SN∕T 2231-2021（代替SN∕T 2231-2008） 出口食品中呋虫胺及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法.pdf

I C S6 7.0 4 0C C SX0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T2 2 3 12 0 2 1代替S N/T 2 2 3 12 0 0 8 出口食品中呋虫胺及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法D e t e r m i n a t i o n o f d i n o t e f u r a n a n d i t s m e t a b o l i t e s r e d u c e s i n f o o d s f o r e x p o r tH P L C-M S/M S m e t h o d2 0 2 1-1 1-2 2发布2 0 2 2-0 6-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言 本文件按照G B/T 1.1-2 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规则起草。本文件代替S N/T 2 2 3 12 0 0 8 进出口食品中呋虫胺残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法,与S N/T 2 2 3 12 0 0 8相比,主要技术变化如下:增加了两种呋虫胺代谢物残留量的检测;扩大了适用范围,检测基质由9种增加至1 9种;改进了样品的提取和净化方法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:青岛海关技术中心、中国检验检疫科学研究院、山东杰诺检测服务有限公司。本文件主要起草人:孙利、张禧庆、王建华、池连学、冷蕾,李立。本文件所代替标准的历次版本发布情况为:S N/T 2 2 3 12 0 0 8。S N/T2 2 3 12 0 2 1出口食品中呋虫胺及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法1 范围 本文件规定了出口食品中呋虫胺及其代谢物1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲和1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍残留量检测和确证方法。本文件适用于小麦、大米、玉米、花生、大葱、圆葱、大头菜、青刀豆、菠菜、紫苏叶、马铃薯、芋头、胡萝卜、苹果、鸡肉、猪肉、马哈鱼、鲅鱼、牛奶中呋虫胺及其代谢物1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲和1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍残留量的测定和确证。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B 2 7 6 32 0 1 9 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法。3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法提要 试样用乙腈超声提取,提取液经C 1 8 固相萃取(S P E)小柱净化,初始比例流动相定容,液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。5 试剂和材料 除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为G B/T 6 6 8 2 规定的一级水。5.1 乙腈:色谱纯。5.2 正己烷:色谱纯。5.3 甲酸:色谱纯。5.4 针式滤器:亲水P T F E膜,0.2 2 m。5.5 0.1%甲酸乙腈溶液:取1.0 mL甲酸(5.3)至1 0 0 0 mL容量瓶中,并用乙腈(5.1)定容至刻度,充分混匀,备用。5.6 0.1%甲酸水溶液:取1.0 mL甲酸(5.3),至1 0 0 0 mL容量瓶中,并用水定容至刻度,充分混匀,备用。5.7 定容液:分别吸取0.1%甲酸乙腈溶液(5.5)和0.1%甲酸水溶液(5.6)按照体积比5:9 5混合均1S N/T2 2 3 12 0 2 1匀,备用。5.8 C 1 8 S P E柱:5 0 0 m g,3 mL,或相当。使用前需用3.0 mL乙腈,3.0 mL水,3.0 mL提取液活化,保持柱体湿润。5.9 呋虫胺标准物质(D i n o t e f u r a n,C A S登记号:1 6 5 2 5 2-7 0-0,分子式:C 7 H 1 4 N 4 O 4):纯度9 9.9%。