30亿CFU_g芽胞杆菌可...薯黄萎病和疮痂病的防治效果_张晓云.pdf

研究论文doi:10.16801/j.issn.1008-7303.2022.008130 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂的研制及其对马铃薯黄萎病和疮痂病的防治效果张晓云,丛蓉,赵卫松,曲远航,苏振贺,郭庆港,鹿秀云,李社增*,马平(河北省农林科学院植物保护研究所，河北省农业有害生物综合防治创新中心，农业农村部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室，河北保定071000)摘 要：黄萎病和疮痂病是马铃薯生产上的重要土传病害，严重影响马铃薯的产量与品质，但缺乏有效的防治药剂。本研究以枯草芽胞杆菌 HMB26553 和解淀粉芽胞杆菌 PHODG36 为有效成分，通过对润湿剂、分散剂及紫外保护剂的筛选，确定了 30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂的配方(质量分数)：HMB26553 菌株母药 10%、PHODG36 菌株母药 10%、润湿剂 LT-5691%、分散剂 MF2%、紫外保护剂抗坏血酸 1%和滑石粉 76%。该制剂芽胞数量 37.6 亿CFU/g，杂菌率 2.8%，pH7.8，细度 98.2%，干燥减量 1.6%，润湿时间 95.7s，悬浮率 80.7%。温室盆栽试验结果表明：该可湿性粉剂 1545kg/hm2拌种处理对马铃薯出苗安全，对生长无不良影响，对马铃薯黄萎病的防治效果为 45.1%47.4%。田间小区试验结果表明：该可湿性粉剂 1545kg/hm2拌种处理能显著减轻马铃薯疮痂病的发生，其中 30kg/hm2拌种处理防治效果高达72.0%，增产率达 15.5%。不同地区的田间示范试验应用结果表明：该可湿性粉剂 30kg/hm2拌种处理对马铃薯黄萎病的防治效果为 50.8%62.1%，疮痂病为 63.9%65.7%，增产率为14.3%29.4%。本研究结果表明，30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂能有效防治马铃薯土传病害且增产作用明显，为该制剂在马铃薯生产上应用提供了科学依据。关键词:芽胞杆菌；可湿性粉剂；马铃薯黄萎病；马铃薯疮痂病；防治效果中图分类号：S482.7；TQ450.6；TQ458文献标志码：ADevelopment of 3 billion CFU/g Bacillus wettable powder and its controlefficacy on potato Verticillium wilt and scabZHANGXiaoyun,CONGRong,ZHAOWeisong,QUYuanhang,SUZhenhe,GUOQinggang,LUXiuyun,LIShezeng*,MAPing(Plant Protection Institute,Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences,IPM Innovation Centre of Hebei Province,Key Laboratoryof Integrated Pest Management on Crops in Northern Region of North China,Ministry of Agriculture andRural Affairs,Baoding 071000,Hebei Province,China)收稿日期：2022-06-17；录用日期：2022-08-15；网络首发日期：2022-09-22.Received:June17,2022;Accepted:August15,2022;Published online:September22,2022.URL:https:/doi.org/10.16801/j.issn.1008-7303.2022.0081http:/ Journal of Pesticide ScienceE-mail:Abstract:SoilbornediseasessuchaspotatoVerticilliumwiltandpotatoscabseriouslyaffectedtheyieldandqualityofpotatoandnoeffectivechemicalisavailabletocontrolthediseases.Inthisstudy,Bacillus