甲酚皂液擦洗被污染区域。2. 直接用火焰对未经任何处理污染地面、操作台、器械等进行烧灼处理。3. 使用消毒效果未经证实消毒剂进行消毒。4. 使用低浓度消毒剂和紫外灯进行短时间、长距离照射。第四章 霍乱弧菌生物危害评定汇报霍乱(cholera)是由霍乱弧菌所致烈性肠道传染病，临床表现轻重不一，经典病例病情严重，有猛烈吐泻、脱水、微循环衰竭、代谢性酸中毒和急性肾功效衰竭等。诊疗不立即常易死亡，属甲类传染病。过去将古典生物型(classical biotype)霍乱弧菌所致感染称为霍乱，由爱尔托生物型(EI Tor biotype)所致者称副霍乱。鉴于霍乱弧菌两个生物型在形态和血清学方面几乎一样，两种弧菌感染临床表现和防治方法基础相同，所以，分别命名为霍乱和副霍乱并无必需，而统称为霍乱。世界第五、六次大流行和古典生物型相关，第七次则由印尼地方流行爱尔托生物型所致，延续至今未止。而1992年于印度及孟加拉等地流行霍乱，已证实是新血清型所致，该菌定名为0139。现已波及巴基斯坦、斯里兰卡、泰国、尼泊尔、中国香港及欧美等地，似有形成第八次流行之势。【流行病学】病人和带菌者是霍乱传染源。经典病人吐泻物含菌量甚多，每ml粪便可含107109弧菌，这对疾病传输起关键作用。轻型病人易被忽略，健康带菌者不易检出，二者皆为危险传染源。潜伏期带菌者尚无吐泻，恢复期带菌者排菌时间通常不长，二者作为传染源意义居次要地位。本病关键借水传输，污染食品和手和苍蝇等，对传输疾病也起一定作用。男女老幼均对本病易感。在新感染区，成人比儿童易受感染；在地方流行区，儿童发病率较成人为高，后者对感染抵御力伴随对霍乱弧菌抗体滴度升高而增加。病后丙次发生严重感染者少见。试验感染霍乱弧菌志愿者，对第二次感染具高度抵御力，其时间最少可维持3年。古典霍乱弧菌首次感染免疫力能(100%保护力)较埃尔托弧菌者(90%保护力)为强。霍乱患者即使对新感染保护免疫可达数年，但对霍乱毒素和细菌肠抗体仅维持一致数月。【危害程度分级】微生物按其是否致病、致病力强弱、危害人体严重性、传染性大小、临近人群抵御力、有没有免疫制剂和特效诊疗药品等综合评价，可分为四个不一样危害等级。霍乱弧菌属于3级危险。3级危险（对个体含有极大危害，对群体含有较大危害性）：指有特殊危险致病菌。感染后症状较重，并可能危及生命，或缺乏有效预防方法、发病后不易诊疗微生物。【试验室感染原因及预防】（一）技术操作可能造成感染及其预防方法。1. 接种：应使用无弹力铂丝接种环，结核菌接种后接种环火焰灭菌易崩散，酒精灯烧灼时要尤其注意。2. 混匀：吸管吸吹菌液时不要产生气泡，应沿容器壁排出。3. 研磨：最好使用组织研磨器，乳钵易产生气溶胶。4. 移液：吸管上端棉花松紧要适度，吸液时要从管底吸收，吹出时要轻缓，不要全部吹净，以免产生气泡，形成气溶胶。5. 开封：要避免压力和气流急剧改变。6. 离心：离心管套底垫要完好，使用匹配管、套、离心头，加盖。7. 注射：做好个人防护，正确使用注射器。8. 搬运：室内移动要避免滑落，移出室外要有坚实密闭外包装。（二）技术保障1. 双人标准，不许可单人操作1、2类病原。2. 入口处应有危险警示标识，并标明所操作微生物种类。3. 培训考评上岗，掌握相关技术操作要领，熟悉规章制度，适应工作环境。4. 完备管理方法，技术操作规范。5. 良好工作行为可降低生物危害风险。【安全防护】(一) 严格遵守试验室安全操作规程，试验室技术人员必需经过生物安全培训后方可上岗。