禽腺病毒血清型4通过JAK_STAT信号通路调控鸡胚心脏成纤维细胞炎症反应的研究.pdf

中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第 45 卷 第 10 期2023 年 10 月Vol.45，No.10Oct.2023doi院10.3969/j.issn.1008-0589.202303013禽腺病毒血清型4通过JAK/STAT信号通路调控鸡胚心脏成纤维细胞炎症反应的研究冯孝傲1，尹德晶1，朱二鹏1，宋春1，文明1,3，岳筠2，程振涛1,3*(1.贵州大学 动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550025；3.贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室，贵州 贵阳 550008)摘要：为探究禽腺病毒血清型4(FAdV-4)感染鸡胚心脏成纤维细胞(CEF)后调控该细胞中炎症因子反应的机制，本研究以MOI 5 FAdV-4贵州分离株(GZ-QL)感染鸡胚心脏CEF细胞，采用荧光定量PCR(qPCR)检测FAdV-4感染后CEF细胞中IL-1茁、IL-6、IL-8、TNF-琢基因的转录水平；采用western blot检测FAdV-4感染后CEF细胞中不同时间段JAK/STAT信号通路关键蛋白JAK2和p-JAK2的表达情况；以 40 滋mol/L JAK/STAT信号通 路抑 制剂Ruxolitinib预处理CEF细胞2 h后，将FAdV-4按MOI 5感染CEF细胞，在感染后不同时间分别收集细胞和上清，采用western blot检测Ruxolitinib处理后FAdV-4感染的CEF细胞中不同时间段JAK/STAT信号通路关键蛋白JAK2和p-JAK2的表达情况；采用qPCR检测Ruxolitinib处理后FAdV-4感染的CEF细胞中IL-1茁、IL-6、IL-8、TNF-琢基因的转录水平；采用ELISA检测Ruxolitinib处理后FAdV-4感染的CEF细胞上清中IL-1茁、IL-6、IL-8、TNF-琢的表达水平。结果显示，与不感染FAdV-4的空白对照细胞相比，FAdV-4感染CEF细胞后IL-6和IL-8基因的转录水平均极显著上调(0.01)，IL-1茁基因的转录水平在后期显著上调(0.05)，TNF-琢基因的转录水平在前期无变化，后期极显著上调(0.01)；western blot结果显示，与空白对照细胞相比，FAdV-4感染CEF细胞后p-JAK2蛋白的表达水平均极显著升高(0.01)，且48 h p-JAK2蛋白的表达水平最高。Western blot结果显示，与FAdV-4感染组相比，Ruxolitinib处理后FAdV-4感染的CEF细胞及Ruxolitinib处理的CEF中p-JAK2蛋白的表达水平均极显著降低(0.01)，Ruxolitinib组与空白对照组无显著差异；qPCR结果显示，与FAdV和空白对照组相比，Ruxolitinib处理后FAdV-4感染的CEF细胞中炎症因子IL-1茁、IL-6、IL-8基因的转录水平均极显著上调(0.01)，TNF-琢基因的转录水平显著上调(0.05)；ELISA结果显示，与FAdV和空白对照组相比，Ruxolitinib处理后FAdV-4感染的CEF细胞中炎症因子IL-8分泌水平极显著上调(0.01)，TNF-琢分泌水平显著上调(0.05)、IL-1茁和IL-6分泌水平无显著变化，与转录水平结果基本一致。本研究上述结果首次证实FAdV-4可以诱导鸡胚心脏CEF细胞产生强烈的炎症反应，并激活了该CEF细胞中的JAK/STAT信号通路，该研究结果为深入阐明FAdV-4感染心脏细胞的致病机制提供一定的参考依据。关键词：禽腺病毒血清型4；JAK/STAT信号通路；炎症反应；心脏成纤维细胞中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：1008-0589(2023)10-1038-07A Fowl adenovirus serotype 4 regulates the inflammatory responseof chicken embryonic cardiac fibroblasts through the JAK/STATsignaling pathway收稿日期：2023-03-09基金项目：贵州省科技计划项目(黔科合20201Y409号)；贵州省科技支撑计划项目(黔科合支撑2021一般161)；贵州省优秀青年科技人才项目(黔科合平台人才20215646)作者简介：冯孝傲(1998-)，女，土家族，贵州德江人，硕士研究生，主要从事动物疫病学方向研究.