SN∕T 5219-2019 出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 521920192019-12-27 发布2020-07-01 实施中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署发 布ICS 67.040C 53出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法Determination of picloram,aminopyralid residues in foods tuffs for exportLC-MS/MS method出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 12020/1/16 21:14:26ISN/T 52192019前 言本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳海关。本标准主要起草人：吴凤琪、赵琼晖、陈波、吴卫东、靳保辉、张建莹、金晓蕾、梁淑雯。出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 12020/1/16 21:14:261SN/T 52192019出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法1 范围本标准规定了出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于大白菜、菠菜、西红柿、芥蓝、苹果、香蕉、火龙果、梨、大米、小麦、猪肉、牛肉、鸡肉、虾、鲫鱼等食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定和确证。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 方法提要试样中的氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸用酸化乙腈提取后，利用改进的 QuEChERS（150 mg C18、900 mg Na2SO4）试剂，对提取液进行净化处理后，采用液相色谱串联质谱仪进行定性定量分析，外标法定量。4 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。4.1 乙腈：色谱纯。4.2 甲醇：色谱纯。4.3 甲酸。4.4 正己烷。4.5 无水硫酸镁。4.6 C18粉末。4.7 氯化钠。4.8 乙酸铵。4.9 无水硫酸钠。4.10 氨氯吡啶酸（Picloram，C6H3Cl3N2O2，CAS No：1918-02-1）：纯度大于或等于 99.0。4.11 氯氨吡啶酸（Aminopyralid，C6H4Cl2N2O2，CAS No：150114-71-9）：纯度大于或等于 99.0。4.12 标准储备溶液：分别准确称取 10 mg 氨氯吡啶酸（4.10）、氯氨吡啶酸（4.11），用甲醇（4.2）溶解，定容至 10 mL，避光-18 保存，保存期为 6 个月。4.13 混合标准使用液：分别移取 100 L 各物质标准储备溶液（4.12），加空白基质提取液定容至 10 mL，避光-18 保存，保存期为 1 个月。4.14 微孔滤膜：0.22m，有机系。出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 12020/1/16 21:14:262SN/T 521920195 仪器与设备5.1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2 分析天平：感量分别为 0.1 mg 和 0.01 g。5.3 均质器。5.4 高速离心机：转速不低于 9 500 r/min。5.5 氮吹仪。5.6 涡旋混合器。5.7 组织捣碎机。6 试样制备与保存6.1 试样制备取有代表性样品 500 g，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。6.2 试样保存试样于-18 以下冷冻保存。在制样和保存的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.3 提取6.3.1 水果、蔬菜类样品称取试样 10.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 1%甲酸乙腈，9 500 r/min 均质 5 min，再加入 4g 无水硫酸美（4.5）、1g 氯化钠（4.7），涡旋振荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。6.3.2 粮谷类样品称取试样 5.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 3 mL 水，涡旋浸润样品后，加入10 mL 1%甲酸乙腈，9 500 r/min 均质 5 min，再加入 4g 无水硫酸美（4.5）、1g 氯化钠（4.7），涡旋振荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。6.3.3 肉类样品称取试样 2.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 2 mL 5 mmoL/L 的乙酸铵缓冲液，涡旋浸润样品后，加入 10 mL 5%甲酸乙腈和 5 mL 乙腈饱和的正己烷，9 500 r/min 均质 5 min，再加入4g MgSO4、1g NaCl，涡旋振荡 10 min，9 500 r/min 离心 5 min。