河南省部分地区蛋鸡场螨虫的种类鉴定_菅忆晨.pdf

2023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023预防兽医预防兽医河南省部分地区蛋鸡场螨虫的种类鉴定河南省部分地区蛋鸡场螨虫的种类鉴定菅忆晨1，郭庆2，李是衡1，李静1，刘帅奇1，许会艳1*，菅复春1*（1.河南农业大学动物医学院，河南郑州450046；2.河南和牧动物制药有限公司，河南郑州451468）摘要：为了解河南地区鸡螨虫病中的常见感染种类，试验采集了河南10个地区阳性蛋鸡场样品，采用形态学鉴定及基于鸡皮刺螨的18 S rRNA基因序列进行PCR扩增。结果显示：新乡市、开封市、平顶山市等8个地区采集8个阳性鸡场的样品虫体呈椭圆形，前端有长的口器，后部稍宽，肛板呈圆三角形，符合鸡皮刺螨的形态特征；在新乡市原阳县和周口市商水县白寺镇采集2个阳性鸡场样品虫体细长，整体小于鸡皮刺螨，肛板位于腹部末端，呈泪滴状，符合林禽刺螨形态特征；河南地区流行的鸡皮刺螨与日本LC034951.1基因序列相似性达100%，林禽刺螨和法国的FN646503.1基因序列相似性达98.72%。表明鸡皮刺螨和林禽刺螨已经在河南省蛋鸡中出现感染和分布。关键词：鸡皮刺螨；林禽刺螨；形态学鉴定；PCR检测；河南地区；蛋鸡中图分类号：S855.9文献标识码：A文章编号：1004-6364（2023）02-27-06收稿日期：2022-03-30；修回日期：2022-07-17基金项目：现代农业产业技术体系建设专项资金（CARS-38）作者简介：菅忆晨（1996-），女，硕士研究生，研究方向为动物寄生虫病防控，E-mail：*通讯作者：许会艳（1985-），女，硕士，实验师，主要从事寄生虫病学研究，E-mail：；菅复春（1971-），女，博士，教授，主要从事动物寄生虫防控研究，E-mail：doi：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.005Species Identification of Mites in Layer Farms in Some Areas of Henan ProvinceJIAN Yichen1,GUO Qing2,LI Shiheng1,LI Jing1,LIU Shuaiqi1,XU Huiyan1*,JIAN Fuchun1*（1.College of Animal Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou,Henan 450046；2.Hemu Animal Pharmaceutical Co.,Ltd.,Zhengzhou,Henan 451468）Abstract:In order to understand the common infection species of chicken mite disease in Henan province,samples were collected from 10 positive layer farms in 10 regions of Henan province.Morphological identification and PCR amplification were performed based on 18 S rRNA gene sequences of Dermanyssus gallinae.The results showed that the insect bodies isolated from thesamples which were collected from the 8 positive chicken farms in 8 areas in Xinxiang city,Kaifeng city and Pingdingshan city,were oval in shape,with a long mouthpiece at the front end,a slightly wider posterior part,and a circular triangle in the plate,which were identified as conforming to the morphological characteristics of Dermanysus gallinae.Samples of 2 positive chickenfarms collected from Yuanyang county,Xinxiang city and Baisi town,Shangshui county,Zhoukou city were similar to the Dermanysus gallinae in morphology.The overall size was smaller than Dermanysus gallinae,and the anal plate was located at the end ofthe abdomen in the shape of a tear drop,which was identified to be consistent with the morphological characteristics of Ornithonysus sylviarum.Sequencing and phylogenetic analysis showed that Dermanysus gallinae was 99%homologous with LC034953.1from Japan,and Ornithonysus sylviarum was 98.72%homologous with FN646503.1 from France.It was indicated that the infec-272023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023预防兽医预防兽医鸡螨虫是以吸食鸡血为生的一类体外寄生虫。