*通信作者：E-mail：*Corresponding authorFENG Xiao-ao1,YIN De-jing1,ZHU Er-peng1,SONG Chun1,WEN Ming1,3,YUE Yun2,CHENG Zhen-tao1,3*(1.College of Animal Science,Guizhou University,Guiyang 550025,China;2.Guizhou Center for Animal Disease Prevention and Control,Guiyang 550025,China;3.Guizhou Key Laboratory of Animal Disease and Veterinary Public Health,Guiyang 550008,China)Abstract:To investigate the mechanism of avian adenovirus serotype 4(FAdV-4)in regulating inflammatory factors inchicken embryonic cardiac fibroblasts(CEF)after infection,the FAdV-4 Guizhou isolate(GZ-QL)was used to infect CEF cells,and the transcription levels of IL-1茁,IL-6,IL-8 and TNF-琢 genes in FAdV-4-infected CEF cells were detected by fluorescencequantitative PCR(qPCR);Western blot was used to detect the expression of JAK2 and p-JAK2,the key proteins of JAK/STATsignaling pathway,in FAdV-4-infected CEF cells at different time points;CEF cells were pretreated with 40滋mol/L JAK/STATsignaling pathway inhibitor Ruxolitinib for 2 hours,and then infected with FAdV-4(MOI 5).Cells and supernatants were collectedat different time points after infection,and the expression of JAK2 and p-JAK2 were detected by western blot;the mRNAtranscription levels of IL-1茁,IL-6,IL-8 and TNF-琢 genes were determined by qPCR and the protein expression levels of IL-1茁,IL-6,IL-8 and TNF-琢 were determined by ELISA.Results showed that the mRNA transcription levels of IL-6 and IL-8 were bothsignificantly up-regulated(0.01),the mRNA transcription levels of IL-1茁 were significantly up-regulated(0.05)in the latestage of infection,and the transcription levels of TNF-琢 gene were unchanged in the early stage and highly significantlyup-regulated(0.01)in the late stage;Western blot showed that the expression levels of p-JAK2 protein significantly increasedafter FAdV-4 infection(0.01),and reached the highest level at 48 hours post-infection.The expression levels of p-JAK2 proteinsignificantly decreased in Ruxolitinib-treated,FAdV-4-infected CEF cells(0.01).qPCR results showed that mRNA transcriptionlevels of IL-1茁,IL-6 and IL-8 and TNF-琢 were significantly upregulated in Ruxolitinib-treated,FAdV-4-infected CEF cells;ELISAresults showed that the protein expression levels of inflammatory factors IL-8 and TNF-琢 were significantly upregulated(0.01),while IL-1茁 and IL-6 expression levels kept unchanged,which were roughly consistent with the transcription levels.These resultsconfirm for the first time that FAdV-4 induces strong inflammatory responses in CEF cells and activates the JAK/STAT signalingpathway.Inhibition