DB44_T 128-2002 蝴蝶兰试管苗生产技术规程(广东省).pdf

ICS 65.020.020 805 备案号13335-23DB 广东省地方标准DB44厅128-2002蝴蝶兰试管苗生产技术规程Test-tube Plantlet Production T民h咀calSpecification of Phalaenopsis 2002-12-06 发布2002-12-06 实施广东省质量技术监督局发布DB44厅128-2002目IJ昌本标准由广东省质量技术监督局、汕头市质量技术监督局提出.本标准起草单位=汕头市农业科学研究所.本标准主要起草人=朱恤卿、李军、王细燕、捷向华、曾宝菌.DB44斤128-22蝴蝶兰试管苗生产技术规程1 范圄本标准规定了蝴蝶兰试管苗生产技术中的基本设施与技术.播神茵的生产，分生苗的生产，炼菌，瓶苗质量，包装、运输等内容.本标准适用于蝴蝶兰类包括蝴蝶兰属PhaJaenopsis、朵丽蝶兰属/Joritaenopsis等属的试管菌生产.2 术语与定义下列术语与定义适用于本标准2,t花flower是有性繁殖的器官，由花托、花尊、花瓣、葛柱等组成-2.2 属瓣I ip 位于花朵下与中尊片对生的片花瓣，形状特殊，是高度特化的花蝇，呈舌片状、唇状等，是兰花种类鉴定的一个重要标志.2.3 蕃挂column 兰科植物花的繁殖部分，也是区别兰科与其它所有科植物的主要特点.葛柱由雌雄两部分器官组成，远柱上部一个有粘性的凹陷部分.称为柱头区.顶端着生一个革路有二个花黯块，花粉块有花精囊盖罩在外面.2.4茎stem一种变态茎，茎短而肥厚，不最新芽，为生长叶片、根系和花序的重要器官-2.5根root为气生根，里困柱状，分枝少或不分枝，肉质根粗大而肥壮，大部里灰白色-2.6播种苗s倒dling也称实生苗，是指无菌条件下种子在适当培养基中发芽生长而成的苗-2.7 分生苗，冒险riclone也称组培苗、克隆苗，是利用植物细胞全能性原理，在无菌条件下将离体的植物细胞、组织或器官经过适当的培养族成的完整植株.2.8 锺代培养subculture 将培养物转移到新的培养基上继续培养的过程-2.9 灭菌steri I ization 经过高温灼烧、蒸煮或其它物理化学方法对物体或安间进行处理，使其达到无菌状态-2.10消毒disinfection用硝毒剂对外植体进行处理达到无菌的状态-2.11 试管苗test-tubeplantlet 或称姬苗.在培养瓶内生长.出报培养后具有根、茎、叶等形态特征的苗-2.12炼茵hardening为使瓶苗出瓶后能正常生长，提高成活率而采取的措施-2.13外植体explant由活体植物上切取下来以进行培养的那部分组织或器官.DB44If 128-2002 2.14原球茎prot回orm是指由胚性细胞组成的呈圆璋状的缩扭曲类似撒茎的器官-2.15用于本标准的缩写词MS:一种常用基本培养基，Murashige和Skg(1962)6-BA:6-辛基酶嘿峙.6-benzylaminopurineNAA:辈乙醋.naphthyleneaceticacid Ad:酶囔峙，Adenine CW:椰乳，coconutwater Hyponex NO.l:花宝1号.N+P+K=7+6+19.美国HyponexCorporation公司生产HgCh:氧化孟，也草草升主NaCIO:氯醋铀NaOH:氢氧化铀HC1:盐酸3 基本设施与技术3.1 基本设施设备拥有交通方便、环境晴拮、空气干惶的实验室一一化学试验室、洗搔室、灭菌室、接种室、培养室、煤苗室等z生产所需的生产设备一高压菇汽灭菌器、超挣王作台、天平、解剖镜、空调、培养架、8日咀器、培养姐、紫外辑灯、常用班璃仪器、手术刀、锤子、洒精坷等，!;J.