鸡群发病后表现为易惊恐、食欲减退、贫血、消瘦、产蛋下降等症状1。鸡螨虫体型微小，可以寄生于宿主身体的任何部位。在全球养禽行业广泛流行，每年可造成数百万欧元的损失2。除此之外，鸡螨虫是多种病原的传播者。可通过叮咬鸡体传播沙门菌、伯氏螺旋体、伯纳特氏立克次氏体等多种病原3，同时也是东方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、黄病毒等多种人兽共患病原的携带者4-5。鸡螨病中的螨虫种类很多，较常见的主要为鸡皮刺螨和林禽刺螨6。鸡皮刺螨（Dermanyssus gallinae）又称家禽红螨（Poultry red mite，PRM），是一种以吸食禽类、鸟类以及人类血液为生的永久性体外寄生虫7。鸡皮刺螨没有特定的寄生部位，主要在夜间侵袭宿主，白天喜欢藏匿在鸡笼缝隙和食槽中。鸡皮刺螨繁殖迅速，在不受控制的条件下，严重感染时每只蛋鸡寄生的鸡皮刺螨可达50 000只，严重影响蛋鸡采食量以及产蛋质量、产蛋率8。鸡皮刺螨的暴发感染不仅对养禽业可造成严重危害，对人类的健康也具有一定威胁，近年来接连有人感染鸡皮刺螨的报道9-10，叮咬人后，可引起皮肤瘙痒、红疹、皮炎和荨麻疹等皮肤病。林禽刺螨（Ornithonyssus sylviarum）又称北方鸡螨（Northern fowlmite，NFM），吸食禽类、鸟类的血液为生11。据报道，北美超过70种野生鸟类可作为林禽刺螨的宿主，其中包括八哥、家雀等12。林禽刺螨形态与鸡皮刺螨相似，但是生活史和寄生部位不同。林禽刺螨常常寄生在鸡体肛门周围，不论白天还是黑夜都寄生在宿主身上。在冬天寒冷的季节感染数量会增多，夏季减少13。鸡皮刺螨和林禽刺螨在欧洲、日本和我国大部分省、市和自治区均有发现14-16，为了解河南省养禽场鸡螨虫病的感染种类，本试验对河南省地区的阳性蛋鸡场中采集的鸡螨虫样品进行形态观察和基因型鉴定，为河南地区鸡螨虫病的防治提供科学依据。1材料与方法1.1主要试剂及仪器主要试剂：DNA Mini Kit 试剂盒（QIAamp 公司），KOD-plus酶（日本TOYOBO公司）。主要仪器：体视显微镜（SMZ-16型，上海徕卡显微系统有限公司）；PCR仪（美国BIO-RAD公司）；低速离心机（TGL-16B 型，赛默飞世尔科技）；凝胶成像仪（上海天能科技有限公司）。1.2样品采集2021年611月对河南省新乡市卫辉县和原阳县、开封市祥符区、开封市杞县、开封市通许县、平顶山市汝州县、周口市商水县白寺镇和练集镇、周口市郸城县、洛阳市汝阳县10个地区的患病蛋鸡场的鸡笼、食槽、鸡体表等鸡舍设备上，用棉签轻挑螨体放入4号自封袋中，每个鸡场至少采取10份不同位置的样品，共采集100份样品。记录蛋鸡发病时间、临床症状、用药情况等，之后带回实验室4 保存待检。1.3样品处理将采集好的样品分装成两份，一份分出24只螨虫置于2 mL离心管中用于后续基因组的提取及分子生物学检测；一份置于80%酒精固定活螨，使螨体附肢伸直，以便于用于形态学鉴定。1.4玻片标本制备将消化完全固定好的螨虫使用蒸馏水反复清洗；用5%氢氧化钠浸泡虫体至呈黄色透明状；再使用蒸馏水将虫体的碱充分冲洗干净，晾干水分；之后取干净载玻片，滴一滴加拿大树胶，将整理清洗完毕待检的螨虫放入；放置在体视显微镜下，使用昆虫针摆正姿势，各足伸展；轻轻盖上盖玻片，若是螨体不伸展，放在酒精灯上稍稍加热使其伸展，然后倒转玻片，螨虫头部朝上，贴上标签；放入45 烘箱内烘干即可。1.5电镜样本制备将消化清洗好的螨虫放置在含有4%戊二醛的1.5 mL离心管中，使螨虫沉入管底，在4 冰箱过夜；将离心管中戊二醛使用针管抽走，加入PBS清洗10 min，可重复清洗，直到将戊二醛清洗干tion species of chicken mite disease in Henan area were Dermanysus gallinae and Ornithonysus sylviarum,which had been infected and distributed in layer of Henan province.Key words:Dermanysus gallinae;Ornithonysus sylviarum;morphological identification;PCR detection;Henan region;layer-282023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023净；用1%锇酸固定1 h 30 min后使用针管抽吸锇酸，再次使用PBS清洗，直至将锇酸清洗干净；使用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇，各脱水置换15 min；再用100%乙醇脱水置换2次，每次不得少于20 min；再用100%丙醇脱水置换2次，每次不得少于20 min；使用丙酮 树脂（1 1）浸透螨虫1 h30 min；再次使用丙酮 树脂（1 2）浸透过夜；再将螨虫浸入醇树脂中放入硅胶板内过夜；进行聚合程序：37 12 h，45 12 h，60 24 h；70 nm超薄切片，捞片200目的带膜铜网；使用2%双氧醋酸铀染色20 min，用流动纯水清洗干净；再用2%柠檬酸铅染色10 min，充分清洗。