of this signaling pathway can upregulate the transcription levels of IL-1茁,IL-6,IL-8,and TNF-琢.Our resultscould be useful for the further study of inflammation mechanism of FAdV-4 infected cardiomyocytes.Key words:avian adenovirus serotype 4;JAK/STAT signaling pathway;inflammatory response;cardiac fibroblasts心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium-hepatitissyndrome，HHS)是由禽腺病毒血清型4(Fowl aden-ovirus serotype 4，FAdV-4)引起的以家禽心包积液和包涵体肝炎为主要特征的传染病1-2。FAdV-4属于腺病毒科、禽腺病毒属，基因组全长约43 kb46 kb，编码10种结构蛋白和11种非结构蛋白3-4。自1987年FAdV-4在巴基斯坦首次报道以来，该病毒已传播至亚洲、中美洲和南美洲以及一些欧洲国家，给我国养鸡业造成了严重经济损失5-6。JAK激酶(Janus kinase，JAK)/信号转导和转录激活 子(Signal transducer and activator of transcription，STAT)信号通路在细胞内普遍表达并存在，转录激活子STAT被JAK激酶磷酸化成二聚体，然后通过核膜转运到细胞核中以调节相关基因的表达，也被称为IL-6信号通路，是近年来发现的细胞因子刺激的信号转导通路7-8。目前对JAK/STAT信号通路的研究主要集中在炎症和肿瘤疾病及相关药物上9-10。越来越多的证据表明，JAK/STAT信号通路的持续激活与宿主的许多免疫反应和炎症性疾病密切相关。最近有研究报道，抑制JAK/STAT通路后能够调节巨噬细胞由促炎M1转化为抗炎M2表型，同时减轻促炎细胞因子(如TNF-琢，IL-1茁和IL-6)的产生及其造成的有害影响，减弱心肌的炎症反应11。最近，Xiang等通过转录组学、荧光定量PCR(qPCR)和western blot等方法证明FAdV-4诱导肉鸡肝脏发生炎症反应并激活了JAK2/STAT3信号通路，且感染后IL-6、IL-1茁、IFN-琢、JAK和STAT基因mRNA的转录水平显著上调12。王月丽等通过ELISA和qPCR方法证明在布鲁氏菌感染后期，在M2型巨噬细胞内启动JAK/STAT6信号转导通路，发挥了抑制炎症反应的作用13。目前对家禽组织中的JAK/STAT信号通路已有研究报道，但对其在心脏细胞中的研究还少有报道。因此，本研究利用western blot、qPCR和ELISA方法分 别检测 FAdV-4感 染后和 Ruxolitinib处 理后冯孝傲，等.禽腺病毒血清型 4 通过 JAK/STAT 信号通路调控鸡胚心脏成纤维细胞炎症反应的研究第 10 期1039FAdV-4感染的鸡胚心脏成纤维细胞(CEF)中不同时间段JAK/STAT信号通路关键蛋白JAK2和p-JAK2的表 达 情 况、以 及 CEF 细 胞 中 IL-1茁、IL-6、IL-8、TNF-琢基因的转录水平和表达水平，为进一步揭示FAdV-4感染所致心脏病变的发病机制奠定实验基础。1材料与方法1.1主要实验材料取13日龄SPF鸡胚心脏，结合差速贴壁和胶原酶装消化方法制备CEF；FAdV-4GZ-QL株由贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室提供；DMEM/F12培养基购自美国Gibco公司；RNAisoTMPlus、TB Green Premix ExTM、PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser购自宝生物工程(大连)有限公司；兔源JAK2 XP单克隆抗体(MAb)3230T和兔源Phospho-JAK2 MAb 4406T购自美国Cell Signaling Technology公司；小鼠茁-actin MAb、HRP标记山羊抗鼠多克隆抗体、HRP标记山羊抗IgG、极超敏ECL化学发光试剂盒和JAK/STAT信号通路抑制剂Ruxolitinib购自上海碧云天生物技术有限公司；IL-1茁、IL-6、IL-8及TNF-琢 ELISA检测试剂盒购自江苏酶免实业有限公司。1.2引物设计及合成参照GenBank中鸡茁-actin、IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢基因序列，利用Primer5.0软件设计引物(表1)，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.3FAdV-4感染鸡胚心脏CEF后炎症因子转录水平的qPCR检测将CEF铺至6孔板，待细胞生长至80%时，将细胞分为FAdV-4组(以MOI 5 FAdV-4接种细胞)和空白对照组(不做处理)，在感染24 h、48 h、72 h后分别收集细胞。利用TRIzol法提取细胞总RNA，反转录为cDNA作为模板，根据表1中的引物，采用qPCR检测IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢基因的转录水平。