基于转录组测序初步筛选维生素C延缓秀丽隐杆线虫衰老的相关基因.pdf

第3 6卷 第3期2023 年08月 青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)J O U R N A L O F Q I N G D A O U N I V E R S I T Y(N a t u r a l S c i e n c e E d i t i o n)V o l.3 6 N o.3A u g.2023 文章编号:1 0 0 6 1 0 3 7(2 0 2 3)0 3 0 0 2 7 0 7d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 6 1 0 3 7.2 0 2 3.0 3.0 6基于转录组测序初步筛选维生素C延缓秀丽隐杆线虫衰老的相关基因王少营,王少聪,李培峰,曾焕玉(青岛大学转化医学研究院,青岛 2 6 6 0 2 1)摘要:为探究维生素C调控秀丽隐杆线虫寿命通路相关基因,设置空白对照组(0 m g/m L维生素C组)、0.4 m g/m L维生素C组、0.8 m g/m L维生素C组以及1.6 m g/m L维生素C组,构建维生素C处理秀丽隐杆线虫模型,检测维生素C与秀丽隐杆线虫寿命关系。空白对照组和处理组利用I l l u m i n a H i S e q基因转录组测序。通过本位数据库(G e n e O n t o l o g y,GO)和通路显著性富集分析数据库(K y o t o E n c y c l o p e d i a o f G e n e s a n d G e n o m e s,K E G G)挖掘影响秀丽隐杆线虫寿命的差异表达基因。研究发现,0.8 m g/m L维生素C处理下,秀丽隐杆线虫寿命相较于其他浓度明显延长,l i p s-1 0基因表达明显上调且参与秀丽隐杆线虫寿命相关通路调节过程,表明维生素C能够影响秀丽隐杆线虫寿命,调控其相关衰老过程。关键词:秀丽隐杆线虫;维生素C;氧化衰老;转录组测序中图分类号:Q 5 6 4 文献标志码:A收稿日期:2 0 2 3-0 2-1 4基金项目:国家自然科学基金外国青年学者研究基金(批准号:8 2 0 5 0 4 1 0 4 5 0)资助。通信作者:曾焕玉,女,博士,讲师,主要研究方向为心血管代谢疾病的表观遗传危险因素研究。E-m a i l:l i f e i n n i v a n a h o t m a i l.c o m 衰老发生于不同生理和病理过程1,导致癌症、骨关节炎、心脑血管病、神经退行性病变、阿尔茨海默症等疾病的发生2。目前衰老假说主要包括自由基衰老假说3、线粒体假说4、端粒假说5和热量限制假说6-7。维生素C又称L-抗坏血酸,作为一种强抗氧化剂,能够减少或“清除”许多(病理)生理相关自由基和活性氧8、维持红细胞AT P酶活性和S O D活性、降低血浆丙二醛及钾离子含量9。秀丽隐杆线虫与人类遗传物质相似,可用于代谢功能研究1 0。因此,本文基于维生素C抗氧化作用,构建秀丽隐杆线虫衰老模型,结合转录组测序技术初步筛选秀丽隐杆线虫衰老相关基因,为延缓其衰老提供新靶点。1 材料与方法1.1 实验材料野生型N 2秀丽隐杆线虫、尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(E.c o l i O P 5 0)(福建上源生物科学技术公司);琼脂粉、蛋白胨、L B肉汤、抗坏血酸V C(索莱宝生物科技有限公司);氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、胆固醇、氢氧化钠(沪试试剂有限公司);次氯酸钠、磷酸氢二钠(罗恩试剂);恒温恒湿箱(上海龙跃有限公司);S MZ 1 8体试显微镜(尼康集团)。1.2 实验方法1.2.1 NGM培养基及菌液制备 NGM培养基(N a C l 1.5 g,蛋白胨1.2 5 g,琼脂粉8.5 g),加单蒸水定容至5 0 0 m L,高温高压灭菌。待培养液温度降至6 0 左右时,加入胆固醇乙醇溶液(5 m g/m L)5 0 0 L、1 m o l/L M g S O4 5 0 0 L、1 m o l/L C a C l2 5 0 0 L和1 m o l/L KH2P O4-K2H P O4 缓冲液(p H 6.0)1 2.5 m L后,快速混匀,倒入9 0 mm培养皿,NGM平板即制备完成。取5 0 L O P 5 0大肠杆菌(-8 0 保存)加至灭青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)第3 6卷菌L B液体培养基(2 5 m L)内,3 7 摇菌床2 0 0 r p m隔夜培养1 21 6 h后,4 离心机2 5 0 0 r p m离心1 0 m i n。弃上清,离心管内留取1 0 m L,菌液即制备完成。1.2.2 秀丽隐杆线虫饲养及给药方法 取维生素C粉末溶于双蒸水,滤过除菌,配制成母液。维生素C母液与O P 5 0菌液配制不同浓度后,取1 0 0 L滴加至NGM培养基内,同时转入秀丽隐杆线虫,2 0 恒温恒湿培养箱内培养。1.2.3 同步化处理 无菌条件下处于产卵期秀丽隐杆线虫使用M 9 b u f f e r冲洗后,置于1 5 m L离心管内。沉降后,再换M 9 b u f f e r反复沉降3次,弃上清。加入N a OH-N a C l O秀丽隐杆线虫裂解液,2 5 0 0 r p m离心2 m i n弃上清。再次加入M 9 b u f f e r,2 5 0 0 r p m离心2 m i n,弃上清。沉淀中的卵滴入NGM平板,2 0 恒温恒湿培养箱内培养6 4 h后,卵发育至成虫期秀丽隐杆线虫。