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生物毒性测试仪说明书

DXY-3型 智能化生物毒性(污染)测试仪使用说明书
一、仪器特点
DXY-3型 智能化生物毒性(污染)测试仪是在DXY-2型 生物毒性(污染)测试仪基础上改善，并加人智能化功效新型号机，和国际上同类产品相当，不过，价格低廉，发光菌能确保供给。
该仪器是基于毒性物质对特殊发光细菌发光度抑制作用而设计，它经过测定发光细菌发光度改变，量度被测环境样品中由重金属和其它有机污染物所造成 急性生物毒性。和传统鱼、蚤和其它水生生物作为生物检测方法相比，发光细菌法简便、快速、灵敏、适应性强、反复性好、精度高、费用低、用途广，凡有毒 化合物、废水、废弃物生物毒性均可测定。所以，它是对受污染环境生物毒性检测进行初筛、监测较为理想工具，也是其它领域开拓新试验测试方法新工 具。
该仪器可测量和显示待测液毒性含量，测量所得数据可存放，可一次存放10组数据，每组数据包含3个标准液测量值和3个待检溶液测量值，方便查看；同时，能够上传到计算机，方便分析和长久保留。仪器显示界面由液晶显示器提供，仪器控制输入由按键实现。
该仪器2型机为中国环境监测总站监制产品。
该仪器测定方法为国家标准，标准号：“GB/T15441-1995水质 急性毒性测定 发光细菌法”由中国家标准准出版社出标准文版。仪器标准号：Ｑ宁/KTS 01-93。经过近三十年不停开发，已经在环境科学、微生物学、免疫学、细菌学、生物化学和临床检验等领域得到广泛应用。
二、仪器用途
测定纯化合物(包含有机分子、无机金属离子)急性毒性。
测定受污染水体(包含工业排放污水、矿山采矿和冶炼废水、河水等水系)急性毒性。
测定受污染土壤、河流和沿海带底泥急性毒性。
用于研究有毒元素和化合物相互之间相互作用－协同或拮抗效应。
用于慢性反应化学发光分析等。
三、测试原理
测试原理：总体急性生物毒性。
明亮发光杆菌之所以发光，是因为菌发光系统发生了以下反应：
    基质
     ↓         ATP         ATP       ATP
还原型辅酶A → 黄素(H2) → 细胞色素 → 02
               ↓
        载氢黄素单核苷酸
   荧光酶(电子)↓
               02          RCH0  RCO0H
电子 → FMNH2 → 电子 → FMNH → 光＋FMN＋电子十H2O
                        ↓
                        OOH
                       黑暗↓
             电子十黄素单核苷酸十H2O2
当细胞活性高，处于主动分裂状态时，细胞ATP含量高，发光强；休眠细胞ATP含量显著下降，发光弱；当细胞死亡，ATP立即消失，发光停止。
处于活性期发光菌，当加入毒性物质(如重金属离子Cu2＋/Cd2＋/Se4＋/Zn2＋/As3＋/Pb2＋，农药五氧吩嗪、福美双，染料对氨基苯甲醚、对硝基邻甲苯胺，酸、碱等)，菌体就会受抑甚至死亡，体内ATP含量也会随之降低甚至消失，发光度便下降甚至到零。因为毒物浓度和菌体发光度呈线性负相关地改变，所以可据发光度确定毒物急性生物毒性。若此毒物知其成份而不知其浓度，则可依据先前测得发光度——毒物浓度关系曲线(标准曲线)，测定浓度。
四、技术指标
1、菌种名称：明亮发光杆菌T3小种                         急性生物毒性测定灵敏度比较
化合物
浓度(毫克/升)
生物毒性测试仪EC50
鱼96小时LC50
CU2＋
  3.239