1.6形态学鉴定在体视显微镜下观察玻片标本中螨虫的形态结构，记录躯体，螯肢、须肢、胸板、生殖腹板、肛板、腹肛板、刚毛、肛门等特点，比对文献中17-19的形态学特征，对其进行鉴定。1.718S rRNA基因PCR扩增将置于2 mL的离心管中的螨虫，利用QIAampDNA Mini Kit试剂盒在室温（1525）下按照说明书进行提取，完成后放置于-20 保存。参照刘成倩等20的鸡皮刺螨 18S rRNA 基因序列设计引物，引物序列为：F1为TAGGTGAACCTGCGGAAGGATC；R1为AGTTCAGCGGGTCGTCACTTG，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。使用KOD-plus酶对采集的样品进行PCR扩增，扩增体系：DNA模板2.0 L，10Buffer 5.0 L，MgSO44.0 L，dNTPs（2 mmol/L each）5.0 L，F1/R1（25 mol/L）各1.5 L，KOD-Plus 2.0 L，灭菌双蒸水29.0 L，共50 L。PCR反应条件：94 4 min；94 45 s，55 35 s，68 1 min，35个循环；最后68 延伸10 min。试验中设置阴性和阳性对照。PCR 产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳、GelRed染色检测，阳性PCR产物由北京诺赛基因有限公司进行双端测序。1.8序列分析和统计分析采用SeqMan软件对获得的基因序列进行校正，在 NCBI 网站 GenBank 中搜索相似序列，用Clustal X 2.11进行比对分析来鉴定采集样品的基因型，使用 Mega 7.0 软件中邻位相连法（Neighbor-Joining Method）构建系统进化树，并进行重复1 000次的自举检验（Bootstrap test）。2结果与分析2.1临床症状在采样过程中观察到在鸡笼、干粪、鸡体表、鸡蛋上可见迅速移动的小黑点；患病鸡出现大量的羽毛脱落，啄毛、躁动不安、抖动羽毛、精神不振、采食量及产蛋量下降等明显症状。2.2鸡皮刺螨形态学鉴定在新乡市卫辉县、开封市祥符区、开封市杞县、开封市通许县、平顶山市汝州县、周口市商水县练集镇、周口市郸城县、洛阳市汝阳县8个地区采集的8个阳性鸡场样品虫体较小，呈椭圆形，前端有长的口器，后部稍宽，体表布满短绒毛；腹面有四对足（幼虫三对足），均较长；螯肢呈细针状，短而小，适宜叮刺吸血，位于虫体的前部。非饱血状态下的虫体呈褐色或棕黑色或淡黄色，饱食的虫体偏红呈红黑色；体长0.451.45 mm，吸饱血后可达1.5 mm（见图1）。通过电镜扫描发现：虫体假头长呈细长针状，螯肢细而长，口器呈鞭状且垂直，内向外；背面有一块背板，前部较宽，后援平直；刚毛约15对；侧膜上批文清晰，侧毛16对左右（见图2A）。胸板前缘呈弓形，后缘浅凹，板上刚毛2对（见图2B）；生殖板和腹板愈合为生殖腹板，生殖腹板呈舌状，后缘钝圆，有刚毛一对（见图2C）；肛板圆三角形，3个刚毛，肛孔位于肛板后部（见图2D），具有鸡皮刺螨的形态特征。在新乡市原阳县和周口市商水县白寺镇采集的2个阳性鸡场样品虫体与林禽刺螨形态相似，体视显微镜下发现，虫体细长，整体小于鸡皮刺螨，后端明显窄于前驱，呈舌状；盾板后端有1对发达的刚毛；前端口器较短，体表布满短绒毛。成虫腹面有四对足（见图3）。电镜扫描发现：螯肢细而长在末端具有微小的剪状（见图4A）；背预防兽医预防兽医A.饱食后B.饱食前图1进食前后的鸡皮刺螨（40）-292023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023面有一块背板，雌性有明显的胸骨板，板上有刚毛3对，胸板拱桥状（见图4B）；生殖腹板呈前宽后短状，后援细长，有刚毛1对，背板与肛板呈连接不明显（见图4C）；肛板位于腹部末端，呈泪滴状，前端为肛门开口，具有3个肛门刚毛（见图4D），经鉴定符合林禽刺螨形态特征。2.3鸡皮刺螨的分子生物学鉴定结果显示，获得的扩增片段约519 bp（见图5）。扩增片段测序结果与GenBank参考序列同源性比对，结果与形态学鉴定结果相符。新乡市卫辉县，开封市祥符区、开封市杞县等8个地区经形态鉴定为鸡皮刺螨的样品基因型与日本的LC034951.1基因序列相似性达100%，命名为HN-Dermanyssus gallinae。新乡市原阳县和周口市商水县白寺镇经形态鉴定为林禽刺螨的样品基因型与法国的FN646503.1 基因序列相似性达 98.72%，命名为HN-Ornithonyssus sylviarum。