subtilisHMB26553andB.amyloliquefaciensPHODG36wereusedasactiveingredientstodevelopwettablepowder(WP).Afterevaluatingthedosesofthewettingagent,dispersant,andUVprotectiveagent,theoptimalformulationof3billionCFU/gBacillusWPwasestablishedasfollows:10%HMB26553technicalconcentrate(TK),10%PHODG36TK,1%wettingagentLT-569,2%dispersantMF,1%UVprotectiveagentascorbicacid,talcpowder76%.ThesporecontentoftheWPwasupto3.76billionCFU/g;therateofmixedbacteriawas2.8%;thepHvaluewas7.8;thefinenesswas98.2%;thedryinglosswas1.6%;thewettingtimewas95.7s;andthesuspensionratewas80.7%.Potexperimentshowedthatseed-dressingwith15to45kg/hm2oftheWPwassafeonpotatoseedlingemergence,andhadnoadverseeffectsonpotatogrowth.ThecontroleffectonpotatoVerticilliumwiltrangedfrom45.1%to47.4%.Fieldplotexperimentsdemonstratedthattreatmentswith15to45kg/hm2ofWPcouldsignificantlyreducetheoccurrenceofpotatoscab,thecontrolefficacywas72.0%andtheyieldincreaseratewas15.5%oftreatmentwith30kg/hm2WP.FieldtrialdemonstrationsindifferentregionsshowedthatthecontrolefficacyofpotatoVerticilliumwiltandpotatoscabwas50.8%to62.1%,and63.9%to65.7%,respectively,withthetreatmentof30kg/hm2WP.Meanwhile,potatoyieldsincreasedfrom14.3%to29.4%.Theresultsindicatedthat3billionCFU/gBacillusWPcouldeffectivelycontrolpotatosoil-bornediseases,andsignificantlyincreasepotatoyield,providingabasisfortheextensiveapplicationofWPinpotatoproduction.Keywords:Bacillus;wettablepowder;potatoVerticilliumwilt;potatoscab;controlefficacy我国是马铃薯第一生产大国，种植面积占世界马铃薯总面积的 25%1。随着马铃薯种植面积的扩大和连作，使得马铃薯黄萎病、疮痂病等土传病害呈现出逐年加重的趋势。马铃薯黄萎病又称“早死病”，是由轮枝菌属Verticilliumspp.真菌引起的病害，其中以大丽轮枝菌 V.dahliae 与非苜蓿轮枝菌 V.nonalfalfae为主要病原菌2-5。目前，马铃薯黄萎病在我国内蒙古、河北、甘肃、黑龙江、山西及宁夏等地均有发生4-5，轻者造成 20%30%的产量损失，严重时可达50%以上，成为制约马铃薯生产的重要因素之一3,6。马铃薯疮痂病是由链霉菌属 Streptomycesspp.引起的病害，主要危害马铃薯块茎，影响其外观和品质，降低商品价值7-8，在马铃薯主栽区普遍发生，有些地区的微型马铃薯发病率达 30%60%9。目前，对这两种土传病害的防治缺乏有效的化学农药，生物防治由于其环保无公害且满足绿色生产的要求，逐渐引起人们重视。申建芳等10通过室内盆栽试验明确特基拉芽胞杆菌 B.tequilensisXT1-4 菌株对马铃薯黄萎病的防治效果达到 60%以上；赵卫松等11以解淀粉芽胞杆菌 PHODG36菌株为有效成分，研制了浓度为 1.5109和 5.0109CFU/g 的微生物菌剂，对马铃薯黄萎病的田间防治效果分别达到 52.3%与 58.5%；李玉聪等12利用甲基营养型芽胞杆菌 B.methylotrophicus1-3-4 菌株发酵液防治马铃薯疮痂病，室内盆栽防治效果达到 48.7%。