6.4 净化6.4.1 水果、蔬菜类样品取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C18粉末（4.6）、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 1 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干，用 10%甲醇水溶液定容至 1 mL，涡旋混合，过 0.22 m 微孔滤膜（4.14），供液相色谱串联质谱仪测定。出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 22020/1/16 21:14:263SN/T 521920196.4.2 粮谷类样品取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C18粉末（4.6）、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 2 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干，用10%甲醇水溶液定容至 1 mL，涡旋混合，过 0.22 m 微孔滤膜（4.14），供液相色谱串联质谱仪测定。6.4.3 肉类样品取 6 mL 上清液，加入预先加有 150 mg C18粉末（4.6）、900 mg 无水硫酸钠（4.9）的 15 mL 离心管中，涡旋振荡 3 min，9 500 r/min 离心 5 min。移取 5 mL 上清液于 15 mL 离心管中，氮吹近干，用 10%甲醇水溶液定容至 1 mL，加入 2 mL 乙腈饱和的正己烷，涡旋混合，9 500 r/min 离心 5 min，过 0.22 m 微孔滤膜（4.14），供液相色谱串联质谱仪测定。7 测定7.1 液相色谱/质谱条件7.1.1 色谱柱：Eclipse Plus C18 色谱柱，50 mm2.1 mm（内径），粒径 1.8 m 或性能相当者。7.1.2 柱温：30。7.1.3 进样量：5 L。7.1.4 流动相：A 为 0.2%甲酸，2 mmoL/L 乙酸铵水溶液，B 为甲醇（4.2）。7.1.5 流速：0.3 mL/min。7.1.6 梯度：参见附录 A 表 A.1。7.1.7 质谱条件：参见附录 A 表 A.2。7.2 液相色谱/质谱检测在仪器最佳工作条件下，对基质标准校准溶液进样，以被测物峰面积为纵坐标，基质校准溶液为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，待测样液中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的响应值均应在仪器检测的线性范围内，上述色谱和质谱条件下，标准物质多反应监测质量色谱图参见附录 B。7.3 液相色谱/质谱定性如果样液与标准工作溶液的质量色谱图中，在相同保留时间有色谱峰出现，允许偏差小于 2.5%，所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内（允许范围见表 1），则可判断样品中存在相应的被测物。在 7.1 条件下，氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的液相色谱-质谱多反应监测相对离子丰度的最大允许偏差见表 2。表 1 定性液相色谱-质谱时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%50 2050 1020 10允许的相对偏差/%20253050出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 32020/1/16 21:14:264SN/T 52192019a表 2 氨氯吡啶酸及氯氨吡啶酸的监测离子对和定量离子对1）序号化合物名称参考保留时间/min母离子/（m/z）子离子/（m/z）碰撞能量（CE）/eV1氯氨吡啶酸1.74208.9190.9a20208.9162.9302氨氯吡啶酸2.87242.9224.8a20242.9196.730 注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。a 为定量离子。7.4 空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和操作步骤进行。8 结果计算和表述用色谱数据处理软件中的外标法或按式（1）计算试样中药物的残留量：10001000=mVcX （1）式中：X试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（g/kg）；c 从基质标准曲线上得到的样液中分析物的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V样品定容体积，单位为毫升（mL）；m样品称样量，单位为克（g）。9 测定低限、回收率9.1 测定低限本方法对大白菜、菠菜、西红柿、芥蓝、苹果、香蕉、火龙果、梨、大米、小麦、猪肉、虾、牛肉、鸡肉、鲫鱼等食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定低限均为 0.010 mg/kg。9.2 回收率在添加浓度水平分别为10 g/kg、20 g/kg及100 g/kg时，大白菜、菠菜、西红柿、芥蓝、苹果、香蕉、火龙果、梨、大米、小麦、猪肉、虾、牛肉、鸡肉、鲫鱼等食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸的回收率数据见表 3。