5.1 0 1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲标准物质(D i n o t e f u r a n m e t a b o l i t e U F,C A S登记号:4 5 7 6 1 4-3 4-5,分子式:C 7 H 1 4 N 2 O 2):纯度9 9.9%。5.1 1 1-甲 基-3-(四 氢-3-呋 喃 甲 基)二 氢 胍 标 准 物 质(D i n o t e f u r a n m e t a b o l i t e D N,C A S登 记 号:4 5 7 6 1 4-3 2-3,分子式:C 7 H 1 5 N 3 O):纯度9 7.6%。5.1 2 标准储备溶液:分别精确称取适量三种标准物质(精确至0.1 m g)于5 0 mL容量瓶中,用乙腈配制成2 0 0 g/mL的标准储备液,0 4 保存,可使用1 年。5.1 3 标准工作溶液:根据需要用定容液(5.7)稀释配制成适当浓度的标准工作液,现用现配。5.1 4 乙腈饱和的正己烷溶液:分别取适量等体积的乙腈和正己烷,混合均匀,静置分层后,上层溶液即为乙腈饱和的正己烷溶液。6 仪器和设备6.1 超高效液相色谱-串联质谱仪(U P L C-MS-MS):配有电喷雾离子源。6.2 分析天平:感量分别为1 m g和 0.1 m g。6.3 超声波清洗器。6.4 涡旋混合器。6.5 固相萃取装置,含真空泵。6.6 比色管:2 5 mL。6.7 移液器:1 0 0 L 1 0 0 0L。6.8 聚丙烯离心管:5 0 mL和2.0 mL。6.9 低速冷冻离心机:5 5 0 0 r/m i n,可控温4。6.1 0 高速离心机:1 0 0 0 0 r/m i n。6.1 1 刻度定容管:3.0 mL 或5.0 mL,精度为0.1 mL。7 试样的制备与保存7.1 制样要求 制样操作过程中必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7.2 样品制备7.2.1 将小麦、大米、玉米、花生样品充分搅拌,均质,分出0.5 k g作为试样,置于清洁样品容器中,密封,并做好标记。将制备好的试样于0 4 冷藏保存。7.2.2 将大葱、圆葱、大头菜、青刀豆、菠菜、紫苏叶、马铃薯、芋头、胡萝卜、苹果、鸡肉、猪肉、马哈鱼、鲅鱼、牛奶样品,按照 G B 2 7 6 3 附录A 中食品类别及测定部位进行制样处理。样品置于清洁样品容器中,密封,并做好标记。将制备好的试样于-1 8 冷冻保存。2S N/T2 2 3 12 0 2 18 测定步骤8.1 提取8.1.1 小麦、大米、玉米、花生样品 称取5 g样品(精确至0.0 1 g)至5 0 mL离心管中,加8.0 mL水浸润3 0 m i n,加入1 0 mL乙腈(5.1),涡旋混合2 m i n,超声提取1 5 m i n,于4 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,上清液转移至2 5 mL比色管(6.6)中,残留物再用1 0 mL乙腈(5.1),涡旋混合2 m i n,于4 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,合并提取液于2 5 m L比色管(6.6)中,并用乙腈(5.1)定容至刻度,混合均匀,所得提取液待净化。8.1.2 大葱、圆葱、大头菜、青刀豆、菠菜、紫苏叶、马铃薯、芋头、胡萝卜、苹果样品 称取5 g样品(精确至0.0 1 g)至5 0 mL离心管中,加入1 0 mL乙腈(5.1),涡旋混合2 m i n,超声提取1 5 m i n,于4 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,上清液转移至2 5 mL比色管(6.6)中,残留物再用1 0 mL乙腈(5.1),涡旋混合2 m i n,于4 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,合并提取液于2 5 mL比色管(6.6)中,并用乙腈(5.1)定容至刻度,混合均匀,所得提取液待净化。8.1.3 鸡肉、猪肉、马哈鱼、鲅鱼、牛奶样品 称取5 g样品(精确至0.0 1 g)至5 0 mL离心管中,加入1 0 mL乙腈(5.1),迅速涡旋混合2 m i n,超声提取1 5 m i n,于4 下4 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,上清液转移至2 5 mL比色管(6.6)中,残留物再用1 0 m L乙腈(5.1),涡旋混合2 m i n,于4 下4 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,合并提取液于2 5 mL比色管(6.6)中,并用乙腈(5.1)定容至刻度,混合均匀,所得提取液待净化。8.2 净化8.2.1 小麦、大米、玉米、花生、鸡肉、猪肉、马哈鱼、鲅鱼、牛奶样品吸取7.1.1和7.1.3 提取液2.0 mL,直接过预先处理好的C1 8 S P E柱(5.8),直接收集。