qPCR反应程序：95 30 s；95 5 s、60 34 s，45个循环。以茁-actin作为内参，采用2-Ct计算基因的相对转录水平。1.4抑 制 剂 Ruxolitinib 处 理 前 后 CEF 中 JAK2 和p-JAK2蛋白表达的western blot 检测将CEF细胞铺至12孔板，待细胞生长至80%时，将细胞分为FAdV-4组(以MOI 5 FAdV-4接种细胞)和空白对照组(不做处理)，在感染24 h、48 h、72 h后分别收集细胞。将CEF细胞铺至12孔板，将细胞分为空白对照组、FAdV-4组、Ruxolitinib组和FAdV-4+Ruxolitinib组。Ruxolitinib组先用40 滋mol/L Ruxolitinib预处理CEF 2 h，FAdV-4+Ruxolitinib组用40 滋mol/L Ruxoli-tinib预处理CEF 2 h后，再将FAdV-4按MOI 5感染CEF，在感染后48 h收集各组细胞，裂解细胞离心后取上清，将提取的细胞总蛋白，分别以兔源JAK2XP MAb(1颐1 000)、兔源p-JAK2 MAb(1颐1 000)、小鼠茁-actin MAb(1颐3 000)为一抗，以HRP标记的山羊抗兔、山羊抗鼠IgG(1颐1 000)为二抗，通过westernblot检测各组细胞中JAK2和p-JAK2蛋白的表达。孵育结束后使用ECL试剂盒避光显色90 s，全自动化学发光成像分析系统观察上述western blot结果。1.5抑制剂Ruxolitinib对FAdV-4感染CEF中炎症因子转录和分泌水平影响的检测取1.4中48 h的空白对照组、FAdV-4组、Ruxolitinib+FAdV-4组细胞样品，按照1.3方法提取细胞总RNA，反转录为cDNA后作为模板，通 过qPCR检 测CEF中 IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢炎性因子的相对转录水平。取1.4中48 h的空白对照组、FAdV-4组、Ruxoli-tinib+FAdV-4组细胞上清液，3 000 r/min离心20 min，弃去沉淀，取上清通过ELISA方法检测CEF中IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢的分泌水平。具体步骤按照对应ELSIA试剂盒说明书进行，按说明书标准品的浓度建立标准曲线。酶标仪测量各孔OD450nm值，以空白孔OD450nm值调零，绘制标准曲线(标准孔浓度为横坐标、OD450nm值为纵坐标)并生成回归方程，将调零后的样品OD450nm值代入回归方程计算结果。1.6数据的统计与分析利用Excel软件对qPCR和ELISA检测结果进行统计，采用Image J软件分析蛋白灰度值，数据表示为3次独立重复试验的平均值依表1用于qPCR的引物序列茁-actinIL-1茁IL-6IL-8TNF-琢ACTCTGTCTGGATTGGAGGCGGTGTGGGTGTTGGTAACAGAGAGATGGCGTTCGTTCCCTGGTGTGCTCAGAATCCAGGAATCCCTCCTCGCCAATCTGTCAAATAGCGAACGGCCCTCTGGTCAGTGCTGTGGGATTCCCCCTAGCAAGCACTTTTGCTCAGGACAGCCTATGCCAACCTCATCTGAACTGGGCGGTCAccession No.amplicationNM_205518.1HM179638.1NM_204628.1HM179639.1MF801626.1Length(bp)1451221207098中 国 预 防 兽 医 学 报2023 年1040GenePrimer sequence(5-3)标准差，利用GraphPad Prism 7.0软件分析各组实验数据，通过One-way ANOVA方法分析不同试验组间差异的显著性，其中*为 0.05，表示差异显著；*为 0.01，表示差异极显著。2结果2.1FAdV-4感染CEF后炎症因子转录水平的qPCR检测结果以茁-actin为内参基因，通过qPCR检测FAdV-4感染后不同时间CEF中IL-6、IL-8、IL-1茁和TNF-琢炎症因子的转录水平。结果显示，与空白对照组相比，24 h、48 h、72 h感染组的CEF中IL-6和IL-8的相对转录水平均极显著上调(0.01)；在早期感染24 h时，该组CEF中IL-1茁基因的相对转录水平与空白对照组无统计学差异，48 h时该组CEF中IL-1茁的相对转录水平极显著上调(0.01)，72 h时IL-1茁的相对转录水平显著上调(0.05)；TNF-琢的相对转录水平在72 h时极显著上调(0.01)，其他感染时间TNF-琢的相对转录水平均无显著差异变化(图1)。结果表明，FAdV-4感染CEF后上调细胞炎症因子的转录水平，引起细胞强烈的炎症反应。*:0.05 was significant difference;*:0.01 was extremely significant difference,the same as below.图1FAdV-4感染CEF中炎症因子转录水平的qPCR检测结果冯孝傲，等.