根据系统进化树分析结果可知，河南部分地区流行的鸡皮刺螨和林禽刺螨分别与日本鸡源性鸡皮刺螨和法国地区的林禽刺螨有较近的亲缘关系（见图6）。3讨论目前国内外对于鸡螨虫采用分子生物学的方法进行种类鉴定的研究报道较少，长期以来，蜱螨的分类鉴定主要依据于传统的形态学分类方法21。许多研究都采用体视显微镜进行鉴定，考虑到不同螨种之间的形态相似性，以及形态特征可能在一个特定的发育阶段出现，仅用显微镜鉴定存在一定的局限性22。比如林禽刺螨和鸡皮刺螨，因形态相近，在临床诊断时，常根据其寄生部A.林禽刺螨腹面视图B.胸板细节C.肛门D.肛门细节注：箭头表示3对胸板刚毛的位置，第3对刚毛在非硬化的被毛上，剪头指向3个刚毛；as.肛板；ao.肛孔；gn.口下板；gs.生殖腹板；Pa.须肢；st.胸板；LI-LIV.足1足4。图4电镜下的林禽刺螨（雌性）图3体视显微镜下的林禽刺螨（40）A.鸡皮刺螨腹面视图B.胸板细节C.腹板D.肛门注：箭头表示两对胸板刚毛的位置；剪头指向刚毛1对；箭头指向3个刚毛；as.肛板；ao.肛孔；dp.背板；gvp.生殖腹板；Pa.须肢；sp.胸板；LI-LIV.足1足4。图2电镜下的鸡皮刺螨（雌性）预防兽医预防兽医M 1 2 3 45 6 78 9 10 11 12 13 1415 16 1718 19 20 21+-2 000 bp1 500 bp1 000 bp750 bp500 bp250 bp100 bp519 bp注：M.DL2000 DNA Marker；121.样品中的 PCR 产物；-.阴性对照；+.阳性对照。图5部分地区采集螨虫样品的PCR扩增结果-302023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023位和季节来进行初步诊断。由于突变、遗传学和自然选择，种群的基因型组成不断变化，导致它们一代又一代的基因型分化，使其可能在非形态特征上存在差异，如生理、行为等方面的差异23。因此识别这些线索是防治鸡皮刺螨病的一个重要问题，这些信息对于临床制定预防和治疗方案具有重要的意义24。而分子生物学鉴定与传统的形态学鉴定相比，具有样品消耗少，检测结果准确性和效率高等优势。本次调查中发现许多养禽人员并不能仅仅根据形态学鉴定分辨出鸡螨虫病的感染虫种。但根据相关研究发现，鸡皮刺螨与同属的其他物种相比，种群的线粒体和核区的单倍型和核多样性显著更高，这表明鸡皮刺螨在早期物种之间的杂交事件反复发生25。故本研究应用形态学结合分子生物学的方法对河南地区感染的鸡螨虫进行种类鉴定，发现新乡市卫辉县和开封市祥符区等8个地区采集的鸡螨虫样本鉴定为鸡皮刺螨；新乡市原阳县和周口市商水县2个地区采集的鸡螨虫样品鉴定为林禽刺螨，且河南地区感染的鸡皮刺螨和林禽刺螨基因型与日本的鸡皮刺螨LC034951.1基因序列相似性达100%、法国地区的林 禽 刺 螨 FN646503.1 基 因 序 列 同 源 性 达98.72%。根据早期报道显示，鸡皮刺螨在我国主要分布在吉林地区，宿主为麻雀和白玉鸟 26。后来罗芳等27报道，鸡皮刺螨在西北地区的陕西、宁夏和新疆均有感染，宿主为鸟、家燕和甘肃鼢鼠，其中新疆地区的分布地为塔城市和乌鲁木齐市。近年来，张星星等28对新疆石河子地区的患病笼养海兰褐壳蛋鸡、伊犁斗鸡和吐鲁番斗鸡进行了形态学鉴定和cox1基因比对分析，结果显示石河子地区流行的鸡皮刺螨与法国和意大利的鸡皮刺螨基因序列相似性达99%，有较近的亲缘关系。刘成倩等20对江苏蛋鸡场采集的螨虫样品进行形态鉴定，并基于鸡皮刺螨18S rRNA基因序列分析发现，该鸡皮刺螨与日本地区的LC034921、LC034936、LC034939、LC034949、LC034950、LC034953TO、LC034953.1同源率达100%。这与本研究发现的鸡皮刺螨的基因序列与 LC034953.1 的相似性100%结果相似，表明该基因型在河南和江苏地区呈广泛传播。4结论河南部分地区鸡螨虫病的感染种类为鸡皮刺螨和林禽刺螨，且分子生物学鉴定能够应用于临床并且快速准确地鉴定出相同或相似物种，避免出现因种类鉴定错误而影响临床治疗等情况。参考文献：1 李国清.兽医寄生虫学 M.北京：中国农业大学出版社，2014：276.2 KRITOFK J，MASAN P，SUSTEK Z.Ectoparasites of bee-eater（Merops apiaster）and arthropods in its nests J.Proceedings of SPIE-The international society for optical engineering，1996，9204：92040F-92040F-8.3 RAELE D A，GALANTE D，PUGLIESE N，et al.First report ofCoxiella burnetii and Borrelia burgdorferi sensu lato in poultryred mites，Dermanyssus gallinae（Mesostigmata，Acari），related to urban outbreaks of dermatitis in Italy J.New microbesand new infections，2018，22（23）：103-109.4 VALIENTE M C，DE LUNA C J，TOD A，et al.The poultry