准确吸取1.0 m L 净化液于刻度定容管(6.1 2)中,4 0 水浴氮气吹至近干,用定容液(5.7)定容至1.0 mL 刻度,混匀后转移至2.0 mL塑料离心管中,加入1.0 mL乙腈饱和正己烷溶液(5.1 4),涡旋震荡1 m i n,于1 0 0 0 0 r/m i n离心2 m i n,吸取下层溶液,过针式滤器(5.4),供上机检测。8.2.2 大葱、圆葱、大头菜、青刀豆、菠菜、紫苏叶、马铃薯、芋头、胡萝卜、苹果样品吸取7.1.2提取液2.0 mL,直接过预先处理好的C1 8 S P E柱(5.8),直接收集。准确吸取1.0 mL 净化液于刻度定容管(6.1 2)中,4 0 水浴氮气吹至近干,用定容液(5.7)定容至1.0 mL 刻度,混匀后过针式滤器(5.4),供上机检测。8.3 测定8.3.1 液相色谱参考条件液相色谱参考以下条件:a)色谱柱:高强度硅胶键合C 1 8液相色谱柱(1.8 m,2.1 mm1 0 0 mm),或相当者。b)流动相:A:含0.1%甲酸的水溶液(5.6);B:含0.1%甲酸的乙腈(5.5),梯度洗脱条件见表1。c)流速:0.3 0 mL/m i n;3S N/T2 2 3 12 0 2 1d)柱温:3 5;e)进样量:1.0 L。表1 梯度洗脱条件时间(m i n)流速(m L/m i n)%A%B曲线i n i t i a l0.3 09 5560.60.3 09 5564.00.3 059 566.00.3 059 566.10.3 09 5518.00.3 09 5518.3.2 质谱参考条件质谱参考以下条件:a)离子化模式:电喷雾电离正离子模式(E S I+);b)质谱扫描方式:多反应监测(MRM);c)分辨率:单位分辨率;d)监测离子和定量离子等详细信息参见附录A。8.3.3 定性测定 在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间与标准溶液的保留时间偏差在 5%之内,且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,其偏差不超过表2规定的范围,则可确定为样品中存在对应的待测物。表2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度5 0%2 0%5 0%1 0%2 0%1 0%允许的相对偏差2 0%2 5%3 0%5 0%8.3.4 定量测定 对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定,试样中目标物的响应值应在仪器检测的线性范围内,若其响应值超过线性范围,调整定容体积使之满足测定要求。在8.3.1、8.3.2仪器条件下,呋虫胺及两种代谢物标准溶液的保留时间以及多反应监测(MRM)色谱图参见附录B中图B.1。8.4 空白试验 除不称取试样外,按照上述步骤进行测定。9 结果计算 利用数据处理软件计算或按公式(1)计算试样中待测物呋虫胺或代谢物的残留量,4S N/T2 2 3 12 0 2 1Xi=C siAiA siVm1 0 0 01 0 0 0(1)式中:Xi 试样中被测物残留量,单位为毫克每千克(m g/k g);C si 标准工作溶液中被测物的浓度,单位为毫克每升(m g/L);Ai 试样溶液中被测物的色谱峰面积;A si 标准工作溶液中被测物的色谱峰面积;V 样液最终定容体积,单位为毫升(mL);m 样液相当的试样质量,单位为克(g);计算结果应扣除空白值,保留二位有效数字,含量超过1 m g/k g,保留三位有效数字。1 0 定量限和回收率1 0.1 定量限呋虫胺、1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲和1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍的定量限均为0.0 0 5 m g/k g。1 0.2 回收率与精密度呋虫胺、1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲和1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍的回收率范围与精密度参见附录C中表C.1。5S N/T2 2 3 12 0 2 1附 录 A(资料性)参考质谱条件1)A.1 质谱参考条件如下:a)毛细管电压:0.6 k V;b)离子源温度:1 5 0;c)脱溶剂气:氮气;d)脱溶剂气温度:4 0 0;e)脱溶剂气流速:1 0 0 0 L/h;f)碰撞气:氩气;g)其他质谱参数见表A.1。表A.1 主要参考质谱参数化合物母离子(m/z)子离子(m/z)锥孔电压(V o l t)碰撞能量(e v)呋虫胺2 0 3.11 1 4*3 51 02 0 3.11 2 93 51 01-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲1 5 9.16 73 51 61 5 9.11 0 2*3 51 01-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍1 5 8.15 73 51 51 5 8.11 0 2*3 51 0 注:附表A.1中带*的离子为定量离子;对于不同质谱仪器,仪器参数可能存在差异,测定前应将质谱参数优化到最佳。