及所需的化学试剂.3.2 常用技术3.2.1 培费基配制撞培养基的配方及所需的数量，分别加入所需的各类物质，植合后倒入煮培养基的锅中，拥入少量的蔬锢水，如艳至琼脂完全需解后，用蔬锢水定容至所需的体积，用lmol/L的HCl培植或lmol/L的NaOH禧擅调节pH值后，是热把10伽nl左右的培养基分装入三角培养姬(c lOcm.h13c时，塞上带通气孔(O.5mm.塞棉塞的撞皮塞.3.2.2 页菌【璋消毒3.2.2.1 培养基在高压藕汽灭菌器内用温热空气灭菌挂(压力o.11MPa-0.14MPa、120C-126C、15min.20min)进行灭菌.3.2.2.2 撞神工具罐子、手术刀、垫盘等接种工具在接种前可随培养基一起灭菌E罐子与手术刀在接种过程中来用酒精坷的烧或高祖灭菌器进行灭菌.3.2.2.3 外植体果用0.1咽gC12培植或5%NaCI0带掖程由处理，不同的材料采用不同的方法和不同的消毒时间-3.2.2.4其它实验室用紫外结灯盖菌z接种台、手等用75%酒精撞撞-3.2.3 接种在超串工作台上，摆肢坷接种王具，用锺于将需要接转的材料拿出后放在垫盘上，用锯于和手术刀将材料进行适当的切割，再用罐子将切割好的材料插植到新的培养基中.操作时要注意对班口及瓶塞进行的班，恤完后及时塞上瓶事，工具使用-段时间后应进行灼蝇，以防止西班-4擂神菌的生产4.1 神子的在得4.1.1 选择亲本DB44ff 128-2002 选择花色、在型、开花司性好，且生物学特性、生*习性、环境适应性、植株*势等表现较好的优良单株.4.1.2 人工授精4.1.2.1 时间开花草ld花勒萌发力量强，开花后7d花勒块仍具活力.母本最好的搜精时间在开花后的(3-4)d.一天中最佳捏墙时间为上午9:00.10:00.4.1.2.2 捏栅先将母本的花勒块除去t去雄).再将罪集的父本花勒块用小嚣于罐起轻轻地放在母本的蕃腔中.用铅笔写坷4.1.3采收捏甜后，应经常现察搜精花朵的变化井防止损坏，加强肥水管理.的(120.150)d后，在葫果尚未裂开时来收.4.2播种42.1 葡果处理蝴蝶兰种子以随果收随播种为好.先将残存的花器官仔细剪去，经自来水冲证后，在超挣工作台上先用75酒精擦洗，再在O.l%HgCh培植或ffiNaCIO禧榷中攫捆【1O15皿in.用无菌水冲址。-5).4.2.2播种在超挣工作台上将己捎毒的萌果跟在无菌垫盘上，用灭菌后的锤子握住葫果、用手术刀阔开，将种于均匀接种于事先准备好的培养基中.4.2.3 培养基Hyponex No.ho/l.+盹盖自脏z+括性量O/L+2%.蘸瑭+0.7琼脂.p国值为5.4:t0.2.4.2.4培养条件培养祖度为(26土2)C.前期暗培养或有散射光即可，在原球茎明显*后，光照强度(2000士100)lx.光照时间为12h/d.4.3分Mi4.3.1 培彝基Hyponex No.1+酶蛋白酶2O/L+活性提Z+香蕉缸50+2%蓝黯-t().1，琼脂.pH值为5.4士0.2.4.3.2培养条件培养温度为(26士2)C.光照强度(2000士100)lx.1t照时间12h/d.4.3.3万法描种的(5060)d后，当第1片叶片开始*出时，即可开始分瓶，因增太生长空间.分瓶时，应尽量将小苗分开，并使其在培养基中均匀分布，淘棋生*势较弱的小苗.每(60.80)d卦瓶-(k.分瓶(12)?x即可.4.4壮苗培养4.4.1 培养基Hyponex No.1,0/1.+盹蛋白酶lo/L+活性炭20/1.+香蕉扼1回11.+2%蓝糖+O.琼脂.PH值为5.4士0.2.4.4.2 培养条件培养嗣度为(26士2)C.前期光照强度为(2000士100)lx.光照时间12h/d.后期可利用太阳光的散射光，光照、强度(8000-10000】lx.4.4.3方法当小苗叶片桂至lCII*井有(1-2)条根时即可进行壮苗培养.接种时，将小苗单株分开，大小分组，井再?x淘放生长势较弱的小苗.