说明芽胞杆菌在防治马铃薯土传病害方面具有潜在的应用前景。以往这些报道均利用单一生防菌株防治病害，其防病机制单一，施入田间后容易受土壤性质(温湿度、pH 值)、作物生长状况及土壤中的原著菌等多种因素影响，从而造成防治效果降低或不稳定等13-15。研究表明，将不同种属或同种属生防菌菌株复配能够提高微生物杀菌剂的防治效果，如将木霉菌与芽胞杆菌混配后使用，对水稻纹枯病的田间防治效果达 53.6%，增产率达 28.9%，超过单一菌剂的防治效果和增产率(47.8%和 12.5%；32.2%和 26.2%)16。芽胞杆菌属细菌菌株 F-1 和D-3 的混合发酵液对甜瓜枯萎病的田间防治效果达到 91.8%，也高于两菌株单独使用的防治效果17。有关生防菌复配防治马铃薯土传病害的研究报道较少，因此本研究拟将解淀粉芽胞杆菌PHODG36 菌株和枯草芽胞杆菌 HMB26553 菌株复配，通过对润湿剂、分散剂及紫外保护剂进行No.1张晓云等:30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂的研制及其对马铃薯黄萎病和疮痂病的防治效果141筛选、用量优化，研制性能优良的芽胞杆菌可湿性粉剂，并通过温室盆栽试验评价该制剂对马铃薯黄萎病的防治效果，通过田间小区试验及田间大区示范试验评价该制剂对马铃薯黄萎病和疮痂病的防治效果，旨在为这两种土传病害的绿色防控提供新型生防产品，并为其进一步产业化提供关键技术依据。1 材料与方法 1.1 供试材料及仪器菌株及母药：枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilisHMB26553 菌株与解淀粉芽胞杆菌 B.amylolique-faciensPHODG36 菌株，均由河北省农林科学院植物保护研究所植物病害生物防治实验室分离并保存。HMB26553菌株母药(200亿CFU/g)与PHODG36菌株母药(200 亿CFU/g)为本实验室生产。供试助剂：6 种润湿剂、3 种分散剂、3 种紫外保护剂，详细信息见表 1。供试马铃薯Solanum tuberosum品种：室内盆栽试验及田间小区试验选用费乌瑞它(荷兰 15)，易感黄萎病；田间示范选用当地主栽品种兴佳 2 号。对照药剂：70%甲基硫菌灵可湿性粉剂(thiophanate-methyl，WP)和 3%中生菌素可湿性粉剂(zhongshengmycin，WP)分别由青岛凯源祥化工有限公司和深圳诺普信农化股份有限公司生产；滑石粉(400 目，粒径 38m)由海城市华洋滑石产品有限公司生产。供试病原菌：马铃薯黄萎菌 VD-P6 菌株，由本实验室分离并保存。育苗基质：田园土、花肥与蛭石按照 1:1:1的质量比混匀作为育苗基质，用于盆栽试验。供试仪器：VH-2 型混合机(上海天阖机械设备有限公司)；QS-50 型气流粉碎机(江阴市干燥机械厂)。1.2 芽胞杆菌可湿性粉剂性能指标测定按照国家相关标准分别测定可湿性粉剂各项指标，其中芽胞含量依据行业标准 NY/T2293.1201218，采用平板菌落计数法测定；在芽胞含量测定的平板上，记录除 HMB26553 菌株与 PHODG36菌株菌落以外的杂菌数，杂菌占总菌量的百分率即为杂菌率；pH 值依据国家标准 GB/T1601199319测定；细度依据国家标准 GB/T16150199520测定；干燥减量依据行业标准 NY/T2293.12012 测定18；润湿时间依据国家标准 GB/T5451200121测定；悬浮率依据国家标准 GB/T14825200622测定。1.3 芽胞杆菌可湿性粉剂助剂的筛选1.3.1助剂与 HMB26553 菌株及 PHODG36 菌株生物相容性测定采用毒性平板法23评价助剂与2 株生防细菌的生物相容性。将供试助剂按质量分数 1%、2%、3%的质量比分别与 LB 培养基混合，制成固体培养基平板，将 HMB26553 菌株与表 1 供试助剂信息表Table 1 The information of tested adjuvants助剂Adjuvant用途Usage生产厂家Manufacturer助剂Adjuvant用途Usage生产厂家Manufacturer十二烷基苯磺酸钠Sodiumdodecylbenzenesulfonate(SDBS)润湿剂Wettingagent山东隆汇化工有限公司ShandongLonghuiChemicalCo.,Ltd.