1)商业性声明:附录A所列参考质谱条件是在W a t e r s I-C l a s s/X e v o TQ-S型液质联用仪上完成的,此处列出试验用仪器型号仅为提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。6S N/T2 2 3 12 0 2 1附 录 B(资料性)多反应监测(MRM)色谱图 图B.1B.3给出了呋虫胺、1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍和1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲标准溶液的典型多反应监测(MRM)色谱图。图B.1 呋虫胺的标准溶液(0.0 0 2 m g/L,进样1.0 L)典型多反应监测(MRM)色谱图图B.2 1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍(的标准溶液(0.0 0 2 m g/L,进样1.0 L)典型多反应监测(MRM)色谱图7S N/T2 2 3 12 0 2 1图B.3 1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲(的标准溶液(0.0 0 2 m g/L,进样1.0 L)典型多反应监测(MRM)色谱图8S N/T2 2 3 12 0 2 1附 录C(资料性)食品中呋虫胺及其两种代谢物添加回收率和精密度C.1 表C.1列出了食品中呋虫胺、1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍和1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲的回收率范围与精密度。表C.1 食品中呋虫胺及其两种代谢物添加回收率和精密度样品基质添加水平/(m g/k g)1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲呋虫胺回收率范围/%R S D/%回收率范围/%R S D/%回收率范围/%R S D/%小麦0.0 0 58 3.69 5.85.18 3.79 0.72.79 0.11 0 3.74.50.0 17 8.79 1.66.38 2.28 9.63.18 9.41 0 1.04.90.0 58 3.01 0 0.168 4.99 1.42.99 3.51 0 5.54.6玉米0.0 0 58 2.51 0 1.47.18 2.39 2.34.28 8.81 0 3.15.60.0 17 3.38 1.848 2.88 8.42.79 3.81 0 1.73.30.0 58 3.18 8.52.48 0.99 5.75.69 2.51 0 1.03.2大米0.0 0 57 3.38 6.85.48 1.29 1.34.28 9.61 0 6.76.90.0 17 2.38 0.84.77 8.58 9.158 8.51 0 6.76.12.07 5.48 3.03.47 2.29 1.98.99 7.71 0 2.41.7花生0.0 0 58 4.09 5.74.37 9.28 6.83.79 2.01 0 0.13.50.0 17 4.18 9.26.97 6.68 9.55.49 2.41 0 3.75.20.0 57 9.49 1.22.88 5.29 5.42.99 5.21 0 1.52.4胡萝卜0.0 0 57 6.28 6.94.87 8.39 7.18.49 0.91 0 2.43.90.0 17 3.37 9.72.98 2.69 2.74.58 8.71 0 1.04.61.08 5.69 9.55.58 4.39 3.84.29 1.61 0 9.26.2青刀豆0.0 0 58 8.31 0 5.86.38 6.09 8.55.29 0.41 0 4.54.90.0 18 1.59 3.04.67 7.79 0.45.69 1.31 0 0.33.60.0 58 4.99 3.73.78 2.59 1.03.39 1.79 9.43.4大葱0.0 0 57 7.19 8.59.38 0.98 9.33.59 6.51 0 6.43.90.0 18 5.59 6.64.17 9.01 0 5.69.88 2.89 7.75.44.09 5.11 0 2.22.78 0.89 7.668 6.81 0 6.37.9圆葱0.0 0 58 2.89 8.36.77 5.49 2.16.79 2.49 7.52.20.0 18 6.49 8.75.87 9.69 3.16.69 2.41 0 5.250.0 58 6.19 5.83.97 8.51 0 1.18.79 0.31 0 4.45.79S N/T2 