1.2.4 寿命观察实验 同步化处理后的秀丽隐杆线虫转入空白组、0.4 m g/m L维生素C组、0.8 m g/m L维生素C组和1.6 m g/m L维生素C组NGM培养基,2 0 恒温恒湿培养。每个浓度设置5个平行实验板,每板培养秀丽隐杆线虫2 0条。为防止实验过程中新生幼虫影响计数结果,实验前期秀丽隐杆线虫需每2 4 h更换1次含有相同维生素C浓度和O P 5 0菌液的NGM培养基,直至新生幼虫消失,改为每2天更换1次NGM培养基。初始观察时间记为第0天,每2 4 h统计死亡和存活的秀丽隐杆线虫数量,直至全部死亡。1.2.5 转录组测序及生物信息学分析 提取秀丽隐杆线虫样本总R NA,利用R NA反转录法逆转录c D-NA,连接a d a p t o r,最后利用I l l u m i n a上机测序。测序完成后,使用R S EM软件分析不同样本间表达量及表达差异,绘制差异基因表达火山图。差异基因表达筛选后,使用GO数据库(h t t p:/www.g e n e o n t o l o g y.o r g/)注释差异表达基因,绘制GO注释柱形图。利用K E G G数据库(h t t p:/www.g e n o m e.j p/k e g g/)分析差异基因功能,同时按信号通路分类,绘制K E G G注释柱形图。1.2.6 统计学分析 利用G r a p h p a d P r i s m 8完成统计学分析,所有结果以xs表示,比较结果以P0.0 5表示具有统计学差异。2 结果2.1 不同维生素C浓度下秀丽隐杆虫存活率图1 不同维生素C浓度处理组中秀丽隐杆线虫存活率 基于前期实验结果初步筛选,设置空白组(0 m g/m L维生素C组)、0.4 m g/m L维生素C组、0.8 m g/m L维生素C组以及1.6 m g/m L维生素C组,观察秀丽隐杆线虫存活率(图1、表1)。结果显示,0.8 m g/m L维生素C组秀丽隐杆线虫平均 生 存 时 间 明 显 长 于 空 白 组(P0.0 5),1.6 m g/m L维生素C组秀丽隐杆线虫平均生存时间明显短于空白组(P0.0 5)。表1 不同维生素C浓度下各组线虫生存时间比较组别线虫数/只最大寿命/d平均寿命/d中位寿命/d0 m g/m L维生素C1 0 01 4.80.47.64.56.00.00.4 m g/m L维生素C1 0 01 5.60.58.14.77.00.00.8 m g/m L维生素C1 0 02 3.30.51 4.26.71 4.01.41.6 m g/m L维生素C1 0 01 1.10.46.23.26.50.782 第3期 王少营等:基于转录组测序初步筛选维生素C延缓秀丽隐杆线虫衰老的相关基因2.2 转录组原始测序结果质量分析为研究维生素C是否影响秀丽隐杆线虫寿命,实验选取0.8 m g/m L维生素C处理第5天和第1 5天的秀丽隐杆线虫样本为研究对象。质量检测结果显示,R NA浓度、O D 2 6 0/2 8 0值和R NA质量完整性指标均符合建库条件。对照组与实验组过滤后,碱基质量符合Q 2 0比例和Q 3 0比例要求,说明测序质量较高,满足后续生物信息学相关分析(表2)。表2 转录组测序质控结果统计表样品原始数据过滤后数据Q 2 0(%)Q 3 0(%)G C含量(%)第5天对照组(0 m g/m L维生素C)5 6 5 1 2 4 3 25 6 0 6 6 5 7 89 8.39 4.6 14 8.4 9第5天实验组(0.8 m g/m L维生素C)4 8 3 8 9 5 7 24 7 9 9 3 2 9 29 8.2 79 4.64 8.0 4第1 5天对照组(0 m g/m L维生素C)5 3 7 2 8 6 2 65 3 2 7 1 3 7 49 8.4 79 5.1 34 9.7 5第1 5天实验组(0.8 m g/m L维生素C)4 8 9 6 0 1 5 44 8 7 2 1 0 3 29 8.3 49 4.7 14 9.0 32.3 差异表达基因筛选两组间差异基因比对结果显示,相较于对照组,第5天实验组有9 3 5个基因表达量上调,1 6 4个基因表达量下调;第1 5天实验组有7 0 2个基因表达量上调,5 1个基因表达量下调,这说明实验组存在差异表达基因可能参与秀丽隐杆线虫寿命的调节(图2)。图2 对照组与实验组中差异表达基因火山图(a)第5天;(b)第1 5天2.4 差异表达基因 G O 功能注释分析为深入了解差异基因相关功能作用,选择GO功能注释分析差异基因。GO功能注释围绕分子功能、细胞学组件和生物学功能注释筛选差异基因。由图3可知,第5天和第1 5天的差异基因GO功能注释排名前2 0条目中,1 0个条目与生物学功能有关,4个条目与分子功能有关,6个条目与细胞学组件相关。细胞学组件分组中,差异基因表达主要集中在膜和细胞部分;分子功能分组中,差异基因表达主要集中在结合、催化活性和转运活性部分;生物学功能中,差异基因表达主要集中在细胞过程、生物过程和代谢过程部分。占比较高的基因分类大多与细胞代谢等生物作用有关,这也提示差异表达基因与秀丽隐杆线虫寿命调节过程存在关联。92青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)第3 6卷图3 对照组与实验组中差异表达基因G O注释分析图(a)第5天;(b)第1 5天2.5 差异表达基因K E G G分析通过K E G G注释分析,深入探讨差异表达基因对秀丽隐杆线虫衰老的调控作用。由图4可知,第5天和第1 5天分别存在5个和4个差异表达基因参与秀丽隐杆线虫衰老通路调节过程。2.6 差异表达寿命相关基因K E G G通路分析结果显示,维生素C处理后,l i p s-1 0基因同时参与了第5天和第1 5天的秀丽隐杆线虫寿命调节过程。