Cd2＋
17.19

Zn2＋
 0.37

Pb2＋
82.23

Hg2＋
  0.126
0.01～0.9
AS3＋
 0.55

2、测试范围：0~1999mV(发光量)
3、测试精度：样品3次反复，相对偏差小于15%
4、灵 敏 度：相当或优于鱼体96小时培养测定急性
生物毒性试验法，见表(列举几例)
5、显 著 性：样品浓度和发光细菌相对发光度P<0.05
工业废水或0.01水平(纯化合物溶液)
6、测试温度：在室温20～25℃范围保持某一恒定值
7、测试时间：10～20min(单个样品)
8、结果表示：样品EC50值(稀释百分浓度)或相对发光
度(%)及相当氯化汞浓度值(mg/L)
9、供电电源：220V ±l0%
10、尺寸重量：300x240x130mm    5.5kg
该仪器外形、尺寸、重量，若有改变，恕不另行通知。
五、仪器操作
(一) 仪器样品室：仪器样品室为单管结构，可放入—只直径为20毫米测试样品管(样品溶液为5毫升)；也能够预先放入塑料套管，用直径为12毫米测试样品管(样品溶液为2毫升)。
(二) 样品溶液制备、发光细菌复苏和测量次序等：见附录。
(三) 仪器预热：在开始测试前，先确定暗室处于关闭状态（具体为暗室向右转至底）再接通仪器电源(这时面板上应是电源指示灯亮和停止指示灯亮)，让仪器预热—刻钟以上。
请注意！在接通电源前，—定要盖好样品室盖子，避免光电倍增管曝光，而疲惫受损。
(四) 功效按键：
仪器控制由按键实现：[上/左]、[下/右]、[取消/返回]、[测量]、[存放]、[确定]。
仪器开机后进入主界面，主界面有5个功效选项：[测量]、[校正]、[设置]、[查看]、[上传]。
经过[上/左]、[下/右]选择要进入功效选项，选中功效反白显示，按[确定]后进入对应菜单。
1、测量：
进入[测量]后，设置有两个选项：
①、使用默认操作员编号进入测量（编号全为1）；
②、使用手动输入，设置操作员编号，有三组操作员，经过[上/左]、[下/右]按键设置，按[确定]进入测量界面。
测量界面分三个部分：
①、最左边显示项目号、设置好操作员编号、时间和日期；
②、上面显示测量值，右上脚显示温度；
③、中间显示测量结果，每屏显示两组测量结果；
下面显示菜单，共四个菜单：[测量]、[上翻]、[下翻]、[返回]主界面。
[测量]  菜单是用于统计和修改已统计稳定测量值。当菜单处于[测量]时，按[确定]键，会将测量值统计下来，并在屏幕中间显示出来；按[取消]键，会将最终统计一个数据清除，重新测量；按[上翻]、[下翻]查看已统计数据。一个项目包含10组数据，每屏只能显示2组数据。
测量完成后假如需要保留数据话，请按[储存]键，屏幕会给出一个界面用于选择是否保留目前项目所测数据，保留是请您记住系统自动递增，生成项目编号，方便你查阅数据。
注意：测量时统计数据只是缓存，没有存入ROM当中，假如测量完成后数据需要存放话，请务必按[存放]键将数据保留。
2、校正：
进入[校正]后，有三个功效菜单：[零点校正]、[时间校正]、[返回]主界面。
经过[上/左]、[下/右]、[确定]、[取消/返回]按键进行具体操作，反白显示为目前选中操作。
3、设置：
进入[设置]后，有五个功效菜单：[背光保持时间]、[声音设置]、[倍率] 、[自动取样时间]、[返回]主界面。
[背光保持时间]包含：15S、30S、60S、常亮；
[声音设置]包含：开和关提醒音；
[倍率]包含：*1、*2、*3、*4、*5  以此放大发光菌发光量。
[自动取样时间]包含：5S、10S、15S、手动；
选择[自动取样时间]后，在测量时，抵达设定时间后，会自动统计测量结果。
4、查看：
进入[查看]后，会提醒输入项目号(左上脚显示项目号)，输入项目号后就会进入界面，能够查看当初测量后保留数据，界面跟测量界面相同，显示此项目测量时间、日期、温度、操作员编号、测量数据，经过[上/左]、[下/右]按键上翻、下翻数据。按[返回]键退出查看，返回主界面。
5、上传：
进入[上传]后，会提醒单一上传或选择整片上传，将ROM里面数据全部上传。
(五) 样品测量：
1、向上拔出样品室盖子(注意！拔出前，面板上应是停止指示灯亮)，然后将盛有待测样品溶液瓶子放入样品室，盖好盖子。
2、抓住盖子，依逆时针方向旋转(这时面板上停止指示灯熄灭，测量指示灯亮)，约1-2秒，则可读取样品溶液测定数据。