redmite（Dermanyssus gallinae）：a potential vector of pathogenicagents J.Experimental&applied acarology，2009，48（1-2）：93-104.5 HUBERT J，ERBAN T，KOPECKY J，et al.Comparison of microbiomes between red poultry mite populations（Dermanyssusgallinae）：Predominance of Bartonella-like bacteriaJ.Microbial ecology，2017，74（4）：947-960.6 SPARAGANO O A E，HO J.Parasitic mite fauna in asian poultry farming systems J.Frontiers in veterinary science，2020，9（7）：400.7PRITCHARD J，KUSTER T，SPARAGANO O，et al.Understanding the biology and control of the poultry red mite Dermanyssus gallinae：a reviewJ.Avian pathology：journal of theW.V.P.A，2015，44（3）：143-153.8 SLEECKX N，GORP S V，KOOPMAN R，et al.Production lossesin laying hens during infestation with the poultry red mite Dermanyssus gallinae J.Avian pathology：journal of the W.V.P.A，2019，48（1）：1-17.预防兽医预防兽医LC034936.1-Dermanyssus gallinae-Japan：OkayamaLC034948.1-Dermanyssus gallinae-Japan：GifuLC034949.1-Dermanyssus gallinae-Japan：ChibaLC034950.1-Dermanyssus gallinae-Japan：MiyagiLC034951.1-Dermanyssus gallinae-Japan：MieHN-Dermanyssus gallinaeFN646503.1-Ornithonyssus sylviarum-France：Vendee HN-Ornithonyssus sylviarumFN646500.1-Ornithonyssus sylviarum-France：Bouches du RhoneMH540345.1-Ornithonyssus bacoti-China：XianMH540343.1-Ornithonyssus bacoti-China：XianAM903318.2-Ornithonyssus bacoti-Framce：Marcy IEtoile1009972100460.02注：.本研究鉴定的鸡皮刺螨基因序列；.本研究鉴定的林禽刺螨基因序列。图6河南地区螨虫样品的系统进化树分析-312023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.20239 SIOUTAS G，MINOUDI S，TILIGADA K，et al.Case of humaninfestation with Dermanyssus gallinae（poultry red mite）fromswallows（Hirundinidae）J.Pathogens，2021，10（3）：299.10CAFIERO M A，BARLAAM A，CAMARDA A，et al.Dermanysuss gallinae attacks humans.Mind the gap！J.Avian pathology：journal of the W.V.P.A，2019，48（1）：S22-S34.11GIUSEPPE V，ANNIE J K，JOY J M，et al.The effect of northern fowl mite（Ornithonyssus sylviarum）infestation on hen physiology，physical condition，and egg quality J.Poultry science，2016，95（5）：1042-1049.12WAYNE K，HEATHER P.Host records for Ornithonyssus sylviarum（Mesostigmata：Macronyssidae）from birds of North America（Canada，United States，and Mexico）J.Journal of medical entomology，2007，44（4）：709-713.13MURILLO A C，MULLENS B A.A review of the biology，ecology，and control of the northern fowl mite，Ornithonyssus