禽腺病毒血清型 4 通过 JAK/STAT 信号通路调控鸡胚心脏成纤维细胞炎症反应的研究第 10 期10412.2抑 制 剂 Ruxolitinib 处 理 前 后 CEF 中 JAK2 和p-JAK2蛋白表达的western blot检测结果抑制剂Ruxolitinib处理前，通过western blot检测FAdV-4感染CEF后JAK2和p-JAK2蛋白表达水平。结果显示，与空白对照组相比，FAdV-4感染CEF后24 h、48 h、72 h时 p-JAK2蛋白的表达水平均极显著升高(0.01)，其中48 h时p-JAK2蛋白的表达水平最高，24 h最低(图2)。表明FAdV-4感染CEF后可能激活JAK/STAT信号通路。分别收集空白对照组、Ruxolitinib组、FAdV-4组和Ruxolitinib+FAdV-4组细胞蛋白，经western blot检测CEF中JAK2和p-JAK2蛋白的表达水平。结果显示，与FAdV-4组相比，Ruxolitinib+FAdV-4组和Rux-olitinib组CEF中p-JAK2蛋白表达水平均极显著降低15010050040302010025201510503210Infection time(h)Infection time(h)724824724824Infection time(h)Infection time(h)724824724824IL-8IL-6TNF-琢IL-1茁Control groupFAdV-4 group图4Ruxolitinib处理后各组CEF中炎症因子转录水平的qPCR检测结果(0.01)，Ruxolitinib组与空白对照组无显著差异(图3)。JAK2蛋白的磷酸化是JAK/STAT信号通路激活的必要条件，进一步表明FAdV-4感染CEF后会诱导其JAK/STAT信号通路的激活。2.3抑制剂Ruxolitinib对FAdV-4感染CEF中炎症因子转录水平影响的qPCR检测结果采用qPCR检测各组CEF细胞中IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢炎症的转录水平，结果显示：与FAdV-4组和空白对照组相比较，Ruxolitinib+FAdV-4组CEF中IL-1茁、IL-6、IL-8炎症因子的转录水平均极显著上调(0.01)，TNF-琢基因的转录水平显著上调(0.05)(图4)。上述结果从基因水平表明，采用浓度40 滋mol/L的Ruxolitinib预处理CEF后，均能够有效促进FAdV-4感染的CEF细胞中IL-1茁、IL-6、IL-8、TNF-琢基因的转录水平。2.4抑制剂Ruxolitinib对FAdV-4感染CEF细胞中炎症因子分泌水平影响的ELISA检测结果采用ELISA方法检测各组CEF中IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢炎症因子的分泌水平，结果显示，与FAdV-4组和空白对照组相比，Ruxolitinib+FAdV-4组CEF中IL-8的分泌水平极显著上升(0.01)，TNF-琢的分泌水平显著上升(0.05)(图5)。从蛋白表达水平进一步表明，采用浓度40 滋mol/L的Ruxolitinib预处理CEF细胞后，均能够有效促进FAdV-4感染的CEF细胞中IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢分泌水平。A：Western blot检测FAdV-4感染的CEF中JAK2蛋白和p-JAK2蛋白的表达水平；B：蛋白条带灰度值分析A:Western blot detection of JAK2 protein and p-JAK2 proteinexpression;B:Grayscale analysis of protein bands图2感染FAdV-4后不同时间段CEF中JAK/STAT通路关键蛋白表达水平的western blot检测结果Blankcontrol24h48h72hBlankcontrolInfection timeA：Western blot检测JAK2蛋白和p-JAK2蛋白表达情况；B：蛋白条带灰度值分析A:Western blot detection of JAK2 protein and p-JAK2 proteinexpression;B:Grayscale analysis of protein bands图3Ruxolitinib处理后各组CEF中JAK/STAT信号通路关键蛋白表达水平的western blot检测结果AB24h48h72h茁-actinJAK2P-JAK20.60.40.20AB茁-actinJAK2P-JAK20.40.30.20.10Ruxolitinib+FAdV-4FAdV-4Blank control5040302010543210中 国 预 防 兽 医 学 报2023 年1042图5Ruxolitinib处理后各组CEF中炎症因子分泌水平的ELISA检测结果3讨论FAdV-4是HHS的主要病原体，主要感染3周龄6周龄肉鸡，能致其死亡率高达80%14-15。自2015年5月以来，由新型FAdV-4诱导的HHS在中国流行，造成严重的经济损失16。FAdV-4感染主要引起以核内包涵体形成为特征的肝细胞变性坏死，其次 是 心 包 腔 中 积 聚 透 明 稻 草 色 液 体。