亚甲基双萘磺酸钠Sodiumsaltofpolynaphthalenesulphonicacid(NNO)分散剂Dispersant山东优索化工科技有限公司ShandongYousuoChemicalTechnologyCo.,Ltd.拉开粉Butylnaphthalene-1-sulfonate,sodium(BX)润湿剂Wettingagent绍兴浙创化工有限公司ShaoxingZhechuangChemicalCo.,Ltd.聚萘甲醛磺酸钠盐Sodiumpoly(naphthaleneformaldehyde)sulfonate(MF)分散剂Dispersant山东优索化工科技有限公司ShandongYousuoChemicalTechnologyCo.,Ltd.Berol790A润湿剂Wettingagent南京捷润科技有限公司NanjingJierunSci.Tech.Co.,Ltd.MorwetD-425分散剂Dispersant南京捷润科技有限公司NanjingJierunSci.Tech.Co.,Ltd.SP-2846BW润湿剂Wettingagent江苏擎宇化工科技有限公司JiangsuSinvoChemS&TCo.,Ltd.荧光素钠Fluoresceinsodium紫外保护剂UV-protectiveagent天津拉斯维特化工贸易有限公司TianjinLasiweiteChemicalTradeCo.,Ltd.GY-W04润湿剂Wettingagent北京广源益农化学有限责任公司BeijingGrandAgroChemCo.,Ltd.糊精Dextrin紫外保护剂UV-protectiveagent上海源叶生物科技有限公司ShanghaiYuanyeBiotechnologyCo.,Ltd.LT-569润湿剂Wettingagent深圳市朗钛生物科技有限公司ShenzhenLangtaiBiotechnologyCo.,Ltd.抗坏血酸Ascorbicacid紫外保护剂UV-protectiveagent山东德彦化工有限公司ShandongDeyanChemicalCo.,Ltd.142农药学学报Vol.25PHODG36 菌株划线接种于含有不同助剂的平板上，于 37 条件下恒温培养 12h 后观察其生长情况。每浓度处理重复 3 次，以不添加助剂的LB 固体培养基平板作为对照。1.3.2润湿剂、分散剂种类及用量的优化在m(HMB26553 菌株母药):m(PHODG36 菌株母药)=1:1 混合物中，加入不同种类及比例的润湿剂与分散剂，用滑石粉补足至 100%，制得不同可湿性粉剂，以润湿时间与悬浮率为评价指标，筛选润湿剂与分散剂种类并优化其用量。1.3.3紫外保护剂的筛选在母药中加入筛选出的润湿剂与分散剂，再加入质量分数为 1%的不同紫外保护剂，用滑石粉补足至 100%，制得不同可湿性粉剂。用无菌水将其系列梯度稀释后涂布于 LB 平板上，在距离紫外灯(254nm,20W)40cm处分别照射 12 和 24h 后，记录菌落数并计算芽胞存活率24。以不加紫外保护剂作为对照，每个处理重复 3次。1.4 芽胞杆菌可湿性粉剂的加工在母药中加入优化筛选出的润湿剂、分散剂及紫外保护剂，用滑石粉补足至 100%，经混合机混匀后，用气流粉碎机粉碎，制得芽胞杆菌可湿性粉剂，并进行质量检测。1.5 芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯生长的影响参考赵卫松等11的方法采用温室盆栽试验评价可湿性粉剂不同用量对马铃薯生长的影响。将健康马铃薯种薯切成 3550g 的薯块(12 芽眼/块)置于塑料薄膜上，在薯块表面撒上芽胞杆菌可湿性粉剂，翻动搅拌使薯块表面着药均匀后种植于装有育苗基质的花盆中(直径 16cm，深13cm)，在温室中进行培养。试验设置芽胞杆菌可湿性粉剂 15、30 和 45kg/hm23 个剂量，每处理重复 3 次，每重复种植 6 盆，每盆 2 块种薯。按生产中马铃薯种薯(切好的薯块)约 2250kg/hm2的用量计算盆栽试验的用药量。以滑石粉 45kg 拌种处理作为空白对照(CK)。播种 30d 后调查各处理出苗数量，按公式(1)和(2)计算出苗率；40d 后调查马铃薯植株株高，评价不同剂量处理对马铃薯株高的影响。Er/%=(Es/12)100(1)式中：Er为出苗率；Es为出苗数量。Cr/%=(Tr/Br)100(2)式中：Cr为校正出苗率；Tr为处理的出苗率；Br为空白对照的出苗率。