sylviarum（Acari：Macronyssidae）J.Veterinary parasitology，2017，246：30-37.14CHU T，MURANO T，UNO Y，et al.Molecular epidemiologicalcharacterization of poultry red mite，Dermanyssus gallinae，inJapanJ.Journal of veterinary medical science，2015，77（11）：1397-1403.15 WAAP H，NUNES T，MUL M F，et al.Survey on the prevalence of Dermanyssus gallinae in commercial laying farms inPortugal J.Avian pathology：journal of the W.V.P.A，2019，48（1）：S2-S9.16 WANG F F，WANG M，XU F R，et al.Survey of prevalenceand control of ectoparasites in caged poultry in China J.Veterinary record，2010，167（24）：934-937.17 DI PALMA A，GIANGASPERO A，CAFIERO M A，et al.Agallery of the key characters to ease identification of Dermanyssus gallinae（Acari：Gamasida：Dermanyssidae）and allow differentiation from Ornithonyssus sylviarum（Acari：Gamasida：Macronyssidae）J.Parasites&vectors，2012，30（5）：104.18MOSS W W.An illustrated key to the species of the acarine genus Dermanyssus（Mesostigmata：Laelapoidea：Dermanyssidae）J.Journal of medical entomology，1968，5（1）：67-84.19 ROY L，CHAUVE C M，BURONFOSSE T.Contrasted ecological repartition of the northern fowl mite Ornithonyssus sylviarum（Mesostigmata：Macronyssidae）and the chicken red miteDermanyssus gallinae（Mesostigmata：Dermanyssidae）J.Acarologia，2010，50：207-219.20 刘成倩，李红，高骏，等.鸡皮刺螨病的 PCR 诊断及 18SsRNAITS28S rRNA 基因序列分析 J.安徽农业科学，2020，48（18）：104-106.21苏小建，杨庆贵.蜱螨分类鉴定方法的研究进展 J.中国国境卫生检疫杂志，2013，36（3）：212-215.22 SPARAGANO O A E，HO J.Parasitic mite fauna in Asianpoultry farming systemsJ.Frontiers in veterinary science，2020，9（7）：400.23 GERARDO PREZ-PONCE DE LENA，STEVEN A N.What we don t recognize can hurt us：a plea for awarenessabout cryptic species J.Journal of parasitology，2010，96（2）：453-464.24 DESALLE R，EGAN M G，SIDDALL M.The unholy trinity：taxonomy，species delimitation and DNA barcoding J.Philosophical transactions of the Royal Society of London.Series B，Biological sciences，2005，360：1905-1916.25 LISE R，THIERRY B，MORITZ R F A.Using mitochondrialand nuclear sequence data for disentangling population structure in complex pest species：a case study with Dermanyssusgallinae J.PLoS one，2011，6（7）：e22305.26中国科学院中国动物志委员会.中国经济昆虫志.第四十册，蜱螨亚纲 皮刺螨总科 M.北京：科学出版社，1993.27罗芳，刘增加，张继军.西北地区皮刺螨科昆虫初报 J.医学动物防制，2011，27（9）：785-787.28张星星，孟庆玲，乔军，等.新疆石河子地区鸡皮刺螨形态学鉴定及其cox1基因比对分析 J.石河子大学学报（自然科学版），2016，34（1）：30-35.预防兽医预防兽医-32