DB34∕T 3476-2019 饲料中恩拉霉素的测定 高效液相色谱法(安徽省).pdf

TCS 65.120 B 46 DB34.l-.文徽省山巳ET且，万标准DB 34/T 3476-2019 饲料中恩拉霉素的测定高效液相色谱法Determination of enramycin in feeds High performance liquid chromatography enramycin method 2019-12-25发布2020-01-25实施安徽省市场监督管理局发布目IJ1=1 本标准按照四月1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。DB34/T 3476-2019 本标准起草单位:合肥中龙神力动物药业有限公司、安徽省兽药饲料监察所、安徽省动物疫病预防与控制中心、肥因县动物疫病预防控制中心、宣少|、|区畜牧兽医局、安徽省畜牧技术推广总站、宿川、1m动物卫生监督所、中国科学技术大学附属第一医院、合肥市动物疫病预防控制中心。本标准起草人:蔡一杰、陈静、董先敏、刘文文、李瑞、杨洁、黄莺、王群、许晓靖、孟庆娟、吴营、王雨霜、沈岚。饲料中恩拉霉素的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了饲料中恩拉霉素含量测定的高效液相色谱法C本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预泪合饲料中恩拉霉素含量测定。本标准定量限为1.0mg/kg。2 规范性引用文件DB34/T 3476-2019 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，又所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1 饲料采样3 原理试样中的恩拉霉素经丙酣盐酸溶液超声提取，过滤后经色谱柱分离，用高效液相紫外检测器检测，外标法定量。4 试剂和材料4.1 除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合GB!T6682中一级用水的规定。4.2 乙睛:色谱纯。4.3 磷酸二氢铀。4.4 丙酣。4.5 盐酸。4.6 流动相0.05mol/L磷酸二氢铀+乙睛，按体积比70:30(v/v)。4.7 稀释液:丙酣-2mol/L盐酸一水(20:1:21)(v/v)。4.8 恩拉霉素标准品CAS号1115-82-5，纯度2:98.0%。4.9 恩拉霉素标准溶液的制备4.9.1 恩拉毒素标准溶液贮备液:精确称取20mg恩、拉毒素标准品(精确至o.01 mg)于100mL容量瓶中，用稀释液(4.7)溶解，冷却，此溶液浓度为200g/mL此溶液现配现用。4.9.2 恩拉毒素标准工作溶液:分别吸取贮备液(4.9.1)O.2 ml、1mL、2mL、5mL、10mL、20mL 于200mL容量瓶中，用稀释液(4.7)定容，标准工作溶液系列浓度分别为O.4问/mL、l问/mL、2g/mL、5g/mL、10g/mL、20g/mL。5 仪器和设备DB34/T 3476-2019 5.1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)。5.2 分析天平:感量1mg、0.01mg。5.3 离心机3000r/mino 5.4 超声波仪。5.5 分析筛:孔径。.42mm。5.6 粉碎机。5.7 微孔滤膜:于L径。.45m尼龙滤膜。6 试样的制备按GB!T14699.1规定采样，选取饲料样品500 g以上，四分法缩减约100g，混合均匀，磨碎，全部通过分析筛(5.5)，充分泪匀，装入磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1 提取7.1.1 称取试样适量(配合饲料5.0 g，浓缩饲料3.0 g，预泪合饲料1.0 g)，精确至0.001g，置于100mL容量瓶中，用稀释液(4.7)准确定容，置于超声波仪(.5.4)超声提取30mi口。7.1.2 将试样提取液(7.1.1)4 m1转移至离心管，3000 r/min，离心.5mi口，取上清液2日lL用O.45 Ilm尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。7.2 高效液中目色谱条件7.2.1 邑谱柱Cl型柱，长250mm，内径4.6 mm，粒径5阳，或相当性能Clt主:7.2.2 检测波长267nm;7.2.3 流动相0.05mol/L磷酸二氢铀+乙脯，按体积比70:30(v/v)7.2.4 流速1.0 mL/min;7.2.5 柱温:室温:7.2.6 进样体积10L7.3 上机测定按上述色i普条件，分别将恩拉霉素标准工作溶液(4.9.2)和试液(7.1.2)上机测定，以单点或多点校准，以色谱曲辈面积积分值定量。色谱图参见附录A。7.4 结果的计算与表述7.4.1 计算公式结果按式(1)计算:式中:C x V x=一一一一一-xf 斤1X一一试样中恩拉毒素含量，单位为毫克/每千克(mg/kg)C一一试液色谱峰对应的恩、拉霉素浓度，单位为微克/每毫升(g/mU2(1)m 试样质量，单位为克(g);V一一定容体积，单位为毫升(mL)f 稀释倍数。7.4.2 结果表示平行测定结果用算术平均直之和表示，计算结果保留3位有效数字。8 精密度DB34/T 3476-2019 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差恒不得超过算术平均值的10%。3 DB34/T 3476-2019 附录A(资料性附录)恩拉霉素标准溶液的液相色i普图2.50-.:1 1.50 1.0G-0.50-内khF古巴3PL川11，-千J.T寸w 35 4口口口句时寸I 45 回口。5550 图A.1 恩拉霉素标准溶液的液相色谱图4