1.6 芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯黄萎病防治效果的温室评价采用伤根接种法人工接种马铃薯黄萎菌，评价芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯黄萎病的防治效果。将保存的马铃薯黄萎病菌 VD-P6 菌株在 PDA平板上活化培养 6d 后，打取直径 6mm 的菌饼，挑取 56 块菌饼接种至装有 200mLPDB 培养液(马铃薯 200g、葡萄糖 20g 和水 1000mL)的三角瓶中，于 25、180r/min 条件下摇培 67d，镜检观察待孢子量达到 108个孢子/mL 时，备用。待按 1.5 节方法调查完马铃薯株高后，在种植马铃薯的花盆底部约 2cm 处用壁纸刀横切一圈，置于装有马铃薯黄萎病菌孢子悬浮液(107个孢子/mL)的育苗盒中浸泡 30min 取出，继续培养 21d 后调查马铃薯黄萎病发生情况。病株病级划分按照 5 级分级标准 1 6：0 级，健康植株，叶片无症状；1 级，25%以下叶片发病的植株，叶片出现淡黄色或呈不规则形的黄色病斑；2 级，25%50%叶片发病的植株，病斑颜色大部分变成黄色或黄褐色，叶片边缘上卷略有干枯；3 级，50%75%叶片发病的植株，少数叶片凋落；4 级，75%以上叶片发病的植株，叶片脱落或植株枯死。按照公式(3)和(4)计算病情指数和防治效果。Di=(DgDn)/(4Tn)100(3)式中：Di为病情指数；Dg为病级；Dn为相应病级株数；Tn为总株数。Ce/%=(CdTd)/Cd100(4)式中：Ce为防治效果；Cd为对照病情指数；Td为处理病情指数。1.7 芽胞杆菌可湿性粉剂在马铃薯上应用效果的田间小区试验评价在河北省承德市围场满族蒙古族自治县城子乡桃山村开展田间小区试验，评价芽胞杆菌可湿性粉剂 15、30 和 45kg/hm2拌种在马铃薯上的应用效果。芽胞杆菌可湿性粉剂拌种方法同 1.5 节。以 70%甲基硫菌灵可湿性粉剂 1.5kg、3%中生菌素可湿性粉剂 1.5kg 与滑石粉 42kg 混匀后拌种处理作为化学药剂对照，以滑石粉 45kg 拌种处理作为空白对照(CK)。每个处理重复 4 次，共 20 个小区，随机排列。小区面积为 20m2(1m20m)。每小区连续调查 30 株马铃薯植株的黄萎病发生情况，调查方法、病情指数及防治效果计算方法同 1.6 节。No.1张晓云等:30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂的研制及其对马铃薯黄萎病和疮痂病的防治效果143在马铃薯收获期，定点取样进行测产并调查块茎疮痂病的发病情况。测产时按照每小区选定2m2面积的马铃薯植株作为样点，将其中植株全部挖出，记录马铃薯薯块总质量，按照公式(5)(8)计算产量、增产率、疮痂病发病率及防治效果。Yi/(kg/hm2)=Ys333.515(5)式中：Yi为产量；Ys为测产样点薯块产量。Yr/%=(YtYc)/Yc100(6)式中：Yr为增产率；Yt为处理产量，kg/hm2；Yc为空白对照产量，kg/hm2。Id/%=(Dp/Hp)100(7)式中：Id为发病率；Dp为发病马铃薯块茎数；Hp为收获总马铃薯块茎数。Pe/%=(CiTi)/Ci100(8)式中：Pe为防治效果；Ci为对照发病率；Ti为处理发病率。1.8 芽胞杆菌可湿性粉剂在马铃薯上应用效果的田间示范试验评价在田间小区试验明确芽胞杆菌可湿性粉剂最佳用量的基础上，在河北省承德市围场满族蒙古族自治县城子乡桃山村、十九号村、拔上村及御道口镇桦树林村开展可湿性粉剂拌种处理在马铃薯上的防病增产效果的田间示范试验。设置 2 个处理：处理 1 为可湿性粉剂拌种处理，处理 2 为化学药剂对照处理(同 1.7 节)。每处理示范面积10hm2。在马铃薯黄萎病发生高峰期调查黄萎病发病情况，计算病情指数；在马铃薯收获期，测产并调查薯块疮痂病发生情况，计算发病率、防病效果和增产率。1.9 数据统计与分析采用 Excel2010 进行数据整理及作图。利用SPSS19.0 软件，采用邓肯氏新复极差法与独立样本 t 检验进行差异显著性分析。2 结果与分析 2.1 不同助剂与 HMB26553 菌株及 PHODG36菌株的生物相容性结果(表 2)表明，不同助剂与两菌株的相容性存在差异。在试验浓度范围内(质量分数 1%3%)，除润湿剂 LT-569 与两菌株相容性较好外，其余 5 种润湿剂均表现为完全抑制生长；分散剂D-425 完全抑制两菌株的生长，NNO 与 MF 在 1%与 2%剂量下，与两菌株的相容性较好，3%剂量下则有抑制作用；紫外保护剂荧光素钠完全抑制两菌株生长，糊精与抗坏血酸在 1%、2%与3%剂量下，与两菌株的相容性较好。