l i p s-1 0基因经过维生素C处理后表现为上调状态,是衰老相关重要调控因子d a f-1 6基因的下游,说明维生素C延缓秀丽隐杆线虫衰老相关基因的表达,但具体机制还有待研究。3 讨论秀丽隐杆线虫是一种自由生活线虫,相较于传统动物模型,具有体型小、寿命短、基因组测序完整且与人类相关基因高度同源等特点,广泛应用于研究衰老的动物模型1 1。胰岛素/胰岛素样生长因子1(I n s u l i n/I G F-1)信号(I I S)调节诸多物种衰老,如线虫、人类1 2。I I S通路可调控秀丽隐杆线虫和哺乳动物寿命,其活性降低会延长寿命,活性升高会导致氧化应激反应1 3从而加速衰老进程。另外,I I S通路控制蛋白质和能量03 第3期 王少营等:基于转录组测序初步筛选维生素C延缓秀丽隐杆线虫衰老的相关基因代谢、细胞增殖和分化以及调节先天和适应性免疫系统功能1 4。图4 对照组与实验组中差异表达基因K E G G注释分析图(a)第5天;(b)第1 5天维生素C是一种强抗氧化剂和水溶性维生素,具有抗应激、抗氧化和免疫增强作用,可通过清除血浆中活性氧自由基、提高体内抗氧化酶活性等方式发挥抗氧化作用1 5。如镉染毒后小鼠肝、肾和脑研究结果显示,单次高剂量镉比慢性低剂量镉具有显著毒性效应,维生素C可减轻镉应激效应1 6;缺乏维生素C鱼类出现生长缓慢、表皮出血、骨骼畸形等症状1 7;维生素C能提高w r n-1突变体和N 2野生型线虫平均寿命1 8。因此,维生素C可保护机体氧化代谢过程不受氧化剂危害1 9。13青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)第3 6卷4 结论本研究主要讨论维生素C是否延缓秀丽隐杆线虫衰老相关基因表达。结果表明,0.8 m g/m L维生素C处理后的秀丽隐杆线虫寿命延长最明显。转录组测序后,差异表达基因分析显示l i p s-1 0基因表达上调,且参与调节秀丽隐杆线虫衰老相关通路。该结果阐明了维生素C会影响秀丽隐杆线虫衰老,调控其寿命相关基因。今后可基于基因和蛋白水平探究l i p s-1 0调节氧化衰老相关机制,为延缓秀丽隐杆线虫衰老提供新思路。参考文献1C A L C I NO T T O A,KOHL I J,Z A GA T O E,e t a l.C e l l u l a r s e n e s c e n c e:A g i n g,c a n c e r,a n d i n j u r yJ.P h y s i o l R e v i e w s,2 0 1 9,9 9(2):1 0 4 7-1 0 7 8.2 许志刚,刘晓蕾,董碧蓉.衰老的意义、特征及相关生物标记与评估模式J.中国临床保健杂志,2 0 2 2,2 5(4):4 7 2-4 7 6.3L I O C HE V S I.R e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s a n d t h e f r e e r a d i c a l t h e o r y o f a g i n gJ.F r e e R a d i c a l B i o l o g y&M e d i c i n e,2 0 1 3,6 0:1-4.4S WE R D L OW R H.M i t o c h o n d r i a a n d m i t o c h o n d r i a l c a s c a d e s i n a l z h e i m e r s d i s e a s eJ.J o u r n a l o f A l z h e i m e r s D i s e a s e,2 0 1 8,6 2(3):1 4 0 3-1 4 1 6.5L I B E R T I N I G,F E R R A R A N,R E N GO G,e t a l.E l i m i n a t i o n o f s e n e s c e n t c e l l s:P r o s p e c t s a c c o r d i n g t o t h e s u b t e l o m e r e-t e l o m e r e t h e o r yJ.B i o c h e m i s t r y B i o k h i m i i a,2 0 1 8,8 3(1 2-1 3):1 4 7 7-1 4 8 8.6P A R V E E N S.I m p a c t o f c a l o r i e r e s t r i c t i o n a n d i n t e r m i t t e n t f a s t i n g o n p e r i o d o n t a l h e a l t hJ.P e r i o d o n t o l o g y 2 0 0 0,2 0 2 1,8 7(1):3 1 5-3 2 4.7 胡梦圆,苏磊,张昕雨.基于转录组测序探讨锁阳提取物对线虫衰老的影响J.现代中西医结合杂志,2 0 2 2,3 1(1 8):2 4 8 8-2 4 9 5.8 贺丽玲,闫新明.维生素C辅助治疗脓毒症研究进展J.医药导报,2 0 2 2,4 1(7):1 0 0 4-1 0 0 7.9G R E B E M,E I S E L E H J,WE I S S MANN N,e t a l.A n t i o x i d a n t v i t a m i n c i m p r o v e s e n d o t h e l i a l f u n c t i o n i n o b s t r u c t i v e s l e e p a p n e aJ.A-m e r i c a n J o u r n a l o f R e s p i r a t o r y a n d C r i t i c a l C a r e M e d i c i n e,2 0 0 6,1 7 3(8):8 9 7-9 0 1.1 0 傅雯,柏桦,王瑶.