戊二醛固定液的配制.doc

Step 1:0.2M磷酸缓冲液的配制：- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O）2.6克 磷酸氢二钠 (Na2HPO4.12H2O)29克 双蒸馏水 加至500毫升 pH调至7.4Step 2:戊二醛固定液的配制：- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度2.5% pH值7.3-7.4 戊二醛固定剂的配方： （a） 磷酸缓冲液的配方： A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液： Na2HPO49H2O 17.81 克 或：Na2HPO47H2O 26.83 克 或：Na2HPO47H2O 35.82克 加双蒸水至 500毫升 B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液 NaH2PO4H2O 13.8 克 或：NaH2PO42H2O 15.61 克 加双蒸水至 600毫升 使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4） （b） 2.5戊二醛固定液的配方： 0.2M磷酸缓冲液 50毫升 25戊二醛溶液 10毫升加双蒸水至 100毫升具体步骤如下：离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2多聚甲醛2.5戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。把细胞离心取沉淀细胞,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察