因此，选择润湿剂 LT-569、分散剂 NNO 与 MF、紫外保护剂糊精与抗坏血酸进行下一步试验。表 2 不同助剂与 HMB26553 菌株和 PHODG36 菌株的生物相容性Table 2 Bio-compatibility evaluation between different adjuvants and B.subtilis HMB26553 orB.amyloliquefaciens PHODG36助剂Adjuvant质量分数Massfraction/%HMB26553PHODG36123123润湿剂WettingagentLT-569+GY-W04BXSDBSSP-2846BW790A分散剂DispersantD-425NNO+MF+紫外保护剂UV-protectiveagent荧光素钠Fluoresceinsodium糊精Dextrin+抗坏血酸Ascorbicacid+注：“+”表示供试芽胞杆菌菌株生长正常；“”表示供试芽胞杆菌生长受到完全抑制；“”表示供试芽胞杆菌生长受到部分抑制。Note:+indicatesthetestedBacillusisolategrowsnormally;indicatesthegrowthofthetestedBacillusisolateiscompletelyinhibited;indicatesthegrowthofthetestedBacillusisolateispartiallyinhibited.144农药学学报Vol.25 2.2 润湿剂、分散剂组合及用量的优化在母药中加入不同组合及比例的润湿剂与分散剂后，对可湿性粉剂的润湿时间及悬浮率有不同程度的影响(表 3)。其中在组合 4 中，当润湿剂 LT-569 添加量（质量分数，下同）为 1%、MF为 2%时，可湿性粉剂的润湿时间最短，为 93.7s，悬浮率为 80.5%；在组合 2 中，当润湿剂 LT-569质量分数为 1%、NNO 质量分数为 2%时，可湿性粉剂的悬浮率最高，为 82.5%，但其润湿时间较长，为 105.3s。比较发现，组合 2 与组合 4 的悬浮率无显著性差异，因此确定润湿分散剂的最佳组合配比(质量分数)为：润湿剂 LT-569 添加量为 1%、分散剂 MF 添加量为 2%。2.3 紫外保护剂的筛选以芽胞存活率为指标，分别评价糊精与抗坏血酸对可湿性粉剂芽胞存活率的影响(图 1)。经紫外线照射 12h 后，添加糊精与抗坏血酸制剂中的芽胞存活率与对照相比均无显著性差异；但经紫外照射 24h 后，以抗坏血酸作为保护剂时，可湿性粉剂中芽胞存活率显著高于糊精与对照，达到41.7%，比对照提高 69.6%。因此选择抗坏血酸作为该可湿性粉剂的紫外保护剂。2.4 芽胞杆菌可湿性粉剂的质量检测根据 2.2 节和 2.3 节的研究结果，确定了 30 亿CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂的配方为(质量分数)：HMB26553 菌株母药 10%、PHODG36 菌株母药10%、润湿剂 LT-5691%、分散剂 MF2%、紫外保护剂抗坏血酸 1%，滑石粉 76%。按照相关标准对制得的芽胞杆菌可湿性粉剂进行质量检测，结果(表 4)表明：其芽胞数量为 37.6 亿 CFU/g，杂菌率为 2.8%，pH 值为 7.8，细度为 98.2%，干燥减量为 1.6%，润湿时间为 95.7s，悬浮率为80.7%，各项物理指标均达可湿性粉剂的相关行业标准25。2.5 芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯生长的影响盆栽试验结果(图 2)表明：30亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂 1545kg/hm2拌种处理马铃薯，播种 30d 时，可湿性粉剂处理的校正出苗率与空白对照相比差异均不显著；播种 40d 时，各处理株高间差异不显著。该结果说明应用 30亿 CFU/g芽胞杆菌可湿性粉剂 1545kg/hm2拌种处理对马铃薯出苗和生长是安全的。