维生素C通过胰岛素信号通路增强秀丽隐杆线虫抗氧化作用J.中国食物与营养,2 0 2 1,2 7(1 2):6 7-7 1.1 1 S HE N P Y,YU E Y R,P A R K Y.A l i v i n g m o d e l f o r o b e s i t y a n d a g i n g r e s e a r c h:C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n sJ.C r i t i c a l R e v i e w s I n F o o d S c i e n c e a n d N u t r i t i o n,2 0 1 8,5 8(5):7 4 1-7 5 4.1 2 L E E H S,L E E S J V.R e c e n t p r o g r e s s i n r e g u l a t i o n o f a g i n g b y i n s u l i n/I G F-1 s i g n a l i n g i n c a e n o r h a b d i t i s e l e g a n sJ.M o l e c u l e s a n d C e l l s,2 0 2 2,4 5(1 1):7 6 3-7 7 0.1 3 李哲,刘子倩,王胤,等.氧化应激状态下心肌细胞中长链非编码RNA的差异表达谱分析J.青岛大学学报(自然科学版),2 0 2 1,3 4(4):9-1 5.1 4 S A LM I N E N A,KAA R N I R AN T A K,KAU P P I N E N A.I n s u l i n/I G F-1 s i g n a l i n g p r o m o t e s i mm u n o s u p p r e s s i o n v i a t h e S T A T 3 p a t h w a y:I m p a c t o n t h e a g i n g p r o c e s s a n d a g e-r e l a t e d d i s e a s e sJ.I n f l a mm a t i o n R e s e a r c h,2 0 2 1,7 0(1 0-1 2):1 0 4 3-1 0 6 1.1 5 孙建华,徐燕红,焦振刚,等.维生素C对夏季水貂血清生化指标、抗氧化能力的影响J.饲料研究,2 0 2 1,4 4(1 1):5 7-6 0.1 6 周健,秦浩,李晓红.维生素C对镉负荷小鼠睾丸抗氧化功能的影响J.中国应用生理学杂志,2 0 2 2,3 8(3):2 3 3-2 3 7.1 7 龚福来,林雪,王红权.不同维生素C源对吉富罗非鱼生长性能、抗氧化能力和免疫力的影响J.动物营养学报,2 0 2 1,3 3(4):2 3 7 8-2 3 8 9.1 8 D A L L A I R E A,P R OU L X S,S I MA R D M J,e t a l.E x p r e s s i o n p r o f i l e o f c a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s m u t a n t f o r t h e w e r n e r s y n d r o m e g e n e o r-t h o l o g r e v e a l s t h e i m p a c t o f v i t a m i n C o n d e v e l o p m e n t t o i n c r e a s e l i f e s p a nJ.BMC G e n o m i c s,2 0 1 4,1 5:9 4 0.1 9 韩旭,田柳青,王子龙.维生素C对中华蜜蜂幼虫发育及工蜂生存能力的影响J.动物营养学报,2 0 1 4,2 6(5):1 2 6 5-1 2 7 1.23 第3期 王少营等:基于转录组测序初步筛选维生素C延缓秀丽隐杆线虫衰老的相关基因P r e l i m i n a r y S c r e e n i n g o f G e n e s R e l a t e d t o V i t a m i n C D e l a y i n g t h e A g i n g o f C a e n o r h a b d i t i s E l e g a n s B a s e d o n T r a n s c r i p t o m e S e q u e n c i n gWANG S h a o-y i n g,WANG S h a o-c o n g,L I P e i-f e n g,Z E NG H u a n-y u(I n s t i t u t e o f T r a n s l a t i o n a l M e d i c i n e,Q i n g d a o U n i v e r s i t y,Q i n g d a o 2 6 6 0 2 1,C h i n a)A b s t r a c t:T h e c o n c e n t r a t i o n g r a d i e n t s o f b l a n k c o n t r o l g r o u p(0 m g/m