40%苄嘧·丙草胺可分散油...安全剂解草啶的HPLC分析_王睿.pdf

农 药AGROCHEMICALS收稿日期：2022-11-15，修返日期：2022-12-20基金项目：贵州省农业生态特色产业检验检测大数据平台研发与应用(黔科中引地20214026)作者简介：王睿(1987)，男，贵州桐梓人，高级工程师，学士，主要从事新化学物质、农药分析方法研究及标准制订的相关工作。E-mail：。王睿,谭正莹,赵亚洲,等.40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂及安全剂解草啶的HPLC分析J.农药,2023,62(4):256-259.doi:10.16820/j.nyzz.2022.203740%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂及安全剂解草啶的HPLC分析王 睿1，谭正莹2，赵亚洲3，张玉梅1(1.贵州省检测技术研究应用中心，贵阳 550014；2.贵州省分析测试研究院，贵阳 550014；3.贵州健安德科技有限公司，贵阳 550014)摘要：目的建立一种利用HPLC同时检测40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂中有效成分和安全剂解草啶的定量分析方法。方法以乙腈和0.05%磷酸水溶液为流动相，搭配岛津C18反相色谱柱，在240 nm波长条件下，同时对苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶进行定量分析。结果苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶线性相关系数R2均大于0.999，SD(标准偏差)分别为0.02、0.39和0.04，CV(变异系数)分别为0.49%、1.08%和0.46%，平均回收率分别为98.1%、100.5%和99.4%。结论该液相分析方法操作简便，线性关系良好，且拥有较好的分离度、精密度及准确度，适用于市场监管和生产企业对该复配制剂的质量检测和质量控制。关键词：苄嘧磺隆；丙草胺；解草啶；液相色谱；分析方法中图分类号：TQ450.7文献标志码：A文章编号：1006-0413(2023)04-0256-04Analysis of bensulfuron-methyl pretilachlor 40%ODand safety agent fenclorim by HPLCWANG Rui1,TAN Zheng-ying2,ZHAO Ya-zhou3,ZHANG Yu-mei1(1.Guizhou Testing Technology Research and Application Center,Guiyang 550014,China;2.Guizhou Academy of Testingand Analysis,Guiyang 550014,China;3.Guizhou Jiandee Technology Limited Company,Guiyang 550014,China)Abstract:Aims This study aims to develop a HPLC method for detecting bensulfuron-methyl pretilachlor 40%ODand the safety agent fenclorim.Methods For the quantitative analysis of bensulfuron-methyl,pretilachlor andfenclorim,acetonitrile and 0.05%phosphoric acid aqueous solution was used,along with Shimadzu C18reversed-phasecolumn at 240 nm.Results The results showed that the linear correlation coefficients of bensulfuron-methyl,pretilachlor and fenclorim were more than 0.999,the standard deviation were 0.02,0.39 and 0.04,the coefficients ofvariation were 0.49%,1.08%and 0.46%,and the average recoveries were 98.1%,100.5%and 99.4%,respectively.Conclusions The HPLC analysis method was simple in operation,and good at linear relationship,separation,precision and accuracy.It was suitable for market supervision and production enterprises to detect and control thequality of the compound preparation.Key words:bensulfuron-methyl;pretilachlor;fenclorim;HPLC;analysis method苄嘧磺隆(bensulfuron-methyl)，是一种磺酰脲类除草剂，其主要被叶面和根系吸收并快速传导至分生组织，抑制结氨酸和亮氨酸的合成，达到阻止细胞分裂和植物生长的作用，常用于水稻或湿地稻田苗前和苗后防除一年生和多年生杂草和莎草。丙草胺(pretilachlor)，是一种氯乙酰胺类除草剂，其容易被下胚轴、胚轴和胚芽鞘吸收，作用于抑制细胞分裂，常用于移栽稻田和直播稻田防除主要的一年生禾本科杂草、阔叶杂草和莎草，若不使用安全剂，丙草胺可能会对直播水稻产生药害。解草啶(fenclorim)，是一种除草剂解毒剂，通过与谷胱甘肽结合提高丙草胺在水稻中的代谢，保护湿播水稻不受丙草胺的侵害1。苄嘧磺隆和丙草胺2者复配再加入适量安全剂，具有除草活性较高、安全性能较好、杀草谱较广、持效期较长等特点，能有效防除水稻直播田中稗草、千金子、异型莎草等一年生杂草2。