表 3 润湿剂及分散剂最佳用量筛选Table 3 Optimal dosage screening of wetting anddispersing agent编号Number添加量(质量分数)Dosage(massfraction)/%润湿时间Wettingtime/s悬浮率Suspensionrate/%LT-569NNOMF1110112.31.3c80.41.6ab2120105.32.0d82.50.8a310199.71.8e81.31.6ab410293.71.5f80.51.3ab5210128.02.3b77.31.2bc6220123.01.2b76.51.7cd7201113.01.2c74.71.5cde820295.31.9ef74.51.6cde9310128.02.1b72.61.0de10320144.31.2a71.10.6e11301123.02.5b74.40.9cde1230295.00.6ef72.50.7de注：表中数据为平均值标准误差，同列数据后不同小写字母表示经 Duncan 氏新复极差法检验在 0.05 水平上差异显著。Note:ThedataweremeanSE.Thedifferentlowercaseinthesamecolumnindicatedsignificantdifferenceat0.05levelbyDuncansnewmultiplerangetest.表 4 芽胞杆菌可湿性粉剂主要指标检测结果Table 4 The main indexes of Bacillus WP指标Index行业标准值25Industrystandards25实际测定值Actualvalue芽胞量Sporecontent/(108CFU/g)37.60.6杂菌率Rateofmixedbacteria/%32.80.0pH值pHvalue5.08.07.80.0细度Fineness(44m)/%9098.20.4干燥减量Lossondrying/%61.60.2润湿时间Wettingtime/s18095.70.9悬浮率Suspensionrate/%7580.70.8注：表中数据为平均值标准误差。Note:ThedatawereshownasmeanSE.706050403020100Survival rate of spore/%糊精 DextrinCKabbaaa抗坏血酸 Ascorbic acid处理 Treatment12 h24 h芽胞存活率注：图中数据为平均值标准误差。不同小写字母表示经Duncan 氏新复极差法检验在 0.05 水平上差异显著。Note:ThedataweremeanSE.Thedifferentlowercaseindicatedsignificantdifferenceat0.05levelbyDuncansnewmultiplerangetest.图 1 紫外保护剂对芽胞杆菌可湿性粉剂芽胞存活率的影响Fig.1 Effects of UV-protective agents on sporesurvival rate of Bacillus WPNo.1张晓云等:30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂的研制及其对马铃薯黄萎病和疮痂病的防治效果145 2.6 盆栽试验评价芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯黄萎病的防治效果试验结果(图 3)表明：30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯黄萎病具有较好的防治效果，种薯经可湿性粉剂 1545kg/hm2拌种处理后，马铃薯黄萎病的病情指数均显著低于空白对照(33.1)，防治效果介于 45.1%47.4%之间。2.7 田间小区试验评价芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯的防病增产效果经调查，在桃山村小区试验地块未发生马铃薯黄萎病，但有马铃薯疮痂病的发生(表 5)。经30亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂不同剂量拌种处理后，马铃薯疮痂病的发病率均显著低于空白对照。15 与 45kg/hm2拌种处理后，马铃薯疮痂病发病率与化学药剂对照差异不显著，防治效果分别为 50.6%与 52.5%；30kg/hm2拌种处理后，马铃薯疮痂病发病率(7.2%)显著低于化学药剂对照(11.1%)，防治效果达 72.0%。在产量方面，1545kg/hm2拌种处理后马铃薯产量均高于空白对照，增产率为 6.1%15.5%，其中 30kg/hm2拌种处理增产率最高，为 15.5%(表 5)。因此选择可湿性粉剂 30kg/hm2拌种作为田间示范试验用药量。