1）非商业性声明：表 2 及附录 A 所列参考质谱条件是在 AB 4500 型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 42020/1/16 21:14:265SN/T 52192019样品基质化合物添加水平/（g/kg）回收率范围/%相对标准偏差（RSD）/%大白菜氨氯吡啶酸1075.190.27.12078.383.42.010073.784.74.8氯氨吡啶酸1074.387.25.62075.184.54.710079.585.92.8菠菜氨氯吡啶酸1071.290.49.72071.086.16.810073.282.85.2氯氨吡啶酸1074.186.25.52071.580.65.110070.285.48.2西红柿氨氯吡啶酸1063.480.19.02077.397.27.210062.184.39.8氯氨吡啶酸1065.282.38.92080.096.17.210074.386.75.7芥蓝氨氯吡啶酸1067.290.311.42072.483.76.710076.785.23.7氯氨吡啶酸10105.1110.53.320106.7118.63.710079.585.53.1苹果氨氯吡啶酸1065.489.29.32066.491.510.210075.090.66.5氯氨吡啶酸1069.184.48.02069.290.09.910077.090.26.4表 3 不同样品基质中氨氯吡啶酸及氯氨吡啶酸加标回收率出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 52020/1/16 21:14:266SN/T 52192019表 3（续）样品基质化合物添加水平/（g/kg）回收率范围/%相对标准偏差（RSD）/%香蕉氨氯吡啶酸1064.184.210.32069.281.45.010071.587.05.9氯氨吡啶酸1067.884.88.02083.698.86.610088.094.22.7火龙果氨氯吡啶酸1065.379.28.32067.282.57.110077.094.17.2氯氨吡啶酸1070.884.97.82072.082.05.910098.6108.84.2梨氨氯吡啶酸1063.185.211.82065.278.66.310072.987.47.3氯氨吡啶酸1073.086.57.22067.076.14.910090.1104.56.6大米氨氯吡啶酸1095.2110.76.12093.4109.05.6100100.7109.42.7氯氨吡啶酸1091.8110.78.92081.690.33.610087.690.31.4小麦氨氯吡啶酸1081.596.46.02098.9114.96.0100104.1114.23.0氯氨吡啶酸1073.588.46.32090.0107.67.810087.293.92.8出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 62020/1/16 21:14:267SN/T 52192019表 3（续）样品基质化合物添加水平/（g/kg）回收率范围/%相对标准偏差（RSD）/%猪肉氨氯吡啶酸1056.665.45.42059.664.83.010079.585.83.0氯氨吡啶酸1079.689.24.72077.482.62.510077.784.22.9虾氨氯吡啶酸1060.774.97.12066.072.63.510070.877.43.2氯氨吡啶酸1090.0104.86.62079.187.63.510075.077.11.0牛肉氨氯吡啶酸1083.690.42.92079.786.52.6氯氨吡啶酸10078.085.83.31080.490.75.02076.482.42.610069.471.00.9鸡肉氨氯吡啶酸1083.4114.812.62081.386.42.210073.678.62.3氯氨吡啶酸1071.684.45.92073.877.52.210064.971.43.8鲫鱼氨氯吡啶酸10105.7119.85.22092.9109.65.710074.177.41.6氯氨吡啶酸1076.886.04.02075.483.03.310068.272.32.0出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 72020/1/16 21:14:268SN/T 52192019附 录 A（资料性附录）液相色谱梯度洗脱及质谱条件表 A.1 液相色谱梯度洗脱条件时间/minA/%B/%09010430704.11090710907.19010109010表 A.2 质谱条件极性正气帘气压力25 psi离子化电压5 500 V气体温度550 喷雾气压力55 psi辅助加热气压力55 psi碰撞气Medium扫描模式MRM出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 82020/1/16 21:14:269SN/T 52192019附 录 B（资料性附录）标准物质多反应监测质量色谱图图 B.1 氯氨吡啶酸和氨氯吡啶酸（100 g/kg）多反应监测质量色谱图出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 92020/1/16 21:14:26SN/T 52192019中华人民共和国出入境检验检疫中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023）编辑部：[phone]网址 ; 8801230 1/16 印张 1 字数 20 千字2019 年 月第一版 2019 年 月第一次印刷印数 1500书号：15517559 定价 18.00 元行 业 标 准SN/T 5169-2019 SN/T 5219-2019*出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法出口食品中氨氯吡啶酸、氯氨吡啶酸残留量的测定.indd 102020/1/16 21:14:26