每班22苗.5 卦生苗的生产3 DB44ff 128-22 5.1 外植体语导5.1.1 母株选择符合需求:植株生佳髓壮、无病虫害.5.1.2外植体提型常用的外植悻包括叶片、花植、革段与茎尖.5.1.3 取材时帆叶片作为外植体时，因时龄(37)d的叶片最好z花梗为外植体时，花梗*至(5.10)cm时最好，开花后的在梗也是主要的扑植体之茎段或主失为外植体时，无菌苗和株龄40d内的植棒较好.5.1.4消毒材料取回后，先用自来水神t(1.2)h.在超挣工作台上将己切割成适当大小的材料先用75%酒精睛就30s.用无菌水神就后，叶片与茎段在0.1划IgC12或5阳aClO黯擅中捏泡00.20)min，无菌水冲班(58);花梗在O.l%HgCh或5%NaCIO禧液中理泡00.20)min.用无菌水冲就(2.3)段，在无菌接种盘上剥酷花梗体眠芽外的苞片，再用O.051JJ1gC12或5唰aCIO榕擅中程由(810)min.无菌水神就(5.8).5.1.5接种在超净工作台上将已悄毒的材料置于无菌垫盘上，将叶片切害IJ成1cmz太小=花梗-民约2cm(体眠芽主下各1cm)适当的主段(0.3.0.4)mm茎尘，接种于事先准备好的诱导培养基中.5.1.6诱导培养基丛芽诱导培养基z瞄+fi-BAt凹的耐性d5-1刷刷+NAAI.+100iCW+3%蘸糖+0.7%琼脂.pH值为5.8:!:0.20 原球茎诱导培养基MS+6-BA盹5-5).+NAA.+1侃回+:rr，蘸糖+0.7%璋脂.pH值为5.8士0.2.5.1.7 培葬条件培养温度为【26士2)C.有散射光即可.花梗培养温度不宜低于26C.5.2 丛芽增殖培养5.2.1 握代培葬基MS+6-BA萨刚刚+Ad5.+阳&.s.+H脏1+3蘸糖+0.商事脂.pH值为5.8士0.2.5.2.2 培养条件培养温度为(26土2)C.光照强度(2000土l)lx.光照时间10h/d.5.2.3 j言语每(40-50)d继代增殖一段，一般继代量丰超过15a随着继代增殖改数的增加.6-BA的榷度可以适当的降低.接种过程中，尽量耐少对材料的伤害，5.3原璋茎增殖培养5.3.1 增殖培养5.3.1.1 增殖培养基眶咱-BAt:;-Ja)哥儿+NAA.吼叫侃CW+3%蘸黯+O.TI麓脂.pH值为5.8士0.2.5.3.1.2 培养条件培养温度为(26士2】C.光照强度(2000土100)lx.光照时间10h/d.5.3.1.3方法将原球茎切割成小块后，接种到增噩培养基中.每【40-50)d鲤代增殖一鼠，一般蛙代改数不超过10.5.3.2 分化培养5.3.2.1 分化培养基-MS+6-BA(血5-n.，.+3%蓝糖-+).7%琼脂.pH值为5.8士0.2.5.3.2.2 培养条件培养祖度为(26土2)C.光，咽强度(2000土100)lx.光照时间10h/d.4 D剧4厅128-2佣25.3.2.3 方法将原球主班入分化培养基中.60d后陆撞长芽，成为完整植株.5.4 生根培养5.4.1 生根培鼻基Hyponex No.1毗+活性炭2sll+香蕉扼田KIl+24J，蓝糖+0.市革脂.pH值为5.8土0.2.5.4.2 培养条件培养温度为(26+2)C.光照强度(4000-10000)lx.光照时间12h/d.或利用太阳的散射光.5.4.3方法当芽佳至(23)片叶，叶*:(l2)cm时，将芽单个分开，井大小分撞，接种于生根培养基中.每姬20苗，6 蝶苗6.1 条件苗t是出口3)条根:有太阳散射光，先强(80-100)lx.温度(20-28)c.环境清洁-6.2方法将培养拖一宇排开.放置于培养架上，约(IS.20)d即可-7姬苗匮量7.1 匮量要求品种纯正=生长健壮，不徒长，无污挚z根系粗壮E变异事小于5%.7.2 分组见表1项目叶桂(cm)l辑3.5 2级2-3 8 包装与运输8.1 包装表1叶片叶宽【cm)叶片盘【片】根数(盎12 3.5 35 1.2 3-4 2-3 根根(cm)1.3 3以瓶苗方式包装，辄口封南膜或盖塑料盖.包装箱外在明品种名辑、等辑、数量、日期、生产单位、地址及注意事项等.8.2运输严禁倒置、侧踵，保持(20.28)C.到达目的地后尽快拆除包装井种植.5