Niu 等 将FAdV-4经体内感染心脏后会诱导强烈的炎症反应，心脏完整性和功能受损，体外感染心肌细胞，发现FAdV-4不会对心肌细胞造成直接损害，炎症因子IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢并无显著变化17。近年来CEF被认为是阐明心脏疾病的关键细胞，CEF在正常和受损心肌中均发挥广泛的功能。目前尚无FAdV-4是否可以诱导心脏CEF产生炎症反应的报道。本实验室前期研究发现FAdV-4可以在体外感染CEF，并通过转录组学技术筛选出JAK/STAT这一条重 要 炎 症 信 号 通 路。但 JAK/STAT 信 号 通 路 在FAdV-4诱导鸡胚心脏CEF炎症反应中的作用尚不清楚。因此，本研究旨在探究JAK/STAT信号通路在FAdV-4诱导CEF炎症反应中的作用及机制。IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢是一类介导和调节机体免疫、炎症反应的非特异性物质，具有多种生物活性，在天然免疫反应中发挥重要作用18。FAdV-4的主要靶器官为肝脏和心脏，可引起机体发生炎症反应19。FAdV-4感染心肌组织会出现一定的炎症变化，IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢等炎症因子的转录水平均显著上调17，这些炎症因子有助于机体对抗FAdV-4的感染。为了确定FAdV-4感染CEF后是否诱导促炎细胞因子的转录和表达，本研究采用qRCR检测IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢基因的相对转录水平。结果显示感染组CEF中IL-6和IL-8的相对转录水平均极显著上调(0.01)；在感染早期24 h时，IL-1茁的转录水平与空白对照组无统计学差异，48 h时IL-1茁的相对转录水平极显著上调(0.01)、72 h时IL-1茁的转录水平显著上调(0.05)；TNF-琢的转录水平在72 h时极显著上调(0.01)，这与牛玉娟等的研究结果一致20。结果表明，FAdV-4体外感染鸡胚心脏CEF细胞后能够诱导其产生强烈的炎症反应。JAK/STAT信号通路与炎症反应最密切相关21。靶向JAK2/STAT3信号转导，干扰该通路关键蛋白JAK2的磷酸化，从而阻断下游STAT3蛋白的磷酸化和活性22。JAK2抑制剂AG490处理FAdV-4感染的LMH细胞后能够显著抑制p-JAK2及其下游p-STAT3的表达水平。精氨酸通过调节JAK2/STAT3信号通路减轻了FAdV-4诱 导 的 炎 症 反 应12。为 了 进 一 步 研 究JAK/STAT信号通路在FAdV-4诱导鸡胚心脏CEF炎症反应中的作用，本实验预处理该CEF再以FAdV-4感染48 h后，通过western blot检测FAdV-4感染CEF细胞中JAK2蛋白和p-JAK2蛋白的表达水平，结果显示，FAdV-4感染CEF细胞后不同时间段p-JAK2蛋白的表达水平均极显著升高(0.01)，抑制剂Ruxoli-tinib预处理再以FAdV-4感染的CEF中p-JAK2蛋白的表达水平极显著降低(0.01)。表明FAdV-4感染CEF细胞可以激活JAK/STAT通路，这与Xiang等的研究结果一致12。为了探究JAK/STAT信号通路是否对FAdV-4感染CEF中诱导的炎症反应有影响，本研究采用qPCR和ELISA方法检测Ruxolitinib预处理再以FAdV-4感染的CEF中IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢的转录水平和分泌水平，结果显示，当JAK/STAT信号通路被抑制后，IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢炎症因子的转录水平均显著上升；IL-8和TNF-琢的分泌水平均升高。推测在FAdV-4感染CEF过程中诱导强烈的炎症反 应 可 能 与 JAK/STAT 信 号 通 路 后 期 抑 制 有 关，JAK/STAT信号通路负调控FAdV-4诱导的CEF的炎症反应。综上所述，本研究首次证实FAdV-4可以诱导鸡胚心脏CEF产生强烈的炎症反应，并激活了鸡胚心脏CEF中的JAK/STAT信号通路，抑制JAK/STAT信号通路后能够显著上调IL-1茁、IL-6、IL-8和TNF-琢因子的转录水平以及IL-8和TNF-琢分泌水平，该结果为进一步阐明FAdV-4致心脏损伤的机制及其感染的有效防控提供思路。冯孝傲，等.禽腺病毒血清型 4 通过 JAK/STAT 信号通路调控鸡胚心脏成纤维细胞炎症反应的研究第 10 期1043Blank controlFAdV-4Ruxolitinib+FAdV-425020015010050013141516171819202122123456789101112参考文献：ASTHANA M,CHANDRA R,KUMAR R.Hydropericardiumsyndrome:current state and future developments J.Arch Vi-rol,2013,158(5):921-931.HESS M.Detection and differentiation of avian 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