(二) 试验室应严格限制非试验人员进入，降低试验室内外交叉生物污染。完成试验工作离开试验室，要关好门窗。(三) 进入试验室应避免携带非必需物品。(四) 进入试验室，工作人员应穿着工作服，操作时应穿戴防护隔离衣、口罩、帽子和手套，长发者应将头发装束在帽子内。(五) 试验过程中绝对严禁吸烟、饮食等，不要以手抚头面部等。(六) 试验前须开启紫外线灯对试验室和操作区域进行照射消毒1小时以上；试验结束后，立即开启紫外灯进行照射消毒2小时以上。(七) 任何试验开始和结束后，操作人员要用70%酒精浸泡双手或仔细擦后，用清洁剂或清水洗净。(八) 每次试验结束后，必需清理好试验台，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗试验台面。(九) 试验室中生物危险品要依据检验项目和性质不一样，局限在对应试验区间，不得随意将其带到其它试验室。(十) 试验室内任何微生物样本，废弃物全部必需经高温高压灭菌后，方可按通常垃圾处理。【安全保障】(一) 首先各级试验室应按等级要求完善试验设施，如简易安全柜内抽气排风功效、紫外灯消毒功效，生物安全柜维护和除菌滤膜定时更换等。(二) 试验室采集病人标本时要格外注意。(三) 一般试验室应注意气流方向，试验过程中尽可能避免强气流改变而产生气溶胶（如涂片、染色过程中）。(四) 细菌分离培养、菌种开封、转种、研磨、稀释等操作，各级试验室均应在简易安全柜或生物安全柜中进行。(五) 使用接种环进行操作时，接种环应在工作灯内焰中燃烧，以避免菌液或菌块飞溅。(六) 稀释菌液时，吸管、针管要缓慢插入试管或烧瓶底部，小心操作避免产生气泡或气溶胶。 (七) 使用注射器加样时，用过针头切勿再重新入套或拔开注射器和针头，应直接放入锐器搜集器，以免划破皮肤造成接种感染。(八) 菌株库要设专员管理，并根据国家微生物菌毒种管理措施实施。(九) 进行毒菌操作过程中，不要穿戴巳经污染防护性手套触摸门柄、仪器或毒菌区以外区域，避免因为粗心扩大污染范围。(十) 试验结束后，操作过程中全部可能和生物危险物接触或被污染试验器械和物品，能够高压消毒必需高压消毒，不能进行高压消毒设备、仪器，应使用有效消毒剂擦洗后再以紫外灯近距离长时间消毒。 (十一)试验中发生意外污染情况，应立即通知主管人员并做好处理污染物和对应区域准备，不得私自采取其它严禁方法进行消毒处理。(十二)试验室主任应制订规章和程序，只有通知潜在风险并符合进入试验室特殊要求(如，经过免疫接种)人，才能进入试验室。(十三)操作致病性微生物时，试验室入口处应贴有生物危险标志，并显示以下信息：相关病原、生物安全等级、免疫接种要求、研究人员姓名、电话号码、在试验室中必需佩带个人防护设施、出试验室所要求程序。(十四)试验室主任为试验室人员尤其制订标准操作程序或生物安全手册中，应包含生物安全程序。对于有特殊风险人员，要求阅读并在工作及程序上遵照实施。(十五)试验室主任确保试验及其辅助人员接收合适培训，包含和工作相关可能存在风险、预防暴露必需方法和暴露评定程序。（十六）试验室所用任何个人防护装备应符合国家相关标准要求。试验室应确保含有足够有合适防护水平清洁防护服供使用。还应穿戴其它个人防护装备，如手套、防护镜、面具、头部面部保护罩等。(十七)处理样本过程中易产生高危害气溶胶时，要求同时使用合适个人防护装备、生物安全柜和/或其它物理防护设备。如可产生含生物因子气溶胶，应在合适生物安全柜中操作。(十八) 试