目前，已有苄嘧磺隆和丙草胺或与其他有效成分复配的产品分析方法报道3-7，但是同时测定苄嘧磺隆、丙草胺以及安全剂解草啶的色谱分析方法尚未见报道。本文建立了一种液相色谱方法，可以对40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂中有效成分和安全剂解草啶同时进行定第62卷第4期2023年4月Vol.62,No.4Apr.2023第4期量分析，可供市场监管中的质量检测以及企业生产中的质量控制。1实验部分1.1试剂和溶液乙腈(上海安谱实验科技股份有限公司，色谱纯)；磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司，优级纯)；去离子水；苄嘧磺隆标准品w=98.31%(Dr.Ehrenstorfer)；丙草胺标准品w=98.8%(上海市农药研究所有限公司)；解草啶标准品w=99.0%(国家农药质量监督检验中心)；苄嘧磺隆原药w=95.0%、解草啶原药w=98.0%、丙草胺原药w=95.0%、40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂、制剂空白(浙江天一农化有限公司)。1.2仪器Agilent 1260II高效液相色谱仪，配备了二极管阵列检测器；Agilent色谱数据处理工作站；梅特勒托利多XSE105DU型电子天平；色谱柱：岛津Shim-pack GISTC18，5 m，4.6 mm250 mm。1.3高效液相色谱操作条件在流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(体积比7030)、30 柱温、1.0 mL/min流速、5 L进样量和240 nm检测波长条件下，苄嘧磺隆、丙草胺、解草啶的保留时间依次为3.9、10.7、12.8 min，典型液相色谱图见图1、2。1.4测定步骤1.4.1混合标准溶液的配制称取苄嘧磺隆标准品0.06 g于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度线，摇匀，得到苄嘧磺隆标准储备溶液(STD-A)；称取解草啶标准品0.15 g于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度线，摇匀，得到解草啶标准储备溶液(STD-B)；称取丙草胺标准品0.12 g于25 mL容量瓶中，准确加入STD-A、STD-B溶液各5.0 mL，用乙腈稀释至刻度，得丙草胺、苄嘧磺隆、解草啶的混合标准储备溶液(STD-ABC)，再用乙腈将该储备液稀释成一系列梯度的混合标准工作溶液。1.4.2试样溶液的配制称取约0.19 g 40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂，置于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，待测。1.5测定在1.3高效液相色谱操作条件下，平衡基线，连续进针标准品溶液，直至相邻2针苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)的峰面积变化1.5%后，按照标样、试样、试样、标样的序列进行测定。1.6计算将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标准品溶液中苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)峰面积进行平均。试样中苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)的质量分数X1(%)按下式计算。X1(%)=A2m1PA1m2f式中：A1为标样溶液中苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)峰面积的平均值，A2为试样溶液中苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)峰面积的平均值，m1为苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)标样的质量(g)，m2为苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)试样的质量(g)，P为标样中苄嘧磺隆(丙草胺、解草啶)的质量分数(%)，f为稀释因子(苄嘧磺隆和解草啶为5，丙草胺为1)。2结果与讨论2.1色谱条件的优化使用DAD检测器将检测波长调整为波长扫描范围为190400 nm对苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶标样进行3D谱图扫描，得到苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶的紫外吸收光谱图，见图3。兼顾3组分的含量及响应大小，让3组分峰型更好的呈现，同时避免杂质和溶剂吸收的干扰，最终选择检测图1苄嘧磺隆、丙草胺、解草啶标样色谱图图240%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂色谱图图3苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶紫外吸收曲线王 睿，等：40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂及安全剂解草啶的HPLC分析257农 药 AGROCHEMICALS第卷62根据苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶的物化信息，选用乙腈溶解样品。经过反复测试的结果显示：使用岛津Shim-pack GIST C18，5 m，4.6 mm250 mm进行分析，当流动相比例为70%乙腈-30%的0.05%磷酸水溶液、1.0 mL/min流速时，基线平稳、3组分峰型对称、分离效果较好，能满足分析要求。2.2线性相关性测定在1.3高效液相色谱条件下，将1.4.1配制的混合标准工作溶液进行分析。