2.8 田间示范试验评价芽胞杆菌可湿性粉剂在马铃薯上的应用效果在桃山村与拔上村两地的示范结果表明，与化学药剂对照相比，30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂 30kg/hm2拌种能够显著降低马铃薯黄萎病的病情指数，防治效果分别达到 62.1%与 50.8%；在产量方面，桃山村的可湿性粉剂处理显著高于化学药剂对照，增产率达到 28.1%；拨上村可湿性粉剂处理与化学药剂对照无显著性差异，但产量仍明显高于化学药剂对照，增产率为 14.3%(表 6)。在十九号村与桦树林村两地的示范结果表明，与化学药剂对照相比，可湿性粉剂 30kg/hm2表 5 田间小区试验中 30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯疮痂病及产量的影响Table 5 The effect of 3 billion CFU/g Bacillus WP on the occurrence of potato scab and the potato yield in field plot trial处理Treatment施药剂量Dosage/(kg/hm2)发病率Incidence/%防治效果Controlefficacy/%产量Yield/(kg/hm2)增产率Yield-increaserate/%空白对照CK4526.51.0a51476.31395.7b化学药剂Chemical4511.11.8b56.858631.62541.7ab13.9芽胞杆菌可湿性粉剂BacillusWP1512.70.5b50.656964.41123.0ab10.7307.20.6c72.059465.33975.3a15.54512.20.6b52.554602.4918.1ab6.1注：表中数据为平均值标准误差，同列数据后不同小写字母表示经 Duncan 氏新复极差法检验在 0.05 水平上差异显著。化学药剂为 70%甲基硫菌灵可湿性粉剂 1.5kg、3%中生菌素可湿性粉剂 1.5kg 与滑石粉 42kg 混匀。Note:ThedatawereshownasmeanSE.Thedifferentlowercaseinthesamecolumnindicatedsignificantdifferenceat0.05levelbyDuncansnewmultiplerangetest.Chemicalisthemixtureof70%thiophanate-methylWP(1.5kg),3%zhongshengmycinWP(1.5kg)andtalcumpowder(42kg).100403020100806040200CKaaaaaaaa校正出苗率Corrected emergence rate/%株高 Plant height/cm校正出苗率 Corrected emergence rate株高 Plant height153045用量 Dosage/(kg/hm2)注：图中数据为平均值标准误差。不同小写字母表示经Duncan 氏新复极差法检验在 0.05 水平上差异显著。Note:ThedatawereshownasmeanSE.Thedifferentlowercaseindicatedsignificantdifferenceat0.05levelbyDuncansnewmultiplerangetest.图 2 30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂不同用量对马铃薯出苗及株高的影响Fig.2 Effects of different doses of 3 billion CFU/gBacillus WP on potato emergence and plant growth454035302520151054243444546474849500CKabbb病情指数 Disease index防效 Control efficacy/%病情指数 Disease index防效 Control efficacy处理 Treatment/(kg/hm2)153045注：图中数据为平均值标准误差。不同小写字母表示经Duncan 氏新复极差法检验在 0.05 水平上差异显著。Note:ThedatawereshownasmeanSE.Thedifferentlowercaseindicatedsignificantdifferenceat0.05levelbyDuncansnewmultiplerangetest.图 3 盆栽试验中 30 亿 CFU/g 芽胞杆菌可湿性粉剂对马铃薯黄萎病的防治效果Fig.3 Control efficacy of 3 billion CFU/g Bacillus WP onpotato Vert