戊二醛固定液的配制.doc

Step 1:
0.2M磷酸缓冲液的配制：
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磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O）　　　　2.6克
磷酸氢二钠 (Na2HPO4.12H2O)　　　　29克
双蒸馏水 　　　　　　　　　　加至500毫升
pH调至7.4

Step 2:
戊二醛固定液的配制：
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25% 戊二醛　　　　　　1ml
双蒸馏水　　　　　　　4ml
0.2mol/L磷酸缓冲液　　5ml
戊二醛最终浓度　　　　2.5%
pH值7.3-7.4

戊二醛固定剂的配方：
（a） 磷酸缓冲液的配方：
A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液：
Na2HPO4·9H2O 17.81 克
或：Na2HPO4·7H2O 26.83 克
或：Na2HPO4·7H2O 35.82克
加双蒸水至 500毫升
B 液：0.2M磷酸二氢钠贮备液
NaH2PO4·H2O 13.8 克
或：NaH2PO4·2H2O 15.61 克
加双蒸水至 600毫升
使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4）
（b） 2.5﹪戊二醛固定液的配方：
0.2M磷酸缓冲液 50毫升
25﹪戊二醛溶液 10毫升
加双蒸水至 100毫升　

具体步骤如下：
离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。

把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后,倒去上清,直接加2.5%戊二醛固定后,送电镜室脱水、包埋、切片后置透射电镜下观察