以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标拟合标准曲线，分别得到苄嘧磺隆的线性方程为y=12.288x+38.176，相关系数R2为0.9997；丙草胺的线性方程为y=1.476x+57.295，相关系数R2为0.9996；解草啶的线性方程为y=8.040 x+61.042，相关系数R2为0.9996。2.3分析方法的精密度称取5份约0.16 g的40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，在1.3高效液相色谱条件下进行分析，计算苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶的标准偏差、变异系数及Horwits计算值，CV值小于Horwits计算值，说明该分析方法的精密度符合方法学的质控要求，结果见表1。图4苄嘧磺隆、丙草胺和解草啶的HPLC-DAD峰纯度色谱图表1分析方法的精密度测定有效成分质量分数/%SDCV/%Horwits值12345平均值苄嘧磺隆3.713.723.753.743.753.70.020.492.20丙草胺36.2036.5936.0135.5735.7736.00.391.081.56解草啶8.738.668.678.628.668.70.040.461.942.4分析方法的准确度试验分别称取5份适量制剂空白于25 mL容量瓶中，按40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂中有效成分的标称值，分别在制剂空白中添加已知质量分数的苄嘧磺隆原药(w=95.0%)、丙草胺原药(w=95.0%)和解草啶原药(w=98.0%)，再用乙腈将上述5份试验样品溶解并稀释至25 mL，制成准确度试验样品。在1.3的条件下进行测定，苄嘧磺隆的回收率范围为97.43%98.65%，平均回收率为98.1%；丙草胺的回收率范围为100.04%101.71%，平均回收率为100.5%；解草啶的回收率范围为98.14%100.47%，平均回收率为99.4%，结果见表2。表2准确度试验样品序号添加量/g实测量/g回收率/%平均回收率/%苄嘧磺隆10.006 450.005 9797.4398.120.006 210.005 8298.6530.006 270.005 8698.3840.006 250.005 8598.5350.006 330.005 8797.61丙草胺10.006 450.057 02101.71100.520.006 210.055 76100.0430.006 270.056 11100.3340.006 250.056 34100.1650.006 330.056 15100.23解草啶10.006 450.013 8398.1499.420.006 210.014 23100.2830.006 270.014 1299.2340.006 250.014 1499.0350.006 330.014 11100.47波长为240 nm，且在该波长条件下，3组分的峰纯度值均大于990，符合定量分析关于特异性的相关要求，见图4。258第4期2.5非分析物干扰测定在1.3高效液相色谱条件下，对制剂空白、苄嘧磺隆原药、丙草胺原药、解草啶原药逐一进行色谱分析，分析结果显示，目标分析物均能有效分离，制剂空白和原药在目标分析物出现的区域无干扰峰存在，典型液相色谱图见图5。王 睿，等：40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂及安全剂解草啶的HPLC分析AgBiome 杀菌剂 TheiaR在美国加州获登AgBiome 近日宣布其 TheiaR杀菌剂被美国加利福尼亚州监管机构批准用于特种作物。TheiaR杀菌剂AgBiome 在该州批准的第 2 种专利性作物解决方案，旨在为高价值水果和蔬菜的土传和叶面病害提供强大的广谱保护。TheiaR杀菌剂是 AgBiome 的 GENESISR平台的产品，原始微生物的发现、测序和产品开发都由 AgBiome 的团队领导，是继HowlerR杀菌剂之后，AgBiome 首个在美国登记使用的生物杀菌剂。TheiaR杀菌剂可阻断真菌和细菌病原体侵害，激活作物自然防御，并通过多种作用模式保护作物。该生物杀菌剂含活性成分枯草芽孢杆菌菌株 AFS032321，于 2022 年 6 月获美国环保署批准，已在美国 49 个州获得登记。AgBiome 首席商务官 Adam Burnhams 说：“加州种植者持续寻找有效且可持续的解决方案，以保护作物免遭病害危害，TheiaR杀菌剂在加州的批准为种植者提供了一种新工具，可以很好地控制各种病害，如白粉病和镰刀菌属病害。”AgBiome Theia 杀菌剂产品经理 Brooke Bissinger 表示：“我们的目标一直是创造高效的植保产品，AgBiome 很高兴利用 TheiaR杀菌剂来帮助美国加州种植者为世界各地提供高质量的水果和蔬菜。”3结论本试验建立了对40%苄嘧 丙草胺可分散油悬浮剂中有效成分和安全剂解草啶的含量分析方法，该方法操作简单，各项方法学验证指标均满足农药登记管理中产品化学试验的技术要求，适用于市场监管中的质量检测以及企业生产中的质量控制。参考文献：1MACBEAN C著.胡笑形,等译.农药手册M.北京:化学工业出版社,2014:77-79,820-821,415-416.2顾慧玲,周加春,李红阳,等.吡嘧 丙草胺WP防除水稻田一年生杂草的效果及安全性J.杂草科学,2015,33(4):31-34.3褚明杰.高效液相色谱法测定除草剂苄嘧磺隆含量研究J.安徽农业科学,2011,39(32):20301-20302.4包宁,孟宪梅,吴雅梅,等.丙草胺原药的高效液相色谱分析J.农药,2020,59(2):105-106.5王磊,单娟,董崭,等.气相色谱法测定小麦中的丙草胺残留J.山东农业科学,2011(9):105-107.6刘峰,赵琳,金海涛,等.UPLC-MS/MS法检测稻米中苄嘧磺隆和苯噻酰草胺的残留量J.中国稻米,2014,20(6):18-20.7秦安丽,乐渊.高效液相-串极质谱联用仪测定土壤中丙草胺的方法研究J.湖北农业科学,2018,57(3):87-90.责任编辑：李新图5非分析物干扰测定色谱图259