L v i t a m i n C g r o u p),0.4 m g/m L v i t a m i n C g r o u p,0.8 m g/m L v i t a m i n C g r o u p a n d 1.6 m g/m L v i t a m i n C g r o u p w e r e e s t a b l i s h e d t o c o n s t r u c t v i t a m i n C-t r e a t e d C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s m o d e l,e x p l o r e v i t a m i n C r e g u l a t e d C a e n o r h a b d i t i s e l e-g a n s l o n g e v i t y p a t h w a y-r e l a t e d g e n e s,a n d d e t e c t t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n v i t a m i n C a n d C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s l o n g e v i t y.I l l u m i n a H i S e q w a s u s e d i n t h e c o n t r o l g r o u p a n d t r e a t m e n t g r o u p t o a n a l y z e t h e G e n e t r a n s c r i p t o m e s e q u e n c i n g.T h e d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d g e n e s a f f e c t i n g t h e l i f e s p a n o f C a e n o r h a b d i t i s e l e-g a n s w e r e m i n e d b y G e n e O n t o l o g y(GO)a n d K y o t o E n c y c l o p e d i a o f G e n e s a n d G e n o m e s(K E G G).T h e r e s u l t s s h o w t h a t 0.8 m g/m L v i t a m i n C s i g n i f i c a n t l y e x t e n d s t h e l i f e s p a n o f C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s c o m p a r e t o o t h e r c o n c e n t r a t i o n s.T h e e x p r e s s i o n o f l i p s-1 0 g e n e i s s i g n i f i c a n t l y u p r e g u l a t e d a n d i n v o l v e d i n t h e l i f e-r e l a t e d p a t h w a y r e g u l a t i o n p r o c e s s o f C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s,i n d i c a t i n g t h a t v i t a m i n C c a n a f-f e c t t h e l i f e s p a n a n d r e g u l a t e t h e r e l a t e d a g i n g p r o c e s s o f C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s.K e y w o r d s:C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s;v i t a m i n C;o x i d a t i v e s e n e s c e n c e;t r a n s c r i p t o m e s e q u e n c i n g(上接第2 6页)T r e h a l o s e E n h a n c e s t h e I n h i b i t o r y E f f e c t o f L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s G DMC C 1.2 0 8 o n A t h e r o s c l e r o s i sGAO H u i-j u a n,L I X i n,Z HANG L e i,L I P e i-f e n g(I n s t i t u t e f o r T r a n s l a t i o n a l M e d i c i n e,Q i n g d a o U n i v e r s i t y,Q i n g d a o 2 6 6 0 2 1,C h i n a)A b s t r a c t:T o e x p l o r e t h e r o l e o f t r e h a l o s e i n t h e p r o l i f