2 3 12 0 2 1表C.1 食品中呋虫胺及其两种代谢物添加回收率和精密度(续)样品基质添加水平/(m g/k g)1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲呋虫胺回收率范围/%R S D/%回收率范围/%R S D/%回收率范围/%R S D/%芋头0.0 0 57 1.88 6.37.77 4.79 1.77.88 9.71 0 1.94.70.0 17 7.39 6.18.18 2.99 4.94.98 5.71 0 0.45.60.0 57 5.28 9.46.48 2.19 1.24.49 2.41 0 3.33.8马铃薯0.0 0 58 0.98 5.42.08 6.09 5.54.19 1.31 0 1.34.30.0 18 2.09 3.84.67 9.99 0.64.98 3.81 0 5.180.27 9.89 2.45.58 2.69 9.77.69 2.71 0 3.85.3大头菜0.0 0 58 6.19 8.05.57 6.29 2.06.79 2.11 0 8.66.10.0 18 1.99 6.06.38 1.29 4.85.89 0.71 0 3.95.12.09 1.99 6.927 8.49 1.36.48 9.61 0 2.14.3苹果0.0 0 58 4.09 5.85.68 0.59 2.85.88 3.89 8.45.30.0 18 0.09 6.86.67 3.89 2.28.18 6.61 0 3.36.52.08 1.19 4.66.37 8.39 1.76.49 5.81 0 4.23.1紫苏叶0.0 0 58 3.49 7.56.48 3.48 9.02.69 0.11 0 0.84.40.0 17 8.71 0 1.48.27 9.59 2.15.58 6.91 0 9.59.30.0 58 6.98 9.51.37 7.59 0.15.59 5.41 0 7.74.9菠菜0.0 0 57 9.48 7.55.48 0.59 2.96.89 1.41 0 3.24.50.0 18 4.09 7.84.98 2.89 4.44.99 2.71 0 1.33.31 5.08 3.61 0 2.44.28 8.78 9.33.19 2.29 9.22.1猪肉0.0 0 58 4.29 6.25.18 8.71 0 6.96.90.0 17 9.29 1.45.39 0.81 0 2.64.50.0 58 3.79 0.83.28 9.81 0 5.05.8鸡肉0.0 0 58 2.79 0.33.38 1.61 0 2.98.10.0 18 4.71 0 1.16.58 3.61 0 3.17.50.0 58 0.79 2.85.98 7.41 0 3.76.8马哈鱼0.0 0 57 7.49 3.06.59 1.41 0 6.56.20.0 18 3.99 6.45.59 2.41 0 3.84.10.0 57 9.78 9.64.38 7.61 0 2.76.3鲅鱼0.0 0 58 3.79 8.95.89 2.01 0 2.14.40.0 18 1.89 8.77.29 1.39 8.53.10.0 58 0.18 9.84.39 3.01 0 3.84.001S N/T2 2 3 12 0 2 1表C.1 食品中呋虫胺及其两种代谢物添加回收率和精密度(续)样品基质添加水平/(m g/k g)1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)二氢胍1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲呋虫胺回收率范围/%R S D/%回收率范围/%R S D/%回收率范围/%R S D/%牛奶0.0 0 58 2.29 2.87.88 6.41 0 1.78.40.0 18 5.49 3.45.48 6.79 4.54.50.0 58 6.49 4.52.38 7.49 7.81.611S N/T2 2 3 12 0 2 112021322T/NS中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准出口食品中呋虫胺及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法S N/T 2 2 3 12 0 2 1*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(1 0 0 0 2 3)编辑部:(0 1 0)6 5 1 9 4 2 4 2-7 5 0 9网址 www.c u s t o m s k b.c o m/b o o k中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本8 8 01 2 3 0 1/1 6 印张 字数 千字2 0 2 1年 月第一版 2 0 2 1年 月第一次印刷印数 1 *书号:1 5 5 1 7 5 定价.0 0元