3、抓住盖子按顺时针方向旋转，回到原处(面板上测量指示灯熄灭，停止指示灯亮)，这时，才能够向上拔出盖子，取出已测过样品。以后，可作以下处理：
①、还有待测样品，再取一瓶放入，盖好盖子，然后按上述步骤进行测量。
②、因样品需要深入处理，不能立即测量，能够盖上盖子等候。
③、整批样品已测试完成，盖好盖子，将仪器电源切断。
(六) 有色样品液测量：
对有色被测液，若用常规方法测会有干扰，所以需用下述方法进行校正。具体步骤以下：
1、从仪器样品室取出黑色塑料管套。
2、取一只2m1管(即12毫米测试样品管)，加3% NaCI溶液2ml，将该管放进一只装有适量3% NaCl溶液5ml管(即20毫米测试样品管)内，并使外管和内管3% NaCl溶液面平齐，此作CK管。
3、另取一只2ml管，加3% NaCl溶液2ml，放入另一只装有适量有色待测样品液5ml管内，要使外管和内管3% NaCl溶液面平齐，此作CKc管。
4、于CK和CKc二管内管中同时加复苏发光菌液10μ(注意：必需是本批样品测定所用同一瓶复苏菌液)，立即记时到秒，等反应满15分钟，迅即放入仪器样品室，测定二只带有内管5ml管发光度。分别记下发光度L1(CK管)和L2(CKc管)。
5、计算因颜色引发发光度校正值△L＝Ll-L2。
6、测试带色样品管及其CK管(加3% NaCl溶液)发光量。
不过，全部CK管测得之发光度均须减去校正值△L后才能作为CK发光度。
六、结果处理
数据处理：见附一中之(五)测试数据处理
说明：当在一次系列样品测量过程中，“输出幅度选择”开关所处位置有变动，则需换算成某—档次值，然后才进行数据处理。“Xl”档和其它档(“XN”档)关系以下：
                XN
          Xl ＝ ---- 或 XN ＝ Xl·N                N
式中：N--------为“输出幅度选择”开关所处位置；
          X1 ，XN --为“输出幅度选择”开关处于“Xl”，“XN”档时，数字表上读数。
七、分级标准
依据国外相关资料及中国部分试验数据，确定以下水质急性毒性分级标准，供参考。
水质急性毒性分级标准
毒性等级
相对抑光率%
Hg（毫克/升）
毒性等级
I
< 30
< 0.07
低毒
II
30-50
0.07-0.09
中毒
III
50-70
0.09-0.12
重毒
IV
70-100
0.12-0.16
高毒
V
100
> 0.16
剧毒
注：相对抑光率% ＝ 100% － 相对发光度%
八、注意事项
(一) 仪器要水平放置于工作台上，并注意，千万不要放置在温度高、湿度大及电磁干扰大地方。
(二) 当仪器不进行测试时，—定要盖上样品室盖子，预防灰尘进入及光电倍增管曝光；在测量时，要避免以强光照射光电倍增管，而产生疲惫现象。
(三) 在给各测试管加复苏菌液后，盖上瓶塞，用手颠倒5次；不过，在放回原位后，要拔去瓶塞！！！
(四) 请尤其注意：严防测试样品溶液漏在样品室内。如发觉样品管外壁已附着样品液时，一定要先擦洁净后，再放入样品室，避免样品室产生锈蚀，致旋转不自如或转不动。若样品室内已沾附着样品液时，立即用滤纸吸干，并用稀机油在沾附处擦洗—下。
(五) 发光细菌活性及使用菌液量正确性全部将对测量产生很大影响，所以务必正确操作。
(六) 当发觉测量结果异常时，要认真检验分析，找出原因，并加以处理：
1、操作环境温度、样品温度是否控制在200C；
2、菌种复苏情况，是否均匀；
3、用于测试管子是否清洗洁净；
4、用10μl微量注射器吸收复苏菌液时是否有小气泡；
5、样品和菌液反应时间是否正确到秒；
6、当日使用菌种复苏液只能在当日使用。
(七) 请注意：
1、仪器处于“停”状态，旋转“调零”，数字表上能出现正负值均匀改变，调整“调零”使显示“0”，零点应稳定；
转动样品室盖子，让仪器处于“测”状态，然后慢慢拔起盖子，使它和样品室间有一小缝，让室内光线射入样品室，数字表有显示值，且随隙缝大小而改变。盖好盖子，转回原位，应显“0”。
2、发光菌液在仪器中显示值符合要求要求，衰减情况正常。
以上两项正常，出现测量结果异常，则属于操作不严格、不规范，要认真重做一遍。
(八) 假如发光细菌不好，则更换发光菌冻干粉。当判定是仪器故障，请发送我所检修，千万不要自拆。
(九) 仪器自提货之日起，因元器件质量造成故障，无偿包修十二个月；该仪器终年保修。

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