e r a t i o n o f L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s G DMC C 1.2 0 8 a n d t h e e f f e c t o f t r e h a l o s e a n d t h e b a c t e r i a l s t r a i n c o m b i n a t i o n o n t h e d e v e l o p m e n t o f a t h e r o s c l e r o s i s i n a p o l i p o p r o t e i n E-d e f i c i e n t(A p o E-/-)m i c e,A p o E-/-m i c e i n t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p w e r e a d m i n i s t e r e d t r e h a l o s e,L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s G DMC C 1.2 0 8,o r t h e c o m b i n a t i o n o f b o t h b y g a v a g e e v e r y d a y,w h i l e t h e b l a n k c o n t r o l g r o u p a n d t h e e x p e r i m e n t a l c o n t r o l g r o u p w e r e g i v e n o n l y P B S b y g a v a g e.T h e a t h-e r o s c l e r o t i c l e s i o n a r e a s o f a o r t a w e r e d e t e r m i n e d b y o i l r e d O s t a i n i n g a n d t h e s e r u m c h o l e s t e r o l l e v e l s w e r e d e t e c t e d a f t e r 1 2 w e e k s.T h e m i c e i n t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p h a s a r e d u c e d a t h e r o s c l e r o t i c l e s i o n a r e a a n d a d e c r e a s e d s e r u m c h o l e s t e r o l l e v e l c o m p a r e d w i t h t h e c o n t r o l g r o u p.T h e i n t e r v e n t i o n w i t h t h e c o m b i-n a t i o n o f t r e h a l o s e a n d L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s G DMC C 1.2 0 8 s h o w a p a r t i c u l a r l y s i g n i f i c a n t e f f e c t o f a t h e r o s c l e r o t i c l e s i o n a r e a a n d s e r u m c h o l e s t e r o l l e v e l o n t h e m i c e.T h e r e s u l t s s u g g e s t t h a t t r e h a l o s e c o u l d p r o m o t e t h e p r o l i f e r a t i o n o f L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s G DMC C 1.2 0 8,a n d t h e c o m b i n a t i o n o f t h e t w o m a y i n h i b i t t h e d e v e l o p m e n t o f a t h e r o s c l e r o t i c l e s i o n s i n A p o E-/-m i c e b y r e d u c i n g c h o l e s t e r o l l e v e l s.T h e c o m b i n a t i o n o f t r e h a l o s e a n d L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s G DMC C 1.2 0 8 m a y b e a n o v e l a p p r o a c h f o r t h e p r e v e n t i o n a n d t r e a t m e n t o f a t h e r o s c l e r o s i s.K e y w o r d s:L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s G DMC C 1.2 0 8;t r e h a l o s e;a t h e r o s c l e r o s i s;A p o E-/-m i c e33